噶米朗伯-比尔定律的偏离及理论解释
演示版朗伯-比尔定律.doc
伯(Lambert)定律阐述为：光被透明介质吸收的比例与入射光的强度无关；在光程上每等厚层介质吸收相同比例值的光。
目录编辑本段定义朗伯比尔定律又称比尔定律、比耳定律、朗伯-比尔定律、布格-朗伯-比尔定律（Bouguer–Lambert–Beer law），是光吸收的基本定律，适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。
比尔-朗伯定律是吸光光度法、比色分析法和光电比色法的定量基础。
光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目。
公式及参数意义log( Io/I)= εCl (1—4)公式中Io和I分别为入射光及通过样品后的透射光强度；log（Io/I）称为吸光度(ab—sorbance)旧称光密度(optical density)；C为样品浓度；l为光程；ε为光被吸收的比例系数。
当浓度采用摩尔浓度时，ε为摩尔吸收系数。
它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关。
当产生紫外吸收的物质为未知物时，其吸收强度可用表示：(1—5)公式中C为lOOml溶液中溶质的克数；b为光程，以厘米为单位；A为该溶液产生的紫外吸收；表示lcm光程且该物质浓度为lg/lOOmL时产生的吸收。
朗伯—比尔定律数学表达式A=lg(1/T)=Kbc（A为吸光度,T为透射比,是透射光强度比上入射光强度c为吸光物质的浓度b 为吸收层厚度）物理意义当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,与其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比.朗伯-比耳定律成立的前提(1) 入射光为平行单色光且垂直照射.(2) 吸光物质为均匀非散射体系.(3) 吸光质点之间无相互作用.(4) 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生.比尔－朗伯定律维基百科，自由的百科全书（重定向自比尔-朗伯定律）比尔-朗伯定律（Beer–Lambert law），又称比尔定律、比耳定律、朗伯-比尔定律、布格-朗伯-比尔定律（Bouguer–Lambert–Beer law），是光吸收的基本定律，适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。
朗伯-比尔定律
伯(Lambert)定律阐述为：光被透明介质吸收的比例与入射光的强度无关；在光程上每等厚层介质吸收相同比例值的光。
目录编辑本段定义朗伯比尔定律又称比尔定律、比耳定律、朗伯-比尔定律、布格-朗伯-比尔定律（Bouguer–Lambert–Beer law），是光吸收的基本定律，适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。
比尔-朗伯定律是吸光光度法、比色分析法和光电比色法的定量基础。
光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目。
公式及参数意义log( Io/I)= εCl (1—4)公式中Io和I分别为入射光及通过样品后的透射光强度；log（Io/I）称为吸光度(ab—sorbance)旧称光密度(optical density)；C为样品浓度；l为光程；ε为光被吸收的比例系数。
当浓度采用摩尔浓度时，ε为摩尔吸收系数。
它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关。
当产生紫外吸收的物质为未知物时，其吸收强度可用表示：(1—5)公式中C为lOOml溶液中溶质的克数；b为光程，以厘米为单位；A为该溶液产生的紫外吸收；表示lcm光程且该物质浓度为lg/lOOmL时产生的吸收。
