(植物中)淀粉酶活性的测定

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淀粉酶活力测定实验报告

淀粉酶活力测定实验报告

淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。

二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。

根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热,70? 15min 则被钝化。

测定时,使其中一种酶失活,即可测出另一种酶的活性。

淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖,利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸,测定其吸光度,从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。

三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管,分光光度计,酸度计,电热恒温水浴锅,离心机,电磁炉。

2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g,定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g,定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。

(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g,定容至100ml水中,紧盖瓶塞,勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8,加水稀释至1000ml即得。

(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。

(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料,去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液,磨碎后以2000r/min 离心10min,转出上清液备用。

实验三、淀粉酶活性的测定实验报告

实验三、淀粉酶活性的测定实验报告

实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。

二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。

根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热,70℃ 15min 则被钝化。

测定时,使其中一种酶失活,即可测出另一种酶的活性。

淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖,利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸,测定其吸光度,从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。

三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管,分光光度计,酸度计,电热恒温水浴锅,离心机,电磁炉。

2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g,定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g,定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。

(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g,定容至100ml水中,紧盖瓶塞,勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液:取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8,加水稀释至1000ml即得。

(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。

(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料,去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液,磨碎后以2000r/min 离心10min,转出上清液备用。

淀粉活性测定实验报告

淀粉活性测定实验报告

一、实验目的1. 掌握淀粉酶活性的测定原理和方法。

2. 了解不同条件对淀粉酶活性的影响。

3. 学会使用比色法测定淀粉酶活性。

二、实验原理淀粉酶是一种水解淀粉的酶,可以将淀粉分解成葡萄糖、麦芽糖等小分子糖类。

在实验中,淀粉酶将淀粉水解成还原糖,还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应生成红色复合物。

通过测定该复合物的吸光度,可以计算出淀粉酶的活性。

三、实验材料与仪器1. 材料:淀粉酶、淀粉、DNS试剂、硫酸铜、无水碳酸钠、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水、待测样品(如唾液、植物组织等)。

2. 仪器:恒温水浴锅、移液器、容量瓶、试管、试管架、吸管、比色计、电子天平。

四、实验步骤1. 准备DNS试剂:称取DNS试剂0.1g,加入50ml蒸馏水溶解,再加入0.5g硫酸铜和0.5g无水碳酸钠,搅拌均匀。

2. 标准曲线制作:准确配制一系列浓度的麦芽糖标准溶液(如0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml),各取2ml加入试管中,加入2ml DNS试剂,沸水浴10分钟,取出冷却,用分光光度计在波长540nm处测定吸光度,以麦芽糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

3. 待测样品处理:准确称取一定量的待测样品,加入适量的蒸馏水,搅拌均匀,离心取上清液。

4. 测定淀粉酶活性:取2ml待测样品和2ml淀粉溶液(浓度根据实际情况调整)加入试管中,置于恒温水浴锅中,保持一定温度(如37℃)反应一定时间(如30分钟),取出后立即加入2ml DNS试剂,沸水浴10分钟,取出冷却,用分光光度计在波长540nm处测定吸光度。

5. 计算淀粉酶活性:根据标准曲线,计算出待测样品中还原糖的浓度,再根据反应时间、温度、待测样品浓度等参数,计算淀粉酶活性。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制:以麦芽糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,计算相关系数,验证标准曲线的线性关系。

二、α-淀粉酶活力的测定2010(精)

