全自动大肠杆菌快速测定仪检测原理
大肠杆菌的检测及原理
大肠杆菌的检测及原理1.检测原理：大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
2.仪器设备与器具：2.1 恒温培养箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接种针。
2.4 显微镜。
2.5 超净工作台。
2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 灭菌釜。
2.9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片3.培养基及试剂：3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.2 伊红美兰琼脂平板：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.3 乳糖发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.4 革兰氏染色液。
3.4.1 结晶紫染色液：结晶紫1g95%乙醇20ml1%草酸铵水溶液80ml将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
3.4.2 革兰氏碘液：碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml。
3.4.3 沙黄复染液：沙黄0.25g95%乙醇10ml蒸馏水90ml将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
3.5 生理盐水。
4.检验程序：检样稀释↓乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr ↓不产气产气↓大肠菌群阴性伊红美兰琼脂平板，36±1℃，24±2hr报告↓ ↓革兰氏染色乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr ↓ ↓ ↓G+ G-，无芽孢杆菌产气不产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性报告大肠菌群阳性报告5.测定方法：5.1 检样稀释：5.1.1 以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。
食品中大肠杆菌的快速检测方法
２００８ 年第 １ 期
陈盼， 等： 食品中大肠杆菌的快速检测方法
５９
３ 月出版
荧光成比例， 生物细胞中 ＡＴＰ 的数量多， 发出的荧 光就多， 因此， 反应产生的荧光定量地反映系统中 代谢活细胞水平。
目前生物荧光反应法被广泛用于食品加工条件 的快速评价和食品中微生物的快速检测， 同时在 ＨＡＣＣＰ 管 理 中 也 被 广 泛 用 于 关 键 控 制 点 检 测 ， 与 传统检测方法不同之处在于几分钟内可获得结果， 而且荧光光度计是便携式的， 使用方便， 适合现场 检测， 不仅可以检测微小的污染物水平， 还能检测 食品加工设备及其表面的清洁程度。
５ 基因芯片技术
基因芯片（ｇｅｎｅ ｃｈｉｐ） 技术是 ２０ 世纪 ９０ 年代兴 起 的 前 沿 生 物 技 术 ， 也 叫 ＤＮＡ 微 阵 列 （ＤＮＡ ｍｉ－ ｃｒｏａｒｒａｙ）、寡核苷酸阵列（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｒｒａｙ）。采用 原位合成（ｉｎ ｓｉｔｕ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ） 或显微打印手段， 将数 以万计的 ＤＮＡ 探针 固 化 于 支 持 物 表 面 上 ， 产 生 二 维 ＤＮＡ 探针阵列， 然 后 与 标 记 的 样 品 进 行 杂 交 ， 通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、 高效地检测或医学诊断， 由于常用硅芯片作为固相 支持物， 且制备过程运用了计算机芯片的制备技 术， 所以称之为基因芯片技术。
将抗原或抗体吸附于固相载体的表面酶标记物与相应的抗体或抗原反应后形成酶标记抗原抗体复合物在遇到相应底物时结合物上的酶催化底物产生水解氧化或从而生成可溶性或不溶性的有色物质可用肉眼或酶标测定仪判定结果
