胰酶配制
胰酶得配制
查看文章细胞消化胰酶的配制2008-12-10 12:46适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。
低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力问：请问哪位仁兄能告知一下EDTA-胰蛋白酶的配制。
急用！多谢！答：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。
2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。
EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。
EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。
如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。
如果对贴壁没影响，那么可不离心。
3、EDTA的浓度也是质量体积比。
和胰酶一起溶于PBS。
4、注意，血清可终止胰酶的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。
5、胰酶和EDTA在pH 为8左右的时候最易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，胰酶可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。
注意，不可加过量NaOH，否则过碱，细胞会受不了。
实验室常用液体配制标准操作规程
常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
几种溶液(PBS、TBS、Citrate buffer、Trypsin、Pepsin、AEC、Blotto A)的配制方法
几种溶液(PBS、TBS、Citrate buffer、Trypsin、Pepsin、AEC、Blotto A)的配制方法1、PBS:取ZLI-9061 PBS 溶于1000ml 的蒸馏水中，混匀，测pH 值应在7.2~7.4 之间，若偏离此范围，请用0.1N 的HCL 或NaOH 调整。
2、TBS：2.1 Tris 缓冲液配方：（0.5 M pH7.6）Tris（三羟甲基氨基甲烷）60.57g1N HCL 约420ml双蒸水加至1000mlTris 缓冲液配制方法：先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl 后，用HCl（1N）或NaOH （1N）将pH 调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。
此液为储备液，4℃冰箱中保存。
2.2 TBS 配方：Tris-HCI 缓冲液（0.5M pH7.6）100mlNaCI 8.5~9g (0.15mol/L)双蒸水加至1000mlTBS 配制方法：先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl 缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。
3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）：3.1 储存液：A. 0.1M 枸橼酸溶液：称取21.01g 枸橼酸（C6H8O7·H20）溶于1000ml 蒸馏水中。
B. 0.1M 枸橼酸钠溶液：称取29.41g 枸橼酸钠（C6H5Na3O7·2H20）溶于1000ml 蒸馏水中。
3.2 工作液：取9ml A 液和41ml B 液加入450ml 蒸馏水中，溶液pH 值应为6.0±0.1 4、胰酶（Trypsin）：4.1 ZLI-9011 胰蛋白酶消化液：常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂 1 胰酶溶液和三滴试剂 2 胰酶稀释液均匀混合（1:3稀释），则可直接滴加使用。
胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10 稀释）至0.25%（1:1 稀释）。
实验室常用液体配制标准操作规程
v1.0 可编辑可修改常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。
2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至％，高压蒸汽灭菌15min后使用。
3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
4、%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含卡那霉素。
取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。
注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。
5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。
剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。
6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。
实验室常用溶液配制
0.25%胰酶-EDTA的配制细胞消化胰酶的配制对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2 称胰酶0.25g3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4 调PH7.45 仍在冰浴中6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。
低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力实验常用溶液的配制1.革兰氏碘液：称碘化钾2g溶于100ml蒸馏水中，再加1g碘使其溶解，最后用蒸馏水稀释至300m1，盛于棕色瓶内，保存于暗冷处。
2.1.苯酚品红改良液（一）①A液：取3克碱性品红，溶于100ml 70％酒精中（此液可长期保存）。
②B液：取A液10m1，加入90ml 5％苯酚水溶液（一般在两周使用为好）。
③C液：取B液45m1，加入 6ml冰醋酸和6ml 37％甲醛。
④、苯酚品红改良液：取C液10m1，加入90ml45％冰醋酸和1克山梨醇。
2.2.苯酚品红改良液（二）：A液：碱性品红3g＋100ml 70％乙醇。
B液：A液10ml＋5％苯酚水溶液90m1。
C液：B液120ml＋冰醋酯12ml＋甲醛12ml。
D液：C液120ml＋45％冰醋酸480ml。
在D液中加1％山梨醇（600mlD液中加 6g山梨醇），此液配好后至少放4一5天方可使用，可保存几年。
