紫杉醇抑制Hut78细胞生长及诱导凋亡的实验研究

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SAHA临床研究者手册

研究者手册1．序言SAHA(Zolinza ®)为美国Merck 公司开发的第一个用于治疗持续、恶化或在用其他药治疗期间或之后复发的皮肤T 细胞淋巴瘤(CTCL)药物，于2006年10月6日获得FDA 上市批准，商品名为Zolinza ®。

SAHA 药理分类属于组蛋白去乙酰酶抑制剂（HDAC inhibitor ），可非特异性结合组蛋白去乙酰酶(HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC6)以促使乙酰化组蛋白增加，造成癌细胞转录过程异常，进而诱导癌细胞周期停止、分化，甚至死亡，但确切的抗肿瘤机制目前尚未完全明了。

根据我国现行《药品注册管理办法》（试行）的有关规定属化学药品第 3.1类。

本手册介绍了SAHA 相关理化性质、动物药理毒理药代及人临床试验相关资料，同时提供了药物使用信息和注意事项以供临床研究者参考。

2．SAHA(Zolinza ®)研究简述SAHA 化学名为N-羟基-N ’-苯基-辛二酰胺，分子式C 14H 20N 2O 3，分子量264.32。

结构式见下图：SAHA 为白色到灰白色粉末，极微溶于水(0.1mg/ml)，微溶于乙醇、异丙醇和丙酮，略溶于0.1N NaOH 、0.1N HCl 、0.1N 磷酸钠盐缓冲盐溶液(pH7)，易溶于二甲基亚砜(DMSO)，不溶于二氯甲烷(Product Monograph Pr ZOLINZA™ SAHA capsules 100mg)。

无手性中心，不易吸潮，差示扫描热量介于161.7℃至163.9℃，其饱和水溶液pH6.6，测得pKa=9.2，正辛醇和水中分配系数为9.6。

表观分配系数为1.7×10-6 cm/sec ，相同测试系统下普萘洛尔(高渗)和阿替洛尔(低渗)表观分配系数分别为1.6×10-5 cm/sec 和1.9×10-7 cm/sec ，表明SAHA 为中等渗透性药物。

实验报告细胞凋亡的诱导与调控机制研究

实验报告细胞凋亡的诱导与调控机制研究实验报告：细胞凋亡的诱导与调控机制研究一、引言细胞凋亡是一种由基因调控的程序性细胞死亡方式，对于生物体的发育、稳态维持和疾病发生发展具有重要意义。

深入研究细胞凋亡的诱导与调控机制，有助于我们更好地理解生命过程，为相关疾病的治疗提供新的思路和策略。

二、实验目的本实验旨在探究不同因素对细胞凋亡的诱导作用以及相关调控机制，为进一步揭示细胞凋亡的奥秘提供实验依据。

三、实验材料与方法（一）实验材料1、细胞系：选用人肝癌细胞系 HepG2 和人乳腺癌细胞系 MCF-7。

2、试剂：顺铂（cisplatin）、紫杉醇（paclitaxel）、AnnexinVFITC/PI 凋亡检测试剂盒、蛋白提取试剂盒、BCA 蛋白定量试剂盒、抗体（如 caspase-3、Bcl-2、Bax 等）、ECL 化学发光试剂盒等。

3、仪器：倒置显微镜、流式细胞仪、酶标仪、蛋白电泳仪、转膜仪等。

（二）实验方法1、细胞培养将 HepG2 和 MCF-7 细胞分别培养于含 10%胎牛血清、1%双抗的DMEM 培养基中，置于 37°C、5% CO2 的培养箱中培养。

待细胞融合度达到 80%左右时，进行传代培养。

2、药物处理将处于对数生长期的细胞分为对照组和实验组。

实验组分别加入不同浓度的顺铂和紫杉醇，对照组加入等体积的 DMSO，处理一定时间（如 24、48 和 72 小时）。

3、凋亡检测采用 Annexin VFITC/PI 双染法，通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。

