广州市售酸奶中乳酸菌的耐药性评估
酸牛奶中乳酸菌数的测量不确定度评定
向有稀释液的平皿内及时注入冷却至 ５０℃左右的 改良 ＭＣ 培养基约 １５ｍＬ， 转动平皿混匀。待琼脂凝固
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上文对同一样品作多次测量， 取平均值报告结果， 但一般对同一样品每次平行检测两次， 这时可使用合 并样本标准差来求检测结果的不确定度。
本实 验 室 随 机 选 择 １５ 份 酸 牛 奶 样 品 ， 制 成 均 匀 样， 由实验室内不同人员， 在不同时间内按国际规定的 测试方法进行重复性检测； 同一样品重复测试两次， 由 同一人员完成。测量结果及中间计算值见表 ２。
目前测量不确定度是对测量结果质量的定量表 征， 测量结果的可用性主要取决于其不确定度的大小。 因此对测量不确定度的评定是实验室质量管理体系的 重要组成部分， 是测试实验室质量管理的重要内容。本 文依据 ＣＮＡＳ－ ＧＬ０５：２００６《 测量不确定 度 政 策 实 施 指 南》［１］的要求， 参 考 有 关 资 料［２］， 对 酸 牛 奶 中 乳 酸 菌 数 检 测项目的检测结果作不确定度［３］的评定。 １ 方法 １．１ 检验方法
·３８·
乳品加工
中国奶牛·２００７ 年第 ４ 期
酸牛奶中乳酸菌数的测量不确定度评定
水明， 张雪林
（ 北京市乳品质量监督检验站， 北京 １０００８５）
乳及乳制品中微生物的危害与控制
乳及乳制品中微生物的危害与控制褚少兴1，2，刘 艳1，解书斌1，杨照悦1，范素琴1，徐泽斌11 青岛明月海藻集团有限公司，海洋食品加工与安全控制全国重点实验室，山东青岛 2660002 上海海洋大学，上海 200000摘 要：随着社会经济发展和人民生活水平的提高，乳制品逐渐成为人们日常生活的必需品。
它可以提供优质蛋白、钙源和维生素等，有效提高人体免疫力。
但近年来，乳制品质量安全问题时有发生，如非法添加和微生物污染等。
常见的产品胀包、酸败、蛋白凝块、苦包及产品颜色变化等均由微生物污染造成。
本文综述引起乳制品质量问题的微生物种类、污染途径及控制方法，对乳品生产企业的产品质量控制提供有益借鉴。
关键词：乳制品；微生物；污染；控制文章编号：1671-4393（2023）11-0069-06 DOI:10.12377/1671-4393.23.11.130 引言乳制品是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种产品。
乳制品根据产品状态可分为液体乳（巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳、发酵乳等）、乳粉（全脂乳粉、脱脂乳粉、部分脱脂乳粉、调制乳粉、牛初乳粉等）、其他乳制品等。
根据品类可分为液体乳类、乳粉类、炼乳类、乳脂肪类、干酪类、乳冰淇淋类、其他乳制品类七类[1]。
乳制品中有优质蛋白、丰富维生素和矿物质等，被公认为健康食品。
在疫情及后疫情时代，乳制品作为提高免疫力的食品被推上高潮[2]，目前已成为人们日常生活必不可少食品。
随着我国乳制品快速发展，质量安全问题时有报道，如2001—2004年饮用奶、奶粉中毒事件、2008年“三聚氰胺”事件等，让消费者对乳制品质量安全的关注度越来越高。
在引起乳及乳制品质量安全的众多因素中，微生物污染对乳制品的影响尤为突出，病原性微生物污染不仅影响奶牛健康，还会产生毒素，影响乳制品的品质。
乳制品生产过程中，正常的巴氏杀菌或超高温瞬杀菌虽可杀死大部分微生物，但微生物产生的耐热酶具有较强的耐热性，影响乳及乳制品品作者简介：褚少兴（1990-），男，河北省邢台市人，在读硕士研究生，中级工程师，研究方向为乳制品加工技术；刘 艳（1995-），女，山东省青岛市人，硕士研究生，中级工程师，研究方向为海盐酸盐在乳制品中的应用；解书斌（1995-），男，山东省青岛市人，硕士研究生 助理工程师，研究方向为海盐酸盐在乳制品中的应用；杨照悦（1975-），男，山东省青岛市人，本科，高级工程师，研究方向为海藻活性物质在食品及医药中的应用；范素琴（1982-），女，山东省东营市人，硕士研究生，高级工程师，研究方向为海藻活性物质在食品及医药中的应用； 徐泽斌（1986-），男，山东省青岛市人，本科，中级工程师，研究方向凝胶食品生产加工。
乳酸杆菌属对抗生素的耐药性