朗伯—比尔定律数学表达式A=lg(1/T)=Kbc（A为吸光度,T为透射比,是透射光强度比上入射光强度c为吸光物质的浓度b 为吸收层厚度）物理意义当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,与其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比.朗伯-比耳定律成立的前提(1) 入射光为平行单色光且垂直照射.(2) 吸光物质为均匀非散射体系.(3) 吸光质点之间无相互作用.(4) 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生.比尔－朗伯定律维基百科，自由的百科全书（重定向自比尔-朗伯定律）比尔-朗伯定律（Beer–Lambert law），又称比尔定律、比耳定律、朗伯-比尔定律、布格-朗伯-比尔定律（Bouguer–Lambert–Beer law），是光吸收的基本定律，适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。
朗伯-比尔定律
伯(Lambert)定律阐述为：光被透明介质吸收的比例与入射光的强度无关；在光程上每等厚层介质吸收相同比例值的光。
目录定义朗伯比尔定律又称比尔定律、比耳定律、朗伯-比尔定律、布格-朗伯-比尔定律（Bouguer–Lambert–Beer law），是吸收的基本定律，适用于所有的和所有的吸光物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。
比尔-朗伯定律是、比色分析法和的定量基础。
光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目。
公式及参数意义log( Io/I)= εCl (1—4)公式中Io和I分别为入射光及通过样品后的强度；log（Io/I）称为(ab—sorbance)旧称光密度(optical density)；C为样品浓度；l为；ε为光被吸收的比例系数。
当浓度采用浓度时，ε为摩尔吸收系数。
它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关。
当产生紫外吸收的物质为未知物时，其吸收强度可用表示：(1—5)公式中C为lOOml溶液中溶质的克数；b为光程，以厘米为单位；A为该溶液产生的紫外吸收；表示lcm光程且该物质浓度为lg/lOOmL时产生的吸收。
朗伯—比尔定律数学表达式A=lg(1/T)=Kbc（A为吸光度,T为透射比,是透射光强度比上入射光强度c为吸光物质的浓度b 为吸收层厚度）物理意义当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,与其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比.朗伯-比耳定律成立的前提(1) 入射光为平行单色光且垂直照射.(2) 吸光物质为均匀非散射体系.(3) 吸光质点之间无相互作用.(4) 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生.比尔－朗伯定律维基百科，自由的百科全书（重定向自）比尔-朗伯定律（Beer–Lambert law），又称比尔定律、比耳定律、朗伯-比尔定律、布格-朗伯-比尔定律（Bouguer–Lambert–Beer law），是吸收的基本定律，适用于所有的和所有的物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。
朗伯-比耳定律
M
(三)标准曲线的绘制及应用
1.
标准曲线
配制一系列已知浓度的
标准溶液，在确定的波长和光 程等条件下，分别测定系列溶 液的吸光度(A)，然后以吸光
A
度为纵坐标，以浓度(c)为横
坐标作图，得到一条曲线，称 标准曲线，也称做工作曲线。
C
2. 标准曲线的应用
(1)曲线的斜率为 b，由 于b是定值，由此可得到 A
κ495=1.5×105 L · -1 · -1 mol cm
(3) 吸收系数(a)与摩尔吸收系数() 的关系
=aM
吸收系数(a)常用于化合物组成不明，
相对分子质量尚不清楚的情况。
摩尔吸收系数()的应用更广泛。
2. 桑德尔灵敏度(Sandell) S
吸光光度法的灵敏度除用摩尔吸收系
数表示外，还常用桑德尔灵敏度S表示。
