山梨酸苯甲酸实验报告
食品中山梨酸、苯甲酸的测定
分析步骤
1 样品处理 1.1 汽水：称取5.00～10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二 氧化碳，用氨水1＋1调pH约7。加水定容至10～20mL，经滤膜 0.45μm过滤。 1.2 果汁类：称取5.00～10.0g样品，用氨水1＋1调pH约7，加水定 容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜0.45μm过滤。 1.3 配制酒类：称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇， 用氨水1＋1调pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜0.45μm过滤。 2 高效液相色谱参考条件 2.1 色谱柱：YWG－C184.6mm×250mm10μm不锈钢柱。 2.2 流动相：甲醇：乙酸铵溶液0.02m0l/L5：95。 2.3 流速：1mL/min。 2.4 进样量：10μL。 2.5 检测器：紫外检测器，波长230μm，灵敏度0.2AUFS。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
计算
式中式中：X2——样品中苯甲酸或山梨酸的含量， g/kg； m3——进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，mg； V4——进样体积，mL； V3——样品稀释液总体积，mL； m4——样品质量，g。
注意事项
1.使用过程中应注意机器是否有异常情况的发生（声 音），压力是否过高（超过200Bar不可再做实验）， 流动相是否流空、废液瓶是否已满等等。 2.所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干 净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后 方可使用。 先抽滤、后超声（10-15分钟） 3.进样针每次改进不同样品或对照品时，需用色谱甲醇 涮洗五次以上，涮洗位置要超过进样量位置。 4.实验完毕后用甲醇冲洗一小时，如果流动相中含有酸 或缓冲盐，则先用新鲜纯水冲洗0.5小时，再用甲醇冲 洗一小时。
高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量
分析检测高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量字琴江1，杨 冲1，王 瑾2，左李美3，赵 芳1，罗桂槐1（1.洱源县检验检测院，云南洱源 671200；2.云南农业职业技术学院，云南昆明650031；3.昆明市城市排水监测站，云南昆明 650118）摘 要：本文采用高效液相色谱法对橙汁中的防腐剂山梨酸、苯甲酸含量进行测定，对方法的线性、加标回收率、精密度进行验证。
结果显示，山梨酸和苯甲酸浓度与峰面积在0.5～20.0 mg/L呈良好的线性关系，相关系数为0.999 6，样品的加标回收率为93.60%～95.90%，RSD为0.97%~1.96%。
该方法能准确测定橙汁中的防腐剂山梨酸和苯甲酸，且操作简单、准确度高，适用于大多数检测机构。
关键词：山梨酸；苯甲酸；高效液相色谱Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid by HPLC ZI Qinjiang1, YANG Chong1, WANG Jin2, ZUO Limei3, ZHAO Fang1, LUO Guihuai1(1.Eryuan County Inspection and Testing Institute, Eryuan 671200, China; 2.Yunnan V ocational and Techical College of Agriculture, Kunming 650031, China; 3.Kunming City Drainage Monitoring Station, Kunming650118, China)Abstract: In this paper, determination sorbic acid and benzoic acid in orange juice by high performance liquid chromatography (HPLC), and the linearity, recovery rate and precision of the method were verified. The results show that there is a good linear relationship between the concentration of 0.5～20.0 mg/L, and the correlation coefficient is 0.999 6, the recovery rate of the samples is between 93.60%～95.90%, and the relative standard deviation (RSD) ranged from 0.97%～1.96%. This method is suitable for accuracition of determination of the content of benzoic acid and sorbic acid in orange juice, which showed great prospect most institutions.Keywords: sorbic acid; benzoic acid; high performance liquid chromatography近年来，随着食品工业的快速发展，食品添加剂已被广泛应用于食品加工、储存中，防腐剂能抑制微生物繁殖，延长食品的保质期，防止食物变质、腐败，防腐剂的出现给人们生活带来极大便利[1]。