4、蛋白表达检测收集处理后的细胞，提取总蛋白，进行 BCA 蛋白定量。

通过Western blot 检测凋亡相关蛋白（如 caspase-3、Bcl-2、Bax 等）的表达水平。

四、实验结果（一）药物诱导细胞凋亡1、顺铂处理随着顺铂浓度的增加和处理时间的延长，HepG2 和 MCF-7 细胞的凋亡率逐渐升高。

在 24 小时处理时，低浓度顺铂（5 μM）对细胞凋亡的诱导作用不明显，而高浓度顺铂（20 μM）可显著诱导细胞凋亡。

紫杉醇诱导人食管癌细胞凋亡的实验研究

２０，７（）３１３８０５３５：９ — ９．
ｒｇｌｔｙｅｐｅｓｎｏＴＮｅｃｄｎｒｄｃ［］ｒｅｕａｄｂｒｓｉｆＥｎｏｉｇｐｏｕｔＪ．ｌｅｘｏＰｓＷｏｄ
收稿日期：０１０ — ４２１－８０
紫杉醇诱导人食管癌细胞凋亡的实验研究
侯俊民摘江苏省泰州市人民医院泰州２５０２３０
要目的：究紫杉醇诱导人食管癌细胞的凋亡作用，探讨其诱导凋亡的分子机制。法：研并方
通过形态学观察，流式细胞仪技术分析研究紫杉醇对人食管癌细胞的凋亡作用，免疫组化测定
ｍｅｈｎｓｏｈｐｐｏｉ．ｅｈｄ：Ｔｅａｏｔｓｓｏｓｐａｅｌｃｒｉｏｅｌａｄｔｅｃａｇｓｏｃ－，ｐ３ｎｃａｉｍｆｔｅａｏｔｓｓＭｔｏｓｈｐｐｏｉｆｅｏｈｇａａｃｎｍａｃｌｓｎｈｈｎｅｆｂ１２５，ａｄｐ２ｗｅｅｂｅｖｄ１ｒｏｓｒｅｍｏｐｏｏｉａｌａｄｗｅｅａａｙｅｔｏ－ｙｅｃｔｍｅｒｆｒｔｅｒａｍｅｔｗｔａｌａｅ．ｒｈｌｇｃｌｙｎｒｎｌｚｄｗｉｆｗｔｐｙｏｔｙａｔｈｔｔｎｉｐｃｉｘ１ｈｌｅｅｈｔＲｅｕｔ：Ｔｐｃｌｍｏｐｏｏｉｃａｇｓｏｐｐｏｉｕｈａｕｌｕｙｎｉ，ｕｌｕｅｏｙｒａｉｎａｄａｏｔｏｉｓｓｌｓｙｉａｒｈｌｇｃｈｎｅｆｏｔｓｓｓｃｓｎｃｅｓｐｋｏｓｎｃｅｓｄｐｌｍｅｉｔ，ｎｐｐｉｂｄｅ，ａｚｏｃ

dMChR抑制人宫颈癌Hela细胞生长及诱导细胞凋亡作用的实验研究

南华大学硕士学位论文dMChR抑制人宫颈癌Hela细胞生长和诱导细胞凋亡作用的实验研究姓名：刘昵申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：陈忠东20070501原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。

与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。

作者签名：日期：年月日关于学位论文使用授权说明本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。

作者签名：导师签名：日期：年月日dMChR抑制人宫颈癌Hela细胞生长和诱导细胞凋亡作用的实验研究硕士研究生：刘昵硕士生导师：陈忠东教授中文摘要目的：观察5,7-二甲氧基白杨素（dMChR）对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。

方法：体外培养人宫颈癌Hela细胞。

采用MTT比色法检测细胞增殖活性（用人脐静脉内皮ECV-304细胞作为非肿瘤细胞对照）；平皿克隆形成实验测定细胞的锚定依赖性生长能力；AO/EB染色荧光显微镜观察凋亡细胞形态，PI染色FCM 测定细胞凋亡率；FITC荧光标记FCM分析细胞的Bcl-2，Bax，Caspase-3蛋白的表达。

