PEG6000聚乙二醇
PEG-6000模拟干旱胁迫对食叶草种子萌发
摘要采用不同浓度的PEG-6000溶液(0、5%、10%、15%、20%和25%)模拟干旱胁迫,研究干旱对食叶草种子萌发及幼苗生长的影响。
结果表明:低浓度PEG-6000溶液对部分萌发特性有促进作用;随着PEG-6000浓度的升高,食叶草的种子发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数均呈下降趋势,胚根、胚芽的长度和鲜重也受到不同程度抑制;当PEG-6000溶液浓度达到25%时,对食叶草种子的萌发、幼苗生长有极显著抑制作用。
关键词食叶草;PEG-6000;干旱胁迫;种子萌发;幼苗生长中图分类号Q945.78文献标识码A 文章编号1007-5739(2023)02-0184-04DOI :10.3969/j.issn.1007-5739.2023.02.001开放科学(资源服务)标识码(OSID ):Effect of PEG-6000Simulated Drought Stress on Seed Germination and Seedling Growth ofRumex HanusHAN Fen HE Qian *JIN Xueqin WANG Kezhuang WANG Fu(Institute of Soil and Water Conservation of Pingliang City,Pingliang Gansu 744000)Abstract Different concentrations of PEG-6000(0,5%,10%,15%,20%and 25%)were used to simulate drought stress to study the effect of drought on seed germination and seedling growth of Rumex hanus .The results showed that low concentration PEG-6000solution could promote some germination characteristics.With the increase of PEG-6000concentration,the seed germination percentage,germination potential,germination index and vitality index of Rumex hanus showed a downward trend,and the length and fresh weight of radicle and germ were also inhibited to varying degrees.When the concentration of PEG-6000solution reached 25%,the seed germination and seedling growth of Rumex hanus were significantly inhibited.Keywords Rumex hanus ;PEG-6000;drought stress;seed germination;seedling growthPEG-6000模拟干旱胁迫对食叶草种子萌发及幼苗生长的影响韩芬何倩*靳雪琴王可壮王辅(平凉市水土保持科学研究所,甘肃平凉744000)食叶草为多年生蓼科酸模属草本植物[1-2],既是适用牛羊猪家畜的优质饲草,又具有防止水土流失、减少地面侵蚀的作用。
PEG残留量检测方法
残留聚乙二醇（PEG）含量测定
1试剂
1.1 PEG（MW4000或6000）。
1.2 0.5mol /L高氯酸（HClO4）溶液。
1.3 5%BaCl2溶液。
1.4 0.1mol /L碘溶液。
2 操作
2.1 取1ml样品，在灵敏度允许的范围内，先将样品稀释到蛋白质浓度≤1%，加入5.0ml 0.5mol /L高氯酸溶液，15分钟后，用4000r/min，离心10分钟，取上清液（如蛋白浓度过高，上清混浊，则要过滤至清）。
2.2 PEG测定
取4ml上清液中加入1.0ml5%BaCl2和0.5ml的0.1mol/L碘溶液，反应15分钟后，进行比色。
记录各样品的A535。
同时以1ml水代替样品溶液，同法操作，即为空白对照组。
2.3 标准曲线的绘制
取≤1%蛋白质溶液，另入PEG合成10～80μg/ml 溶液。
根据样品的大致浓度，用去除蛋白质后溶液制剂作标准曲线。
2.4 根据样品读数，从标准曲线上查出PEG含量。
3 计算
样品中PCG浓度%（g/ml）=样品稀释倍数×查得标准曲线相应的PEG浓度。
1.整个比色过程应在试剂加入以后的15～45分钟内完成，否则将要影响结果。
2.本方法的灵敏度随被测定PEG的分子量的增加而提高。
药用PEG4000和PEG6000的作用
药用聚乙二醇(PEG)用作片剂和薄膜衣用作片剂和薄膜衣的药用聚乙二醇(PEG)主要有PEG4000和PEG6000等. 原理:1.PEG的可塑性。
2. 良好的与药物相容性。
3. PEG在水中的溶解性很大，高分子量PEG在水中溶解度可达50%以上，PEG溶液属非离子性。
4.高分子量的PEG（PEG4000和PEG6000）作为制造片剂的粘合剂是很有用途的。
优点:1. PEG的可塑性有利于片剂的成型。
2.它可提高片剂释放药物的能力。