乳酸杆菌属对抗生素的耐药性郭慧玲;陈霞;邵玉宇;潘琳;孟和毕力格;张和平【摘要】以分离自不同地区的发酵乳制品的44株乳杆菌为研究对象,通过对其进行16S rRNA的基因序列分析,鉴定为干酪乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、瑞士乳杆菌和保加利亚乳杆菌.同时,研究了这5种乳杆菌的抗生素耐药性.结果显示,乳杆菌对不同的抗生素表现出不同的耐药性.【期刊名称】《乳业科学与技术》【年(卷),期】2014(037)006【总页数】5页(P6-10)【关键词】乳杆菌;抗生素;耐药性【作者】郭慧玲;陈霞;邵玉宇;潘琳;孟和毕力格;张和平【作者单位】内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特 010018;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特 010018;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特 010018;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特 010018;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特 010018;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特 010018【正文语种】中文【中图分类】TS201.3乳酸菌是对身体健康有益的细菌，它们可以维持肠道菌群的自然平衡，也对全身健康和免疫系统十分重要。
常见的乳酸菌主要包括两大类乳酸菌群：一类是乳杆菌，另一类是双歧杆菌[1]。
乳酸菌已被广泛应用于食品和药品领域中，但是随着抗生素的广泛使用，细菌耐药性的产生对人体产生了巨大威胁[2]。
在人体肠道内，乳酸菌可能通过基因转移方式获得其他细菌的抗性基因，也可能将携带的抗性基因转移给致病菌，使致病菌的耐药性增强，给疾病的治疗带来困难[3]。
本实验研究了分离自不同地区的发酵乳制品中44 株乳杆菌分别对11 种不同抗生素的耐药性，为乳酸菌的安全性提供部分理论依据。
1.1 菌种与试剂选取44 株菌，均由内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室提供。
GB4789. 35乳酸菌检验
乳酸菌计数
乳杆菌计数 乳酸菌总数结果减去 双歧杆菌与 嗜热链球 菌计数结果之和即得乳杆菌计数。
报告（GB/T4789.35-2008）
根据菌落计数结果出具检测报告。最终确定 的乳酸菌菌落在30～300之间的平板计数， 再乘以相应的稀释倍数，修约保留两位有效 数字，之后的数字，采用10的指数表示。参 照GB/T 4789.2规定。每克（或毫升）食品 中所含有的乳酸菌数以CFU/g（mL）表示。
结果的表述
7.4.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在 适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平 均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为 每g（mL）中菌落总数结果。 7.4.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在 适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
7.4.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平 板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以 最高稀释倍数计算。 7.4.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释 倍数计算。 7.4.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平 板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍 数计算。 7.4.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2010版
样品制备
7.1.3 固体和半固体食品：以无菌操作称取25 g 样品，置于装有225 mL 生理盐水的无菌均质杯内， 于8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min， 制成1:10 样品匀液；或置于225 mL 生理盐水的无 菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min 制成1:10 的样品匀液。 7.1.4 液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以 无菌吸管吸取样品25 mL 放入装有225 mL 生理盐 水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠） 中，充分振摇，制成1:10 的样品匀液。
乳酸菌的应用现状及前景
乳酸菌的应用现状及前景【摘要】乳酸菌是一种有益的微生物，在食品、医药、生物工程、环境保护和美容保健领域都有广泛的应用。
在食品行业，乳酸菌可以用于制作酸奶、奶酪等发酵食品；在医药行业，乳酸菌可以用于调节肠道菌群、增强免疫力；在生物工程领域，乳酸菌可以用于生产有机酸和酶；在环境保护中，乳酸菌可以用于处理污水和土壤；在美容保健领域，乳酸菌可以用于护肤品和口腔保健品。