结果：1.MTT比色法结果显示：dMChR（0.3µM, 3µM, 30µM, 100µM）孵育细胞48小时，显著抑制Hela细胞增殖，呈浓度依赖性改变，其 IC50值为30.09µM；但相同浓度范围的dMChR对人脐静脉内皮（ECV-304）细胞增殖无明显影响，dMChR作用ECV-304细胞48小时的IC50值为15415.80µM；dMChR对Hela细胞毒性选择指数是512.32。

SAHA临床研究者手册

根据我国现行《药品注册管理办法》（试行）的有关规定属化学药品第 3.1类。

本手册介绍了SAHA 相关理化性质、动物药理毒理药代及人临床试验相关资料，同时提供了药物使用信息和注意事项以供临床研究者参考。

2．SAHA(Zolinza ®)研究简述SAHA 化学名为N-羟基-N ’-苯基-辛二酰胺，分子式C 14H 20N 2O 3，分子量264.32。

无手性中心，不易吸潮，差示扫描热量介于161.7℃至163.9℃，其饱和水溶液pH6.6，测得pKa=9.2，正辛醇和水中分配系数为9.6。

多西紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究

多西紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究目录摘要..................................................................................................... Abstract ..............................................................................................1.1 材料和试剂 (1)1.2 仪器 (1)2.1细胞培养 (2)2.2 细胞的维持和培养 (3)2.2.1 细胞的复苏 (3)2.2.2 A549细胞更换新的培养液 (3)2.2.3 A549细胞的传代 (4)2.3 分组给药 (4)2.4 MTT溶液的配置与检测 (4)2.4.1配制 (5)第3 章实验计算以及结果 ........................................... 错误!未定义书签。

3.1 计算IC50 ....................................................... 错误!未定义书签。

3.2 实验结果 (6)参考文献 (9)摘要目的观察多西紫杉醇诱导hepg2 PC3 MD-231 A549 四种肿瘤细胞凋零并对其作用机制进行探讨。

方法培养4种细胞，取对数生长期细胞分为五组，空白对照组、模型组、蜂胶黄酮高、中、低剂量组，剂量分别为200mg/L、100 mg/L、50 mg/L.药物预处理2h后，做MTT检测。

通过实验数据计算IC50.结果各组细胞IC50值结论多西紫杉醇对肿瘤细胞有诱导凋亡作用关键词多西紫杉醇；hepg2；A549；PC3；M-231；；细胞凋亡AbstractStudy on the effect of docetaxel on tumor cell proliferation inhibition and in tumor chemotherapy, take the cell count, morphologic observation, flow cytometry method for the detection and observation respectively and combined with docetaxel on proliferation of human tumor cell lines in nude mice bearing human tumor inhibition; to establish animal model, to treat separately and combined with docetaxel, and blank control. Observation of growth and pathological characteristics of the tumor body. Through the experiments of MTT detection test of docetaxel on tumor cell proliferation inhibition. Using different concentrations of tumor cell suppression test, the influence of the concentration on the survival of tumor cells.The experiment is divided into two parts, respectively, and MTT detection of cell culture.Keywords: Docetaxe l Stem cells Research Application前言紫杉类药物属于红豆杉的树皮或针叶中提取或半合成的新抗肿瘤药物，作用在微管以及微管蛋白系统，紫杉类药物与其他植物碱不同，紫杉类药物通过促进微管双聚体装配成微管通过防止去多聚化过程而使微管稳定，阻滞细胞于G 和M 期，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖。

染料木素抑制人胃癌细胞BGC-823的增殖和诱导细胞凋亡的机制的开题报告

染料木素抑制人胃癌细胞BGC-823的增殖和诱导细胞凋亡的机制的开题报告题目：染料木素抑制人胃癌细胞BGC-823的增殖和诱导细胞凋亡的机制背景和意义：胃癌是一种高度侵袭性的癌症，它在全球范围内都占据着令人担忧的地位。