3.PEG可使片剂的表面有光泽而且平滑，同时不易损坏。
4.提高药物溶解、溶出度而速效：国外率先使用灰黄霉素PEG(1:3或1:9)分散片, 灰黄霉素在水中溶解速率和口服后人体吸收速率均有明显增加。
国内有人自制氢氯噻嗪PEG(1:9)分散片3批与市售传统片4批作溶出度比较, 结果平均T70由市售片的40min缩至分散片的20min。
有人对6个厂的中成药水飞蓟素片进行试验, 30min溶出率<30%, 低于国外同类产品, 而改制成分散片, 溶出度提高了37倍。
延缓药物释放或排出而长效：据报道, PEG用量<20%并与其它阻滞剂伍用熔制的甲丙氨醋片有延效作用, 用50%PEG溶液制作的苯巴比妥片崩解速度快于4%明胶粘合剂1倍多, 而药物溶解速率反而慢。
国内以PEG4000-葡萄糖(1:1)为联合载体再与异丁基哌嗪力复霉素（2:1)制成的分散片, 体外溶出速率好,犬体内血药浓度高, 人体尿药排出量比单纯药物低。
国外用PEG微孔聚丙烯等制成的速尿控释骨架片, 当口服低剂量(23.0+-7.4mg)即可达到比静注高剂量(40.0+-1.0mg)或口服液(44.5+-7.4mg)更强的利尿作用。
5.此外，少量的高分子量的PEG（PEG4000和PEG6000），可以防止糖衣片剂之间粘接合与药瓶之间粘接。
此外，高数目药用PEG（100目—300目）适用于薄膜衣技术。
PEG在国外曾用于苯海拉明片包衣, 在国内先后用于包肠溶衣, 苯妥英钠片, 中药首乌片的薄膜包衣, 丹参片的复合膜包衣。
PEG-6000_模拟干旱胁迫对冬黑麦生理指标的影响
894㊀㊀2024年第65卷第4期收稿日期:2023-05-26基金项目:吉林省科技发展计划(YDZJ202301ZYTS345);白城市科技发展计划(202204);长春大学博士科研启动项目(ZKQD202308)作者简介:乌日力嘎(1998 ),女,内蒙古通辽人,硕士,从事农艺与种业研究,E-mail:158398750@㊂通信作者:邓宇(1989 ),女,吉林松原人,讲师,博士,从事植物逆境分子生物学㊁果树生物技术研究,E-mail:dengyu _ccu@;孙墨可(1988 ),女,吉林白城人,助理研究员,硕士,从事作物遗传育种研究,E-mail:337645598@㊂文献著录格式:乌日力嘎,邓宇,孙墨可.PEG-6000模拟干旱胁迫对冬黑麦生理指标的影响[J].浙江农业科学,2024,65(4):894-899.DOI:10.16178/j.issn.0528-9017.20230210PEG-6000模拟干旱胁迫对冬黑麦生理指标的影响乌日力嘎1,邓宇1∗,孙墨可2∗(1.长春大学园林学院,吉林长春㊀130022;2.白城市农业科学院,吉林白城㊀137099)㊀㊀摘㊀要:为探究干旱胁迫对冬黑麦生长及生理指标的影响,使用15%聚乙二醇-6000(PEG-6000)对水培俄罗斯冬黑麦BK01模拟干旱胁迫,分别在处理0(CK)㊁3㊁6㊁9㊁12㊁24h 测定不同胁迫时叶片各项生理指标㊂结果表明,随胁迫时间的延长,冬黑麦叶片脯氨酸和丙二醛含量呈上升趋势;过氧化氢酶㊁过氧化物酶㊁超氧化物歧化酶活性㊁可溶性蛋白和可溶性糖含量呈先上升后下降趋势;相对含水率呈下降趋势;研究结果将为冬黑麦抗旱研究进展提供新的理论依据㊂关键词:冬黑麦;干旱胁迫;生理指标中图分类号:S512.5㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:0528-9017(2024)04-0894-06Effects of PEG-6000simulated drought stress on physiologicalindexes of winter ryeWurlig 1,DENG Yu 1∗,SUN Moke 2∗(1.College of Landscape Architecture,Changchun University,Changchun 130022,Jilin;2.Baicheng Academy of Agricultural Sciences,Baicheng 137099,Jilin)㊀㊀Abstract :In order to investigate the effects of drought stress on the growth and physiological indexes of winter rye(Secale cereale L.),the hydroponic Russian winter rye BK01was simulated by using 15%PEG 6000(PEG-6000).Thephysiological indexes of leaves under different stress conditions were determined at 0(CK ),3,6,9,12and 24h,respectively.The results showed that the contents of proline and malondialdehyde in winter rye leaves increased with theprolonging of stress time.The activities of catalase,peroxidase,superoxide dismutase,soluble protein and soluble sugar increased first and then decreased.The relative water content showed a decreasing trend.This study will provide a newtheoretical basis for the research progress of drought resistance of winter rye.Keywords :winter rye (Secale cereale L.);drought stress;physiological index㊀㊀黑麦(Secale cereale L.)