定义：当光度仪器的检测极限为A=0.001
时，单位截面积光程内所能检出的吸光
物质的最低质量
单位：g·cm-2
3.桑德尔灵敏度(S)与摩尔吸收
系数()的关系
由桑德尔灵敏度S的定义可得到：
A=0.001=bc
bc
0.001
∵b : cm c : mol· -1=mol/103cm3 L ∴bc = mol/103cm2 (1) 若再乘以M( g · -1 )， mol 则为103cm2的截面积光 程中所含物质的质量(g) (2)若再乘已106，则(g)把 变成了(g)
（二）化学因素
1．溶液浓度过高引起的偏离
朗伯-比耳定律是建立在吸光质点之间没有 相互作用的前提下。但当溶液浓度较高时，吸 光物质的分子或离子间的平均距离减小，从而 改变物质对光的吸收能力，即改变物质的摩尔 吸收系数。浓度增加，相互作用增强，导致在 高浓度范围内摩尔吸收系数不恒定而使吸光度 与浓度之间的线性关系被破坏。
朗伯-比尔定律
一、朗伯-比尔定律1、推导当一束单色光垂直射到均匀的溶液时，一部分被器皿表面反射，一部分被溶液中的吸光质点吸收，一部分透过溶液。
设入射的单色光强度为I0。
，反射光强度I r。
吸收光强度为I a，透过光强度为I t，则它们之间的关系为I0 = I r + I a + I t当入射光垂直于介质表面射入，I r很小，（约为入射光强度的4%），又由于进行光度分析时，都采用同质料、同厚度的吸收池盛试液和空白溶液，然后让强度同为I0的单色光分别通过这两个吸收池，再测量其透过光的强度。
此时Ir基本上是不变的,且其影响可以抵消。
故上式可简化为：I0 = I r + I t单色光通过溶液时，光的强度减弱的主要原因是溶液中的吸光质点吸收了一部分光能。
图8-3 单色光通过溶液示意图如上图所示，当一束强度为I0的平行单色光垂直照射到长度为b的液层时，由于溶液中吸光质点的吸收，通过溶液后光的强度减为I，如将液层分为厚度为无限小的相等薄层db，设其截面积为S，则每一薄层的体积为dV，即Sdb，又设此薄层溶液中吸光质点数为dn，照射到薄层溶液上的光强度为I b，光通过薄层溶液后，强度减弱dl b，则dl b与dn成正比，也与I b成正比，即-dl b = K · l b · dn (1)负是表示光温度减弱，K 为比例常数。
设吸光物质浓度为C，则上述薄层溶液中的吸光质点数dn为：dn = K2 . C .dV = K2 . C . S . db (2)K2与所取浓度、面积及长度的单位有关，式中S为光束截面积，对一定仪器为定值。
将式（2）带入式（1）中，合并常数项，得到-dI b = K1 . I b. K2 . C . S . db-dI b = K3 . I b . C . dbK3 = K1 . K2 . S这个关系式称为光吸收定律或比耳定律的数学表达式。
lgI0/I称为吸光度，用符号A表示，其物理意义表示有色溶液吸收单色入射光的程度。
朗伯 - 比尔定律
朗伯- 比尔定律摘要：一、朗伯-比尔定律的概念及意义二、朗伯-比尔定律的数学表达式三、朗伯-比尔定律的应用领域四、影响朗伯-比尔定律的因素五、朗伯-比尔定律在实际生活中的应用案例正文：朗伯-比尔定律（Lambert-Beer law）是一种描述物质在溶液中吸光度与浓度、厚度以及溶液对该光线的吸收波长之间关系的定律。
该定律在光学、环境科学、化学、生物学等领域具有广泛的应用。
一、朗伯-比尔定律的概念及意义朗伯-比尔定律是由约翰·亨利·朗伯（John Herschel）在1852年提出的。
它指出，在一定条件下，物质对某一波长光的吸收程度与该物质的浓度成正比，与溶液的厚度成反比。
这意味着，通过测量物质溶液在特定波长下的吸光度，我们可以推断出溶液中物质的浓度。
二、朗伯-比尔定律的数学表达式朗伯-比尔定律的数学表达式为：A = eb*l*C其中，A 表示吸光度，eb 表示摩尔吸光系数（单位：L/mol·cm），l 表示溶液厚度（单位：cm），C 表示溶液浓度（单位：mol/L）。
三、朗伯-比尔定律的应用领域朗伯-比尔定律在许多领域都有广泛的应用，如化学分析、环境监测、生物医学检测等。
通过测量物质溶液在特定波长下的吸光度，可以快速、准确地测定物质的浓度，从而为各种研究和实际应用提供数据支持。
