液相色谱故障排除之谱图的各种问题
HPLC谱图的各种问题及相应的解决办法
HPLC谱图的各种问题及相应的解决办法随着2005年版药典的施行，高效液相色谱仪在新版药典中得到极为广泛的应用。
我们在平常的检验工作中，常常发现HPLC谱图会与理论上的有差别，出现各种各样的问题，一直是困扰着广大药品检验人员的一个主要因素。
当出现某种现象时，又该如何去有针对性的解决问题呢，这也是广大药检人士所共同期待的事，如今参考多种文献资料，讲义，教材，结合自身的平常工作经验，将一些常见的，主要的现象，原因及解决措施进行了整理总结，以供专业人士查阅参考,也。
这里所罗列的也只是一个大概内容。
如何做到真正解决问题，我认为坚持几个原则：一具体问题具体对待原则；二先外设后内部原则；三由简而繁原则；四单一处理到综全处理原则。
由于这方面所遇到的问题相对比较多，笔者打算做成几个系列化内容，分次发表。
下面先介绍几个最常见，最主要的问题。
（解决办法前的编号对应前面相应的原因编号，其他皆同。
）问题一：基线漂移原因主要有：1、柱温波动。
（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。
通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
）；2、流动相不均匀。
（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
）；3、流通池被污染或有气体；检测器出口阻塞。
（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）；4、流动相配比不当或流速变化；5、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；6、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成；7、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线；8、使用循环溶剂，但检测器未调整；9、检测器没有设定在最大吸收波长处。
针对上述原因，有一些基本的解决办法：1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器；2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。
流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气；3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。
如有需要，可以用1N的硝酸。
（不要用盐酸）；4、取出阻塞物或更换管子。
高效液相色谱仪常见故障及解决方法
高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象：泵无法正常启动或启动后无法正常停止。
解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧。
2. 故障现象：泵的流量不稳定或无法调节。
解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧；检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏，如损坏，更换密封圈。
二、流动相跑空1. 故障现象：流动相液位下降至最低液位以下，导致无法正常进样。
解决方法：检查流动相的储液瓶是否已空，如已空，重新更换储液瓶；检查流动相的流速设置是否正确，如不正确，重新设置流速；检查管路是否有泄漏点，如存在泄漏点，修复泄漏点。
2. 故障现象：流动相液位迅速下降，导致无法正常进样。
解决方法：检查废液瓶是否已满，如已满，倾倒废液；检查管路是否有堵塞或弯折，如有，更换管路或调整管路布局。
三、峰面积重复性差1. 故障现象：同一色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。
解决方法：检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查进样针的清洗是否彻底，如不彻底，加强清洗；检查样品前处理的稳定性是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。
2. 故障现象：不同色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。
解决方法：检查流动相的组成是否恒定，如不恒定，重新配制流动相；检查色谱柱的稳定性是否可靠，如不可靠，更换色谱柱；检查检测器的波长是否准确，如不准确，重新调整波长。
四、峰丢失1. 故障现象：在色谱图中看不到预期的峰。
解决方法：检查进样针是否堵塞或断裂，如堵塞或断裂，更换进样针；检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查样品前处理是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。
2. 故障现象：在流动相中添加了某种物质后，出现了预期之外的峰。
解决方法：检查流动相中添加的物质是否稳定，如不稳定，重新配制流动相；检查检测器的灵敏度是否足够高，如不够高，调整灵敏度；检查色谱柱的类型是否正确，如不正确，更换色谱柱。
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
液相色谱仪常见故障分析及解决要点
液相色谱仪常见故障分析及解决要点液相色谱仪作为一种常用的分析仪器，经常会遇到一些故障。
以下是液相色谱仪常见故障的分析及解决要点：1.噪声增加：可能原因：进样器泄漏、柱床固定不良、柱床老化、流体系统不稳定等。
解决方法：检查进样器和柱床的连接，更换柱床，检查流体系统并重新校准。
2.峰形畸变：可能原因：柱床老化、进样器问题、流体系统堵塞等。
解决方法：更换柱床、清洗进样器、检查流体系统并进行维护。
3.基线漂移：可能原因：溶剂质量不纯、流体系统不稳定、进样器问题等。
解决方法：更换纯净溶剂、检查流体系统并重新校准、清洗进样器。
4.压力异常：可能原因：流体系统堵塞、泵的柱床老化、柱床压力限制等。
解决方法：清洗流体系统、更换柱床、检查柱床的压力限制。
5.进样器问题：可能原因：进样器泄漏、进样器柱床老化、进样器阀门不灵活等。
解决方法：检查进样器的连接，更换进样器柱床，润滑进样器阀门。
6.柱温控制问题：可能原因：柱温控制器故障、柱床老化、温度传感器问题等。
解决方法：更换柱温控制器、更换柱床、校准温度传感器。
7.柱床老化：可能原因：使用时间过长、样品残留、溶剂残留等。
解决方法：更换柱床、进行柱床维护、清洗柱床。
8.溶剂选择错误：可能原因：溶剂质量不纯、溶剂选择不适合分析物等。
解决方法：更换纯净溶剂、重新选择合适的溶剂。
9.柱床堵塞：可能原因：样品残留、溶剂残留、柱床老化等。
解决方法：清洗柱床、更换柱床、进行柱床维护。
10.柱床压力限制：可能原因：柱床老化、流量设置不合理等。
解决方法：更换柱床、重新设置流量。
在解决液相色谱仪常见故障时，需要注意以下要点：确定故障现象，并记录下来，有助于分析和解决问题。
了解仪器的正常工作原理，对比故障现象，定位故障的可能原因。
逐一排除故障可能原因，一步一步进行检查和测试，从最简单的可能原因开始排除。
如果无法解决故障，及时向仪器供应商或相关专家咨询，并提供详细的故障描述和测试结果。
定期进行仪器的维护和保养，包括清洗柱床、更换柱床、校准流量和温度等。
液相色谱常见问题及处理方法
液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1．样品量不足，解决办法为增加样品量2．样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3．样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器4．检测器衰减太多。
调整衰减即可。
5．检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数6．检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
7．检测池中有气泡。
解决办法为排气。
8．记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
9．流动相流量不合适。
调整流速即可。
10．检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1．拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2．把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3．将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。
这时，如果柱压仍不下降，再检查；4．更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高，请与厂商联系。
一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2．存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
液相色谱仪保留时间漂移的故障排出 液相色谱常见问题解决方法
液相色谱仪保留时间漂移的故障排出液相色谱常见问题解决方法保留时间不重现有两种不同的情况：既保留时间漂移和保留时间波动。
前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。
将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮忙。
如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。
事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。
保留时间漂移的几种常见的原因如下：一色谱柱平衡假如我们察看到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。
通常平衡需要10—20个柱体积的流动相，但假如在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。
