实验一微生物拮抗作用
微生物拮抗关系实验报告
一、实验目的1. 了解微生物拮抗关系的概念和类型；2. 掌握微生物拮抗关系实验的方法和原理；3. 通过实验验证微生物之间的拮抗关系。
二、实验原理微生物拮抗关系是指微生物之间通过竞争、抑制、杀死等方式相互作用的关系。
根据拮抗关系中的专一性，可以分为专一性拮抗关系和非专一性拮抗关系。
专一性拮抗关系是指一种微生物的生命活动和代谢产物可以抑制另一种微生物的生命活动，甚至杀死另一种微生物的现象。
而非专一性拮抗关系是指微生物之间的拮抗作用没有特异的针对性，凡是不耐酸的微生物都会受到抑制。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）微生物菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌；（2）培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、酵母膏培养基；（3）实验工具：培养皿、移液器、无菌操作台、酒精灯、恒温培养箱等。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）显微镜；（3）移液器；（4）酒精灯；（5）无菌操作台。
四、实验方法1. 金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的拮抗实验（1）将金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，37℃恒温培养24小时；（2）将金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的菌液分别涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上，37℃恒温培养24小时；（3）观察并记录金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的生长情况。
2. 大肠杆菌与乳酸菌的拮抗实验（1）将大肠杆菌和乳酸菌分别接种于酵母膏培养基上，37℃恒温培养24小时；（2）将大肠杆菌和乳酸菌的菌液分别涂布于酵母膏培养基上，37℃恒温培养24小时；（3）观察并记录大肠杆菌和乳酸菌的生长情况。
3. 枯草芽孢杆菌与乳酸菌的拮抗实验（1）将枯草芽孢杆菌和乳酸菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，37℃恒温培养24小时；（2）将枯草芽孢杆菌和乳酸菌的菌液分别涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上，37℃恒温培养24小时；（3）观察并记录枯草芽孢杆菌和乳酸菌的生长情况。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的拮抗实验结果：金黄色葡萄球菌在培养基上生长良好，而枯草芽孢杆菌的生长受到抑制。
什么是生物拮抗
生物拮抗是指微生物之间的互相抵制、互相排斥、甚至互相残杀的斗争被称为“生物拮抗”。
一个安定的、处于生物平衡的正常微生物群，对包括人体致病菌在内的外籍菌有明显的生物拮抗作用。
导致生物拮抗的原因，是微生物及其产生的多种分泌物质的作用，其中厌氧菌起着重大作用。
生物拮抗大致有以下几种形式：
（1）改变微环境。
细菌生长过程产生的有机酸降低了生物环境中的PH值，抑制了外籍菌，促进肠蠕动，清除外籍菌。
（2）占位。
细菌与宿主（动物）黏膜上皮细胞紧密结合形成“占位”性保护（生物屏障），从而排斥外籍菌。
（3）营养争夺。
由于厌氧菌（多数是有益菌）在其特定的生物环境内数量很大，在与外籍菌的营养争夺上处于优势，从而限制了外籍菌的生长繁殖。
（4）分泌抗菌物质。
在生物拮抗中微生物产生的抗生素、细菌素的作用至关重要，对外籍菌具有强大的抑制力、杀伤力。
（5）免疫作用。
正常微生物群与宿主的免疫力配合，也可产生很有效的生物拮抗。
微生物间拮抗作用机制研究论文素材
微生物间拮抗作用机制研究论文素材随着生物学和生命科学的发展，微生物间的相互作用成为研究的热点之一。
微生物之间不仅存在协同共生的关系，还存在着拮抗作用。
微生物间的拮抗作用是指不同种微生物之间通过产生抑制物质或竞争资源等方式相互制约的现象。
这种拮抗作用对于维持生态平衡和生态系统的稳定具有重要意义。
本文将介绍微生物间拮抗作用的机制，并提供一些相关论文素材供进一步研究使用。
1. 拮抗作用的定义和意义微生物间的拮抗作用是指不同微生物群体之间通过各种方式抑制其他微生物的生长或活性的现象。