许多潜在机制导致了这种癌症的发展和扩散，但是至今还没有找到能够完全消除胃癌的方法。

因此，寻找更有效的治疗策略来治疗胃癌变得至关重要。

染料木素是一种从檀香木属的染料木（Mimusops elengi）中提取的天然化合物，它在许多生物学领域中都具有广泛的应用，如抗菌、抗炎和抗氧化等。

此外，研究表明染料木素对癌细胞的增殖和生长有抑制作用，因此它可能是治疗胃癌的潜在药物。

因此，本文旨在探究染料木素对人胃癌细胞BGC-823的作用机制，从而为开发治疗胃癌的新策略提供基础研究支持。

研究内容和方法：1. 细胞培养和处理。

在本研究中，将使用人胃癌BGC-823细胞系。

该细胞系的细胞培养将在高糖DMEM培养基中进行，并将由染料木素处理。

2. 细胞增殖的检测。

MTT法将用于检测染料木素对BGC-823细胞增殖的影响。

通过对不同浓度的染料木素进行处理，并在不同时间点采集样本，测定BGC-823细胞的增殖状况。

3. 细胞周期的测定。

流式细胞术将用于测定BGC-823细胞周期的变化。

通过给予不同浓度的染料木素处理细胞，确定染料木素对细胞周期的影响。

4. 细胞凋亡的检测。

DAPI染色和Annexin V-FITC/PI法将用于检测BGC-823细胞的凋亡情况。

通过给予不同浓度的染料木素处理细胞，并通过上述方法检测其对细胞凋亡的影响。

实验预期：研究预期染料木素能够抑制BGC-823细胞的增殖，并重组细胞周期，诱导细胞凋亡。

同时，该研究将为探究染料木素作用于人类胃癌的作用机制提供板块。

紫杉醇对膀胱癌EJ细胞株增殖抑制及诱导凋亡的作用

紫杉醇对膀胱癌EJ细胞株增殖抑制及诱导凋亡的作用作者：郭春龙黄艳丽朱晓敏张春阳冯禄王赞滔姜华茂【关键词】紫杉摘要：目的：探讨紫杉醇体外抑制膀胱癌EJ细胞株及诱导凋亡的作用。

方法：体外培养膀胱癌EJ细胞株，以不同浓度紫杉醇处理12～72h后，通过MTT法测定细胞生长抑制作用，采用电镜观察和DNA 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。

结果：紫杉醇能抑制EJ细胞的生长，并在一定剂量和时间范围内呈现出明显的时间、浓度依赖关系。

电镜下凋亡细胞体积缩小，染色质浓缩致密，并沿核膜分布形成花瓣形。

电泳见出现典型的凋亡DNA梯形带。

结论：紫杉醇能抑制膀胱癌EJ 细胞株的生长，诱导凋亡可能为其抗肿瘤作用机制之一。

关键词：紫杉醇；膀胱癌；细胞凋亡膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤，手术切除是膀胱癌治疗的首选方法。

但是膀胱癌的易复发性常使单纯采用手术疗法难以获得满意疗效，应用化疗作为辅助治疗手段可望减少肿瘤患者的复发率，提高其生存率。

紫杉醇（Paclitaxel，商品名：Taxol）是从紫杉树皮中提取的一种新型抗微管广谱抗癌药，具有特异性地稳定细胞微管的作用［1］。

本研究旨在体外观察紫杉醇对膀胱癌EJ细胞株的抑制和诱导凋亡作用，以探讨紫杉醇对膀胱癌的临床应用价值。

1 材料与方法11 试剂紫杉醇由上海华联制药有限公司提供，临用前稀释至所需浓度；RPMI1640培养基(含10％胎牛血清，青霉素及链霉素各100U/ml)；L谷氨酰胺2mmol/L、丙酮酸钠1mmol/L购自华美公司；四甲基偶氮唑蓝（MTT）购自Sigma公司。

12 细胞培养人膀胱癌EJ细胞株购自上海午立生物有限公司，培养于含有10％胎牛血清，100 U/ml青霉素、链霉素的培养基中，在37℃、5％ CO2培养箱内常规传代培养。