二、α-淀粉酶活力的测定2010(精)
于660nm波长下,用10mm比色皿迅速测定其吸光度值(A)
根据吸光度表C1,查得所测酶液的酶活力
5.1.3 计算酶活力
X=c×n
其中:X—样品的酶活力,单位为u/g c—测试酶液的酶活力,单位为u/g n—样品的稀释倍数
5.3 注意事项
✓ 酶反应时间应准确计算。 ✓ 试剂加入按规定顺序进行。
6.实验报告
✓ 记时器
每组 1台
3.2 器材(每组)
✓ 15ml大试管10支 ✓ 5ml移液管10支 ✓ 1ml移液管5支 ✓ 10ml移液管10支 ✓ 比色皿1套(4个) ✓ 双蒸水1瓶(50ml) ✓ 洗瓶1个 ✓ 玻璃平皿1套 ✓ 50ml小广口瓶(棕色)2个 ✓ 50ml 容量瓶 1个 ✓ 100ml 容量瓶 1个 ✓ 500ml 试剂瓶2个 ✓ 100ml 试剂瓶2个 ✓ 250ml 三角瓶2个 ✓ 200ml烧杯2个 ✓ 500ml烧杯1个 ✓ 记号笔1支、吸耳球、称量纸、药勺、试管架、
生物技术专业系统实验(四)
——酶(蛋白质)工程实验II
二、α-淀粉酶活力的测定
--国家标准GB 8275-2009
1.目的意义 2.实验原理 3.试剂和溶液 4.仪器和器材 5.实验方法 6.实验报告 7.思考题
1.目的意义
➢ 淀粉是葡萄糖以α-1,4糖苷键及α-1,6糖 苷键连结的高分子多糖,是人类和动物的 主要食物,也是食品、发酵、酿造、医药、 纺织工业的基本原料。
➢ 例如,生产葡萄糖需要葡萄糖淀粉酶,但 仅有葡萄糖淀粉酶作用,不能液化淀粉溶 液,葡萄糖的生成速度非常慢。此时,α淀粉酶的使用就成为必要条件。
➢ α-淀粉酶的活性测定,在理论 研究和实际应用中具有重要的 意义。
➢ 通过本实验,学习一种测定α淀粉酶酶活力的方法,巩固并 熟练分光光度计的使用方法。

淀粉酶活性的测定

淀粉酶活性的测定

淀粉酶活性的测定一、原理淀粉酶(amylase)包括几种催化特点不同的成员,其中α-淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端,生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉浆的粘度下降,因此又称为液化酶;β-淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶;葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。

淀粉酶产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。

可以用麦芽糖制作标准曲线,用比色法测定淀粉生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。

几乎所有植物中都存在有淀粉酶,特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强,主要是α-和β-淀粉酶。

Α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;而β-淀粉酶不耐热,在70℃15min则被钝化。

根据它们的这种特性,在测定时钝化其中之一,就可测出另一个的活力。

本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶的活力,再与非钝化条件下测定的总活力(α+β)比较,求出β-淀粉酶的活力。

二、材料、仪器设备及试剂(一)材料:萌发的小麦种子(芽长约1cm)。

(二)仪器设备:1. 分光光度计;2. 离心机;3. 恒温水浴(37℃,70℃,100℃);4.具塞刻度试管;5. 刻度吸管;6. 容量瓶。

(三)试剂(均为分析纯):1. 标准麦芽糖溶液(1mg/ml):精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100ml;2. 3,5-二硝基水杨酸试剂:精确称取1g3,5-二硝基水杨酸,溶于20ml2mol/L NaOH溶液中,加入50ml蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100ml。

盖紧瓶塞,勿使CO2进入。

若溶液混浊可过滤后使用;3.01mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液(0.1mol/L 柠檬酸):称取C6H8O7.H2O 21.01g,用蒸馏水溶解并定容至1L;B液(0.1mol/L 柠檬酸钠):称取Na3C6H5O7.2H2O 29.41g,用蒸馏水溶解并定容至1L。

实验二淀粉酶活性的测定总结

实验二淀粉酶活性的测定总结
2018/12/2 生物化学实验
(3)取对照管和测定管中溶液各2ml,分别加入到刻
度试管中→各加 2ml 3,5- 二硝基水杨酸→沸水浴
5min→冷却→稀释至 20ml 刻度→混匀→ 以制作
麦芽糖标准曲线的 1号试管为参比溶液,调 “零”,测定540nm处吸光度→记录结果。
2018/12/2
生物化学实验
入100ml容量瓶→定容,此提取液即为淀粉酶液。
2018/12/2
生物化学实验
3、α-淀粉酶活性的测定:
(1)取两支试管一支对照,一支测定→各加淀粉酶 液 1ml→70℃ 准确加热 15min→冷却 →向对照管加 4ml 0.4M NaOH,终止酶活性; (2)测定管和对照管于40℃水浴15min→均加入 2ml 40℃预热的淀粉→立即40℃水浴保温5min→ 取出后迅速向测定管加入4ml 0.4M NaOH;
2ml 淀粉 40℃ 5min
冷却后稀释至20ml
混匀 测定540n活力的测定
(1)取两支试管一支对照,一支测定→各加酶液1ml, 向对照管加4ml 0.4M NaOH,以钝化酶的活性; (2)测定管和对照管于40℃水浴5min→均加入2ml 40℃预热的淀粉→立即40℃水浴保温5min→取出 后迅速向测定管加入4ml 0.4M NaOH;
1.0 1.0 0.5 2.0
1.5 0.5 0.75 2.0
2.0 0 1.0 2.0
吸光度值
2018/12/2
沸水浴5min,冷却,稀释至20ml 测定540nm处吸光度 0
生物化学实验
摇匀,置沸水浴中煮沸5 min。取出后流水
冷却,加蒸馏水定容至20 mL。以1号管作为空
白调零点,在540 nm波长下比色测定光密度。