这种拮抗作用的机制对于生态系统的稳定和物种多样性的维持至关重要。
它可以降低微生物群落中某些微生物的数量，避免过度繁殖导致生态平衡破坏。
2. 拮抗作用的机制2.1 干扰竞争机制干扰竞争是微生物间拮抗作用中常见的一种机制。
在这种机制中，一种微生物通过产生抑制物质或酶等方式，干扰其他种群的生长和代谢过程。
例如，某些细菌可以产生抗生素来抑制周围的细菌生长，从而获得更多的资源。
2.2 空间竞争机制空间竞争是指微生物群落中不同种群之间通过竞争物理空间来排除其他种群的机制。
这种竞争包括附着表面、利用细胞外聚集物等方式。
空间竞争在土壤、水体等环境中广泛存在。
2.3 资源竞争机制资源竞争是指微生物群落中不同种群之间通过争夺有限的资源来竞争生存的机制。
这种竞争包括争夺营养物质、水分、光照等。
资源竞争是微生物间拮抗作用中最普遍且重要的机制之一。
3. 微生物拮抗作用的应用微生物拮抗作用在农业、医学等领域具有广泛的应用前景。
在农业上，利用微生物拮抗作用可以替代或减少化学农药的使用，从而实现绿色农业的目标。
在医学上，微生物拮抗作用可以用于控制和预防微生物感染，开发新型抗生素等。
4. 相关论文素材以下是一些关于微生物间拮抗作用机制研究的论文素材供参考使用：- 论文1：《微生物间的物质竞争与拮抗作用机制研究》- 论文2：《微生物间拮抗作用对土壤生态系统的影响》- 论文3：《微生物拮抗作用在植物保护中的应用与展望》- 论文4：《微生物拮抗作用与抑制物质研究进展》以上论文素材可以作为进一步研究微生物间拮抗作用机制的参考文献，帮助读者更深入地了解该领域的研究进展和应用前景。
植物病原菌拮抗微生物的筛选、鉴定及拮抗机理研究
植物病原菌拮抗微生物的筛选、鉴定及拮抗机理研究一、本文概述植物病原菌是威胁全球农业可持续发展的重要因素之一，它们引发的植物病害会导致作物减产、品质下降，甚至造成整个生态系统的破坏。
因此，寻找并利用拮抗微生物来防治植物病害，已成为当前植物保护领域的研究热点。
本文旨在探讨植物病原菌拮抗微生物的筛选方法、鉴定技术，以及深入研究其拮抗机理，以期为农业可持续发展提供新的生物防治策略。
本文将详细介绍拮抗微生物的筛选过程，包括采样方法、初筛和复筛步骤等。
通过从各种环境样本中分离和筛选出具有拮抗活性的微生物，为后续研究提供丰富的资源库。
本文将阐述拮抗微生物的鉴定方法，包括形态学观察、生理生化特性分析以及分子生物学鉴定等，以确保所获得的拮抗微生物种类准确可靠。
在此基础上，本文将重点研究拮抗微生物的拮抗机理。
通过比较基因组学、转录组学、蛋白质组学等多组学手段，揭示拮抗微生物与植物病原菌之间的相互作用关系，明确其拮抗作用的分子机制。
还将通过室内生物测定和田间试验，验证拮抗微生物的实际应用效果，为其在实际生产中的应用提供科学依据。
本文旨在通过系统研究植物病原菌拮抗微生物的筛选、鉴定及拮抗机理，为农业病害的生物防治提供新的思路和方法。
这不仅有助于推动植物保护领域的发展，也将为农业可持续发展和生态环境保护做出积极贡献。
二、材料与方法为了筛选拮抗微生物，我们从各种植物病害的土壤中收集了多种微生物，并选取了代表性的植物病原菌，如灰霉病菌、青枯病菌等。
这些病原菌是在植物病理实验室中通过常规方法分离和纯化的。
用于微生物培养和筛选的培养基包括牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡萄糖培养基等，这些培养基均按照标准方法进行配制和灭菌。
实验过程中所使用的试剂均为分析纯，购自国内知名试剂公司。
实验仪器包括显微镜、培养箱、分光光度计、PCR仪等，这些仪器均经过定期校准和维护。
将收集到的微生物在牛肉膏蛋白胨培养基上进行初步培养，然后通过平板对峙法观察微生物对病原菌的拮抗作用。
微生物的共生与拮抗关系研究
微生物的共生与拮抗关系研究微生物是一个广泛的概念，包括了细菌、真菌、病毒等很多种类。
这些微生物之间有着各种各样的关系，其中最常见的就是共生与拮抗关系。
一、微生物的共生关系共生是指两个或两个以上的生物相互利用、互惠互利的关系。
在微生物界中，共生常见的分为三类：互利共生、寄生共生以及微生物寄主共生。
1、互利共生互利共生是指两个生物之间都可以从对方身上获得益处的关系。
在微生物界中，比较典型的例子就是与植物有着互利共生关系的根瘤菌。
根瘤菌可以在植物根部形成瘤，提供给植物所需的氮源，而植物则可以为根瘤菌提供所需的营养和保护环境。
2、寄生共生寄生共生是指寄主和寄生者之间的共生关系。
在微生物界中，比较典型的例子就是病毒与细胞之间的关系。
病毒通过感染细胞来生存，而宿主细胞则被病毒利用，最终互利共赢。
3、微生物寄主共生微生物寄主共生是指宿主与微生物之间的共生关系。
在微生物界中，比较典型的例子就是人类的肠道微生物。
