蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测蔬菜是我们日常生活中不可或缺的食物之一，是我们餐桌上重要的一部分。
随着农业生产的发展，农药的使用也在逐渐增加，为了提高产量和质量，农民们经常使用有机磷及氨基甲酸酯类农药来防治病虫害。
这些农药的残留问题却引起了人们的关注。
对蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测成为了一个迫切需要解决的问题。
有机磷及氨基甲酸酯类农药是目前农业生产中广泛使用的一类农药，它们能够有效地抑制害虫和杂草的生长，提高作物产量。
在农药使用过程中，由于农民对农药的使用不当或者过量使用，导致蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留量超标的情况屡见不鲜。
这些农药残留会对人体健康造成潜在的威胁，因此对蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测显得尤为重要。
目前，关于蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留快速检测的方法有很多种，包括色谱法、光谱法、质谱法等。
这些方法虽然在检测有机磷及氨基甲酸酯类农药残留方面具有一定的灵敏度和准确性，但是它们需要昂贵的设备和复杂的操作流程，并且需要较长的时间才能得到结果，无法满足快速检测的需求。
研究人员正在不断寻找更加简便、快速和准确的方法来检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留。
近年来，基于生物传感技术的快速检测方法逐渐成为研究热点。
生物传感技术是一种利用生物材料的特异性反应来检测目标化合物的技术，具有操作简便、灵敏度高、结果快速等优点。
在蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测中，常用的生物传感技术包括酶传感技术、免疫传感技术和核酸传感技术等。
酶传感技术是利用酶对目标化合物的特异性反应来进行检测的技术。
在蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测中，常用的酶包括乙酰胆碱酯酶、磷酸化酶等。
当有机磷及氨基甲酸酯类农药存在时，它们会与酶发生特异性的化学反应，产生颜色变化或发光信号，从而实现对有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的快速检测。
除了传统的生物传感技术之外，近年来还出现了一些新的快速检测方法，如基于纳米材料的快速检测方法、基于光学技术的快速检测方法等。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量
样品取样部位
• 参照GB/T 2763-2014上面的具体要求。因 为这部分内容较多又很重要，请大家一定 认真学习标准。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类 农药残留量快速测定
盐城市农产品质量监督检验测试中心 丁立彤
• 4 抽取不同样品时推荐使用一次性手套，每抽一 个样品时更换一次。抽样全过程所有用具都要保 证不会对样品造成二次污染。
抽样程序
• 5抽样人员要与受检单位人员共同确认样品的真实性和代 表性，在现场认真填写抽样工作单，准确记录抽样的相关 信息。双方签字、盖单位公章。抽样工作单一式四联，第 一联留抽样单位，第二联留被抽单位，第三联随样品，第 四联交任务下达单位。抽样工作单填写的信息要齐全、准 确，字迹清晰、工整。
• 6因遇到抽样点关闭、天气状况等特殊情况造成不能抽样， 或在规定时间内抽样点抽不到样品，应及时与任务下达单 位联系，汇报情况。
抽样程序
• 7 抽取的样品应放入塑料袋中，装入样品后的塑 料袋要密封，样品袋一旦打开后不能恢复原状。 封条上标明封样时间，并由双方代表共同签字。
• 8 样品袋上要加贴样品的标识。标识的内容包括 样品名称、样品编号和抽样时间。
1、对照溶液测试
2、样品处理 （1）样品的采集和称取 （2）样品提取液的制备
（1）样品的采集和称取
称烧杯去皮
（2）样品提取液的制备
吸取5ml缓冲液
3、样品溶液测试
四、结果判定
当蔬菜的提取液对酶的抑制率≥50%， 表示蔬菜中可能有高剂量的有机磷或 氨基 甲酸酯类农药存在， 样品为阳性结果 ， 确定阳性结果前，对样品需重复检验2次 结果一致方能判定。 对阳性结果的样品， 可以用其他定量方法进一步确定具体农药 品种和含量。当蔬菜的提取液对酶的抑制 率＜50%，表示检测结果阴性。
蔬菜农药残留快速检测技术