四、影响朗伯-比尔定律的因素虽然朗伯-比尔定律提供了一种简单、快捷的测量方法，但在实际应用中，一些因素可能会影响到测量结果。
这些因素包括：溶液的温度、溶液的酸碱性、溶剂的种类、测量仪器的精度等。
因此，在应用朗伯-比尔定律进行测量时，需要注意这些因素的影响，并进行相应的校正。
五、朗伯-比尔定律在实际生活中的应用案例在日常生活中，朗伯-比尔定律也有很多实际应用。
例如，在酒类生产中，通过测量酒液对特定波长光的吸光度，可以了解酒中的糖分含量；在医学检测中，通过测量血液或尿液对特定波长光的吸光度，可以快速检测出患者是否患有某些疾病。
比色分析的基本原理朗伯比尔定律
比色分析的基本原理(朗伯-比尔定律,吸光度,消光度,吸光系数)( 关键词：比色分析,吸光光度法,光电比色法,分光光度法,朗伯-比尔定律,吸光度,消光度,吸光系数)比色分析是基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，又称吸光光度法。
有色物质溶液的颜色与其浓度有关。
溶液的浓度越大，颜色越深。
利用光学比较溶液颜色的深度，可以测定溶液的浓度。
根据吸收光的波长范围不同以及所使用的仪器精密程度，可分为光电比色法和分光光度法等。
比色分析具有简单、快速、灵敏度高等特点，广泛应用于微量组分的测定。
通常中测定含量在10-1～10-4mg·L-1的痕量组分。
比色分析如同其他仪器分析一样，也具有相对误差较大（一般为1%～5%）的缺点。
但对于微量组分测定来说，由于绝对误差很小，测定结果也是令人满意的。
在现代仪器分析中，有60%左右采用或部分采用了这种分析方法。
在医学学科中，比色分析也被广泛应用于药物分析、卫生分析、生化分析等方面。
一、物质的颜色和光的关系光是一种电磁波。
自然是由不同波长（400～700nm）的电磁波按一定比例组成的混合光，通过棱镜可分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种颜色相连续的可见光谱。
如把两种光以适当比例混合而产生白光感觉时，则这两种光的颜色互为补色。
图8-1中处于同一直线关系的两种色光（如绿与紫、黄与蓝）互为补色。
当白光通过溶液时，如果溶液对各种波长的光都不吸收，溶液就没有颜色。
如果溶液吸收了其中一部分波长的光，则溶液就蜈现透过溶液后剩余部分光的颜色。
例如，我们看到KMnO4溶液在白光下呈紫红色，就是因为白光透过溶液时，绿色光大部分被吸收，而其他各色都能透过。
在透过的光中除紫红色外都能两两互补成白色，所以KMnO4溶液呈现紫红色。
有色溶液的颜色是被吸溶液能吸收黄色光，所以溶液呈蓝色。
由此可见，同理，CuSO4收光颜色的补色。
吸收越多，则补色的颜色越深。
比较溶液颜色的深度，实质上就是比较溶液对它所吸收光的吸收程度。
朗伯比尔定律原理
朗伯比尔定律原理嘿，朋友们！今天咱来聊聊朗伯比尔定律原理。
这玩意儿啊，就像是一把神奇的钥匙，能打开好多科学奥秘的大门呢！你看啊，这朗伯比尔定律原理就好像是我们生活中的一个小魔法。
比如说，我们在大晴天走在路上，阳光直直地照下来，有些地方亮堂堂的，有些地方却比较暗，这其实就和朗伯比尔定律有点关系呢！它说的就是物质对光的吸收程度和很多因素有关。
就好像我们去超市买东西，不同的东西有不同的价格，而这里呢，不同的物质对光的吸收能力也是不一样的。
有的物质就像个“大胃王”，能把光吃得多多的；而有的物质就比较“挑食”，对光不怎么感兴趣。
想象一下，光就像一群小精灵，它们欢快地跑着，遇到不同的物质，有的被热情地挽留，有的则轻松地穿过去了。
这是不是很有意思？我们在实验室里做实验的时候，经常会用到这个定律呢。
通过它，我们可以知道某种溶液里到底有多少我们想要研究的物质。
就好比我们要在一堆糖果里找出特定口味的糖果，朗伯比尔定律就帮我们找到了方法。
而且啊，这个定律还特别靠谱。
它就像我们的老朋友，每次都能给我们准确的答案。
不像有些不靠谱的家伙，一会儿这样一会儿那样。
你说，要是没有朗伯比尔定律，我们得走多少弯路啊！好多科学研究可能就会变得困难重重，就像在黑暗中摸索一样。
但有了它，就像是有了一盏明灯，照亮我们前进的道路。
这朗伯比尔定律原理可真是个宝贝啊！它在化学、物理、生物等好多领域都发挥着重要的作用。