未来，乳酸菌的应用前景十分广阔，市场需求不断增长。
乳酸菌的发展趋势主要体现在产品多样化、功能化和定制化方面。
市场前景分析显示，乳酸菌市场有望持续稳步增长，成为未来发展的热点领域。
【关键词】乳酸菌, 应用现状, 前景, 食品行业, 医药行业, 生物工程, 环境保护, 美容保健, 应用前景展望, 发展趋势, 市场前景分析1. 引言1.1 乳酸菌的应用现状及前景乳酸菌是一类益生菌，被广泛应用于食品行业、医药行业、生物工程领域、环境保护和美容保健领域。
随着人们对健康的关注不断增加，乳酸菌的应用前景也变得愈发广阔。
在食品行业中，乳酸菌被广泛添加到酸奶、乳饮料、发酵食品等产品中，不仅可以增加产品的口感和营养，还能调节肠道菌群，提高消化吸收功能，对人体健康大有裨益。
乳酸菌的应用前景十分乐观，随着科学技术的不断发展，乳酸菌将会在更多领域展现其价值，未来的市场前景也将更加广阔。
2. 正文2.1 乳酸菌在食品行业的应用1. 发酵乳制品：乳酸菌是制作酸奶、发酵乳、酸乳等乳制品的重要原料之一。
通过乳酸菌的发酵作用，可以增加乳制品的口感、延长保存期限，并且还可以产生益生菌，有助于维持肠道菌群平衡，促进消化吸收。
2. 醋的生产：乳酸菌在醋的生产中也发挥着重要作用。
乳酸菌可以将酒精发酵成乳酸，再经过乳酸发酵转化成醋酸，从而制作出具有酸味的醋，广泛应用于食品调味和保鲜中。
3. 面包的制作：在面包的发酵过程中，乳酸菌可以产生乳酸和醇类物质，使得面包更加松软、有弹性，并且还可以增加面包的营养价值和口感。
-三株食用乳酸菌对抗生素的药敏性研究
!""#魏新元，张新颖，赵艳茹（西北农林科技大学，食品科学与工程学院，陕西杨凌!"#"$$）摘%要：乳酸菌是人体胃肠道内的益生菌，抗生素的施用可能导致乳酸菌功能的降低或丧失。
为了了解乳酸菌对药物的敏感性，以便指导人们合理使用乳酸菌制品和施药，本实验通过对保加利亚乳酸杆菌、嗜热链球菌和乳酸链球菌三株常用乳酸菌对氨苄青霉素、氯霉素、红霉素、链霉素和四环素等五种医疗常用抗生素的敏感性进行研究，结果显示，不同的乳酸菌对不同的抗生素表现出不同的敏感性。
研究结果提示人们在使用乳酸菌制品时，要注意施用药物对乳酸菌的影响。
关键词：乳酸菌，抗生素，敏感性!"#$%&’(’")*)&")+,,-’,)").)"%&/"01--,"1()’,&/-$)*2-2(+")+(+)$*(+"-1)(!"#$%&&’()&，*+,-.$%&&’%&/，*+,01)&&2(（’())*+*(,-((./01*20*32.42+12**512+，6(5789*:7;<-=21>*5:17?，@32+)12+!"#"$$，’8123）3*,"1(+"：!"#$%#"#%&’"#$()%"")(’(*(+%#%",-(-’()./+$0(-%#)/’%/$"%*$0(1".$)/&%*$(.$%*",$)"#$/+02-"*.A 30("44,%#"$%/*/+"*$%’%/$%#.#/2,&)(.2,$%*+2*#$%/*)(&2#$%/*/)(5(*&(5%$",%6"$%/*/+,"#$%#"#%&’"#$()%"A 7*/)&()$/2*#/5()$0("*$%’%/$%#..(*.%$%5%$8/+,"#$%#"#%&’"#$()%""*&%*.$)2#$02-"*$/"44,8,"#$%#"#%&’"#$()%"4)/&2#$.)("./*"’,8%+$0(89()($":(*.%-2,$"*(/2.,89%$0"*$%’%/$%#$0()"48，$0%..$2&8+/#2.(&/*.(*.%$%5%$8$(.$./+B .$)"%*./+,"#$%#"#%&’"#$()%"（!"#$%&"#’(()*&)(+",’#)*，-$,./$%#%##)*$0.,1%/0’()*"*&-$,./$%#%##)*"#’2’("#$’#’）$/C :%*&./+"*$%’%/$%#.（"-4%#%,,%*，#0,/)"-40(*%#/,，()8$0)/-8#%*，.$)(4$/-8#%*"*&$($)"#8#,%*(）A 30()(.2,$..0/9(&$0"$&%++()(*$,"#$%#"#%&’"#$()%"4/..(..(&&%++()(*$.(*.%$%5%$8$/&%++()(*$"*$%’%/$%#.A 7$42$4(/4,(%*-%*&/+$0(%*+,2(*#(/+"*$%’%/$%#.，90(*$0(8(-4,/8+//&"*&0(",$04)/$(#$%/*#/*$"%*%*1,"#$%#"#%&’"#$()%"A 4-%5&1$,：,"#$%#"#%&’"#$()%"；"*$%’%/$%#.；.(*.%$%5%$8中图分类号：DEBEA""F !%%%%文献标识码：;%%%%文章编号："$$#&$B$G （#$"$）$E&$"GG&$B 收稿日期：#$$E&$E&"!作者简介：魏新元（"E!"&），男，博士，讲师，主要从事微生物学和分子生物学教学与研究。