是禾本科黑麦属栽培作物,有春黑麦和冬黑麦之分,冬黑麦可以在东北地区种植且越冬生长[1],抗逆性较强,广泛种植冬黑麦可以提高冬季地表覆盖,对提高粮食单产和保证粮食安全均有一定的积极作用[2]㊂冬黑麦富含膳食纤维㊁蛋白质㊁维生素㊁不饱和脂肪酸等生理活性成分,具有很高的营养价值和经济价值,在人类生活中具有重要意义[3]㊂干旱是严重影响植物生长发育的非生物胁迫之一,并且影响广泛而深远㊂中国作为农业大国,在世界上属于水资源短缺的国家之一,再受全球气候变暖的影响,旱灾更是频繁发生,水资源短缺的矛盾也日益突出,对农业生产带来严重危害,甚至会直接危害到粮食安全问题[4]㊂干旱胁迫下,植物会产生活性氧,导致细胞膜系统的代谢紊乱,损坏细胞功能,使细胞保水能力下降,导致植物无法正常生长发育甚至死亡㊂通过测定冬黑麦叶片各项生理指标可以反映出其在干旱胁迫条件下的生长规律等㊂目前,科研人员对冬黑麦研究多以抗寒为主,采用PEG-6000模拟干旱胁迫及分子生物学水平研究较少,因此,本试验以俄罗斯冬黑麦BK01为研究对象,采用15%PEG-6000对水培冬黑麦模拟干旱胁迫,测定各胁迫时期冬黑麦叶片多项生理指标,明确干旱胁迫下冬黑麦的生理特性,为进一步干旱胁迫下冬黑麦转录组测序研究及探究其抗旱分子机制奠定基础㊂1㊀材料与方法1.1㊀试验材料㊀㊀俄罗斯冬黑麦BK01由吉林省白城市农业科学院保存㊂1.2㊀试验方法1.2.1㊀冬黑麦胁迫处理㊀㊀选择健康㊁颗粒饱满的冬黑麦种子,用0.1%高锰酸钾溶液浸泡消毒15min,将消毒后的种子平铺于培养皿中湿润的滤纸上,置于25ħ培养箱中暗培养2d至种子发芽㊂将发芽的冬黑麦种子转入含1L霍格兰德营养液的培养盘中并移至光照培养室继续培养(25ħ,光照16h,黑暗8h),营养液每天更换1次㊂将冬黑麦水培至三叶一心后,利用15%PEG-6000模拟干旱胁迫,处理时间为0 (CK)㊁3㊁6㊁9㊁12和24h,每组处理重复3次,收集冬黑麦叶片,用于生理指标测定㊂1.2.2㊀冬黑麦生理指标的测定㊀㊀分别采用烘干称重法测定相对含水率(RWC),采用TBA法测定丙二醛(MDA)含量[5],采用蒽酮法测定可溶性糖(SS)含量[6],采用考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白(SP)含量[6],采用比色法测定脯氨酸(Pro)含量[7],采用可见光法测定过氧化氢酶(CAT)活性[8],采用比色法测定过氧化物酶(POD)活性[9],采用羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性[10]㊂2㊀结果与分析2.1㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片相对含水率的影响㊀㊀相对含水率通常能够直观地表现出植物的有效含水量㊂在15%PEG-6000模拟干旱胁迫下随着时间的延长冬黑麦叶片的相对含水率呈现下降趋势㊂与0h相比,冬黑麦叶片在干旱胁迫3㊁6㊁9㊁12㊁24h的RWC极显著降低,在胁迫24h时RWC达最低,为59.028%(图1)㊂因此,干旱胁迫导致冬黑麦叶片失水,相对含水率下降,对植物造成损害㊂∗∗ 表示差异极显著(P<0.01)㊂图1㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片相对含水率的影响Fig.1㊀Effects of drought stress on RWC contentof winter rye leaves2.2㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片丙二醛含量的影响㊀㊀丙二醛含量能够反映出膜脂过氧化的程度,也能间接反映抗旱能力的强弱㊂在15%PEG-6000模拟干旱胁迫下随着时间的延长冬黑麦叶片的丙二醛含量呈现上升趋势㊂在干旱胁迫时间达24h时,冬黑麦叶片丙二醛含量最高,为7.741μmol㊃g-1,且9㊁12㊁24h的丙二醛含量与0h相比极显著升高,6h的丙二醛含量与0h相比显著升高(图2)㊂随着干旱胁迫时间延长,冬黑麦叶片丙二醛含量的累积,使膜脂过氧化,导致细胞膜流动性降低,透性增强㊂∗ 表示差异显著(P<0.05); ∗∗ 表示差异极显著(P<0.01)㊂图3~8同㊂图2㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片丙二醛含量的影响Fig.2㊀Effects of drought stress on MDA content ofwinter rye leaves896㊀㊀2024年第65卷第4期2.3㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片可溶性糖含量的影响㊀㊀在15%PEG-6000模拟干旱胁迫下冬黑麦叶片可溶性糖含量变化呈先上升后下降趋势,当胁迫时间达9h时,冬黑麦叶片可溶性糖含量最高,为8.536μg㊃g-1㊂冬黑麦叶片在干旱胁迫3㊁12h的可溶性糖含量与0h相比显著升高,胁迫6和9h 