它让我们能更深入地了解物质的性质，能让我们做出更准确的判断和实验。
所以啊，朋友们，可别小看了这个朗伯比尔定律原理。
它虽然看起来不起眼，但却有着大大的能量呢！它就像一个隐藏在科学世界里的小惊喜，等待着我们去发现和利用。
让我们一起好好利用这个神奇的定律，去探索更多的科学奥秘吧！总之，朗伯比尔定律原理真的是非常非常重要啊！原创不易，请尊重原创，谢谢!。
朗伯比尔定律
一、透光率和吸光度 二、Lambert-Beer定律 三 偏离Lambert-Beer定律的原因
一、透光率和吸光度
当一束单色光通过均匀的溶液 时，光的一部分被吸收，一部分透 过溶液，还有一部分被器皿表面反 射。设入射光强度Ia 为I0,吸收光强 度为 ，透射光强度为It，反射光
强度为II0r，则：Ia It Ir
式中A为总吸光度，Aa、Ab、Ac….. 为溶液中共存物质各组分a、b、c……等的吸 光度。
例：已知某化合物的相对分子质量为251，将此 化合物用乙醇作溶剂配制成浓度为 0.150mmol·L－1的溶 液，在480nm波长处 用 2.00cm吸收池测得透光率为39.8％，求该化
合 吸光物系在数上述a条。件下的摩尔吸光 系A数 εlg及T 质量
D．航空运输
解析：根据所学1872年李鸿章创办轮船招商局，这是洋务
运动中由军工企业转向兼办民用企业、由官办转向官督商
办的第一个企业。具有打破外轮垄断中国航运业的积极意
义，这在一定程度上保护了中国的权利。据此本题选C项。
答案：C
2. 右图是1909年《民呼日报》上登载的 一幅漫画，其要表达的主题是( ) A．帝国主义掠夺中国铁路权益 B．西方国家学习中国文化 C．西方列强掀起瓜分中国狂潮 D．西方八国组成联军侵略中国
二、近代以来交通、通讯工具的进步对人们社会生活的影 响
(1)交通工具和交通事业的发展，不仅推动各地经济文化交 流和发展，而且也促进信息的传播，开阔人们的视野，加快 生活的节奏，对人们的社会生活产生了深刻影响。
(2)通讯工具的变迁和电讯事业的发展，使信息的传递变得 快捷简便，深刻地改变着人们的思想观念，影响着人们的社 会生活。
但在实际测定中，常会出现标准曲线偏离直线的现 象，曲线向上或向下发生弯曲，这种现象称为偏离 Lambert-Beer 定律。
偏离朗伯-比尔定律的因素
偏离朗伯-比尔定律的因素
沧州医学高等专科学校
刘超
分析化学
分析化学 偏离朗伯比-尔定律的因素
偏离朗伯-比尔定律的因素
依据Beer定律，A与C关系应 为经过原点的直线
偏离Beer定律的主要因素表 现为以下两个方面： （一）化学因素 （二）光学因素
2
化学因素
分析化学 偏离朗伯比-尔定律的因素
1、吸光物质溶液的浓度：朗伯-比尔定律只适用于 稀溶液；浓度过高会使c与A关系偏离定律：
①吸光物质相互作用加强，吸光能力改变。 ②溶液对光的折射率显著改变。 2、吸光物质的化学变化：物质的离解、缔合、形成 新化合物和互变异构会改变浓度，引起偏离。 3、溶剂的影响：不同种类的溶剂会导致偏离。
3Байду номын сангаас
光学因素
分析化学 偏离朗伯比-尔定律的因素
1.非单色光：（仪器本身所致） 严格来讲，朗伯-比尔定律只适用于单色光，
但一般的单色光器所提供的入射光并不是纯的单 色光，而是波长范围较窄的复合光。 2．杂散光 3．反射 4．散射 5．非平行光
4
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郎伯-比尔定律为UV-Vis定量的基本公式，适用的前提是：1.入射光为单色平行光，2.吸收发生在均匀介质中，3.吸收物质及溶剂互不作用。
干扰因素包括：杂散光或复合光引起的负偏移，非平行光引起的正偏移，化学因素引起的偏移等。
另外该定律推导时未考虑反射分数的影响，因此在浓溶液及混浊液中也有偏离。
杂散光引起的误差：杂散光对吸光度的测定引起负偏移，且在吸光度愈大时愈明显。
另外，对仪器输出的边缘波长来说,单色器的透射率、光源光强和接收器的灵敏度都是比较低的,这时杂散光影响就更为明显,所以在紫外分光光度计中,首先应该检查200～220 nm处的杂散光。
由于杂散光强度在边缘波段较大,因此在波长小于220 nm进行紫外分光光度,测定时,常出现一种假峰,其原因,主要是样品随波长变短而吸收增大,可是由于杂散光在短波时急剧增大,因而使原来逐渐增大的吸收反而变小,就会出现不应有的“假峰”。