苯甲酸山梨酸的测定方法
实验十七、酱油中山梨酸、苯甲酸的测定1、目的与要求掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。
2、原理样品中的苯甲酸在酸性条件下蒸馏，馏出液剧烈氧化除去杂质，再次蒸馏后，所得苯甲酸在220nm处有最大吸收，它的吸光度与浓度的关系符合比尔定律，因此可以据此定量测定。
同时山梨酸在酸性条件下也能随水蒸汽一起蒸馏出来，可在酸性溶液中，用蒸汽蒸馏的方法将样品中的山梨酸蒸馏出来，并除去非挥发性的干扰物质。
山梨酸在弱氧化条件下氧化成丙二醛，再与硫代巴比妥酸反应，生成红色的化合物。
其颜色的深浅与山梨酸含量成正比，可以比色测定之。
3、仪器与试剂3.1 仪器3.1.1 蒸馏设备。
3.1.2 紫外可见分光光度计。
3.2 试剂3.2.1 无水硫酸钠。
3.2.2 85%正磷酸。
3.2.3 0.034mol/L重铬酸钾溶液：溶解4.9g重铬酸钾于水中，稀释到500mL。
3.2.4 2mol/L硫酸溶液：稀释66.5mL浓硫酸至500mL。
3.2.5 氢氧化钠溶液：1mol/L、0.1mol/L、0.01mol/L。
3.2.6 0.5%重铬酸钾溶液。
3.2.7 0.5%硫代巴比妥酸溶液：称取硫代巴比妥酸0.5g，加入20mL水，再加1mol/L 氢氧化钠溶液10mL，用玻璃棒搅拌使之溶解，然后加入1mol/L盐酸11mL，用水稀释至100mL，摇匀。
3.2.8 0.15mol/L硫酸：取浓硫酸1mL加入到100mL水中，并用用水稀释至120mL。
3.2.9 山梨酸标准溶液：精密称取在105℃干燥至恒量的山梨酸0.0500g用0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶解后，移入500mL容量瓶中，加0.1mol/L 氢氧化钠溶液至刻度，摇匀，每毫升含山梨酸100μg。
临用时取1mL置于50mL容量瓶中，加入0.01mol/L氢氧化钠溶液到刻度，摇匀，每毫升含山梨酸2μg。
3.2.10 苯甲酸标准溶液：准确称量经过干燥的苯钾酸0.1000g，溶于0.1mol/L氢氧化钠溶液中，以水定容至1000mL，每毫升溶液相当于苯甲酸0.1mg。
防腐剂的测定山梨酸苯甲酸
7.2.2 糖精钠的测定方法
高效液相色谱法
薄层色谱法
7.2.2.1 高效液相色谱法测定糖精钠的含量
以饮料为样品，讲解甜味剂糖精钠的测定，并演示 样品的处理、HPLC的使用
原理：
样品经加温除去二氧化碳和乙醇后，调节pH至 近中性，过滤后进高效液相色谱仪。经反相色谱柱 分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
进样量：20µL
(3)测定：仪器稳定后，分别将20µL标准溶液和样品溶
液注入色 谱系统，根据保留时间定性，峰面 积定量。
结果计算：
A样 C标 V样 X (m g / Kg或m g / L) A标 m样
A样----样品的峰面积 A标----标样的峰面积
C标----标样的浓度(ug/mL）
V样----样品的定容体积（mL）
m样----样品质量(g)
说明：
( 1）本方法国家标准检验方法(GB/T5009.28），适 用于各类食品中糖精钠含量的测定。另外，本方法 可同时测定食品中糖精钠、苯甲酸、山梨酸的含量。 （2）被测溶液的PH值对测定和色谱柱使用寿命均有 影响， PH>8或PH<2时会影响被测组分的保留时间， 对仪器有腐蚀作用，以中性为宜。
• 我国1995年颁布《食品卫生法》，2009年6月1被 《食品安全法》取代
• 1997年颁布《食品添加剂使用卫生标准》（最新 GB 2760—2007）
测定意义
食品添加剂的检测，目的在于监督、保证和 促进正确合理地使用食品添加剂，确保人们的身 体健康。
7.2 甜味剂（糖精钠）的测定 7.2.1概述
将制备好的样品溶液放入分液漏斗中加2ml盐酸三正辛胺正丁醇溶液5951020ml振摇重复提取至无机相无色合并有机相用饱和硫酸钠溶液洗22次将有机相于水浴加热浓缩至10ml转移到分液漏斗中加60ml正己烷混匀加氨水2298提取2233次每次5ml合并氨水层含水溶性酸性色素用正己烷洗22次氨水层加乙酸调成中性水浴加热蒸发至近干加水溶解定容至5ml
防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析
防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析一、实验目的1、了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理，初步掌握其操作技能。
2、掌握高效液相色谱保留值定性方法和外标定量方法。
二、实验原理高效液相色谱法是重要的液相色谱法。
它选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。