人类肠道中有着数百种微生物，它们可以分解食物、保护肠道、帮助合成维生素等，与人类之间存在着互利共生的关系。
二、微生物的拮抗关系拮抗是指微生物之间的相互作用，其中一方会对另一方产生负面影响，通过这种方式来与另一方竞争或防止其生长。
在微生物界中，拮抗主要包括两种形式，即竞争拮抗和抑制拮抗。
1、竞争拮抗竞争拮抗是指微生物之间的竞争关系，互相占用生存空间和营养资源，彼此之间形成资源争夺和竞争的关系。
比较典型的例子就是微生物和菌落之间的竞争。
当一个微生物在某个环境中过于繁殖时，就会占用其他微生物的资源，最终竞争胜利。
2、抑制拮抗抑制拮抗是指微生物之间的化学作用，其中一方可以通过发酵产生化学物质，抑制另一方的生长和繁殖。
在微生物界中，抑制拮抗比较典型的例子就是一些细菌之间的相互作用。
其中一些细菌可以通过产生化学物质来抑制其他细菌的生长，使自己占据更多的资源和生存空间。
三、微生物的研究微生物的共生与拮抗关系，在生物多样性领域中有着重要的研究意义。
(高考生物)实验一微生物拮抗作用
（生物科技行业）实验一微生物拮抗作用《生物技术大实验》讲义实验一枯草芽孢杆菌对棉花黄萎病的拮抗作用实验目的：进一步掌握无菌操作技术，加深对微生物之间互作的进一步认识实验原理：枯草芽孢杆菌分泌到体外的带谢产物能够抑制棉花黄萎病的生长供试菌株(1)拮抗菌株:枯草芽孢杆菌（冰箱保存）(2)病原菌株:棉花黄萎病菌（冰箱保存）实验步骤1.培养基的制作(1)PD培养液：(2)PDA培养基：查氏培养液：按上述配方配制查氏液体50ml及固体胶培养基125ml分别装在250的三角瓶中，121℃条件下灭菌30分钟。
2.接种培养(1)在无菌操作条件下，将棉花黄萎病菌接种在查氏培养液中，28℃振荡培养4天。
(2)将枯草芽孢杆菌在PD培养液中28℃培养24小时3.抑菌试验(1)平板制备：将固体PDA培养基溶化后倒入培养皿中，制成平板(2)棉花黄萎病菌液涂皿：将棉花黄萎病菌液用玻棒均匀的涂布在查氏平板培养基上(3)枯草芽孢菌的接种：将圆滤纸片放置在平板培养基上，用吸管吸取少许枯草芽孢杆菌菌悬液滴到滤纸片上(4)培养：28℃培养箱中培养4天(5)观察结果实验二酶联免疫法测ABA含量仪器：酶联免疫仪酶标板752分光光度计实验原理本方法是一种固相抗原型酶联免疫法(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssayELISA),先将ABA蛋白质复合物与固相载体(聚苯乙烯微量滴定板)结合,然后将待测的ABA(样品或标准品)和兔抗ABA抗体加入微量滴定板的孔中,进行竞争反应,接着弃去上清液,洗涤固相表面,加入酶标二抗使其与结合在固相ABA上的抗体反应,最后去除多余的未反应的酶标二抗,测定与固相结合的酶活性,酶活性和待测ABA 含量呈负函数关系,即固相ABA结合的抗体与酶标二抗量(OD或B%)随待测ABA含量增加而减少,以一系列已知浓度的ABA的OD值制图而获得标准竞争性抑制曲线,对于未知样品B,只要在同样条件下测定反应后的OD值,就可以从标准曲线上查到ABA的量。
拮抗的作用主要有哪些？
拮抗的作用主要有哪些？关于《拮抗的作用主要有哪些？》，是我们特意为大家整理的，希望对大家有所帮助。
人的的身上会出現很多种多样病症，医治疾患的方式有很多，应用用药治疗是更为普遍的方法，有的情况下，大家用一种药来医治一种病症，但有的情况下，需要二种乃至二种以上的药品融合医治疾患，此刻可能会出現二种或是二种以上的药品药力互相相抵的状况，这就称之为抗体作用，那麼抗结功效有哪些应用呢？第一、应用拮抗生产加工基本原理是由海林在18新世纪末期明确提出的。
即全部的视觉效果感受造成于三个基本系统，每一个系统包括二种拮抗成份：红对绿，蓝对黄，或是黑（沒有色调）经典对白（所有颜色）。
也有一种存有于微生物间的抑制作用，就是指某类生物所造成的某类新陈代谢物质能抑制别的种微生物的成长发育乃至杀掉她们的一种内在联系。
在一般状况下，拮抗常指微生物菌种间的“有机化学战略”，但有时候因某微生物菌种的生长发育而造成的别的标准改变（如氧气不足、pH改变等）抑止别的种微生物的状况也称之为拮抗。
比如，在生产制造酸菜、青储饲料全过程中的乳杆菌，便是因为它能造成很多乳酸菌而抑止别的腐败问题微生物菌种成长发育的。
但微生物菌种间最典型性、对人类关联最紧密的抑制作用，当推微生物所造成的能抑止别的微生物成长发育的抗生素。
微生物菌种间的拮抗关联能为抗生素的挑选、食品储藏、保健医疗和动物与植物病虫害的预防等出示许多合理的方式。
第二、举例说明抑制作用就是指不一样生长激素对某一生理学效用充分发挥反过来的功效。
这能够根据甘精胰岛素和胰高血糖素对血糖值成分的调整来表明：胰高血糖素是由胰岛A细胞代谢的，它的关键功效是推动糖原分解和非糖物质转换为葡萄糖，进而使血糖升高。
