T4 DNA Ligase产品说明书
T4 DNA 连接酶 #EL0011 Thermo scientific
T4 DNA Ligase ——Thermo scientific #EL0011产品信息特点快速–室温下10分钟内完成粘末端的连接反应。
•该酶在Fermentas公司限制酶、PCR和RT缓冲液(添加ATP)中活性。
•配套提供聚乙二醇溶液以有效进行平末端连接。
应用克隆酶切产生的DNA片段。
•克隆PCR产物。
•连接双链寡聚核苷酸街头或连接物。
•定点诱变。
•扩增片段长度多态性(AFLP)。
•连接酶介导的RNA 检测(3)。
•双链DNA，RNA 或DNA/RNA 复合体中缺口的修复。
•线性DNA自身环化。
说明T4� DNA Ligase催化双链DNA或RNA中毗邻的5’ -磷酸基团和3’-羟基末端之间形成磷酸二酯键。
酶还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA 的粘性和平末端，但是该酶对单链核酸无酶活性(1, 2)。
T4 DNA Ligase需要辅因子ATP。
浓度1 Weiss u/µl = 200 CEU*/µl5 Weiss u/µl = 1000 CEU*/µl30 Weiss u/µl = 6000 CEU*/µl*一个粘性末端连接单位的是指在16°C 、30分钟内50%连接HindIII酶切的lamda DNA产物所需要的酶的量。
来源含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌。
分子量55.3 kDa，单体。
活性单位定义1个活性单位是指在ATP-PPi交换反应中，37°C、20分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit 可吸收形式所需的酶量(Weiss单位**(4)。
酶活性分析混合物：66 mM Tris-HCl (pH 7.6), 6.6 mM MgCl2, 0.066 mM ATP, 10 mM DTT, 3.3�µM [32PP i].** 1个Weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。
t4dna连接酶的作用原理
t4dna连接酶的作用原理T4DNA连接酶（T4 DNA ligase）属于酶类的连接酶，它主要作用是将DNA链的断裂连接起来。
T4DNA连接酶在DNA修复、重组以及基因工程领域有着广泛的应用。
T4DNA连接酶的作用主要包括两个基本步骤：底物DNA识别和连接。
在底物DNA识别和连接之前，需要通过一系列的步骤将底物DNA进行处理。
首先，T4DNA连接酶会与ATP结合形成活化复合物，这一步骤可以增加酶的活性。
活化复合物可以与底物DNA发生作用。
接下来，T4DNA连接酶需要依靠其5'磷酸化底物的末端组成碱基对，与空穴或3'末端的OH基团结合。
连接酶与底物DNA的连接主要是通过底物DNA端的5'磷酸基团的负责寻找配对。
如果5'末端的磷酸基团没有找到环状底物DNA，连接酶就会断裂。
接着，连接酶识别合适的连接底物，并在此处将两个底物的DNA链连接起来。
连接酶利用酶的活性位点上的核苷酸串，并与待连接的DNA产生磷酸二酯键连接，同时释放出底物DNA链的磷酸化基团。
这个连接过程消耗了一个分子的ATP，而T4DNA连接酶可以使用外源的ATP来实现底物的连接。
总结起来，T4DNA连接酶的作用原理可以归纳为以下几个步骤：酶与ATP形成活化复合物，连接酶与底物DNA的5'极末端磷酸化基团或3'极末端的OH基团结合，连接酶将两个底物DNA链的连接位点负责与连接酶上的核苷酸串连接，从而实现底物的连接。
此外，T4DNA连接酶还具有一些特殊的特性和应用。
连接酶可以在无ATP的存在下进行连接反应，但此时反应速率较慢。
连接酶还需要适宜的反应条件，如适宜的温度和pH值。
在基因工程领域，T4DNA连接酶被广泛应用于构建重组DNA载体和进行基因克隆。
通过连接酶的作用，可以将DNA的片段连接在一起，从而构建出预期的DNA载体。
T4dna连接酶使用说明
Certificate of AnalysisProduct name/Description:T4 DNA Polymerase Cat. #:2040A Lot #:K314BA Storage Condition:-20 degrees C Shipping Condition:-20 degrees C Expiration Date:Specified on product label Package Size:100 U Package Contents: 1. T4 DNA Polymerase5 U/μl 100 U 2. 10X T4 DNA Polymerase Buffer (BSA free)1 ml 3. 0.1% BSA 10X 1 mlProduct Documents:Documents for Takara Bio products are available for download at Source: Unit Definition: Quality Control Data:Nuclease contamination test:Endonuclease activity was not detected by agarose gel electrophoresis after incubation of 1 μg ofsupercoiled pBR322 DNA with 2 units of this product for 16 hours at 37°C.Escherichia coli carrying the plasmid containing phage T4 DNA polymerase gene One unit of the enzyme is defined as the amount that incorporates 10 nmol of total nucleotides intoacid-insoluble products in 30 minutes at 37°C and pH 8.8, with heat-denatured calf thymus DNAas the template-primer.It is certified that this product meets above specifications.Manager, Quality AssuranceTAKARA BIO INC.Safety Information :Please refer to our website for safety information :Notice To Purchaser :This product is for research use only. It is not intended for use in therapeutic or diagnostic procedures for humans or animals. Also, do not use this product as food, cosmetic, or household item, etc.Takara products may not be resold or transferred, modified for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC.If you require licenses for other use, please contact us by phone at +81 77 543 7247 or from our website.Your use of this product is also subject to compliance with any applicable licensing requirements described on the product web page. It is your responsibility to review, understand and adhere to any restrictions imposed by such statements.All trademarks are the property of their respective owners. Certain trademarks may not be registered in all jurisdictions.。