叶片的可溶性糖含量与0h相比极显著升高(图3)㊂干旱导致冬黑麦叶片细胞失水,可溶性糖含量升高能够降低细胞失水性,维持新陈代谢正常进行㊂图3㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片可溶性糖含量的影响Fig.3㊀Effects of drought stress on soluble sugarcontent in winter rye leaves2.4㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片可溶性蛋白含量的影响㊀㊀可溶性蛋白与可溶性糖是植物重要的渗透调节物质,在干旱胁迫中起到提高植物保水能力的作用㊂在15%PEG-6000模拟干旱胁迫下,冬黑麦叶片可溶性蛋白含量变化,呈先上升后下降的趋势㊂冬黑麦叶片在干旱胁迫处理3㊁6h的可溶性蛋白含量与0h相比显著上升,9㊁12㊁24h的可溶性蛋白含量与0h相比极显著上升㊂当胁迫时间达9h时冬黑麦叶片可溶性蛋白含量达最高,为17.702mg㊃g-1(图4)㊂冬黑麦叶片可溶性蛋白含量的增加能够提高细胞保水能力,增强抗旱性㊂2.5㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片脯氨酸含量的影响㊀㊀脯氨酸是植物重要的渗透调节物质,在干旱胁迫中会主动积累㊂在15%PEG-6000模拟干旱胁迫下冬黑麦叶片脯氨酸含量呈上升趋势,在24h达到最高,为66.985μg㊃g-1㊂冬黑麦叶片在干旱胁迫处理6㊁9h的脯氨酸含量显著高于0h,12㊁24h的脯氨酸含量与0h相比极显著上升(图5)㊂随着干旱胁迫时间延长,冬黑麦叶片脯氨酸含量逐渐升高,能够减缓叶片组织失水㊂图4㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片可溶性蛋白含量的影响Fig.4㊀Effects of drought stress on soluble proteincontent in winter ryeleaves图5㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片脯氨酸含量的影响Fig.5㊀Effects of drought stress on proline content inwinter rye leaves2.6㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片酶活性的影响㊀㊀在干旱胁迫条件下植物体内产生大量活性氧,保护性酶可以有效地清除积累的自由基,起到保护细胞的作用㊂在干旱条件下CAT和POD活性的作用是分解代谢中产生的H2O2,以避免H2O2积累对细胞的氧化破坏作用㊂在15%PEG-6000模拟干旱胁迫下冬黑麦叶片CAT活性随着干旱胁迫时间的延长,呈先上升后下降趋势,9㊁12㊁24h的CAT 活性与0h相比极显著上升,且干旱胁迫处理9h时冬黑麦叶片CAT活性达到最高,为9.109U㊃mg-1, 6h的CAT活性与0h相比显著上升(图6)㊂在15%PEG-6000模拟干旱胁迫下,冬黑麦叶片POD活性变化,随着干旱胁迫时间的延长,冬黑麦叶片POD活性呈先上升后下降趋势㊂当胁迫12h时,冬黑麦叶片POD活性达到最大值,9㊁12㊁24h时的POD活性与0h相比显著上升(图7)㊂在逆境胁迫条件下,SOD可以有效地清除植图6㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片过氧化氢酶活性的影响Fig.6㊀Effect of drought stress on CAT activity inwinter rye leaves图7㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片过氧化物酶活性的影响Fig.7㊀Effect of drought stress on POD activity inwinter rye leaves物的自由基,减少活性氧的含量,起到保护细胞的作用㊂在15%PEG-6000模拟干旱胁迫下冬黑麦叶片SOD 活性变化,随着干旱胁迫时间的延长,冬黑麦叶片SOD 活性呈先上升后下降趋势,胁迫处理9㊁12㊁24h 的SOD 活性与0h 相比极显著升高,在9h 时冬黑麦叶片SOD 活性达到最高㊂冬黑麦叶片胁迫6h 的SOD 活性与0h 相比显著上升(图8)㊂干旱胁迫导致冬黑麦叶片细胞内活性氧积累,SOD 能够减少活性氧积累㊂3㊀讨论㊀㊀干旱胁迫下相对含水率能够表明植物的水分状况的生理意义,能够表现出植物的有效水分含量㊂刘硕等[11]以甘蔗为实验材料探索抗旱品种选育,发现干旱1d 时叶片相对含水率变化不明显,但随着干旱加剧,叶片相对含水率显著降低,干旱9d图8㊀干旱胁迫对冬黑麦叶片超氧化物歧化酶活性的影响Fig.8㊀Effect of drought stress on SOD activity inwinter rye leaves时云蔗05-51和粤糖93-159的叶片相对含水率仅为11.64%和8.89%,复水10d 后虽有所回升,但仍显著低于对照㊂一些研究[12]发现在干旱胁迫期间,细胞的膨胀压力降低,这减少了芽长㊁生物量和植物生长㊂干旱会导致叶片枯萎,植物生长减少,花蕾形成减少,叶和叶面积减少,Rollins 