枯草杆菌生产_淀粉酶的研究
枯草芽孢杆菌降解淀粉的原理
枯草芽孢杆菌降解淀粉的原理
枯草芽孢杆菌降解淀粉的原理是通过分泌胞外淀粉酶将淀粉分解为小分子有机物，进而被吸收到细胞内。
在细胞内，这些小分子有机物通过呼吸作用被彻底分解为无机物。
具体来说，枯草芽孢杆菌能够产生一种生理性细菌，这种细菌能够直接发酵淀粉，将其分解为短链脂肪酸和气体。
这个过程中，淀粉被分解为一种类似于营养细胞壁的纤维，这些纤维将淀粉营养物质包围在细胞壁内。
部分纤维可溶解于水并产生粘性物质，这些粘性物质抑制动物的正常消化功能，妨碍动物吸收营养。
然而，当这些纤维被去除后，营养物质就能从细胞壁里释放出来，从而提高代谢能和蛋白质的利用率。
此外，酵母作为单细胞生物，在操作和生产上具有细菌表达系统的特点，同时也具有真核细胞对翻译后蛋白的加工及修饰过程。
酵母细胞壁中的β-葡聚糖和甘露糖醇可以与淀粉分子中的葡萄糖基团结合，使其酶解，从而进一步促进淀粉的降解。
总之，枯草芽孢杆菌降解淀粉的过程是一个复杂的生物化学过程，涉及到多种酶和代谢途径的协同作用。
枯草芽孢杆菌产淀粉酶基因的克隆与表达
枯草芽孢杆菌产淀粉酶基因的克隆与表达枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）是一种在垃圾堆、陆地和淡水中常见的细菌，它可以合成淀粉酶，参与食品加工和制药等领域。
为了深入研究芽孢杆菌产淀粉酶的机制，本文旨在克隆和表达枯草芽孢杆菌的淀粉酶基因，为今后的更深入研究奠定基础。
研究中，我们首先从枯草芽孢杆菌的形态学特性中确定菌株，然后利用定点突变技术，以外源基因引入枯草芽孢杆菌，以达到调控基因表达的目的。
实验中，通过对枯草芽孢杆菌分离介质DNA的提取、限制性内切酶扩增以及后续的PCR扩增，我们能够从大量杂合DNA中克隆出淀粉酶基因的片段，然后进行终止密码子转录、酶切以及连接方面的实验，最终可以将淀粉酶基因克隆入宿主细菌质粒中，从而表达淀粉酶蛋白。
经过蛋白质免疫印迹分析，可以看到从枯草芽孢杆菌中克隆和表达的具有淀粉酶功能的蛋白质，在不同pH条件下具有较强的淀粉水解能力，与未经克隆表达的芽孢杆菌菌株相比，淀粉酶产量有了显著提高。
基于以上结果，我们总结出了枯草芽孢杆菌产淀粉酶基因的克隆与表达的技术方案，为今后的深入研究提供基础，也为特定乳酸菌淀粉酶防护剂的研发提供参考价值。
本文通过介绍枯草芽孢杆菌产淀粉酶基因的克隆与表达，探索了枯草芽孢杆菌淀粉酶的分子机制，证明了定点突变技术对淀粉水解能力的增强作用，为淀粉酶的进一步研究提供了可靠的技术手段。
未来，
我们将借助于新的基因技术等技术平台，进一步深入研究芽孢杆菌淀粉酶的功能、结构和稳定性，以期能更好地利用该酶的乳化作用，为食品加工和药物制造等领域提供支持。
从枯草杆菌发酵液中提取a淀粉酶的流程
从枯草杆菌发酵液中提取a淀粉酶的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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实验六紫外线对枯草芽孢杆菌产淀粉酶的诱变效应
实验六紫外线对枯草芽孢杆菌产淀粉酶的诱变效应、抗菌素生物效价的评价及裂解性噬菌体效价测定（-----结果分析）•实验目的与要求：•1、学习并掌握物理诱变——紫外射线诱变育种的方法。
学习并掌握计算诱变后存活率及致死率的计算。
学习透明圈和菌落直径大小及HC比值计算。
•2、学会裂解性噬菌体效价测定方法。
•3、学会抗生素效价测定方法及利用检定菌检测微生物代谢产物的抗菌性。
一、紫外诱变枯草芽胞杆菌效应• 1.紫外诱变过程：•紫外线诱变采用15W紫外线杀菌灯；在正式照射前，应先开紫外线10min，让紫外灯预热；灯与处理物的距离为30cm；无菌取菌悬液使其厚度为0.5～1.0cm，放在紫外灯的照射台上，开启电磁搅拌器开关。
操作均应在红灯下进行，或用黑纸包住，避免白炽光。