流动相污染也可能是原因之一、溶于流动相中的少量污染物可能渐渐富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。
应注意：水是很简单污染的流动相成分。
二固定相稳定性固定相的稳定性都是有限的，即使在推举的PH范围内使用，固定相也会渐渐水解。
例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性更好。
水解速度与流动相类型和配体有关。
双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。
常常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。
其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。
三色谱柱污染保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。
HPLC色谱柱是特别有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。
污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。
通常通过试验可判定污染的来源。
样品中假如存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。
这些根源通常是样品基质。
如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。
液相色谱常见的问题及改进
Base
Base
拖尾且 在HPLC中 保留过长
上述实验使用了两个相同的普通C8色谱柱 ©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 19
碱性物质拖尾的解决方案
色谱柱或填料的品牌/流动相的pH值
中性物质
中性物质 0
碱性物质
普通 C18
碱性物质 Time (min) pH 7
©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 28
采样速率
Absorbance
0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0
A=10
0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0
©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 11
传统硅胶基质填料的pH局限性 键合相水解
10
硅胶溶解
1
0
2
Байду номын сангаас
4
6 pH 8
10
12
14
XTerra 杂化填料 — 宽pH范围
©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 12
(60:40)
Detection:
UV at 210 nm
Flow Rate: 1 mL/min
Inj. Volume: 30 µ L
ST溶RO剂N强GE度R强SA于M流PL动E 相SOLVENT
3
15
©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 25
液相色谱图谱常见问题及解决办法
液相色谱图谱常见问题及解决办法液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。
其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而有些问题必须通过修改操作程序来解决。
本文汇总了一些关于液相色谱图谱问题的解决办法，这些办法也许能更有效的帮你解决问题。
一、峰拖尾原因和解决方法1、筛板阻塞a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷填充色谱柱3、干扰峰a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误调整PH值。
对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱二、峰前延原因和解决方法1、柱温低升高柱温2、样品溶剂选择不恰当使用流动相作为样品溶剂3、样品过载降低样品含量4、色谱柱损坏更换色谱柱三、峰分叉原因和解决方法1、保护柱或分析柱污染取下保护柱再进行分析。
如果必要更换保护柱。
如果分析柱阻塞，拆下来清洗。
如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。
如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂。
如果可能采取流动相作为样品溶剂。
四、峰变形原因和解决方法1、样品过载减少样品载量五、早出的峰变形原因和解决方法1、样品溶剂选择不恰当a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂六、早出峰拖尾程度大于晚出峰原因和解决方法1、柱外效应a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池七、K’增加时，脱尾更严重原因和解决方法1、二级保留效应，反相模式a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对加入三乙胺（或碱性样品）八、酸性或碱性化合物的峰拖尾原因和解决方法1、缓冲不合适a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液九、额外的峰原因和解决方法1、样品中有其他组份2、前一次进样的洗脱峰a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积十、保留时间波动原因和解决方法1、温控不当调好柱温2、流动相组分变化防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱十一、保留时间不断变化原因和解决方法1、流速变化重新设定流速2、泵中有气泡从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相十二、基线漂移原因和解决方法1、柱温波动控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器2、流动相不均匀。
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液相色谱故障排除之谱图的各种问题：培训日期：2008年8月9日液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。
其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。
对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A、峰拖尾1、筛板阻塞a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷a、填充色谱柱3、干扰峰a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误a、调整PH值。
对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱B、峰前延可能的原因在大峰前，有小峰流出柱死体积样品溶剂不适当过滤片部分堵塞柱过载1、柱温低a、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当a、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载a、降低样品含量4、色谱柱损坏a、见A1、A2C、峰分叉1、保护柱或分析柱污染【柱中有死体积】a、取下保护柱再进行分析。
如果必要更换保护柱。
如果分析柱阻塞，拆下来清洗。
如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。
如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相a、改变样品溶剂。
如果可能采取流动相作为样品溶剂。
D、峰变形1、样品过载a、减少样品载量E、早出的峰变形1、样品溶剂选择不恰当a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效应a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池G、K’增加时，脱尾更严重1、二级保留效应，反相模式a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对a、加入三乙胺（或碱性样品）H、酸性或碱性化合物的峰拖尾1、缓冲不合适a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、额外的峰1、样品中有其他组份2、前一次进样的洗脱峰a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积J、保留时间波动1、温控不当a、调好柱温2、流动相组分变化a、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡a、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化1、流速变化a、重新设定流速2、泵中有气泡a、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、基线漂移1、柱温波动。
（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。
通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
）a、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器2、流动相不均匀。
（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
）a、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。