等[13-14]研究发现,干旱胁迫是植物鲜重和干重㊁叶片数㊁总叶面积㊁相对含水量㊁气孔大小和频率降低的原因㊂本研究中冬黑麦相对含水率呈逐渐下降趋势,在干旱胁迫0h 时达最高,24h 时最低,与上述结果相似㊂干旱胁迫时,膜脂过氧化导致MDA 积累,使蛋白质和核酸变性,导致膜脂流动性降低,透性增强㊂MDA 含量的高低在一定程度上能反映膜脂过氧化作用水平和膜结构的受害程度,MDA 含量越高品种抗旱能力越弱[7]㊂王晓雪等[7]研究表明,燕麦生长早期根系抗氧化酶活性和脯氨酸含量随干旱胁迫程度增加而增加㊂张翠梅等[15]研究干旱胁迫对不同抗旱苜蓿品种根系生长特征及生理特性的影响发现,干旱胁迫显著增加了供试苜蓿根系的MDA 含量和质膜相对透性,说明供试苜蓿的膜脂过氧化水平均随干旱胁迫程度增加而显著增加㊂本实验结果与上述结果相似,随着干旱胁迫时间的延长,在24h 时叶片MDA 含量达到最高值,在干旱胁迫下叶片受到伤害,反映了干旱胁迫下冬黑麦叶片逆境损伤,产生了大量的MDA㊂可溶性糖是植物体内重要的渗透调节物质和代谢产物,在干旱胁迫中,可溶性糖类是参与渗透调节的重要物质[16]㊂可溶性糖含量与植物叶片生理代谢调节能力和光合作用有关,叶片中可溶性糖含898㊀㊀2024年第65卷第4期量随着干旱胁迫时间的延长而增加,抗旱品种的可溶性糖含量高㊂苏玮娟等[17]研究表明,随胁迫时间的延长,可溶性糖含量总体呈上升趋势,在胁迫72h时达到峰值,青引1号和定燕2号的可溶性糖含量较高,甜燕麦的可溶性糖含量最低㊂随着胁迫时间的进一步延长,胁迫96h时可溶性糖含量稍微降低㊂本研究中,冬黑麦可溶性糖含量呈先上升后下降趋势,9h时可溶性糖含量达最高,通过升高细胞液的渗透势吸收水分,随着胁迫时间的延长,可溶性糖含量开始下降,自我调节能力下降㊂可溶性糖含量升高说明干旱胁迫下,冬黑麦通过可溶性糖含量的增加,降低细胞失水性,使自身新陈代谢能够正常进行㊂可溶性蛋白是重要的渗透调节物质和营养物质㊂在干旱胁迫中,可溶性蛋白的增加和积累能提高细胞的保水能力,对细胞的生命物质及生物膜起到保护作用㊂在干旱胁迫下可以通过植物中可溶性蛋白含量这一指标来反映植物的抗旱性㊂很多研究证明,可溶性蛋白含量的变化与干旱强度有直接关系,随着干旱胁迫强度的增加可溶性蛋白的含量表现为先增强后减弱;干旱胁迫对蛋白含量的影响各异,抗旱性强的品种能诱导基因更强的表达以适应干旱胁迫,而抗旱性较弱的品种可能减弱或丧失其自我调节能力[6]㊂本实验冬黑麦叶片可溶性蛋白含量9h最高,自我调节能力最强,随着胁迫时间调节能力下降,表明冬黑麦叶片细胞通过增加可溶性蛋白含量使细胞保水能力提高,使得适应性增强,这与上述结果相似㊂脯氨酸是植物细胞内重要的渗透调节物质,在逆境条件下脯氨酸会主动积累,受干旱胁迫的植物在植物的叶子㊁芽和根尖等区域表现出较高的脯氨酸浓度㊂植物中脯氨酸的积累可引起细胞渗透势下降,提高细胞的吸水能力或使水分外渗,有助于细胞和组织的持水,使植物能够吸收水分进行生长和代谢[18]㊂Nasrin等[19]研究发现,水稻品种BRRI Dhan-24在干旱胁迫下脯氨酸积累量增加㊂许多抗旱研究将脯氨酸含量的积累量作为植物抗旱指标之一,本实验中冬黑麦的脯氨酸含量随着胁迫时间的延长呈上升的趋势,24h时达最高,与上述研究相似㊂脯氨酸含量升高说明了干旱胁迫下冬黑麦细胞通过增加脯氨酸的含量,使细胞渗透势降低,阻止水分丧失,使自身新陈代谢能够正常进行,响应了干旱胁迫㊂逆境条件下植物细胞会产生过氧化物,导致细胞膜系统代谢紊乱,损坏细胞功能㊂此时植物会产生CAT㊁POD㊁SOD㊁APX等保护酶,减少活性氧的含量,起到保护细胞的作用㊂苏玮娟等[17]研究表明,除甜燕麦的SOD活性随胁迫时间的延长一直上升外,其余材料的CAT㊁POD及SOD活性均随胁迫时间的延长呈先升后降趋势㊂本实验中冬黑麦叶片的3个酶活性随胁迫的加剧均呈先上升后下降趋势㊂其中,CAT与SOD活性在9h时达到最高,POD活性在12h时达到最高,与上述研究结果相似㊂结合本实验,在干旱胁迫初期叶片内的过氧化物被CAT㊁POD和SOD活性分解或清除,缓解氧化的速度,随着胁迫时间的延长冬黑麦叶片活性氧清除功能逐渐降低㊂参考文献:[1]㊀杨军丽,郎旭,张延明,等.越冬小黑麦材料的创制及细胞遗传学研究[J].黑龙江农业科学,2020(10):16-24.[2]㊀ATEH C M,DOLL J D.Spring-planted winter rye(Secalecereale)as a living mulch to control weeds in soybean(Glycinemax)[J].Weed Technology,1996,10(2):347-353.[3]㊀张慧,温纪平,郭林桦,等.黑麦营养特性及其在食品中的研究[J].食品研究与开发,2014,35(3):97-99. 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聚乙二醇应用
聚乙二醇应用［中文名］:聚乙二醇［英文名］:Polyethylene Glycol［简称］:PEG［化学分子式］:HO(CHzCHO)n H一. 产品用途：本系列产品无毒.无刺激性.具有有优的水溶性.相容性、润滑性、保湿性、粘接性和热稳定性。
因而，做为润滑剂、保湿剂、分散剂、粘接剂、赋型剂等，在医药及化妆品等工业做为软膏、栓剂的基质，丸剂、片剂的载体，成型剂和针剂的溶剂等，均有着极为广泛的应用。
制药中主要作用溶媒和水溶性基质。