•照射时间：未照射前（0时），照射1min，照射2min，照射3min时分别取样0.5ml；每照射到时间马上无菌取样，加到已经编号的第1个试管，为10-1，共有4个时间的10-1 ，分别将其稀释至：•0min 1min 2min 3min•稀释度10-610-710-8 10-610-710-8 10-510-610-7 10-410-510-6•每个稀释度各取0.2ml涂平板，共涂12块平板，做好标记，37℃培养48hr。
• 2.计算致死率•（1）对照样品中活菌数：将培养至48h后对照古板取出进行细胞计数，根据平板上菌勤务员落数，计算出对照样品1ml菌液中的活菌数。
同样方法数出紫外线处理1、2、3min后的细菌数。
•（2）致死率计算：（3）画出致死率曲线：横坐标为照射时间，纵坐标为致死率。
• 3.观察诱变效应•在平板菌落计数后，分别向菌落数在5个左右的平板内加碘液数滴，在菌落周围将出现透明圈。
•分别测量透明圈菌落计算比值（HC值），与对照平板进行比较。
二、抗菌素滤纸片法测定生物效价• 1.实验操作过程：•（1）将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基灭菌融化，倒平板凝固后，用无菌吸管吸取培养好的试验菌液0.2ml，采用涂布法均匀涂于平皿表面。
枯草杆菌生产α-淀粉酶的研究 -回复
枯草杆菌生产α-淀粉酶的研究-回复枯草杆菌生产α淀粉酶的研究引言：淀粉是一种由葡萄糖分子组成的多聚体，是植物细胞中最重要的储能物质。
为了有效地利用淀粉，许多微生物产生了淀粉酶。
淀粉酶能够水解淀粉成为可被微生物利用的单糖，其中α淀粉酶是将淀粉水解成麦芽糖或是葡萄糖的主要酶类之一。
而枯草杆菌是一种广泛存在于土壤中的细菌，在许多领域都具有潜在应用价值。
本文将探讨枯草杆菌生产α淀粉酶的研究目的、方法、结果和展望。
目的：本研究的目的是通过培养枯草杆菌，使其表达α淀粉酶，以探索其在产业应用上的潜力。
方法：1. 枯草杆菌菌种的筛选：从不同的土壤样本中筛选出具有较高淀粉酶产量的枯草杆菌菌株；2. 培养基的优化：对枯草杆菌菌株进行不同培养基的筛选和优化，以提高淀粉酶产量；3. 发酵条件的优化：调节发酵条件，包括温度、初始pH、培养时间和淀粉浓度，进一步提高淀粉酶活性；4. α淀粉酶的提取和纯化：通过离心、过滤、浓缩和柱层析等技术，将淀粉酶从菌体中分离提取，并进行纯化。
结果：通过以上的实验步骤和优化条件，我们成功获得了一株高产α淀粉酶的枯草杆菌菌株，并获得了较高的淀粉酶产量。
实验结果表明，枯草杆菌在适宜的发酵条件下能够表达和产生大量的α淀粉酶。
展望：虽然本研究已经取得了一定的成果，但仍然存在一些挑战和改进的空间。
首先，我们可以进一步优化发酵条件，以提高淀粉酶产量。
其次，可以通过基因工程手段改良枯草杆菌的基因组，提高其淀粉酶产量和活性。
此外，可以进一步研究α淀粉酶的性质和机制，以在其应用领域发挥更大的作用。
结论：本研究通过对枯草杆菌的研究，成功实现了α淀粉酶的生产。
这为淀粉酶的产业化应用提供了新的途径和可能性。
枯草杆菌生产α淀粉酶具有较高的生物安全性和可行性，且可以通过合理优化发酵条件和基因工程手段，进一步提高产量和活性。
通过深入研究淀粉酶的性质和机制，有望在食品加工、饲料行业和生物能源领域等方面发挥重要作用。
总结：枯草杆菌是一种潜在的产α淀粉酶的微生物菌株。
产淀粉酶枯草芽孢杆菌
“生物制药技术实训”课程研究报告项目一：产淀粉酶枯草芽孢杆菌一实验原理枯草芽孢杆菌的多数中都能产生大量的淀粉酶，较易得到分离。
由于芽孢具有较强的抗热能力，分离纯化时可采用热处理的方法，高温加热处理，杀死样品中所有不含芽孢的菌类，在培养过程中使芽孢杆菌得到很好的富集。
利用该菌产淀粉酶的特性，选择以淀粉为碳源的分离培养基，菌体分泌的淀粉酶会使菌落周围的淀粉水解，滴加碘液即可在菌落周围出现清晰的透明圈。