根据使用的固定相及分离机制的不同，一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排阻色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K ；组分在流动相中的浓度组分在固定相中的浓度K显然，K 越大，组分在固定相上停留时间越长，固定相与流动相间的极性差值也越大，因此，相应出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相液相色谱法和以流动相为极性而固定相为非极性物质的反相液相色谱法。
目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。
若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。
据此，采用反相液相色谱法可分离防腐剂苯甲酸和山梨酸。
本实验采用外标法测定样品中苯甲酸和山梨酸的浓度。
外标法又称定量进样-标准曲线法，指用欲测组分纯物质配制成不同浓度的标准溶液，取固定量标准溶液进行分析，从所得色谱图上测出响应信号（峰面积或峰高），然后绘制响应信号（纵坐标）对浓度（横坐标）的标准曲线。
分析样品时，取和制作标准曲线时同样量的试样（固定量进样），测得该样品的响应信号，由标准曲线即可查出其浓度。
三、仪器DIONEX UltiMate3000（USA ） 高效液相色谱仪（配有自动进样器，紫外检测器）。
四、试剂和溶液苯甲酸（分析纯）、山梨酸（分析纯）、甲醇（色谱纯)、高纯水、0. 02 mol/ L 乙酸铵溶液、标准储备液、标准使用液、标准混合使用液、未知溶液。
气相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的含量(精)
气 相 色 谱 法 测 定 饮 料 中
3．样品溶液的配制 吸取2.50 mL混合均匀的试样于25 mL带塞的量筒中， 加 0.5 mL 6mol·L-1 HCl 酸化，分别用 15 mL 和 10 mL 乙 醚各提取1次，每次振摇1min，将上层醚液合并于50 mL
分液漏斗中。用 6 mL 4 ％ HCl 酸性溶液分 2 次洗涤醚液，
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焰，待基线稳定后进样。
(2) 将前面配制的山梨酸标准溶液系列、苯甲酸 标准溶液系列、试样溶液各进样 2 μL于气相色谱仪 中，记录色谱图。
在线答疑：yanjie0001@ liaolw@
苯 甲 酸 和 山 梨 酸 的 含 量
气 相 色 谱 法 测 定 饮 料 中
实验100 气相色谱法测定饮料中 苯甲酸和山梨酸的含量
100.1 实验目的
(1) 掌握气相色谱外标法定量分析的方法。 (2) 初步了解气相色谱仪的使用。
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苯 甲 酸 和 山 梨 酸 的 含 量
气 相 色 谱 法 测 定 饮 料 中
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度，摇匀。
2．苯甲酸标准溶液的配制 (1) 苯甲酸标准储备液。准确称取 0.2000 g 苯甲酸于小
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烧杯中，用少量 3︰1 的石油醚 - 乙醇溶解后定容于 100 mL 容
量瓶。此溶液含苯甲酸2.0 mg·mL-1。 (2) 苯甲酸标准溶液系列。取 5 个 10 mL 容量瓶，依次加
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将针头插入试样反复抽排几次，再慢慢抽入试样，并稍多于
苯甲酸和山梨酸的测定
食品中苯甲酸和山梨酸的检测摘要：近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。
食品安全已越来越引起广大消费者的密切关注和担忧。
目前我国每年食物中毒报告例数约2万人，但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。
食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康，还涉及相关企业的经济效益和市场空间，关系到整个食品行业的发展。
苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。
如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠，将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用，其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。
特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言，苯甲酸和苯甲酸钠的摄食是不适合的嘲。
另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。
在体外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。
苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的报道，在使用上有争议，虽仍为各国允许使用，但应用范围愈来愈窄。
日本的进口食品中就限制使用，甚至部分禁止使用，日本已停止生产。
但因价值低廉，在中国仍作为主要防腐剂使用。
山梨酸具有较低的毒性，是迄今为止国际公认的最好的防腐剂，已经成为了西方发达国家的主流防腐剂。