当血糖值成分较高时，胰岛素分泌提升，胰高血糖素代谢降低，推动血糖值生成为糖元，并抑止非糖物质转换为葡萄糖，使血糖值的成分减少。
当血糖值成分较低时，胰岛素分泌降低，胰高血糖素代谢提升，結果是推动糖原分解为葡萄糖，并促进非糖物质转换为葡萄糖，使血糖值的成分上升。
菌与菌的拮抗实验流程
菌与菌的拮抗实验流程英文版：Experiment Procedure for Antagonism between Bacteria1. Experiment ObjectivesThe objective of this experiment is to investigate the antagonism between different bacterial species by observing and analyzing their interactions. This will help us to understand their ecological relationships and the mechanisms of antagonism. Antagonism refers to the phenomenon where one microorganism inhibits or kills another, which is crucial for studying microbial competition and ecological balance.2. Material PreparationThe materials required for the experiment include sterile culture media, bacterial species (test species and indicator species), sterile inoculating loops, Petri dishes, microscopes, incubators, and relevant chemical reagents and sterilization equipment. Ensure the sterility of the experimental environment throughout.3. Inoculation & CultivationBoth the test and indicator bacterial species are inoculated under sterile conditions into culture media containing appropriate nutrients. The inoculation process must be sterile to avoid contamination by foreign microorganisms. The inoculated Petri dishes are then placed in an incubator at an appropriate temperature for cultivation, and the growth of colonies is observed.4. Observation of AntagonismDuring cultivation, regular observations are made of the growth of the test and indicator bacterial colonies. When the growth of the indicator species is inhibited or killed by the test species, antagonism occurs. Microscopic observations of colonymorphology, hyphal morphology, and cellular structure can further elucidate the reasons for antagonism.5. Result Recording & AnalysisDetailed records are kept of the growth of various bacterial species, the time and extent of antagonism, and other relevant information. The experimental results are analyzed to explore