几种市售活性乳酸菌饮料的活菌含量测定与分析
几种市售活性乳酸菌饮料的活菌含量测定与分析作者：潘旻佳来源：《中国科技教育》2016年第05期目的在日常生活中，我发现有关活性乳酸菌饮料的广告宣传比较多，在超市购物时也经常能看到这类饮料，由此我产生了一些疑问：什么是活性乳酸菌？饮料包装上写着每毫升含100亿或者300亿个活菌，是否真有那么多？为什么这类饮料要放在冰柜里保存？我希望了解喝活性乳酸菌饮料有什么好处，并学习检测微生物含量的方法，亲自动手检测不同保存条件下的活性乳酸菌饮料的活菌含量，进而为这类饮料的消费者提供有益的建议。
过程确定研究题目，制订研究计划和方案；请教教师并通过图书馆和上网查阅资料；选择大、中、小型超市进行实地调查；在实验室检测不同品牌和保存条件的乳酸菌饮料的活菌含量；分析结果，撰写论文。
结果与分析查资料情况及结果通过上网搜索、查阅期刊资料、向中科院微生物所的专家和教师请教等多种方式，了解了微生物的基本原理、乳酸菌的基本特性、微生物检测实验过程和基本方法等知识，撰写了查新报告。
通过查找资料，了解了活性乳酸菌的基本知识。
通过上网查找资料了解到活性乳酸菌有生长曲线，按照生长速率不同，一般分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期4个阶段，这有助于理解和分析活性乳酸菌检测原理和结果。
市场抽样调查设计市场抽样调查表，选取西城区官园桥、赵登禹路及附近区域的50个大型（营业面积100平方米以上）、中型（营业面积30-100平方米）和小型超市（含小卖部，营业面积30平方米以下）进行了实地调查。
经过市场调查得到以下结论。
一是50个营业单位中有31个（占62%）出售至少1种品牌的活性乳酸菌饮料，其中大型、中型和小型超市中出售活性乳酸菌饮料的分别为100%、87%和35%。
大型超市经营的品牌均超过3个，中型超市有1-3个不等，而小型超市顶多1-2个。
这些情况说明这类饮料有一定市场销路，在大中型超市中都能买到。
二是31个出售活性乳酸菌的超市中26个均以冷藏保存饮料（占84%）。
乳酸菌抗生素抗性的研究进展
rpgy@中国乳品工业0引言细菌的抗生素抗性伴随着抗生素应用于临床而出现[1]。
目前，抗性很少出现在未直接接触抗生素的细菌中[2]。
有学者猜测，共生菌可能像病原菌一样也存在抗性基因[3]。
对乳酸菌的研究多集中在其抗性基因的起源及其潜在的转移机制上。
抗性基因通过转移而增加[4]。
抗生素抗性分为先天和获得性。
先天抗性基因大多不可水平转移；获得性抗性可能来自一个种属的特定基因，可进行水平转移。
其获得可能由于细菌基因变异或者通过获得外源编码的抗性基因，这些基因通过改变膜渗透功能，使抗抗生素的酶失活；或通过主动运输，进行目标性修饰[5]；或通过改变接触点的代谢来完成目标菌的防御[6]。
1乳酸菌的抗生素抗性1980年Sozzi 等[7]对分离自酸奶的31株Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus 和15株Streptococcus thermophilus 进行抗药性分析，得到Lactobacillus delbrueckii subsp.bul -garicus 对制霉菌素、萘啶酸、新霉素、多粘菌素B 、甲氧苄啶、多粘菌素和磺酰胺有先天抗性，对邻氯青霉素、双氯青霉素、呋喃妥因、新生霉素、竹桃霉素、苯唑西林和链霉素敏感性相同，而对卡那霉素和链霉素的抗性不同；Streptococcus thermophilus 对多粘霉素、庆大霉素、卡那霉素、制霉菌素、萘啶酸、新霉素、多粘菌素B 、甲氧苄啶、链霉素和磺胺的抗性不同。
1985年Orberg 等[8]对26株ctis subsp.cremoris 和lactis 的研究发现，它们对甲氧苄啶有抗性，其中的大多数菌株对磺胺嘧啶有抗性；对庆大霉素、卡那霉素、林可霉素、新青霉素ⅲ、新霉素、细菌素、利福平和链霉素抗性不同。
1992年Curragh 等[9]报道一部分乳杆菌对呋喃妥因、卡那霉素和链霉素有抗性，但抗性存在差异。
Elisha 等[10]在1995年的研究表明，许多L.plantarum 、L.casei 、L.salivarius 、L.leishmannii 和L.acidophilus 由于体内有D-丙氨酸和D-丙氨酸连接酶的出现，对万古霉素有天然的抗性。
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现代食品科技Modern Food S cience and Technology2014, Vol.30, No.10广州市售酸奶中乳酸菌的耐药性评估石磊，李艳莉，梁暖意，董春阳，孟赫诚，闫鹤 （华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）摘要：研究广州市售酸奶中乳酸菌对不同种类抗生素的药物敏感性。
从市售酸奶中分离并鉴定乳酸菌，采用纸片扩散法检测分 离菌株对18种抗生素的药物敏感性；E-test 方法对耐药菌株进行最低抑菌浓度测定。