蔬菜农药残留快速检测基础知识一、蔬菜农药残留酶抑制法检测原理农残速测仪检测原理是酶抑制法，在必然条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性，其抑制率与农药的浓度呈正相关。
在正常情况下，酶催化代谢产物水解，其水解产物与显色剂反映，产生黄色物质，用分光光度计在410纳米处测定吸光度随时间的转变值，计算出抑制率，通过抑制率的大小可以判断样品中是不是有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
二、农药残留速测法检测对象一、有机磷类农药包括：甲胺磷、水胺硫磷、乐果、敌百虫、敌敌畏、氧化乐果、马拉硫磷、甲基异柳磷、辛硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、乙酰甲胺磷、久效磷、杀螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱等。
二、氨基甲酸酯类农药包括：叶蝉散、速灭威、西维因、涕灭威、克百威（呋喃丹）、异丙威、灭多威等。
三、农药残留速测法依据的标准中华人民共和国国家标准GB/—2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布四、检测方式一、准备阶段试剂或条件发生转变及时间距离比较长时，应重做。
①开机预热15分钟。
②仪器调0。
③仪器调100。
④制作对照。
第①、②、③步在天天利用前必需做，在改换新一瓶试剂时也必需做。
二、对照①在干净的试管顶用移液管加入提取液。
②用移液器提取的酶，加入到试管中。
③用移液器提取的显色剂，加入到试管中。
④适度晃动试管，使液体混合均匀，25℃左右的温度放置15分钟。
⑤15分钟后，用移液器提取的底物，加入到试管中，晃动试管，使液体混合均匀，马上倒入比色皿中，放入仪器1通道，按启动键开始检测。
⑥时间到后显示对照结果，一般对照值应在30以上，按Y保留，对照结束。
3、样品检测液①用天平称取表面干净蔬菜或水果1g剪成1cm左右的方块，放入小烧杯中。
②用移液器提取5ml的提取液用振荡器震荡2分钟。
③将烧杯中的液体用移液器提取的上清液到试管中，为检测液。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
（GB/T 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）方式一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速查验法及熟悉查验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的进程发生改变，由此可判定出样品中是不是有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：一、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；二、pH 磷酸盐缓冲液：别离称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：一、整体测定法（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.(2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反映，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。
预反映后的药片表面必需维持湿润。
（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反映。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
二、表面测定法（粗筛法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
（3）放置10 min以上进行预反映，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。
预反映10 min，预反映后的药片表面必需维持湿润。
（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反映。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判定：一、结果判定结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。