the mechanisms of antagonism between different bacterial species. This provides deeper insights into microbial interactions and ecological balance.6. Conclusion & DiscussionThrough this experiment, we observed antagonism between different bacterial species and conducted a preliminary analysis of its mechanisms. The results showed that certain bacterial species can produce substances that inhibit or kill other species, thus occupying ecological niches. Additionally, the experiment revealed the competitiveness among microorganisms and the importance of ecological balance. However, limitations exist in the experiment, such as the limited range of bacterial species selected, which require improvement in subsequent studies.中文版：1. 实验目的与原理本实验旨在探究不同菌种之间的拮抗作用，通过观察和分析菌与菌之间的相互作用，揭示它们之间的生态关系。
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《生物技术大实验》讲义实验一枯草芽孢杆菌对棉花黄萎病的拮抗作用实验目的：进一步掌握无菌操作技术，加深对微生物之间互作的进一步认识实验原理：枯草芽孢杆菌分泌到体外的带谢产物能够抑制棉花黄萎病的生长供试菌株(1) 拮抗菌株: 枯草芽孢杆菌（冰箱保存）(2) 病原菌株: 棉花黄萎病菌（冰箱保存）实验步骤1. 培养基的制作(1)PD培养液：(2) PDA培养基：查氏培养液：按上述配方配制查氏液体50 ml及固体胶培养基125 ml分别装在250的三角瓶中，121℃条件下灭菌30分钟。
2. 接种培养(1) 在无菌操作条件下，将棉花黄萎病菌接种在查氏培养液中，28℃振荡培养4天。
(2) 将枯草芽孢杆菌在PD培养液中28℃培养24小时3. 抑菌试验(1) 平板制备：将固体PDA培养基溶化后倒入培养皿中，制成平板(2) 棉花黄萎病菌液涂皿：将棉花黄萎病菌液用玻棒均匀的涂布在查氏平板培养基上(3) 枯草芽孢菌的接种：将圆滤纸片放置在平板培养基上，用吸管吸取少许枯草芽孢杆菌菌悬液滴到滤纸片上(4) 培养：28 ℃培养箱中培养4天(5) 观察结果实验二酶联免疫法测ABA含量仪器：酶联免疫仪酶标板752分光光度计实验原理本方法是一种固相抗原型酶联免疫法(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay ELISA),先将ABA蛋白质复合物与固相载体(聚苯乙烯微量滴定板)结合,然后将待测的ABA(样品或标准品)和兔抗ABA抗体加入微量滴定板的孔中,进行竞争反应,接着弃去上清液,洗涤固相表面,加入酶标二抗使其与结合在固相ABA上的抗体反应,最后去除多余的未反应的酶标二抗,测定与固相结合的酶活性,酶活性和待测ABA含量呈负函数关系,即固相ABA结合的抗体与酶标二抗量(OD或B%)随待测ABA含量增加而减少,以一系列已知浓度的ABA的OD值制图而获得标准竞争性抑制曲线,对于未知样品B,只要在同样条件下测定反应后的OD值,就可以从标准曲线上查到ABA的量。
测定方法1、包被：在微量滴定板内准确加入100μLABA包被液，37℃湿盒过夜。
2、标样稀释?：取8支试管每管加150μLDB，第一管中加入50μL（2000ng／50μL）标准液，充分涡旋后，取50μL至第二号管中，同样涡旋后，取50μL到第三管；依次稀释到第六管，稀释后的标准ABA依次为1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng／50μL。
3、洗板：从37℃湿盒中取出滴定板，恢复到室温后，弃去包被液，用WB（洗涤缓冲液）洗涤三次，甩干（吸水纸）。
4、加样：1～8孔对应加入ABA标样50μL，10号孔相应加入最浓ABA标样，9号孔加50μLDB，三排重复；然后每孔加50μL抗体，37℃ 45分钟。