根据透明圈的直径（C）与菌落直径（H）之比（C/H）可初步鉴定酶活力的高低，即比值越大酶活力越高，进而筛选出优良的生产用菌。
二材料灭过菌的种子培养基无菌生理盐水（杀了菌的生理盐水，盐浓度0.9％）培养基配方：蛋白胨10g，酵母浸膏5g，NaCl10g，水1L，淀粉，1. 8%的琼脂PH7.2-7.4，121℃灭菌20min（各量取其三分之一）。
三操作步骤1.包平板2.配生理盐水3.根据培养基配方配置培养基，并取出45ml用于液体培养基，其余作为固体培养基4.取1，2，3中配成的平板，生理盐水，大型三角瓶在121℃中灭菌20min5．称取土壤10g与 90mL无菌水中，振荡20分，使土壤中菌体或孢子均匀分散，取其悬浮液于80℃下保持10min,以杀死非芽孢的菌体。
取5ml悬浮液接入到装有45 ml种子培养基的三角瓶内，（于37℃、200 r/min摇床中）培养20 h6.灭完菌后倒平板，自然冷却凝固后放入恒温培养箱中静致一夜，观察其是否染菌7.将用于做梯度试验的试管8个，每个加9ml蒸馏水，移液管8个，塞棉花拿去灭菌121℃，20min8. 取培养后的菌液，用无菌生理盐水适当稀释，取一定量涂布于平板，做梯度试验分别标记为100，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，10-9，10-10。
9.将标记的的试管，移取1ml与培养基中涂布并进行标记，于37℃，培养20h10.将灭菌好的平板拿出，进行无菌划线，在培养基中观察到10-8，10-9，10-10，有单一菌落，而10-6，10-7并不明显，．对10-8，10-9，10-10的培养基中的菌落加碘液进行观察，发现有透明圈。
枯草杆菌摇瓶发酵生产α-淀粉酶实验方案
枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶发酵试验一、实验原理以枯草芽孢杆菌（BacilusSubtilisBF—7658）为实验菌株，通过种子扩大培养，选出生长力旺盛的菌株进行液体摇瓶发酵。
通过测定不同发酵时间生产的酶活，来初步估计发酵最佳时期和终点。
淀粉酶是能够分解淀粉糖苷键的一类酶的总称，包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶。
芽孢杆菌主要用来产生α-淀粉酶和异淀粉酶，其中α-淀粉酶又称淀粉1，4-糊精酶，能够切开淀粉链内部的α-1，4-糖苷键，将淀粉水解为麦芽糖、含有 6 个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖；而异淀粉酶又称淀粉α-1，6-葡萄糖苷酶、分枝酶，此酶作用于支链淀粉分子分枝点处的α-1，6-糖苷键，将支链淀粉的整个侧链切下变成直链淀粉。
通过发酵实验，我们可以以酶活为依据，初步估计发酵的最佳时期和发酵终点。
二、实验材料（一）实验菌株：以枯草芽孢杆菌（二）培养基：1、种子培养液：葡萄糖1% 、胰蛋白胨：1%, 、酵母提取物：0.5%、NaCl(氯化钠)：1%调pH7.2 ，若配置固体培养基，则再加入1.5% 琼脂。
2、产淀粉酶发酵培养液：玉米粉 2 .0 % 、蛋白胨1 .5% 、CaCl20 .02 % 、MgSO40 .02% 、NaCl 0 .25% 、K2HPO40 .2% 、柠檬酸钠0 .2% 、硫酸铵0 .075% 、Na2HPO40 .2 %调节pH 值7 .0（三）0.02M磷酸缓冲液（pH6.0）（四）实验仪器离心机、水浴锅、250mL三角瓶、试管三、实验过程1、分别按培养基配方配制种子培养基和发酵培养基。
2、种子斜面及种子液准备A.挑取单菌落从平板转接于新鲜种子斜面培养基，37℃，24h作菌种（3支/组）。
B.将配好的种子培养液按每瓶50mL分装于250mL三角瓶中灭菌（ 100KPa 20min ）。
C.在无菌操作条件下，将活化的菌株接种于以上培养液中（每支斜面接两瓶），37℃ 120r／min振荡培养16h作种子液。