T4 DNA Ligase使用说明书
T4 DNA Ligase使用说明书T4 DNA Ligase是一种重要的酶类工具，广泛应用于分子生物学领域中DNA拼接和连接的实验中。
本文将为您详细介绍T4 DNA Ligase的使用方法及注意事项。
一、T4 DNA Ligase的简介T4 DNA Ligase是一种DNA连接酶，能够嫁接DNA链断裂处的末端，形成磷酸二酯键，完成DNA片段的连接。
它在分子克隆、基因工程以及测序等领域具有重要作用。
二、T4 DNA Ligase的用途1. DNA连接：T4 DNA Ligase可用于连接DNA片段，如重组DNA、插入DNA载体等。
2. 测序修饰：在测序实验中，T4 DNA Ligase可用于修饰DNA片段，方便后续测序操作。
三、T4 DNA Ligase的使用方法1. 实验准备：将T4 DNA Ligase取出放置于冰上解冻，配制工作液。
2. 反应体系：按照实验要求配制反应体系，包括DNA片段、缓冲液、T4 DNA Ligase等。
3. 反应条件：根据实验要求确定适宜的反应温度和时间，一般在16-25摄氏度下进行反应。
4. 加酶条件：将适量T4 DNA Ligase加入反应体系中，轻轻混匀后，放置于适宜温度反应。
5. 反应终止：加入终止液终止反应，如热处理或添加酶失活液。
四、T4 DNA Ligase的注意事项1. 避免反复冻融：为保证酶活性，避免T4 DNA Ligase的反复冻融操作。
2. 注意保存条件：将T4 DNA Ligase储存在-20摄氏度干燥冰箱中，远离酶解冻或受潮。
3. 酶活检测：使用T4 DNA Ligase前应对其酶活进行检测，确保反应的准确性和可靠性。
4. 实验操作注意：在操作过程中应注意消耗性品的消耗量，避免浪费。
综上所述，T4 DNA Ligase作为一种重要的DNA连接酶，在分子生物学实验中起着关键作用。
了解并熟练掌握其使用方法，对于科研工作者来说至关重要。
希望本文所提供的使用说明书能够帮助您顺利完成实验，并取得预期的研究成果。
T4 DNA 连接酶
T4 DNA Ligase即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需A TP作为辅助因子。
同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA 或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
用途：T4 DNA Ligase常用于DNA片段和载体、linker或adaptor等的连接。
也可以用于缺刻修复及Ligase 介导的RNA检测。
来源：本T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of lambda DNA in 30 min at 16℃in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12 μM(300 μg/ml)。
200U等于1个Weiss unit，以Weiss unit计，本产品共1000单位。
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规连接反应要求。
酶储存溶液：20 mM Tris, pH 7.5, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50%(v/v)glycerol。
10X Ligation Buffer：400 mM Tris, pH 7.8, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM A TP。
失活或抑制：65℃孵育10分钟可以导致T4 DNA Ligase失活；NaCl或KCl浓度大于200mM时强烈抑制T4 DNA Ligase。
PH0642 T4连接酶 T4 DNA Ligase 实验操作手册与方法
10μl 体系 x μl y μl 1 μl 0.1 μl up to 10 μl
终浓度 10-50 ng 插入片段：载体=1:1-5:1* 1× 0.5 U
*：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般 vector:insert 在 1:1~1:5 之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔 数：pmol 数= DNA 量(ng)/(660×片段 bp 数)×1000。例如：插入片段 2000bp，线性载体为 3000bp，如果载体使用量为 50ng （0.025pmol），10μl 连接体系中 vector:insert 的摩尔比是 1:3，则需要 2000bp pmol 数为 0.075pmol，插入片段 2000bp 的使 用量为 100ng。 2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。 3．反应条件：16℃孵育 30 分钟。 4．可取 5 μl 连接产物热击转化 50 μl 感受态细胞或取 1-2 μl 连接产物电击转化 50 μl 感受态细胞。 注：1）若要提高电转实验效率，推荐 65℃孵育 10 分钟或 70℃孵育 5 分钟以灭活 T4 DNA Ligase 后，用 DNA 产物纯化试剂盒 对连接后的 DNA 片段进行纯化后进行电击转化。
2．彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。 3．反应条件：16℃孵育 30 分钟。 4．65℃孵育 10 分钟或 70℃孵育 5 分钟灭活 T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。
注意事项
1. T4 DNA Ligase 的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。 2. PEG 可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为 5% PEG Solution 以提高平末端的连接效率。 3. 为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的 10%。 4. 由于 T4 DNA Ligase 中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入 液面太深以免粘在枪头上造成损失。
T4 DNA Ligase使用说明
T4DNA Ligase使用说明货号：T1410储存条件：-20℃保存，避免反复冻融，10×T4DNA Ligase Buffer建议分装使用。