一种微量、快速测定植物种子β-淀粉酶活性的方法

一种微量、快速测定植物种子β-淀粉酶活性的方法

mo i e to o l e a p id t es l c ieme s rme t f —my a ea t i nd fe e t d f d me d c u db p l t ee t a u e n a l s c v t i i r n i h e oh v o B i y
pa e d . lnts e s
Ke od  ̄ yaem t d r e r i n zme c vt,N G5pate yw r s[a l , e o t m n g n y t i P P ,l e - m s h f de i e o ai y n sd
淀粉的降解代谢是禾谷类作物种子萌发过 性失活的技术, 并结合35二硝基水杨酸( N ) ,一 D S
fo l n pe i s a d t e e a td g e fi t re e c y 一 m y a ew a e e i d. r m 4 p a ts c e 。 n h x c e r e o n e f r n eb a l s sd tr ne Thi m s
程的关键步骤(h g t 1 2 0 ) Z a . 0 5。通常 ,c淀 来进行定量测定淀粉酶降解产物还原糖的含量 n ea, 0 一 粉酶( 3 . 1 1 .1 ) 2 . 首先直接水解完整的淀粉粒, 释 ( 以下简称D S ( N 法) 巩普遍, 0 0。 2 0 ) 由于有时植 放出糊精, 然后 由c淀粉酶(c3 .2等将其进 物种子中 B淀粉酶的生化特性差异并不十分 l - E .1 ) 2. 一 步水解 为麦芽糖和葡萄糖 。已经知道 , 植物 明显 , 使得 B淀粉酶的活性测定受到严重的干 一 种子B淀粉酶往往以游离态( e -my s) 一 l B f e a l e和 扰。例如某些耐高温的 B 淀粉 酶对于 7  ̄处 a 一 0C

淀粉酶活性测定实验报告

淀粉酶活性测定实验报告

班级:植物092 :X炜佳学号:0901080223淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反响的活性蛋白,几乎所有的生化反响都离不开酶的催化,所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色,因此对酶的研究有着非常重要的意义。

酶的活力是酶的重要参数,反映的是酶的催化能力,因此测定酶活力是研究酶的根底。

酶活力由酶活力单位表征,通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称,按照其水解淀粉的作用方式,可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。

α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种,存在于禾谷类的种子中。

β-淀粉酶存在于休眠的种子中,而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。

α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之那么易穗发芽。

目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不一样,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。

这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶,分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶,β-淀粉酶不耐热,在高温下易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6下那么发生钝化。

本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性,在高温下〔70℃〕下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。

酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的,淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定,由于麦芽糖能将后者复原生成硝基氨基水杨酸的显色基团,将其颜色的深浅与糖的含量成正比,故可求出麦芽糖的含量。

常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。

然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。

实验中为了消除非酶促反响引起的麦芽糖的生成带来的误差,每组实验都做了相应的对照实验,在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。

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(植物中)淀粉酶活性的测定
一实验目的
本实验的目的在于掌握淀粉酶的提取及活性的测定方法。

二实验原理
植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解为麦芽糖。

淀粉酶几乎存在于所有植物中,有α-淀粉酶及β-淀粉酶,其活性因植物生长发育时期不同而有所变化,其中以禾谷类种子萌发时淀粉酶活性最强。

α-淀粉酶和β-淀粉酶都各有其一定的特性,如β-淀粉酶不耐热,在高温下容易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下容易发生钝化。