性质稳定，无副作用，对很多药物有增溶、增加稳定性和延效作用。
PEG~20O 400常作为注射机溶煤，多余乙醇、丙二醇、甘油之类组合成复合溶媒使用，列如：病毒灵注射液、安乃近注射液、痢菌净注射液针、穿心莲注射液、菌毒杀星注射液等。
PEG~100卜1500是作为软膏剂水溶性基质的，本品对皮肤无刺激，易洗除，不易霉败。
常用PEG~4000^ 6000进行不同比例调节软膏稠度，以适应不同季节、温度的需要。
PEG~4000 6000还可以用作片剂、散剂上作为辅助作用。
列如：痢菌净片、多钙片、钙中钙片、痢特灵片、痢菌净散、复方禽菌灵散等等日化领域：牙膏防腐剂，湿粉饼 ，洁肤水，香皂，个人护理品; 制药：胶囊载体，针剂，药膏，栓剂基质，标本保护剂;二. 产品包装:液体和腊状固体采用20kg 50kg 200kg 塑料桶或内喷塑铁桶包装;固体粉状采用20kg 内置无毒PVC 双层塑料袋外加纸箱或纸板桶包装。
三. 产品贮存：本品无毒、难燃，可按一般化学品运输规定办理。
储存于干燥、通风处，避免阳光照射或雨淋或颗粒状粉未工业清洗：油墨增稠剂，橡胶剥离剂，塑胶助剂;白色固态蜡状薄片PEG-8000。
PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒
PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒文章来源： 2006-7-18 18:54:14PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒第四军医大学学报2000年第21卷第1期张文清马文煜骆文静姜绍谆胡艳冰侯悦张进于碧云摘要：目的建立一种简便、有效的从细胞培养物中纯化PV1病毒的方法用于水病毒消毒实验.方法PV 1 Henan株在Hep-2细胞中增殖后用聚乙二醇(PEG)6000沉淀结合差速离心的方法纯化病毒. rT-PCR和透射电镜(TEM)鉴定提纯病毒的形态学和分子生物学特性.结果pH值7.5时终浓度70 g·L-1的PEG6000沉淀病毒的感染性回收率(PFU 计数)为79.2%，提纯系数(PF)为106，再经差速离心(16000 g 30 min，100 000 g 4.5 h)浓缩病毒的感染性回性率和提纯系数分别为29.0%和168. rT-PCR和TEM最终鉴定提纯物为PV 1 Henan株.结论PEG6000结合差速离心的方法较之蔗糖密度梯度区带离心方法易于操作，且比单独PEG沉淀有更高的纯化系数，是一种简便、有效的方法.关键词：脊髓灰质炎病毒；病毒分离与纯化；聚乙二醇；离心法0 引言影响水中病毒消毒效果的因素很多，除了病毒的生物学特性、消毒剂的性质与剂量以及环境温度外,还有水中病毒聚集性、水质酸碱度、离子强度以及病毒周围有机物等［1］.包绕在病毒周围的有机物，尤其是蛋白类，不仅为病毒提供物理屏障，使消毒剂不易穿透至作用靶点，而且有机物中许多化学基团如巯基还可与氧化性消毒剂产生反应，导致消毒剂有效浓度大为降低. emetson等［2］报告，臭氧灭活Hep-2. 细胞中的PV和Coxs病毒需要的消毒剂浓时积(CT值)较灭活游离于细胞外的这两种病毒高约150倍,因此在人工制备病毒污染水样时要经过反复冻融感染细胞、超声粉碎、低速离心沉淀细胞碎片以及其它特殊沉淀病毒蛋白、离心提纯病毒的过程.我们采用反复冻融、超声粉碎、低速离心以去除细胞碎片,并进一步用PEG6000沉淀病毒蛋白、差速离心提纯PV1病毒.1 材料和方法1.1 材料电子显微镜，JEM-2000EX型，日本电子公司；高速冷冻离心机GL-20A型，湘西仪器仪表厂；超速离心机，Centrikont-2080型，瑞士Kontron公司.病毒株与细胞株［3］，PEG 6000，日本进口，天津天秦公司分装.1.2 方法细胞培养与病毒感染按我们先前的方法［3］.接种病毒3～5 d出现严重CPE（＞）后反复冻融细胞5～6次，再经超声粉碎至细胞完全裂解.病毒原液（S）在4℃环境经4000 r·min-1离心30 min后弃沉淀(P1)，留上清(S1)冻存备用.PEG沉淀：在S1中缓慢滴加400 g·L-1PEG 6000溶液至PEG终浓度为70 g·L-1，并随时搅拌、调整pH 至7.5.4℃过夜后，8000 r·min-1离心30 min后弃上清(S2)，留沉淀(P2).差速离心：用0.01 mol·L-1pH 7.4的PBS混悬P2后4℃12 000 r·min-1(16 000g)离心30 min后弃沉淀(P3)，上清(S3)再经PBS混悬，4℃38 000 r·min-1 (100 000 g)超速离心4.5h弃上清(S4)，沉淀(P4)混悬后冰浴条件下14 mm振幅超声粉碎2 min，加双抗处理后用灭菌双蒸去离子水稀释，-75℃冻存.蛋白质浓度测定：按Lowry方法.病毒感染性测定：采用改良的蚀斑试验［3］. RT-PCR：详见我们先前的实验［4］.TEM鉴定：30 mL·L-1戊二醛和10 g·L-1饿酸双固定P4中病毒，按常规电镜制作程序用Epon812, dDSA, DMP-30混合液制备包埋块，超薄切片后用醋酸铀和枸橡酸铝染色，透射电镜下观察照相.2 结果2.1 细胞培养物处理效果细胞冻融、粉碎后低速离心可去除绝大部分细胞碎片(P1)，由Tab1可见，离心降低25%的蛋白，但病毒的感染性仅下降15.8%.