浓度：3U/μL来源：重组大肠杆菌产品内容：T4DNA Ligase60U10×T4DNA Ligase Buffer30μL产品说明：该酶在以ATP做辅酶的情况下，可以催化相邻DNA链的5'-磷酸集团和3'-羟基之间的链接反应。
平末端和粘性末端均可。
此酶液可以催化双链RNA与双链DNA连接，但不能催化单链核酸的连接。
活性单位定义：1个Weiss活性单位是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、20min内将1nmol[32PPi]转换为Norit 可吸收形式所需的酶量。
1个Weiss活性单位相当于约200个粘性末端连接单位。
1个粘性末端连接单位：20μL反应体系（50mM Tris-HCl pH7.5），10mM MgCl2，10mM DTT,1mM ATP,25μg/ml BSA,0.12μM(300μg/ml的5'DNA末端)中，在16℃、30min内50%连接Hind III 酶切的Lambda DNA产物所需要的酶量。
使用示例：1、先将10×T4DNA Ligase Buffer在冰上融化，并进行短暂的离心。
2、以10μL连接体系示例，在微量离心管中加入以下各种成分：组成成分体积目的DNA片段约0.1pmol载体DNA约0.01pmol10×T4DNA Ligase Buffer1μLT4DNA Ligase0.5-1μLddH2O补足至10μL3、16℃连接过夜。
4、将3-5μL连接产物转化至100μL感受态细胞中。
注意事项：1、载体DNA和连接片段的摩尔比：对于不同的载体和DNA片段，要取得成功的连接，应分别建立具有不同摩尔数比例的连接反应，在大多数情况下，DNA片段的摩尔数应控制在载体DNA摩尔数的3-10倍。
T4dna连接酶使用说明
Certificate of AnalysisProduct name/Description:T4 DNA Polymerase Cat. #:2040A Lot #:K314BA Storage Condition:-20 degrees C Shipping Condition:-20 degrees C Expiration Date:Specified on product label Package Size:100 U Package Contents: 1. T4 DNA Polymerase5 U/μl 100 U 2. 10X T4 DNA Polymerase Buffer (BSA free)1 ml 3. 0.1% BSA 10X 1 mlProduct Documents:Documents for Takara Bio products are available for download at Source: Unit Definition: Quality Control Data:Nuclease contamination test:Endonuclease activity was not detected by agarose gel electrophoresis after incubation of 1 μg ofsupercoiled pBR322 DNA with 2 units of this product for 16 hours at 37°C.Escherichia coli carrying the plasmid containing phage T4 DNA polymerase gene One unit of the enzyme is defined as the amount that incorporates 10 nmol of total nucleotides intoacid-insoluble products in 30 minutes at 37°C and pH 8.8, with heat-denatured calf thymus DNAas the template-primer.It is certified that this product meets above specifications.Manager, Quality AssuranceTAKARA BIO INC.Safety Information :Please refer to our website for safety information :Notice To Purchaser :This product is for research use only. It is not intended for use in therapeutic or diagnostic procedures for humans or animals. Also, do not use this product as food, cosmetic, or household item, etc.Takara products may not be resold or transferred, modified for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC.If you require licenses for other use, please contact us by phone at +81 77 543 7247 or from our website.Your use of this product is also subject to compliance with any applicable licensing requirements described on the product web page. It is your responsibility to review, understand and adhere to any restrictions imposed by such statements.All trademarks are the property of their respective owners. Certain trademarks may not be registered in all jurisdictions.。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
T4 DNA Ligase
使 用 说 明 书
包 装 量：
浓度： 5U/μl
储运温度：-20℃（保存6个月）
制品说明：T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表后分离纯化而来的。
它催化
相邻DNA 链的的5’-磷酸末端和3’羟基末端以磷酸二酯键结合反应。
该酶催化平滑末端或粘性末端DNA 的连接，修复双链DNA 、RNA 、DNA/RNA 杂交中的单链中的单链切口。
适用范围：（1）DNA 片段和载体DNA 快速连接；
（2）限制酶切片段的克隆；
（3）将DNA 片段与Linker 或Adaptor 连接。
酶贮存缓冲液：
20mM Tris-HCl (pH7.5)， 0.1 mM EDTA ， 1mM DTT ， 50 mM KCl ， 50% glycerol 。
10×Ligation Buffer ：
400 mM Tris-HCl ， 100 mM MgCl 2， 100 mM DTT ，5 mM ATP(PH7.8)，其他成分。
建议连接反应体系： (以 10 μl 反应体系为例)
反应循环的设置：
粘端连接：20～25o C 反应2～5分钟；
平端连接：20～25o C 反应2小时或16 o C 过夜。
NOT FOR HUMAN OR DRUG USE
完。