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５８
食品工程
ＦＯＯＤ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ
大肠菌群实验报告
大肠菌群实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
【报告】大肠杆菌培养实验报告
【关键字】报告大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml 量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
自动生化分析仪 原理
自动生化分析仪原理
自动生化分析仪是一种常用于医学检验、生命科学研究和药物开发等领域的实验仪器。
它通过测量样品中的生化参数来评估生物体的健康状况或检测药物在体内的代谢情况。
这些生化参数包括血糖、血脂、肝功能指标、肾功能指标等。
该仪器工作的原理主要基于光学吸光度测量和电化学测量技术。
对于光学吸光度测量，仪器会通过样品中的化学反应，产生某种颜色或发光的物质。
仪器会发射特定波长的光束通过样品，并检测透过或反射回来的光的强度。
通过测量光的强度变化，可以计算出样品中特定化学物质的浓度。
电化学测量则是通过在样品中加入电极并测量电流或电压来评估生化参数。
这些电极可以与样品中的特定化学反应相关联，当该反应发生时，会产生电流或电压的变化。
通过测量这些变化，可以得到样品中特定化学物质的浓度。
自动生化分析仪的工作原理与传统的手动化验方法相比，具有更高的精确度和灵敏度。
它可以根据预设的方法和参数批量处理样品，减少了人工操作的误差。
同时，仪器还可以实现数据的自动采集和处理，大大提高了工作效率和数据的可靠性。
总之，自动生化分析仪是一种利用光学吸光度测量和电化学测量技术来评估生物样品中生化参数的实验仪器。
它具有高精确度、高灵敏度和高效率的特点，广泛应用于医学、科研和药物开发等领域。
大肠杆菌培养实验报告
大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
简述食品中大肠杆菌的快速检测方法相关研究进展
简述食品中大肠杆菌的快速检测方法相关研究进展摘要：大肠菌群的快速检测是食品、药品卫生监督检验迫切需求，本文从免疫学技术，酶学的技术，分子生物学技术，传统检测方法改进技术，物理化学技术，其它技术方面对大肠菌群快速检测方法研究进展进行综述，并对其存在问题及应用前景进行分析。
这些方法各有优缺点，免疫学技术和分子生物学技术灵敏度高，但假阳性率高，无法区分死活菌；酶学的技术和物理化学技术特异性好，省时省力，但这些方法成本较高，不适合基层实验室使用；传统检测方法改进技术结果准确，但费时费力。
因此，仍需要发展一种新的方法解决所存在的问题。
要真正实现大肠菌群的快速检测还需要不断进行科学研究，以寻找一种能够真正实现成本低、灵敏度好、准确性高并且检测速度快的更合适的方法。
关键词：食品；大肠菌群；快速检测；研究1引言大肠菌群为一群在37C、24h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽胞杆菌的统称。
这些细菌多存在于温血动物粪便中，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然存在的主要原因。
因此，大肠菌群被国际上公认为检测各种水质、医药及食品在流行病学上安全性的指示菌。
如果检测到大肠菌群呈阳性结果，那么便表明食品、药品或者水质存在大肠菌群，已经被粪便污染。
大肠菌群的数量与受到的污染程度成正比，数量越多，受污染越严重。
目前我国国家标准主要用多管发酵法来检测大肠菌群多管发酵法作为一种传统的检测方法已沿用多年，其准确性、权威性无可质疑，但该方法费时费力，而且检测所需的费用较高，已无法满足人们对食品、药品安全现场监测的要求，因此，现在食品、药品卫生监督检验迫切需要一种更加有效、快速的大肠菌群检测方法。
近年来，世界各国针对大肠菌群的快速、定量检测技术都进行了专门的研究，本文综述了大肠菌群快速检测技术的研究进展，并对其存在问题及应用前景进行分析。
2大肠菌群主要的快速检测方法2.1免疫学技术免疫学方法检测原理是依据抗原和抗体特异性反应。
VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用
VITEK全自动微生物检测系统原理及其应用近年来，微生物的检测鉴定技术已逐步由手工检测走向仪器化和电脑化，并力求简便、快速、准确.由生物梅里埃公司出品的全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。
近年来,微生物的检测鉴定技术已逐步由手工检测走向仪器化和电脑化，并力求简便、快速、准确。
由生物梅里埃公司出品的全自动微生物鉴定/药敏分析系统VITEK是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一。
VITEK已被许多国家定为细菌最终鉴定设备,并获美国药品食品管理局（FDA）认可。
该系统有高度的特异性、敏感性和重复性，还具有操作简便、检测速度快的特点，绝大多数细菌的鉴定在2～18 h内可得出结果。
现将该系统的工作原理、主要结构、功能并结合我们使用后的一些体会介绍如下。
1工作原理VITEK对细菌的鉴定是以每种细菌的微量生化反应为基础，不同种类的VITEK试卡（检测卡）含有多种的生化反应孔，可达30种。
将手工分离的待检菌的纯菌落制成符合一定浊度要求的菌悬液，经充填机将菌悬液注入试卡内,封口后放入读数器/恒温培养箱，根据试卡各生化反应孔中的生长变化情况，由读数器按光学扫描原理，定时测定各生化介质中指示剂的显色(或浊度反应，然后把读出信息输入电脑储存并进行分析，再和预定的阈值进行比较,判定反应，再通过数值编码技术与数据库中反应文件进行比较,最后鉴定报告将在显示器上自动显示）并在打印机上自动打印。
2VITEK系统的结构组成2。
1检测卡目前VITEK系统的检测卡有14种，微生物常用的有7种，即：革兰氏阳性菌鉴定卡（GPI)、革兰氏阴性菌卡（GNI+）、非发酵菌卡（NFC)、酵母菌卡(YBC)、厌氧菌卡(ANI)、芽胞杆菌卡（BAC)、奈瑟氏菌嗜血杆菌卡（NHI），以及药敏检测卡等.每张检测卡对应接种1份标本，检测卡为一次性消耗品。
2。
2充填机将待测菌的菌悬液注入试卡内。
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课堂提问：
检测和鉴定细菌的标准方法是什么？
分离培养
染色镜检
生理生化反应
传统的微生物学鉴定方法
药物敏感实验
过程烦琐
费时费力
质量控制难
传统的微生物学鉴定方法
易发生主观片面错误
微生物学技术方法快速、准确、简易和自动化?
计算机学 化学
微电子学
渗交 透叉
微生物学
分子生物学 物理学
自动化检测系统
第一节 全自动微生物鉴定仪器
淀粉水解实验
微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必 须靠产生的胞外酶将大分子物质分解成小分子物质才能被 微生物吸收利用。胞外酶主要是水解酶，通过加水裂解大 分子物质为较小的化合物，使其能被运输到细胞内。
Microbact生化鉴定试剂盒（18-24h出结果， 约200种细菌。）
第一节 全自动微生物鉴定仪器
一、ATB Expression 细菌鉴定智能系统
API 细菌鉴定系统 （生物梅里埃）
鉴定产品包括试剂条和数据库，试剂条通常包 含20个微量生化试验。 目前系列提供的16个产品鉴 定范围涵盖几乎所有的细菌群，超过550个不同的 种。
第一节 全自动微生物鉴定仪器
一、ATB Expression 细菌鉴定智能系统 API 细菌鉴定系统 （生物梅里埃）
ATB Expression 细菌鉴定智能系统
原理 选择识别力最强的发酵试验、同化试验、抑制试验、
酶试验和其他传统的生化反应，经过优化，组成由32 个反应联合的专一鉴定试剂条。采用8进位制细菌数 码分类法，整个鉴定条10-11位数的生物数码，与标 准数据库分类单位比较，得到相似系统和鉴定值，并 计算模式频率T值(T index)，T值越接近1代表该细菌 与典型菌株反应模式越接近。
[目的与要求]
（1）熟悉微生物自动化仪器检测原理；
（2）熟Байду номын сангаас全自动微生物鉴定仪检测原理；
（3）熟悉微生物总数测定仪检测原理；
（4）熟悉全自动大肠杆菌快速测定仪检测原理。
[难点与重点] 难点：微生物自动化仪器检测原理； 全自动微生物 鉴定仪检测原理； 微生物总数测定仪检测原理； 全 自动大肠杆菌快速测定仪检测原理。 重点：全自动微生物鉴定仪检测原理；微生物总数 测定仪检测原理