白色药片变成天蓝色或与空白对照卡相同，为阴性结果。
果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测
（． １ 河南农业 大学 迅 捷测试技术 有限公 司， 郑州 ４ ０ ０ ；２河南 省建筑科学研 究院 ， 州 ４ ０ ０ ） ５０２ ． 郑 ５０２
摘要 ： 通过研究表明， 丁酰胆碱酯酶对果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药较为敏感 ， 检测有机磷和氨基 甲酸酯类农
药的最佳条件 ： 预反应时间１ ｎ最佳预反应温度３ ５ｍｉ ， ７℃， 酶最佳用量为００ 底物最佳用量００ 显色剂 ． ｍＬ， ５ ．５ｍＬ，
ｒ ｓｄ ｅ ｉ ｕｅ
吸光度值变小） 根据颜色（ 。 吸光度值） 变化的 目 ， 前 果蔬中有机磷及氨基 甲酸酯快速检验方法主要 系的颜色较浅（ 是酶抑制率法 ， 这种 检测方法是以国家标 准（ ／ 情况来判断有机磷和氨基 甲酸酯类农药残留的多少。 ＧＢ Ｔ １ ６ ０ ２ ０ ）所用酶为小麦酶）农业部 颁标准 （ Ｔ １２实验设备与试剂 ３ — ０ ２（ ８ 、 ＮＹ／ ＿ ４ ８２ ０ ） ４ — ０ （ 酶为 丁酰胆碱 酯酶 ） 乙酰胆碱 酯酶抑 制 １ 所用 和 测试仪 ： Ｎ Ｃ Ⅵ型农药残留、 Ｙ ．Ｌ 重金属综合速测仪（ 河 率法（ ＢＴ ０９１９ ２０ ） 础的 ， Ｇ ／５０ ． — ０２为基 ９ 但市场上 检测仪 器的 南农大迅捷测试技术有限公 司研制） 。 灵敏 度相差 很大 ， 又有一些 厂 家有各 自的检 测方 法及判 断 预 反应 装置 ： Ｎ Ｃ Ⅵ 型测试 仪 自配 预反 应池 ， Ｙ ．Ｌ 控温 标准 ， 这些都不利于无公害蔬菜与绿色食品市场的培育与
文章编号 ：０ ６ ０ １ （ ０ ７ ０ — ３ ６ ０ １ ０ —４ ３２ ０ ） ５０ ２ — ２
Ｒａ ｉ ｓ ａ ｃ ｆＯｒ ａ Ｏ ｈ ｓ ｈ ｒ ｓ Ｐｅ ｔ ｉｅ ａｎ ｐｄ Ｒｅ ｅ ｒ ｈＯ ｇ ｎ ｐ Ｏ ｐ Ｏ ｕ ｓ ｉ ｄ ｄ ｃ Ｃａ ｂ ｍａ ｅ Ｐｅ ｔ ｉｅ ｎ Ｆ ｕｔ ｎ ｇ ｔ ｂｅ ｒ ａ ｔ ｓｉ ｄ ｓ ｉ ｒ ａ ｄ Ｖｅ ｅａ ｌ ｃ ｉ
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
随着工业的发展和农业的现代化，化学农药的广泛应用成为农业生产中的常见现象。
因此，农产品中农药残留已成为一个普遍的问题。
为了确保消费者的健康和安全，需要对
农产品中的农药残留进行检测。
其中，有机磷类及氨基甲酸酯类农药是最常见的农药残留
物之一。
本文将介绍如何快速检测蔬菜中的有机磷类及氨基甲酸酯类农药残留量。
有机磷类农药是一类广泛使用的农药，它的主要成分是磷酸酯化合物。
这种农药可以
杀死害虫、杂草和真菌，从而保护作物的生长。
但是，它往往会对环境和人体产生有害影响，因此需要对其进行检测。
在蔬菜中，有机磷类农药的常见成分包括马拉硫磷、甲胺磷、乐果等。
针对这些残留物的检测方法主要有色谱法、荧光法和电化学法等。
其中，色谱法
是最常见的检测方法之一。
该方法可以快速和准确地检测出有机磷类农药在蔬菜中的残留量。
除了现有的检测方法之外，近年来还出现了一种新型的检测技术——基于光纤传感器
的检测技术。
这种技术利用光纤的传导性能和敏感度来检测蔬菜中的农药残留。
与传统的
检测方法相比，基于光纤传感器的检测技术具有响应快、准确、灵敏度高等特点，可以快
速地检测出蔬菜中的农药残留，同时可节省检测成本和时间。
总之，在蔬菜中确定有机磷类及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测对保障农产品质
量和消费者的健康至关重要。
通过创新技术和不断的研究，我们可以期望未来的检测方法
会更加成熟、高效和安全。
蔬菜中有机磷类农药残留的快速检测
近年来，由蔬菜中农药残留超标而引起的中毒事故时有发生，因此对蔬菜中农药残留的监测显得尤为重要。
在蔬菜生产中，所使用的农药主要包括有机磷类和氨基甲酸酯类农药[1]。
传统的有机磷类和氨基甲酸酯类农药的残留分析方法主要有气相色谱法、液相色谱法、薄层色谱法及质谱联用[2]等，这些方法测试灵敏、准确度高，但预处理较为烦琐，测试时间较长，且仪器比较昂贵，对仪器的使用条件和操作人员要求也比较严格，只适用于实验室检测[3]。
如果能在蔬菜上市前快速检测出其农药残留是否超标，将能防止许多农药中毒事件的发生，确保消费者的安全。
为了满足市场需求，九十年代快速检测方法应运而生[4]，其中植物酯酶抑制法以其操作简单、方法灵敏、检测快速、原料来源广、成本低廉、保存期长、适合现场检测等优点被广泛使用[5]。