从31份市售保质期内商标注册酸奶中分离鉴定出 48株乳酸菌，其中25株嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus） 、20株保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus） 、3株副干酪乳杆菌 （Lactobacillus paracasei） 。
48株乳酸菌对卡那霉素、链霉素均耐药；对头孢他啶、头孢噻肟、红霉素均敏感；对环丙沙星、庆大霉 素、万古霉素等呈现出不同程度的耐受性；79.2% (38/48)表现出多重耐药性；E-test 分析表明，除了保加利亚乳杆菌MR10的MIC为256 µg/mL以外，所有万古霉素耐药菌株对万古霉素的MIC均大于1024 µg/mL。
不同品牌酸奶分离菌株对抗生素具有不同的耐受性，均有 多重耐受性出现，应加强其耐药性连续监测及安全评价。
关键词：酸奶；乳酸菌；耐药性 文章篇号： 1673-9078(2014)10-245-250 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.10.041Antibiotic Resistance of Lactic acid bacteria in Yogurt from GuangzhouSHI Lei, LI Yan-li, LIANG Nuan-yi, DONG Chun-yang, MENG He-cheng, YAN He (School of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)Abstract: The aim of this study was to evaluate the antibiotic sensitivity of Lactic acid bacteria isolated from commercially available yogurt in Guangzhou. The bacteria isolated from 31 commercially available yogurt samples (used before expiry date) were identified by physiological and biochemical reactions and 16s rDNA sequence analysis. The sensitivity of these strains to 18 different antibiotics was determined using Kirby-Bauer method. The minimum inhibitory concentration (M IC) of the drug-resistant strains in this study was determined by the Epsilometer test (E-test). In all, 48 isolates were identified, including 25 Streptococcus thermophilus strains, 20 Lactobacillus bulgaricus strains, and 3 Lactobacillus paracasei strains. All strains were found to be susceptible to ceftazidime, cefotaxime, and erythromycin; resistant to kanamycin and streptomycin; and showed different degrees of resistance to ciprofloxacin, gentamicin, and vancomycin. Moreover, multi-drug resistance (resistance to ≥3 antibiotics) w as detected in 79.2% of isolates. The E-test results showed that MIC for all vancomycin-resistant strains was greater than 1024 µg/mL, except that for Lactobacillus bulgaricus MR10 (256 μg/mL). Strains from different yogurt samples showed resistance to different drugs, and multi-drug resistance was observed in lactic acid bacteria. Therefore, continuous monitoring of antibiotic resistance and safety evaluation of lactic acid bacteria is recommended. Key words: yogurt; Lactic acid bacteria; antibiotic resistance酸奶是以嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌为主要菌 种所生产的发酵乳。