第一节 全自动微生物鉴定仪器
一、ATB Expression 细菌鉴定智能系统 ATB Expression是自动化微生物鉴定和药敏分
析系统，它是从API系统发展而来，由法国生物-梅里埃研制生产。以API试剂条为基础，测试品 种齐全，共有750种反应，电脑数据库不断地完 善和补充，鉴定能力强，可鉴定近700多种细菌。
第一节 全自动微生物鉴定仪器
一、ATB Expression 细菌鉴定智能系统
（一）系统原理 1．微生物数值编码鉴定技术 ������ 细菌的编码鉴定法采用21项生化指标， 每3项一 组，共7组。每组3项生化试验，阳性结果数值分别记 为1、2、4，反应阴性者记为0，尔后，分别将各组数 值相加，依次组成一组7位数值的编码，即代表所鉴 定的菌株的相应菌名。查《革兰氏阴性杆菌新编码鉴 定手册》中的检索表，找出这7位数码相对应的菌名。
糖（醇）类发酵实验
溴甲酚紫［P H 5.2 （黄色）-6 . 8 （紫 色）]
﹣
﹢
﹣﹢
甲基红 pH4 .4 （红色pH6 . 2 （黄色）
V.P. 实验
甲基红实验（MR实验）
甲基红试验是检测由 葡萄糖产生的有机酸。 当细菌代谢糖产生酸 时，培养基变酸，培 养基中甲基红指示剂 由橘黄色变为红色。 VP试验是测定某些细 菌利用葡萄糖产生非 酸性或中性末端产物 的能力
﹢﹣
柠檬酸盐利用试验：有的细菌如产气杆菌， 能利用柠檬酸钠为碳源，能在柠檬酸盐培养 基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐， 使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香 草酚蓝（变色范围pH6.0(黄)～7.6(蓝) ）指 示剂由绿色变为深蓝色。
吲哚实验 ﹣﹢
对二甲基氨基苯甲醛
硫化氢产生试验
某些细菌能分解含 硫的氨基酸(胱氨酸、 半胱氨酸等)，产生 硫化氢，与乙酸铅 试纸条反应，产生 黑色物质。
一、ATB Expression 细菌鉴定智能系统
用于细菌的快速鉴定，细菌的鉴定是细菌分类的实 验过程，即将未知细菌按分类原则放入某系统中的适 当位置与已知细菌比较，如果相同就采用已知细菌的 名称；不同则按命名原则，确定一个新的名称。
第一节 全自动微生物鉴定仪器
一、ATB Expression 细菌鉴定智能系统
第一节 全自动微生物鉴定仪器
一、ATB Expression 细菌鉴定智能系统
第一节 全自动微生物鉴定仪器
一、ATB Expression 细菌鉴定智能系统 （一）系统原理
2．微生物快速生化反应技术 ������ 通过实验总结不同的细菌与不同物质反应规律，设计独 特的培养基通过与未知细菌反应，根据反应结果鉴定出细菌。
将操作繁琐、解释冗长的传统方法微量化和标 准化，将生化试验试剂条和数据库结合起来，使鉴 定工作变得容易、快速和安全。这一创新得益于数 值鉴定法的发展。
API 细菌鉴定系统
ATCC成立于1925年， 是世界上最大的生物资 源中心，由美国14家生 化、医学类行业协会组 成的理事会负责管理， 是一家全球性、非盈利 生物标准品资源中心。 ATCC向全球发布其获 取、鉴定、保存及开发 的生物标准品，推动科 学研究的验证、应用及 进步。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质 的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。以 此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代 谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之 为细菌的生理生化反应。
API鉴定原理
常见的生理生化反应包括：
（1）糖（醇）类发酵实验； （2） 甲基红试验（M.R试验）； （3）Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）； （4）靛基质试验（吲哚实验）； （5）硫化氢产生试验（三糖铁实验）； （6）明胶液化实验； （7）柠檬酸盐利用试验； （8）淀粉水解实验 （9）尿酶； （10）氧化酶； （11）赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶； （12）半乳糖酶；（13）触酶实验（过氧化氢酶）