取对数生长期细胞用于实验。

13 实验分组对照组：不加药，每天更换1640全培养液。

实验组：紫杉醇浓度分别为10、50、100、500nmol/L，接种细胞24h进入对数生长期后开始加药，每天换液以维持药物浓度恒定。

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Ｈｕｔ７８ｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌｃｏｕｌｄｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｔｅｌｏｍｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆ
【文章编号］１０００ — ４９６３（２ｏ０７）０４ — ０２４— ０４０
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｐａｃｌｉｔａｘｅｌｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｉｎＨｕｔ７８ｃｅｌｌｌｉｎｅ
（中国医学科学院、中国协和医科大学皮肤病研究所，江苏【摘南京２１００４２）
要１目的：研究紫杉醇对皮肤Ｔ细胞淋巴瘤（ｃｕｔａｎｅｏｕｓＴｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ，ＣＴＣＬ）Ｈｕｔ７８细胞株的生长抑制及诱导凋亡作
及诱导凋亡的作用，且呈时间依赖和剂量依赖性。表现为Ｇ２／Ｍ期阻滞，出现典型的凋亡细胞特征，流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰。结论：紫杉醇能下调端粒酶的活性，诱导细胞凋亡是其发挥抗癌作用的机制之一。
【关键词１紫杉醇；淋巴瘤，Ｔ细胞，皮肤；端粒酶；细 பைடு நூலகம் 凋亡『中图分类号１Ｒ７３３．４；Ｒ９７９．１【文献标识码］Ａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐａｃｌｉｔａｘｅｌｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｉｎｃｕｔａｎｅｏｕｓＴ－ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅ
Ｈｕｔ７８ｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｈｕｔ７８ｗａｓｔｒｅａｔｅｄｂｙｐａｃｌｉｔａｘｅｌｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄａｃｔｉｎｇｔｉｍｅ．Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ
ｘｕＸｉｕ — ｌｉａｎ，ＣＨＥＮＳｈｅｎｇ — ｌｉ，ＣＨＥＮＨａｏ，ＪＩＡＮＧＹｉ — ｑｕｎ，ＺＥＮＧＸｕｅ－ｓｉ，ＳＵＮＪｉａｎ－ｆａｎｇ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｆｏＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｃａｉｌＣｏｌｌｅｇｅ．Ｎａｎｊｉｎｇ２１００４２，Ｃｈｉｎａ）
维普资讯
２０４
ｆ缶床皮肤科杂志２ｏＱ生鱼鲞筮塑』ｌｉｎ
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２：：鱼：：
论著
紫杉醇抑制Ｈｕｔ７８细胞生长及诱导凋亡的
实验研究
徐秀莲，陈声利，陈浩，姜讳群，曾学思，孙建方
Ｈｕｔ７８，ａｎｄｉｎｄｕｃｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎａｄｏｓｅａｎｄｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．ＳｐｈａｓｅａｎｄＧ２／ＭｐｈａｓｅＤＮＡｃｏｎｔｅｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄａｔｙｐｉｃａｌｓｕｂｄｉｐｌｏｉｄｐｅａｋｂｅｆｏｒｅＧ０／Ｇ１ｐｈａｓｅｗｅｒｅｏｂｓｅｖｅｒｄｂｙｌｆｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌｈａｓｏｂｖｉｏｕｓｅｆ－ｆｅｃｔｓｏｆｇｒｏｗｔｈ－ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｏｎｃｕｔａｎｅｏｕｓＴ－ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａａｎｄｃａｎｉｎｄｕｃｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＨｕｔ７８ｃｅｌ１．
用，并探讨其诱导凋亡作用的机制。方法：将紫杉醇按不同浓度、不同作用时间分别处理Ｈｕｔ７８细胞，四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＦ）法
测定Ｈｕｔ７８细胞的生长抑制率，端粒酶重复序列扩增及酶联免疫吸附法（ＴＲＡＰ — ＰＣＲ — ＥＬＩＳＡ）检测端粒酶活性的变化，采用形态学观察和流式细胞仪检测其诱导Ｈｕｔ７８细胞凋亡的情况。结果：紫杉醇明显下调端粒酶活性表达，对Ｈｕｔ７８细胞具有生长抑制
ｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＴＲＡＰ — ＰＣＲ— ＥＬＩＳＡ．ＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＨｕｔ７８ｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＭ＇ＩＴａｓｓａｙ．Ｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