有些酸奶制品还添加嗜酸乳杆菌 和双歧杆菌以增加其益生特性[1]。
乳酸菌菌种一般被认 为是安全的无致病性的益生菌种，不仅可以提高食品 的营养价值，还可以改善食品风味。
由于乳酸菌的特 殊生理活性和营养功能，正日益引起人们的重视。
收稿日期：2013-11-22 基金项目：国家自然科学基金项目资助（31201363） ；国家级大学生创新创业 训练计划(1056112055) 作者简介：石磊（1961-） ，男，博士，教授，研究方向：糖类物质及其药物 制备与生物利用；李艳莉，并列第一作者 通讯作者：闫鹤（1972-） ，女，副研究员，主要从事细菌耐药机制及食品安 全研究乳酸菌对消费者健康的益处已被公认，但也面临 着一些问题，其中亟待解决的问题之一是部分乳酸菌 也产生了耐药性。
耐药性主要是伴随着抗生素应用于 治疗细菌感染产生的。
长期以来，主要是研究致病微 生物的耐药性。
然而，研究发现食品中使用的乳酸菌 也产生了耐药性。
已有报道，干酪乳杆菌、植物乳杆 菌、嗜酸乳杆菌等对糖肽类抗菌药物都有天然耐药性， 且对青霉素G、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星均有不 同程度耐受性出现， 并已检测出相应的耐药基因[2]。
在 我国，徐进等人从保健食品益生菌制剂中分离得到的 12株菌中， 除动物双歧杆菌FDBb-12耐受2种抗生素外， 其余菌株分别耐受3~9种常见抗生素，属于多重耐药菌[3]。
作为进入人和动物有机体的外源性活菌在肠道内生245现代食品科技Modern Food S cience and Technology2014, Vol.30, No.10长、定植、繁殖，其耐药基因可能以各种方式在肠道 内微生物菌群之间相互传递，从而导致某些致病菌也 获得了耐药性。
因此，对乳酸菌的耐药性检测与分析 对益生菌制品安全性评价十分必要。
本研究主要是了解广州市售酸奶中乳酸菌对抗生 素的药物敏感性状况，采用纸片扩散法就分离得到的 乳酸菌进行耐药性检测，同时对耐药菌株进行最低抑 菌浓度测定，为酸奶乳酸菌的安全性评价提供理论参 考。
所用引物为 27F： 5’-AGAGTTTGA TCCTGGCT CAG-3’ 和 1495R ： 5’-CTACGGCTACCTTGTTACG A-3’。
PCR 条件如下： 95 ℃ 5 min， 94 ℃ 1 min， 58 ℃ [4] 1 min，72 ℃ 2 min，30 个循环，72 ℃ 10 min 。
上海 美吉生物医药科技有限公司测序，将 16S rDNA 基因 测序结果通过 BLAST 在 GenBank 中进行同源比对分 析，鉴定乳酸菌种类。
1.2.2 菌悬液的制备将金黄色葡萄球菌 A TCC25923 及受试乳酸菌分 别于相应的培养基上活化，用接种针从纯化培养的平 板上挑取单个菌落至 2 mL 无菌生理盐水试管中，与 0.5 麦氏标准比浊管比对， 研磨制成 0.5 麦氏浊度的均 一细菌悬液，与 4 ℃保存备用。
1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 材料来源随机采取广州地区市售的保质期内商标注册酸 奶 31 份，质控菌株为金黄色葡萄球菌 A TCC25923。
1.2.3 接种将无菌无毒的棉签浸泡于接种悬浮液中，在管内 壁挤压棉签去除多余菌液， 在 90 mm 的琼脂面上仔细 划线三次，每次将平板旋转 60° ，以便使接种液均匀 分布在整个平板上。
1.1.2 药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司，包括 18 种 常用抗生素：Ⅰ青霉素类：青霉素（PEN 10 µ g） 、氨 苄西林（AMP 10 µ g） 、青霉素/舒巴坦（SAM 10/10 µ g） ；Ⅱ青霉烯类：亚胺培南（IPM 10 µ g） ；Ⅲ氨基糖 苷类：链霉素 （STR 10 µ g） 、 卡那霉素 （KAN 30 µ g） 、 庆大霉素 （GEN 10 µ g） ； Ⅳ四环素类： 强力霉素 （DOX 30 µ g） 、四环素（TET 30 µ g） ；Ⅴ氯霉素类：氯霉素 （CHL 30 µ g） ；Ⅵ喹诺酮类：环丙沙星（CIP 5 µ g） ； Ⅶ安沙霉素类：利福平（RIF 5 µ g） ；Ⅷ叶酸途径抑制 剂类：复方新诺明（SXT 1.25/23.75 µ g） ；Ⅸ头孢菌素 类：头孢噻吩（CEP 30 µ g） 、头孢他啶（CTZ 30 µ g） 、 头孢噻肟 （CTX 30 µ g） ； Ⅹ大环内酯类： 红霉素 （ERY 15 µ g） ；Ⅺ糖肽类：万古霉素（V AN 30 µ g） 。