枯草杆菌生产α-淀粉酶的研究
淀 粉 酶活 力 。 果示 干表 １ 菌 体 生长 和 结 。
产 酶 的最 适 温 度 均 在 ３ ７℃。 度 高 于４ 温 ４℃
１ １ １菌种 枯 草芽孢 杆 菌（ ａ ｉ ｕ 菌体 生 长 和 酶 活 力 迅 速 下 降 。 ．． Ｂ ｃｌ ｓ ｌ （） ２ 培养 基 对 菌体 生 长 和 产 酶 的 影 响 ， 同在 最适 温 度 ３ ℃下 ， 同的 接 种量 、 同 ７ 相 相
枯草 芽孢 杆 菌在马 铃 பைடு நூலகம்
薯 固体 培养 基（ 简称Ｐ Ａ） ７ Ｄ 上３ ℃培养 １ ｈ ２ 后 ３ 结 论 １ ２ ２液体 种子 的制备 ．． １ ０ 三角瓶 ０ ｍＬ ０一淀粉 酶是 产量 在 ， 【 用途 广 的 酶制 剂 品种 之 一 ， 国 目前 枯草 杆 菌 ａ一 粉酶 是 我 淀
一
实 际 的 指导 意 义 。
津产Ｓ ０ ０ Ｈ６ ０ Ａ型） ３ 在２ ℃至４ ℃范 围内培养 ４ 枯草 芽孢杆 菌（ ａ ｉｕ ｕ ｔ ｉ ，６ 后 测定 Ｂ ｃ ｌｓ ｓ ｂｉ ｓ ３ ｈ ｌ ｌ）
一
般 可 由微 生 物 发 酵 产 生 ， 可 由植 物 和 也 动物提取 。 １材料和方法 目前 ， 业 生 产 上 都 以 微 生 物 发 酵 法 １ １实验材料 工 ．
１ ｈ ｎｆ ｒ ｓ ） ｉ ｅ ｉｏ ｍｕ 等 中分 离 得 到 了 耐 高 温的 １ ２实验方 法 ｃ ． ａ一 粉 酶 菌 种 。 就 国 内而 言 ， 己开 展 淀 但 虽
了耐 高 温 ａ一淀粉 酶 的 研 究工 作 ， 目前 仍 以 １ ２． ． １菌种 激活
使 用
适 培 养 时 间为 ３ ｈ。 ６
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科技创新导报 Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｈｅｒａｌｄ
２０１０ ＮＯ．２９
Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｈｅｒａｌｄ
研 究 报 告
α－淀粉酶是在淀粉加工、食品工业、医药工业、发酵工业及酿造、制糖和纺织工业上应用广泛的酶种，也是目前国内外应用最广、产量最大的酶种之一。
α－淀粉酶一般可由微生物发酵产生，也可由植物和动物提取。
目前，工业生产上都以微生物发酵法为主进行大规模生产α－淀粉酶。
我国从１９６５年开始应用枯草芽孢杆菌（Ｂｃａｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＦ－７６５８生产α－淀粉酶，当时仅无锡酶制厂独家生产，年产量为１０．２２吨。
现在国内生产酶制剂的厂家己发展到上千个，其中约有４０％～５０％的工厂生产α－淀粉酶。
总产量上万吨。
近年来，国外生产耐热α－淀粉酶发展较快，己从嗜热真菌、高温放线菌、特别是从嗜热细菌（嗜热脂肪芽孢杆菌Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓｔ和地衣芽孢杆菌Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｕｓ等）中分离得到了耐高温的α－淀粉酶菌种。
但就国内而言，虽己开展了耐高温α－淀粉酶的研究工作，目前仍以枯草杆菌菌株生产α－淀粉酶为主。
本文就枯草杆菌在淀粉培养基上产
α－淀粉酶做一下研究，其对在以玉米（淀粉含量为７０％～７５％）或大米（淀粉含量为８０％～８５％）主要原料的发酵酿酒过程，具有实际的指导意义。
１ 材料和方法
１．１实验材料
１．１．１菌种 枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）为实验室保藏菌种。