但事实上，现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。
由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。
1防腐剂的检测在食品工业中，作为防腐剂，不能影响人体正常的生理功能，一般说来，在正常规定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。
因此，食品防腐剂的定性与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。
目前，测定防腐剂的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相气谱法等1.1苯甲酸和山梨酸各种检测方法1.1.1高效薄层色谱法和高效液相色谱法M．Thomassin等人曾经采用高效薄层色谱法和高效液相色谱法对尼泊金酯类作过检测，实验发现高效薄层色谱法的相对标准偏差要大于高效液相色谱法，但是高效薄层色谱法对于尼泊金酯类的定量就更为快速。
食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的测定
食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的测定【摘要】目的：同时对食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸进行测定，缩短检测时间，提高检测效率。
方法：使用高效色谱仪，紫外检测器，同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量。
结果：精密度在1%-8%之间，回收率在91%-110%之间。
结论:该方法前处理简单，检测结果稳定性好，准确度高，能同时检测食品中的4种添加剂，提高检测效率。
【关键词】高效液相色谱仪; 安赛蜜; 苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 脱氢乙酸在食品加工中，为了提高食品的风味，延长保持期等原因，食品中会加入各种的添加剂，而比较常用的包括山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸等。
在国标中，山梨酸、苯甲酸、糖精钠是使用国家标准GB 5009.28-2016进行检测，脱氢乙酸是使用国家标准GB 5009.121-2016进行检测，但在市场的抽检中，有很多的食品均需要检测这4种添加剂，在大量的检测工作中，如果能把这4种添加剂同时进行检测，可以大大缩短检测时间，提高检测效率。
本实验通过对流动相、检测波长的调整探索了一种能同时检测山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的方法。
1 实验部分1 试剂与仪器岛津液相色谱仪，配紫外检测器，C18色谱柱苯甲酸钠标准品（CAS号:532 32-1)，山梨酸钾标准品（CAS号:590-00-1)，糖精钠标准品（CAS号:128-11-9)氨水、亚铁氰化钾、乙酸锌、无水乙醇、正已烷、甲醇: 色谱纯1.2 试样提取准确称取约2 g试样于50 ml具塞离心管中,加水约25 m，涡旋混匀，于50℃水浴超声20 min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液（92g/L)2 ml和乙酸锌溶液(183g/L)2 mL，用氢氧化钠溶液(20g/L)调pH至7.5，混匀于8 000r/ min离心5 min,将水相转移至50 ml容量瓶中，于残渣中加水20 mL，涡旋混匀后超声5 min，于8 000 r/min离心5 min将水相转移到同一50 ml容量瓶中并用水定容至刻度，混匀。
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酱油中山梨酸、苯甲酸含量的测定
概述：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂。
目前，我国允许使用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。
第一部分、苯甲酸
一、实验原理：苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强的吸收。
通过查找资料，苯甲酸在
230nm处具有最大吸收。
另一方面，它在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。
二、实验试剂及器材
试剂：无水乙醚(回收后可重复使用)、苯甲酸标准液(1mg/ml)、5%NaHCO3溶液、5%NaCL 溶液、(1+2v)盐酸溶液
器材：紫外分光光度计、125ml分液漏斗×2，铁架台一套，量筒100ml、容量瓶（100ml、50ml、）移液管（5ml×2、1ml×2）、胶头滴管、试剂瓶100ml×2、水浴锅、蒸馏回流装置一套。
三、实验步骤：
1、试剂准备：标准液：125.0mg苯甲酸+250ml无水乙醚
5%NaHCO3：5.0g NaHCO3+100mlH2O
(1+2)HCl：20ml浓盐酸+40mlH2O
2、样品的处理：取酱油5.00ml于125nl分液漏斗中加入（1+2）盐酸2ml酸化，再用无水乙醚萃取三次，每次用量30ml，每次振摇1min。
合并乙醚层于另一分液漏斗，用5%NaCl 溶液洗涤二次，每次5—10ml，然后蒸馏回收乙醚，用20ml、5%NaHCO3溶解、定容到100ml 容量瓶中。
备用。
3、标准曲线绘制：取苯甲酸标准使用液0、0.1、0.2、0.
