大豆异黄酮对心理应激所致小鼠卵巢氧化损伤的保护作用

大豆异黄酮对心理应激所致小鼠卵巢氧化损伤的保护作用肖卫荣1，袁照清2，余玉珍1，徐良全3，邹文斌4（1.丰城市妇幼保健医院妇产科，江西丰城331100；2.万载县中医院妇产科，江西万载336100；3.南昌大学医学实验教学部，南昌330006；4.丰城市人民医院医务科，江西丰城331100）摘要：目的从抗氧化的角度探讨大豆异黄酮（SI）对心理应激导致的小鼠卵巢氧化损伤的保护作用。

方法以束缚法建立动物的心理应激模型。

将50只刚刚性成熟的健康雌性昆明小鼠，按随机数字表法分为5组：对照组、应激模型组、SI低剂量组（83mg·kg－1）、SI中剂量组（167mg·kg-1）和SI高剂量组（333mg·kg-1），每组10只小鼠。

SI组应激的同时给与SI处理。

SI组和应激模型组束缚持续30d，束缚结束后，检测各组小鼠血清皮质醇含量，卵巢组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力及丙二醛（MDA）含量的变化。

结果皮质醇水平：应激模型组及SI低剂量组明显高于对照组（均P＜0.05）；SI各剂量组明显低于应激模型组（P＜0.05），其中SI中剂量组皮质醇水平降低最明显；与对照组相比，SI中、高剂量组皮质醇虽然有升高，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

卵巢组织中SOD、GSH-Px活力及MDA含量：应激模型组及SI低剂量组卵巢组织中SOD、GSH-Px活力均低于对照组，MDA含量均高于对照组（均P＜0.05）；与应激模型组比较，SI各剂量组小鼠卵巢组织中SOD、GSH-Px活力均明显升高，MDA 含量均明显降低（均P＜0.05），其中以SI中剂量组效果最为明显。

结论SI可以对抗或降低应激所致的小鼠卵巢组织的氧化损伤。

关键词：心理应激；大豆异黄酮；卵巢；SOD；MDA；GSH-Px；动物，实验；小鼠中图分类号：R758.73+3文献标志码：A文章编号：1009-8194（2012）12-0015-04 Protective Effect of Soy Isoflavones on Ovarian OxidativeDamage Caused by Psychological StressXIAO Wei-rong1,YUAN Zhao-qing2,YU Yu-zhen1,XU Liang-quan3,ZOU Wen-bing4（1.Department of Obstetrics and Gynecology，the Maternal and Child Health Hospital of Fengcheng, Fengcheng331100，China;2.Department of Obstetrics and Gynecology，Wanzai Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wanzai336100，China;3.Department of Medical Experimental Training of Nanchang University，Nanchang330006，China;4.Department of Medical Services，Fengcheng People’s Hospital，Fengcheng331100，China)A BSTRACT：Objective To investigate the protective effect of soy isoflavones（SI）on the ovarianoxidative damage caused by psychological stress in mice.Methods The animal model of psychological stress was established by restraint for30days.A total of50female mice only just sexually mature were randomly assigned to five groups：control group，stress group，low dose SI treatment group（83mg·kg-1）, middle dose SI treatment group（167mg·kg-1）and high dose SI treatment group（333mg·kg-1），with10 rats in each group.SI treatment was given to stress rats.Serum cortisol levels and superoxide dismutase （SOD）activity，glutathione peroxidase（GSH-PX）activity and malondialdehyde（MDA）content in ovarian tissue were examined.Results Compared with control group，levels of cortisol significantly收稿日期：2012-10-11基金项目：宜春科技局科技计划（JXYC2011KSC017）作者简介：肖卫荣（1972—），女，学士，主治医师，主要从事妇产科的临床研究。

通信作者：徐良全，讲师，E-mail:xlq2005002@increased in stress group and low dose SI treatment group（P<0.05）.In contrast，middle and high doses of SI had no significant effects on cortisol levels（P>0.05）.Compared with stress group，SI treatment obviously decreased cortisol levels（P<0.05）.The maximal effect was observed at the middle dose eval-uated.In addition，SOD and GSH-PX activities significantly decreased and MDA content obviously increased in stress group and low dose SI treatment group，compared with control group（P<0.05）.Com-pared with stress group，SI treatment significantly increased SOD and GSH-PX activities and obviously decreased MDA content（P<0.05）.The maximal effect was observed at the middle dose evaluated. Conclusion SI treatment can resist or reduce stress-induced oxidative damage in mouse ovaries. KEY WORDS：psychological stress；soybean isoflavone；ovary；SOD；MDA；GSH-Px；animals,laboratory;mice卵巢储备功能是指卵巢内存留卵泡的数量和质量，能反映女性的生育潜能和生殖内分泌功能。

卵巢储备功能下降（decreasing ovarian store，DOS），可导致女性生育能力减弱及性激素缺乏，进一步发展为卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）。

近年来，随着社会经济、文化、生活环境、工作节奏等的改变，DOS发病率有逐年上升趋势，严重影响着女性的生殖健康和生活质量。

以往研究［1-2］表明，应激可以通过影响内分泌从而影响生殖功能。

至于长期心理应激条件下，是否会导致卵泡细胞的氧化损伤，国内外均未见报道。

本研究通过建立动物的应激模型，并进行大豆异黄酮（soy isoflavones，SI）干预处理。

同时，通过测定小鼠卵巢中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物（glutathione peroxi-dase，GSH-Px）及丙二醛（malo-ndialdehyde，MDA）含量的变化，探究心理应激对卵巢氧化损伤作用及其损伤机制，明确心理问题对女性生殖健康的影响，为妇女更年期的推迟及卵巢早衰的治疗提供新的思路。

1材料与方法1.1实验动物及分组选取刚刚性成熟的健康雌性昆明小鼠50只，体质量18～22g，由南昌大学实验动物中心提供。

喂养普通饲料，自由饮水。

动物房温度控制在（24±1）℃，湿度为40%～70%，光∶暗周期为12h∶12h。

适应喂养3d后，按随机数字表法分为5组：对照组、应激模型组、SI低剂量组（83mg·kg-1）、SI中剂量组（167 mg·kg-1）和SI高剂量组（333mg·kg-1），每组10只小鼠。

SI组应激的同时给与SI处理。

SI各组每日按2%（即2mL·100g-1）给予相应剂量的SI，用0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）配制成混悬液灌胃；应激模型组和对照组每日给予等体积0.5%CMC-Na溶液灌胃。

连续30d。

1.2心理应激动物模型的建立参照文献［3］的方法，SI组及应激模型组小鼠以束缚为应激原建立心理应激动物模型。

使用50mL 离心管（图1），在离心管管壁前端扎数个孔，保证空气通畅。

在离心管盖子上钻孔，待小鼠钻入离心管后，盖上离心管盖子，将小鼠尾部暴露在外面，封闭后的离心管固定于水平桌面上。

每天09:00开始，15:00解除，束缚持续30d。

1.3检测指标及方法1.3.1血清皮质醇测定在末次束缚应激24h后，取小鼠眼眶血分离血清，采用皮质醇放射免疫分析测定盒（北京四环生物技术有限公司）检测血清中的皮质醇含量。

1.3.2SOD、GSH-Px活性和MDA含量测定分别摘取各组小鼠卵巢。

称重后，按1∶9的比例与冷生理盐水混合，制成10%的匀浆。

离心后，取上清液，按试剂盒（南京建成生物工程研究所)要求测定SOD、GSH-Px活性及MDA含量。