１．１．２种子培养基 马铃薯固体（及液体）培养基（简称ＰＤＡ，马铃薯２００ｇ、蔗糖２０ｇ、琼脂１５ｇ、水１０００ｍｌ、ＰＨ自然，马铃薯去皮，切成块煮沸３０ｍｉｎ，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至１０００ｍｌ。
１２１℃灭菌３０ｍｉｎ）
１．１．３发酵培养基 淀粉液体培养基（可溶性淀粉、蒸馏水、ｐＨ自然。
１２１℃灭菌３０ｍｉｎ）
１．２实验方法
１．２．１菌种激活 枯草芽孢杆菌在马铃薯固体培养基（简称ＰＤＡ）上３７℃培养１２ｈ后使用
１．２．２液体种子的制备 １００ｍＬ三角瓶装５０ｍＬ马铃薯液体培养基（起始ＰＨ为自然ＰＨ），灭菌后接激活菌种悬液１．５ｍＬ，培养３６ｈ。
１．２．３发酵培养 在各淀粉液态培养基中加１．５ｍＬ液体种子，用电热恒温振荡培养箱培养枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）。
１．２．４分析方法 酶活力测定，根据国家标准局发布的方法进行①。
即１ｍＬ酶液于６０℃，ＰＨ４．８条件下，１小时液化１ｇ可溶性淀粉为１个活力单位。
［①国家标准局颁布，ＧＢ８２７５－８７，１９８８－０２－０１实施］
２ 实验结果与讨论
（１）培养温度对菌体生长和产酶的影响在不同温度下用电热恒温振荡培养箱（天津产ＳＨ６０００Ａ型）在２３℃至４４℃范围内培养枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ），３６ｈ后测定α－淀粉酶活力。
结果示于表１。
菌体生长和产酶的最适温度均在３７℃。
温度高于４４℃菌体生长和酶活力迅速下降。
（２）培养基对菌体生长和产酶的影响，同在最适温度３７℃下，相同的接种量、相同的种龄的枯草杆菌，比较不同比例的淀粉液体培养基产α－淀粉酶，结果见表２测定产α－淀粉酶的最适培养基为：淀粉∶水＝７５∶１００。
（３）培养时间对产酶的影响，在最适温度３７℃下，相同的接种量，淀粉与水的比例为：７５∶１００时１（最适产α－淀粉酶的淀粉液体培养基），测定枯草杆菌产α－淀粉酶最适培养时间为３６ｈ。
３ 结论
α－淀粉酶是产量在，用途广的酶制剂
品种之一，我国目前枯草杆菌α－淀粉酶是主要品种之一，在行业应用具有重要价值。
本实验采用枯草杆菌在淀粉液态培养基上产α－淀粉酶，其研究结果对以玉米或大米为主要原料的发酵造酒具有指导意义。
１）在２３℃至４４℃范围内，振荡培养，起始ＰＨ为自然ＰＨ，产α－淀粉酶最适培养条件：培养温度３７℃。
２）在温度３７℃下，用淀粉液体培养基发酵，当淀粉与水的比例为７５∶１００时，产α－淀粉酶酶活力最高。
３）在最适温度３７℃，淀粉与水的比例为７５∶１００（即产酶最高的淀粉液体培养基）时，最佳培养时间为１２ｈ，此时α－淀粉酶活力最高。
参考文献
［１］沈萍，范秀容，李广武．微生物学实验．
北京：高等教育出版社，２０００．［２］臧明玺，姜延程，李廷生．发酵助剂提高
枯草杆菌α－淀粉酶的活性研究．郑州粮食学院学报，１９９７．
［３］钟穗生等．枯草杆菌α－淀粉酶的活性
研究．太原工业大学学报，１９９７．
枯草杆菌生产α－淀粉酶的研究
哈申吐力古尔
（内蒙古通辽职业学院 通辽 ０２８０４５）
摘 要：以枯草杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＢＦ７６５８）为实验菌株，以淀粉为主要原料，采用液态培养基摇瓶发酵，生产α－淀粉酶。
结果表明：①在２３℃至４４℃内，培养基起始ＰＨ为自然ＰＨ，产酶最适培养温度为：３７℃②枯草杆菌在淀粉液态培养基中３７℃，振荡培养，其产酶最适淀粉水组成为：淀粉∶水＝７５∶１００；③在最适温度３７℃下，淀粉∶水＝７５∶１００时，最适培养时间为３６ｈ。
关键词：α－淀粉酶 枯草杆菌 淀粉液体培养基中图分类号：Ｒ３１３文献标识
码：Ａ
文章编号：１６７４－０９８Ｘ（２０１０）１０（ｂ）－００１０－０１
表１ 不同温度下所测糖度值
表２ 不同培养基对枯草杆菌产α－淀粉酶的影响。