3.1.甲基绿一哌罗宁混合染液（一）：①醋酸缓冲液（pH4.8）0．2mol.L-1醋酸（A.R）（取1.2ml加蒸馏水至100ml）4份0．2mol.L-1醋酸钠（A.R）（取2．72g加蒸馏水至100ml）6份。
胰酶的配制
胰酶的配制过程姓名：李达专业：预防兽医学号：2013022060 导师：汤德元一．胰酶-EDTA的配制1、专用PBS缓冲液配方：1000mlPBS: 7.000g NaCl1.100g Glucose·H2O 或 1.000g Glucose0.3700g KCl0.2g Na2PO4H3.000g Tris0.2400g KH2PO40.4000g EDTA超纯水1000ml所有试剂全部为细胞培养专用sigma试剂。
0.0010g 酚红5ml PS2.5g 胰酶（HyClone 胰蛋白酶1:250 SH30848.018）2、配制步骤：1）所用容器先泡酸12小时，后用自来水洗至无色后用蒸馏水洗净，再用超纯水洗三遍，最后高压灭菌，烘干。
2）将缓冲液配好后高压灭菌，同时洗好的广口瓶灭一瓶超纯水备用。
3）加入5ml双抗（PS）。
4）以灭菌的超纯水补足高压过程中损失的水分定容至1000ml。
5）转移到1L的试剂瓶中，加入酚红（0.0010g）。
6）调PH至7.2-7.4。
7）低温冰浴中溶解Tryspin2.5g.混匀。
此过程避免产生气泡，否则将损失酶活性。
8）在细胞间里用0.22um的滤膜过滤，分装入灭菌的50ml或1.5ml离心管中。
此过程避免产生气泡，否则将损失酶活性。
-20℃保存。
9）不可反复冻存。
每次解冻后4℃保存，并在短期内用完。
3、注意事项：1）整个分装过程在无菌条件下进行。
2）机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫酶就变性了。
低温可防止酶失活。
3）加入的EDTA可以络合细胞外基质中的Ca2+ ，增加消化效力。
4）在调节PH时一定要注意保护探头，防止损伤电极。
5）分装时不要太满，防止冻存后体积增大而溢出。
50ml离心管装45ml左右，1.5ml离心管装1.4ml左右。
6）分装后的胰酶尽快转移到-20℃冰箱中冻存。
二．0.25%胰酶（无EDTA）的配制1、250ml胰酶配制方法Tryspin 0.625gPS 2.5ml苯酚红0.1g所有试剂全部为细胞培养专用sigma试剂。
细胞培养所需耗材有哪些
细胞培养的路上，有多虐心就有多少需要值得注意的地方。
小小的平皿之中，细胞点点，引无数英雄竞挂东南枝。
正所谓“万事开头难”，即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情，也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。
下面就给各位实验室新手介绍一下细胞培养具体需要哪些耗材。
一、细胞培养基础试剂1、培养基：一般是用不完全培养基+10% FBS（胎牛血清）自己配的，有时也添加双抗预防细胞感染。
具体培养基类型根据你养的细胞类型去选择。
2、胰蛋白酶：简称是胰酶，消化细胞用的。
一般消化1-2 min，时间太短，细胞消化不完全，时间太长，会消化过度损伤细胞。
3、常用试剂：酒精，PBS 缓冲液。
二、细胞培养基础耗材1、细胞培养容器。
（1）培养瓶：如果你们是实验室小规模一般选50ML 100ML 250ML。
（2）玻璃瓶：培养基可以买胰酶的配置需要的成本很低所以准备两三个150ML的瓶子自己配就行了。
配置胰酶需要购买一种过滤器。
（3）细胞4102培养1653板（我们自己常用的有96空、24孔、6孔，当然还有其他的规格，可以根据需回要选择）。
（4）培养基：如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子，一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的，也要买一些装血清的血清瓶，10ml的玻璃试管也要买一些。
2、耗材。
吸管、移液管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。
（1）玻璃吸管：长25-30CM 玻璃器2113皿总是摔5261断所以稍稍长一点比较好。
（2）EP管：4ML的塑料管、冻存管、这些塑料的管子是必须的。
（3）移液枪：（各种型号都要一把吧）这个不算是耗材但是枪头是耗材。
三、细胞冻存试剂和耗材1、冻存液：一般用10% DMSO+FBS+培养基组成，FBS 和培养基的比例依细胞类型决定，比较珍贵的细胞一般用90% FBS，一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。
2、胰蛋白酶等用于细胞培养的一般试剂。
3、冻存管、离心管、离心机、吸管、枪头、显微镜、冻存盒、冰箱、液氮罐等。
D-hank's液配制
胰酶配方10×D-Hank’s液 100mL单蒸水 900mL0.5M/L EDTA 10ML胰酶（粉末） 4g用1 M NaOH 调节pH 至7.2-7.4PH调完后用0.22 um的滤器过滤除菌（注：10×D-Hank’s液先稀释成1×，调PH 7.2，再加入胰酶粉末，最后再调pH）1×Hank’s液配方NaCl 8gKCl 0.4gCaCl20.14gMgSO4·7H2O 0.2gNa2HPO4·H2O 0.06gKH2PO40.06gNaHCO30.35gGlucose 1.00g酚红 0.02g加水至1L，用NaHCO3调pH 7.2-7.4(0.22 um 滤膜过滤除菌)20×D-Hank’s液配方NaCl 160gKCl 18gNa2HPO4·12H2O 3.04gKH2PO41.2gGlucose 20g 1%酚红 40mL加水至1L，10pM，10min；7.5% Na2CO3调pH 7.2-7.4RPMI1640 配方RPMI1640粉末 10.4gHEPES 4.67gL-G 2 m mol/L，0.292g2-ME（2-巯基乙醇） 1×10-5 mol/L丙酮酸钠 1 m mol/L（0.11g/L）PNC（青霉素） 100IUSM（链霉素） 100IUO 约800mLDH2磁力搅拌3-4小时，充分溶解；用NaHCO约2g，调pH至7.2-7.43DHO加至1000 mL混匀，0.22 um滤器过滤除菌，分装，-20度保存2附：0.01mol/L 2-ME配制：取7 mL 2-ME加入93mL双蒸水（1mol/L）,再取1mol/L O至50mL，即成（即：万分之七）。
即70uL至100mL，临时用2-ME0.5mL加ddH2每1L 1640取1mL。
DMEM 配方DMEM粉末 10.4gHEPES 4.67gL-G 2 m mol/L，0.292g2-ME（2-巯基乙醇） 1×10-5 mol/L丙酮酸钠 1 m mol/L（0.11g/L）PNC（青霉素） 100IUSM（链霉素） 100IUDHO 约800mL2磁力搅拌3-4小时，充分溶解；用NaHCO约2g，调pH至7.2-7.43DHO加至1000 mL混匀，0.22 um滤器过滤除菌，分装，-20度保存2。
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胰酶配制
一、器材与试剂：
干粉型培养基、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。
具体步骤：
(1)水的制备：