流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体a、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。
如有需要，可以用1N的硝酸。
（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。
（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）a、取出阻塞物或更换管子。
参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化a、更改配比或流速。
为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时a、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成a、检查流动相的组成。
使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
a、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
a、重新设定基线。
当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
a、将波长调整至最大吸收波长处M、基线噪音（规则的）1、在流动相、检测器或泵中有空气a、流动相脱气。
冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2、漏液a、见第三部分。
检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。
如有必要，更换泵密封。
3、流动相混合不完全a、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）a、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备a、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。
6、泵振动a、在系统中加入脉冲阻尼器N、基线噪音（不规则的）1、漏液a、见第三部分。
检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。
如有必要，更换密封。
检查流通池是否漏液。
2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成a、检查流动相的组成。
3、流动相各溶剂不相溶a、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子元件的问题a、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。
5、系统内有气泡a、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡a、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。
）a、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、检测器灯能量不足a、更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞a、更换色谱柱10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常a、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置O、宽峰1、流动相组成变化a、重新制备新的流动相2、流动相流速太低a、调节流速3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）a、见section 3。
检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。
如果必要更换密封。
4、检测器设定不正确a、调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反应时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长a、小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品b、减少响应时间或使用更小的流通池c、使用内径为0.007-0.01的短管路d、减少响应时间6、缓冲液浓度太低a、增加浓度7、保护柱污染或失效a、更换保护柱8、色谱柱污染或失效，塔板数较低a、更换同样类型的色谱柱。
如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。
9、柱入口塌陷a、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰a、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果11、柱温过低a、提高柱温。
除非特殊情况，温度不宜超过75℃12、检测器时间常数太大a、使用较小的时间常数P、分离度降低1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）a、重新配置流动相2、保护柱或分析柱阻塞a、去掉保护柱进行分析。
如果必要则更换保护柱。
如果分析柱阻塞，可进行反冲。
如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。
如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。
Q、所有的峰面积都太小1、检测器衰减设定过高a、减少衰减的设定2、检测器时间常数设定太大a、设定较小的时间常数3、进样量太少a、增大进样量R、所有的峰面积都太大1、检测器衰减设定过低a、采取较大的衰减2、进样过多a、减少进样量3、记录仪连接不正确a、正确连接记录仪S、高效液相色谱HPLC保留时间漂移的故障排除保留时间不重现有两种不同的情况：即保留时间漂移和保留时间波动。
前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。
将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。
如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。
事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。
保留时间漂移的几种最常见的原因如下:1：色谱柱平衡如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。
通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。
流动相污染也可能是原因之一。
溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。
应注意：水是很容易污染的流动相成分。
2：固定相稳定性固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。
例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。
水解速度与流动相类型和配体有关。
双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。
经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。
其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。
3：色谱柱污染保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。
HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。
污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。
通常通过实验可判断污染的来源。
样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。
这些根源通常是样品基质。
如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。
通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。
可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。
避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。
相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。
通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。
如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。
DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。
使用保护柱是个非常有效的方法。
反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。
4：流动相组成流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。
如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。
5：疏水坍塌当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象，这就是疏水坍塌。
此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。
挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。
由是色谱柱长期储存也会发生此现象。
使用内嵌极性基团的反相色谱柱或非端基封口的色谱柱也可避免发生坍塌。