4、0.6、0.8ml分别置于100ml 容量瓶中，各加入5%NaHCO3溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液2ml，加水至刻度，摇匀。
放置15min,尽量让CO2逸尽。
用1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光度。
以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。
4、取样品处理液5ml于100ml容量瓶中加入(1+2v)盐酸溶液2ml,摇荡以排除CO2，加水至刻度、摇匀、放置15min，与标准系列一起进行比色测定，根据测得吸光度，在标准曲线上查出其对应量，就可以计算出样品中苯甲酸（钠）的含量。
四、数据处理：
结果计算：0.1ml转化成浓度为0.005mg/L，样品吸光值代入得0.025mg/L
苯甲酸含量=0.025mg/L×样品稀释倍数20×（100ml/5ml）=10.0mg/L
实验结果分析：本实验测得该酱油中的苯甲酸含量为10.0mg/L，高于国标中最低检出浓度 1 mg／kg，低于G B／T 5009．29—1996中最大被检出量 1.0g/k g。
该酱油合格。
注意事项：
第二部分：山梨酸
一、实验原理：样品经氯仿(三氯甲烷)提取后，再加人碳酸氢钠，使山梨酸形成山梨酸钠而
溶于水溶液中。
纯净的山梨酸钠水溶液在254nm处有最大吸收，经紫外分光光度计测定其吸光度后即可测得其含量。
二、实验试剂及器材：
试剂：三氯甲烷：以三氯甲烷体积50％的碳酸氢钠(0.5mol/L)提取2次，而后以无水硫酸钠干燥，过滤备用。
0.5mol/L碳酸氢钠：称取21g碳酸氢钠于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解，移至500mL
容量瓶中加水定容至刻度
0.3mol/L碳酸氢钠：25.2g碳酸氢钠+1000ml水
山梨酸标准溶液：准确称取250mg山梨酸，用0.3mol/L的碳酸氢钠定容至250mL 器材：紫外分光光度计，容量瓶（1000ml、250ml、50ml×6），移液管（5ml、1ml），锥形瓶250ml。
三、实验步骤：
1、样品处理：去酱油5ml于50ml容量瓶中用水定容，再从中取5ml于250ml分液漏斗中，加100ml（精确）三氯甲烷提取1min。
分层后将氯仿层分至125ml锥形瓶中，加5g无水硫酸钠，备用。
2、标准曲线绘制：分别吸取山梨酸标准使用液0.0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25mL于50mL 容量瓶中，用0.3mol/L碳酸氢钠定容。
于紫外分光光计中254nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
3、取氯仿提取液50ml于125ml分液漏斗中，用50ml NaHCO3(0.3mol/L)溶液提取1min，分层，小心弃除氯仿层，将NaHCO3提取液于紫外分光光度计254nm处比色，根据测得吸光度，在标准曲线上查出其对应量，就可以计算出样品中山梨酸的含量。
四、数据处理：
结果计算：0.05转化成浓度为0.2mg/L，标准曲线中依次为0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、，样品吸光值代入得0.9018mg /L
苯甲酸含量=0.9018mg /L×样品稀释倍数10×（100ml/50ml）=18.036mg/L
实验结果分析：本实验测得该酱油中的山梨酸含量为18.036mg/L，高于国标中最低检出浓度 1 mg／kg，低于G B／T 5009．29—1996中最大被检出量 1.0g/k g。
该酱油合格。
注意事项：。