细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水。
(2)PBS的制备与消毒（也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制）：1、溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2 HPO4 ?H2 O 1.56g，KH2 PO4 0.2g ）
倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
2、移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
(3) 胰蛋白酶溶液的配制与消毒：
胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+ 、Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+ 、Mg2+ 的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
1、称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
2、用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于20℃保存以备使用。
(4)青、链霉素溶液的配制与消毒
1、所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。
2、具体操作均在超净台内完成。
青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。
链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。
3、使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。
1单位＝1微克
(5)RPMI1640的制备与消毒：
1、溶解、调PH值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3的双蒸水中，并用双蒸水冲洗包装袋2-3次(冲洗液一并加入培养基中)，充分搅拌至粉剂全部溶解，并按照包装说明添加一定的药品。
然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml，使青链霉素的浓度最终各为100单位/ml。
然后用一个当量的盐酸和NaOH调PH到7.2左右。
最后定容至1000ml，摇匀。
2、安装蔡式滤器：安装时先装好
支架，按规定放好滤膜，用螺丝将不锈钢滤器和支架连接好。
然后卸下支架腿分别用布包好待消毒。
3、抽滤：配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。
通常用蔡式滤器在超净工作台内过滤。
4、分装：将过滤好的培养液分装入小瓶内置于4℃冰箱内待用。
5、使用前要向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。
(6)血清的灭活：
细胞培养常用的是小牛血清，新买来的血清要在56℃水浴中灭活30分钟后，再经过抽滤方可加入培养基中使用。
(7)HEPES溶液：
HEPES 的化学全称位羟乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid ）。
对细胞无毒性作用。
它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。
使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。
1mol/L HEPE缓冲液配制方法如下：
准确称取HEPTS 238.3g，加入新鲜三蒸水定容至1L。
过滤除菌，分装后4℃保存。
注意：因为现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，所以可根据实际情况灵活配制，但是要保证培养液内HEPES的终浓度仍然为20mmol/L 。
如：称取4.766克HEPES 溶于20ml三蒸水中，过滤除菌后可完全（20ml）加入1L培养液中，或者每100ml 培养液中加入2ml即可。
(8)谷氨酰胺：
合成培养基中都含有较大量的谷氨酰胺，其作用非常重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏要导致细胞生长不良甚至死亡。
在配制各种培养液中都应该补加一定量的谷氨酰胺。
由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50％，故应单独配制，置于-20℃冰箱中保存，用前加入培养液。
加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新加入原来的谷氨酰胺。
一般培养液中谷氨酰胺的含量为1～4mmol/L。
可以配制200mmol/L谷氨酰胺液贮存，用时加入培养液。
配制方法为，谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml 即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶，-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
(9)肝素溶液的配制：
含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为50ug/ml。
因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将其溶于100ml三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为--℃。
使用时，向100ml培养液中加入1ml（精确可加入0.9ml）即可。
(10)Ⅰ型胶原酶：
0.1％Ⅰ型胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制和消毒灭菌。
注意：因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器
过滤除菌。
分装入10ml小瓶-20℃保存。
(11)明胶溶液：
因为明胶难于过滤，所以配制0.1％明胶溶液必须用无菌的PBS配制。
所以制备
过程中必须要注意无菌操作。
首要的问题是如何无菌准确称量0.1克（配成100ml 溶液）―即解决无菌分装药品的问题。
其次要注意即使是0.1%的溶液，明胶也难溶，因此要充分摇匀，过夜放置，然后无菌分装入50ml小瓶中，4℃保存。
(12)其他培养用液的配制：
20ug/ml内皮生长因子
注意事项：
1、配制溶液时必须用新鲜的蒸馏水。
2、安装蔡式滤器时通常使用孔径0.45微米和0.22微米滤膜各一张，放置位置为0.45的位于0.22微米的滤膜上方，并且要特别注意滤膜光面朝上。
3、配制RPMI1640培养基时因为还要加入小牛血清，而小牛血清略偏酸性，为了保证培养液PH值最终为7.2，可在配制时调PH至7.4。