表1 从细胞培养物中提纯PV1病毒结果tab 1 The results of purification of PV 1 from cell culturesSample(No) V/mLProtein Virus infectivity g·L-1 %Recovery PFU/L %Recovery PFU/g PF aS1600 6.24 100.00 2.80×108100.0 0.49×108 1.00S11584 4.73 75.00 2.38×10884.2 0.50×108 1.01P1Discarded - - - - - -S2Discarded 2.80 - 5.54×106- - -P240b 1.71 0.69 8.87×10979.2 5.19×109 106.00S338 0.87 0.33 5.02×10942.6 5.77×109 118.00P3Discarded - - - - - -S4Discarded - - 2.37×107- - -P424b0.66 0.16 5.42×10929.0 8.21×109 168.00a: PF (Purify coefficient)=(S1～S4or P1～P4PFU/mg protein)÷(SPFU/mg protein); b:Volume of pellets suspended with PBS buffer.s0: Primary virus solution. S1,S2,S3,S4:supernate,after first,second,third,and fourth centrifugation,respectively.P1,P2,P3,P4: precipitation,afterfirst,second,third,and fourthcentrifugation,respectively.2.2 PEG 6000沉淀病毒蛋白作用PEG处理后的沉淀物P2能保留79.2%的病毒感染性，同时去除99.1%非病毒蛋白，从而使提纯系数达到106 (Tab 1).2.3 差速离心提纯沉淀病毒的作用经一次高速和一次超速离心后可除去P2中约50%的小分子杂蛋白，而感染性回收率分别为42.6%和29.0%，提纯系数分别为116和168(Tab 1).2.4 RT-PCR及TEM鉴定结果提取物(P4)电镜检查可见密集分布的直径约30 nm、呈对称颗粒球形的病毒(Fig 1)，与文献一致，而提纯前细胞内质网中见有散在的病毒颗粒(Fig2). RT-PCR扩增后电泳可见一个214 bp特异片断，与阳性对照相同.图1 纯化后沉淀物PV1透射电镜鉴定结果fig 1 TEM photograph of poliovirus type 1 henan strain after purification ×20000图2 纯化前感染细胞透射电镜检查结果fig 2 TEM photograph of poliovirus type 1 henan strain in infected Hep-2 cells×120003 讨论常用的PV提纯方法是丁醇抽提、酶处理及两次超速离心后，再经速率区带密度梯度离心［5］，有较高的感染性回收率，但费时费力，不易操作，难以用于经常性提纯使用.而PEG沉淀法适于从含有大量宿主蛋白和磷脂的大体积(通常为数千毫克升)原始材料中选择性沉淀病毒，具有手段温和、非病毒蛋白残留量少等优点，但单独使用则感染性回收率低.本实验通过冻融、粉碎、低速离心等预处理去除细胞碎片而降低沉淀过程中非病毒蛋白的影响，结果显示约25%的细胞蛋白被沉淀去除.在此基础上，用PEG 6000沉淀法结合差速离心，可去除99%以上的非病毒蛋白，感染性回收率为29.0%，提纯系数(PF)168，与单独PEG沉淀(PF为66.4)［6］相比提高了近一倍；与蔗糖密度梯度离心相比，虽然感染性回收不及前者(47.0%)［7］，但相对而言，方法简便易行，适合于水中PV消毒实验人工病毒污染水样的经常性制备.作者简介：张文清(1965-)，男(汉族)，安徽省怀宁县人.讲师，博士. 现工作在第一军医大学军队卫生学教研室，广州510525. Tel.(020)7705370-48522 Email.defaultuser@张文清（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)马文煜（第四军医大学：基础部微生物学教研室，陕西西安710033)骆文静（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)姜绍谆（第四军医大学：基础部微生物学教研室，陕西西安710033)胡艳冰（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)侯悦（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)张进（第四军医大学：预防医学系军队卫生学教研室，陕西西安 710033)于碧云（第四军医大学：基础部微生物学教研室，陕西西安710033）参考文献［1］韩友.消毒剂灭活病毒影响因素的研究进展［J］.中国消毒学杂志，1993；10(3):168-171.［2］Emerson MA， Sproul OJ, Buck CE. Ozone inactivation of cell-associated virus ［J］. Appl Environ Microbiol， 1982；43(2):603-610.［3］张文清，姜绍谆，马文煜et al.水中脊髓灰质炎病毒细胞感染模型中病毒株与细胞株的筛选［J］.第四军医大学学报，1998；19(6):643-645.［4］张文清，姜绍谆，马文煜et al.水中脊髓灰质炎病毒感染性、抗原性及核酸指标检测方法的评价研究［J］.第四军医大学学报，1998；19(5):498-500.［5］戴华生. 新实验病毒学［M］. 北京:中国学术出版社，1983:595-596.［6］黄志尚，黄祥瑞，杨佩英et al. Sindbis 病毒的浓缩提纯［J］.中华微生物学和免疫学杂志，1981；1(2):101-103.［7］马文煜，于碧云，姜绍谆et al.从感染鼠脑浓缩提纯流行性乙型脑炎病毒的研究［J］.第四军医大学学报，1984；5(4):251-254.。