通常酶提取液中同时存在两种淀粉酶,测定时,可以根据他们的特性分别加以处理,钝化其中之一,即可以测出另一种酶的活性。

将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β-淀粉酶,便可测定α-淀粉酶的活性。

或者将提取液用pH3.6的醋酸在0℃加以处理,钝化α-淀粉酶,以测出β-淀粉酶的活性。

淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定。

由于麦芽糖能将后者还原成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团,在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比,故可以求出麦芽糖到含量。

以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性大小。

三实验材料
萌发的小麦、大麦或者豆类等(芽长1cm左右)
四实验仪器和试剂
1.仪器:
电子天平、研钵、100mL容量瓶(1个)、50mL量筒(1个)、刻度试管[25mL(9个)、10mL(1个)]、试管6支、移液管[1mL(2支)、2mL(2支)、10mL(2支)]、离心机、恒温水浴锅、7220型分光光度计
2.试剂:
1%淀粉溶液、0.4mol/LNaOH、
pH5.6的柠檬酸缓冲液:A、称取柠檬酸20.01g,溶解后稀释至1 000mL;B、称取柠檬酸钠29.41g,溶解后稀释至1 000mL;取A液13.70mL与B液26.30mL 混匀即是。

3,5-二硝基水杨酸:精确称取3,5-二硝基水杨酸1g溶于20mL1mol/LNaOH 中,加入50mL蒸馏水,在加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水稀释至100mL,盖紧瓶盖,勿让CO2进入。

麦芽糖标准液:称取化学纯麦芽糖0.100g溶于少量蒸馏水中仔细移入100mL 容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。

五操作步骤
1.酶液的提取:
称取萌发的水稻种子0.5g(芽长1cm左右,置于研钵中加石英砂研磨成匀浆,移入25mL刻度试管中,用水稀释至刻度,混匀后在温室下放置,每隔数分钟振荡一次,放置20分钟后离心,取上清液备用。

2.α-淀粉酶活性的测定:
(1)取三支试管,编号注明1支为对照管,2支为测试管。

(2)于每管中各加入酶提取液1mL,在70℃恒温水浴中(水文的变化不应该超过±0.5℃),准确加热15分钟,在此期间β-淀粉酶受热钝化,取出后迅速在自来水中冷却。

(3)在试管中各加入1mLpH5.6的柠檬酸缓冲液。

(4)向对照管中加入4mL0.4mol/LNaOH,摇动2-3分钟,静止2分钟,以钝化酶的活性,再加入1%淀粉2mL。

(5)将测定管置40℃(±0.5℃)恒温水浴中保温15分钟,再加入40℃下预热的1%淀粉溶液2mL,摇匀,立即放入40℃水浴中准确保温15min取出,迅速加入4mL0.4mol/LNaOH,以终止酶的活动,然后准备下一步糖的测定。

3.α-淀粉酶和β-淀粉酶总活性的测定:
取上述酶提取液1mL,放入刻度试管中,用蒸馏水稀释至10mL(稀释程度视酶活性的大小而定)。

混合均匀后,取3支试管,1支为对照管,2支为测定管,各加入稀释的酶液1mL、pH5.6的柠檬酸缓冲液1mL。

以上步骤重复α-淀粉酶测定的第(4)及(5)的操作,同样准备糖的测定。

4.麦芽糖的测定:
(1)标准曲线的制作:
取25mL刻度试管5个编写号分别加入麦芽糖标准液(1mg/mL)0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL,然后于各管加入蒸馏水使溶液为2mL,再各加3,5-二硝基水杨酸试剂2mL,置沸水中准确煮5分钟,取出冷却,用蒸馏水稀释至25mL,混匀。

用7220型分光光度计在520nm的波长下进行比色,记录光密度,以光密度为纵坐标,以麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线。

(2)样品的测定
取以上各管中酶作用后的溶液及对照管中的溶液各1mL,分别加入25mL刻度管中,再加入1mL的水,3,5-二硝基水杨酸试剂2mL,混匀置沸水中准确煮5分钟,取出冷却,用蒸馏水稀释至25mL,混匀。

用7220型分光光度计在520nm 的波长下进行比色,记录吸光度,从麦芽糖标准曲线中计算出麦芽糖含量,用以表示酶的活性。

六结果计算
A: α-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量(mg)
A1: α-淀粉酶对照管中麦芽糖量(mg)
B: α+β-淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量(mg)
B1: α+β-淀粉酶的对照管中的麦芽糖量(mg)。

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