杂散光产生的原因：杂散光有两种,一种是杂散光的波长与测量波长相同,它是由于测量波长因种种原因偏离正常光路,在不通过样品的情况下,就直接射到光电接收器上。
引起这种杂光的原因是由于光学、机械零件包括样品本身的反射和散射所引起。
这种杂散光可以通过一个对测定波长不透明的样品来检查。
当发现放在试样池中的不透明样品的透光率不为零时,说明仪器中有上述杂光存在。
但当光度存在零位误差时,可能令造成混淆,如果在不透明的样品上涂上白色,则可增强样品本身反射和散射的效果,以提高测量灵敏度。
第二种杂散光是由光学系统中的缺陷所引起,如不必要的反射面、光束孔径不匹配、灰尘的散射、光学表面的擦痕、光学系统的象差、不均匀色散等都会降低光线的单色性,使杂光增加。
仪器光源系统设计不良、机械零部件加工不良、位置错移、仪器内壁防眩黑漆脱落等等也是造成杂散光的原因。
通常所指的杂散光是上述的第二种。
使用过程中减小杂散光的方法：(1 )因光学零件表面沾污、积尘而使杂散光增大,则可用清洁的软毛刷或吹气球除去积尘,或经脱脂的软布和纯净的溶剂(如乙醚:酒精=2 :1的混合液) ,小心地擦试光学零件(不包括反光镜)表面。
(2 )如果是由于光学零部件(如棱镜、通光窗口等)表面潮解发毛,或由于反射镜面失泽甚至膜层破坏而使杂散光增大,则必须重新抛光或重新镀膜或者更换光学零件。
(3 )如果光学零件受震后松动、移位、光束不能准确行进(偏离正常光路光束被切割或射到非工作表面等)。
则必须仔细调节光源和反射镜,使它们重新回到正常工作位置。
为了防止仪器杂散光增大,在日常工作中应经常注意保护仪器,特别是防尘和防潮,防沾染,所以不要轻易打开单色器和光度计部分的封盖板,不能用手直接触摸光学零件表面。
吸收定律是一个有限的定律
最近看到一个帖子，问吸光度指标在多少范围好？简单地说，吸光度A 在0.2—1.4范围内和浓度C之间的线性关系较好。
浓度越高误差越大。
原因是多方面的。
1. 吸收定律基本性质的限制
A＝abC 这是朗伯—比耳定律。
其中比耳定律部分表示吸光度(A)和浓度(C)之间呈线性关系。
但这只适用于稀溶液时才成立。
在高浓度时吸收成分之间的平均距离缩小，临近质点间电荷分布互相受到影响，同时改变了他们对特定辐射的吸收能力。
此现象使得A—C的线性关系发生偏差。
浓度越高，偏差越大。
此外，定律的偏差还与溶液的折射率有关。
溶液的吸光系数a和折射率有一定的函数关系，而折射率是随浓度变化的。
这是偏差造成的另一原因。
当然，采用适当的方式仍可在高浓度时进行定量分析，如差示光度法等。
2. 实际条件的偏离
吸收定律有四个隐含的假设。
1），光和被测成分之间的相互作用只是光被成分吸收。
2），采用“单色光”。
3），吸收成分相互无关，而不论数量和种类。
4），吸光要限于同样的光程和横断面。
实际情况并不是这样，四个假设均会出现偏差。
1).荧光，磷光和散射都会引起不同程度的“非真”吸收。
荧光，磷光可以加适当的滤光片滤除。
而散射的问题就比较复杂，不容忽视。
2).所有的单色器均不能输出真正的单色光，只是宽窄不同。
所以对吸收的影响也不同。
此外，不同的物质其吸收峰宽度是不同的。
因此仪器的光谱带宽亦成为分析工作者十分重视的一项指标。
3).不同组分的物质同时出现在被测溶液中的情况是十分普遍的。
当浓度
增大时往往产生某些附加效应，如凝聚，聚合，水解等，从而影响物质的吸光效应。
4).光程的不一致性是引起吸光度偏差的另一原因。
多数仪器通过样品池的光是不平行的。
而为了得到足够光强，光束必须有一定孔径角。
计算证明，入射孔径角为10度时，即会产生0.3%的吸收误差。
此外，池壁的平行度，光洁度，光的内反射，干涉等都可能引起不同程度的吸光度偏离。
3.测试过程中产生误差
采用分光光度法进行定量分析的过程中，均可能产生化学的误差，仪器的误差以及人为的误差。
有经验的分析工作者都会采取相应的措施，以减少这些误差。
这里不再过多的累述。
总之，光度法测量样品浓度会随浓度的增大而出现线性偏差，绝大多数是向下偏离。
因此采用一组标准浓度溶液作出二次标准曲线，以此标准曲线对照测出样品浓度的方法，即可较好地减少测量偏差。