聚乙二醇(peg)分解温度
聚乙二醇(peg)分解温度
聚乙二醇在正常条件下是很稳定的，但是在120℃或更高温温度下与空气中的氧气发生氧化作用。
采用惰性气体，如氦气或二氧化碳保护．聚乙二醇即使加热到200～240℃也不发生变化。
当温度升到300℃左右，聚乙二醇的链节才会发生断裂和热裂解。
加入抗氧剂如0.25～0.5％的吩噻嗪，可以提高化学稳定性。
因此，有些厂商在PEG-4000和6000中加入少量的抗氧剂(对苯二酚的单甲醇酯)。
聚乙二醇的任何分解产物都是挥发性的，不会生成硬壳状或秸泥状的沉积物。
而且，装聚乙二醇的任何设备、容器．加热盘管等，均很易用水清洗。
因此，聚乙二醇常被用作传热介质。
由于它的分解不产生任何残渣，因而可用于铸造泥蕊、模塑瓷器以及焊剂中。
聚乙二醇6000模拟干旱胁迫及复水对黄竹幼苗抗性生理特性的影响
聚乙二醇6000模拟干旱胁迫及复水对黄竹幼苗抗性生理特性的影响浦婵;董文渊;张孟楠;尹泽南【摘要】探究黄竹幼苗对聚乙二醇6000(PEG-6000)模拟干旱胁迫的生理响应,为培育优质抗旱黄竹苗及其抗旱性锻炼提供理论依据和技术支持.以黄竹实生苗为研究材料,采用PEG-6000模拟干旱胁迫的方法,探索黄竹幼苗在干旱胁迫及复水条件下叶片形态的变化,及其对黄竹幼苗叶片相对含水量、膜脂产物、渗透调节物、细胞保护酶和叶绿素的影响.结果表明:随着PEG-6000质量分数(0～30％)的增加和胁迫时间的延长,黄竹叶片的萎蔫等级和相对含水量均呈现下降趋势;相反,相对电导率、丙二醛质量摩尔浓度、可溶性糖质量分数、可溶性蛋白质量分数和游离脯氨酸质量分数均呈上升趋势;超氧化物歧化酶活性和过氧化物酶活性呈现先上升后下降趋势.PEG-6000质量分数在0～15％范围内,复水后各抗性指标值均恢复到对照同一水平,说明黄竹幼苗具有一定的耐旱性,但重度干旱胁迫会对其造成严重损伤.因此,适度干旱胁迫有助于增加黄竹幼苗抗旱性,叶片萎焉程度、相对含水量、膜脂产物、渗透调节物和细胞保护酶活性可作为抗旱性综合评价指标,PEG-6000质量分数为O～10％范围内的短期胁迫可用于黄竹幼苗抗旱性锻炼.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2018(046)008【总页数】7页(P31-37)【关键词】黄竹;PEG模拟干旱;复水;抗旱生理【作者】浦婵;董文渊;张孟楠;尹泽南【作者单位】西南林业大学,昆明,650224;西南林业大学,昆明,650224;西南林业大学,昆明,650224;西南林业大学,昆明,650224【正文语种】中文【中图分类】Q945.79黄竹(Dendrocalamus membranaceus Munro)为竹亚科牡竹属笋材两用竹种，其天然分布于泰国、老挝、缅甸、越南和我国滇南、滇西南，在云南形成大面积单优群落，为澜沧江中下游海拔1 000 m以下低山、河谷地区防护林的主要组成部分[1-2]。
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聚乙二醇PEG-6000
【基本信息】
化学成分------------环氧乙烷缩合物
类型----------------非离子
外观----------------乳白色固状物
色泽----------------≤50(Pt-Co)
水份----------------≤1.0%
PH值----------------5.0～7.0（1%水溶液）
【产品介绍】
聚乙二醇PEG-6000可用于药剂。相对分子量较低的聚乙二醇可用作溶
剂、助溶剂、o/w型乳化剂和稳定剂。用于制作水泥悬剂、乳剂、注射
剂等，也用作水溶性软膏基质和栓剂基质，相对分子量高的固体蜡状聚
乙二醇常用于增加低分子量液体PEG的粘度和成固性，以及外偿其他药
物；对于水中不易溶解的药物，本品可作固体分散剂的载体，以达到固
体分散目的，是良好的包衣材料，亲水抛光材料、膜材和囊材、增塑剂、
润滑剂和滴丸基质，用于制备片剂、丸剂、胶囊剂、微囊剂等。
【性能与应用】
聚乙二醇PEG-6000在医药工业中作为赋形剂，用作栓剂、膏剂的制备；
造纸工业中用作涂饰剂，增加纸张的光泽和平滑性；在橡胶工业中作为
添加剂，增加橡胶制品的润滑性和塑性，减少加工过程中的动力消耗，
延长橡胶制品的使用寿命，在医药、化妆品工业生产中用作基质，起调
节粘度、熔点的作用；在橡胶、金属加工工业中用作润滑剂、冷却剂，
在农药、颜料工业生产中用作分散剂、乳化剂；在纺织工业中用作抗静
电剂、润滑剂等。可作为酯型表面活性剂的原料。
【包装与贮运】
包装：本品采用50KG、120KG、200KG桶装。
贮运：按一般化学品贮存和运输。贮存于干燥通风处。保质期二年。
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