5、洗板：6、加酶标二抗：每孔加100μL，37℃反应1小时。
7、洗板：8、显色：各孔加10μLOPD显色液，37℃ 20分钟。
9、终止反应：各孔加50μL 6NH2SO4。
10、读数：490nm读取OD值。
其中10号孔调零,而9号孔为最大值(B0),1~8号孔的OD值为B。
11、结果计算：以In（B/B0）∕（1－B/B0）为纵坐标，以标准ABA浓度的常用对数（lg［ABA］）为横坐标,绘制曲线。
实验三质粒DNA的提取及其酶切实验目的通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒DNA 。
实验原理碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。
在pH值介于12.0～12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互缠绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH 至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那木迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
实验步骤（一）提取质粒1.将2 ml 含相应抗生素的LB液体培养基加入试管中，接入上述的含pUC19质粒的大肠杆菌单菌落，37℃振荡培养过夜。
2.取培养物倒入微量1.5ml离心管中，4000 r/min 离心 2 min。
3.弃上清，吸尽残液，使细胞沉淀尽可能干燥。
4.加入100ul溶液Ⅰ，充分混匀，室温放置10 min。
5.加200 ul溶液Ⅱ（新鲜配制），盖紧管盖，轻轻颠倒数次混匀，将离心管放冰上 5 min 。
6.加入150 ul 溶液Ⅲ（冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀。
冰上放置 15 min 。
7.12000 r/min ,离心15 min ，将上清转至另一离心管中。
8.加入等体积酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反复混匀，12000 r/min，离心5 min，将上清转移到另一离心管中。
9.加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10 min。
12000r/min离心 5 min。
倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。
10.用1 ml 70% 乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干燥。
11.加50 ul TE缓冲液，其中含有20 ug/ml的胰RNA酶，使DNA完全溶解，－20℃保存。
（二）酶切取DNA溶液，加酶切缓冲液，Eco RI酶1 ul，无菌水补至总体积10 ul，37℃保温3h,加终止液，准备下个实验电泳，分析质粒DNA的限制性酶切图谱。
实验四琼脂糖凝胶电泳技术［实验目的］通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
［实验原理］DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
DNA分子在高于等电点的pH 溶液中带负电荷在电场中向正极移动。
由于糖－磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此他们能以相同的速度向正极方向移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。
具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。
DNA分子的迁移速度与相对分子质量对数值成反比关系.。
凝胶电泳不仅可以分离不同相对分子质量的DNA, 也可以分离相对分子质量相同,但构型不同的DNA分子。
如上次实验提取的pUC19质粒，有3种构型：超螺旋的共价闭合环状质粒DNA(covalently closed circular DNA，简称CCCDNA)，开环质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA1条链断裂，（open circular DNA, 简称OCDNA）,线状质粒DNA ，即共价闭合环状质粒DNA2条链发生断裂，（linear DNA，简称L DNA）。
这3种构型的质粒DNA分子在凝胶电泳中的迁移率不同。
因此电泳后呈3条带，超螺旋质粒DNA泳动最快，其次为线状DNA，开环质粒DNA。
[实验步骤](一)制备琼脂糖凝胶电泳槽及用胶量将琼脂糖按比例溶入1X TAE缓冲液中，微波炉加热至完全溶化，冷却至60℃, 加入适量EB, 混匀。
（二）胶板的制备1.取有机玻璃内槽，洗净，晾干，用橡皮膏将有机玻璃内槽的两端边缘封好（一定封严，不能留缝隙）。
2.将有机玻璃内槽放置于一水平位置，并放好样品梳子。
梳子调整齐3.将冷到60℃左右的琼脂糖凝胶液，缓缓倒入有机玻璃内槽，直至有机玻璃板上形成一层均匀的胶面（注意不要形成气泡）。
4.待胶凝固后，取出梳子，取下橡皮膏，将胶槽放在电泳槽内。
5.加入电泳缓冲液至电泳槽中。
（三）加样, 用移液器将已加入上样缓冲液的DNA样品加入样品孔（记录点样顺序及点样量）。
（四）电泳1.接通电泳槽与电泳仪的电源（注意正负极，DNA片段从负极向正极移动）。
DNA的迁移速度与电压成正比，最高电压不超过5 V/cm。
2.当溴酚蓝染料移动到距凝胶前沿1~2cm处，停止电泳。
（五）染色将电泳后的凝胶浸入溴化乙锭染色液中，染色以观察在琼脂糖凝胶中的带（戴手套操作）。
实验五真核生物高分子量DNA制备实验原理利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细胞。
细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。
EDTA抑制DNA酶的活性。
再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
实验材料: 新鲜植物叶片[实验步骤]1.取4g新鲜叶片，在液氮中研磨成粉末状（越细越好）。
2.转移至50ml离心管中，加入16ml TENbf，充分混匀。
65℃水浴保温20min。
3.从水浴中取出离心管，加入5ml 5 mol/L KCl溶液，混匀，水浴20min。
4.4000r/min 离心 20 min。
5.将上清液转移到另一50ml离心管中。
6.加等体积酚／氯仿混匀，12000r／min 离心5min，取上清。
7.加等体积氯仿，混匀，12000r／min 离心5min，取上清。
8.加入0.6－1倍体积的异丙醇（沉淀DNA），混匀。
放置时间9.离心获得沉淀，70％乙醇洗3次。
风干沉淀。
10.加入500μLTE缓冲液，溶解DNA。
11.取3μL上清液,琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度、质量。
实验六PCR基因扩增实验目的：掌握PCR反应的基本原理与实验技术实验原理：PCR( Polymerase Chain Reaction)-聚合酶链式反应，可以选择性扩增一段DNA序列。
其基本步骤是，首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链， DNA样品中，特异性的引物能够与其互补的序列杂交，在dNTPs和Taq酶存在时，就可以合成模板DNA的互补链，反应完成后，将反应混合物加热使DNA双链变性，温度下降后，过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。
这种延伸—变性—退火—延伸的循环可以重复多次，使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。
1．变性：加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链.2．退火：使溶液温度降至50～60℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合.3．延伸：溶液反应温度升至72℃，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTPs），按5ˊ→3ˊ方向复制出互补DNA.上述3步为一个循环，即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。
从理论上讲，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25～30个循环后DNA可扩增106～109倍。
典型的PCR反应体系由如下组分组成：DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两个合成的DNA引物、耐热Taq聚合酶。