目前用于快速检测的植物酯酶主要是从大米、小米、玉米、面粉[6]、大豆[7]等粮食作物中提取，在很大程度上造成了粮食的浪费。
本实验通过使用从苜蓿这种非粮食作物中提取的植物酯酶，以2，6—二氯乙酰靛酚为显色剂，通过对蔬菜中常用的氧化乐果、甲基对硫磷、甲拌磷、甲胺磷、久效磷等5种有机磷农药的敏感性研究，确定了蔬菜中有机磷农药残留的快速检测方法。
实验结果表明，该方法农药残留最低检测限较低，可以满足国内和欧盟对以上5种有机磷农药最低残留量的检测要求。
1试剂与仪器1.1仪器UV-2802PCS 型紫外可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司），高速冷冻离心机（法国JOUAN ），蔬菜中有机磷类农药残留的快速检测王亚飞，张金艳（黑龙江八一农垦大学文理学院，大庆163319）摘要：通过研究蔬菜中常用的5种有机磷农药对植物酯酶的抑制作用，以2，6—二氯乙酰靛酚为显色剂，确立了蔬菜中有机磷农药残留的快速检测方法。
实验结果表明：该方法能快速检测氧化乐果、甲基对硫磷、甲拌磷、甲胺磷、久效磷等5种有机磷农药在蔬菜中的残留，最低检测限范围为0.002~0.05μg ·mL -1。
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
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2
我 国 农药 残 留检 测 方 法 的研 究 现 状
一
农药 残 留分 析 是 门 综 合 性 高 涉 及 面 广 的分析 科 学 食 品 k k 中 农 药残 留水平 般 在 m g ／ g ~ t g ／ g 之 间 农 药 残 留检 测 是 对 复 杂 混 合 物 中痕 量 组 分 进 行 检 测 当 前 我 国对 蔬 菜 瓜 果 等农产 品 中农 药 残 留 的 定 量检 测 技 术 已 达 到 相 当 高 的 水平 目前 采 用 的农 药残 留分析 方法 可 分 为 定 量 及 定 性 分 析法 定 量 分 析 法 主 要 有 薄 层 色 谱 分 析检 测 技 术 气 相 ( 液 相 ) 色 谱 分 析 技 术 毛 细 管 电色 谱 分析技 术 超 临界流 体 色 谱 分 析技术等 波 谱 分 析检 测 方 法 该 类技术在 分 析检 测方 面 较 为精确 但 是 由 于 仪 器 价格 昂 贵 操 作 成 本高 以 及 操作耗 时较 长 结 果 滞 后 若 采 用 其 开 展 快 速 检 测 工 作 不太 切 合 实 际 定 性 分 析 法 主 要 有 化 学 显 色 法 生 物传 感 器 法 及 酶 学 法 生
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蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准
1. 范围
本标准规定了由酶抑制法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检验方法。
本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定。
测试方法酶抑制率法
2. 原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。
正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在410nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
3.试剂
3.1 pH8.0缓冲溶液：分别取43.5g无水磷酸氢二钾与2.2g磷酸二氢钾，用510mL蒸馏水溶解。
3.2 显色剂：分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg 碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4°C冰箱中保存。
3.3 底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.1mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。
保存期不超过十天。
3.4 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3 min 的吸光度变化D A0值应控制在0. 3以上。
摇匀后置4℃冰箱中保存备用，保存期不超十天。
3.5 可选用由以上试剂制备的试剂盒。
乙酰胆碱酯酶的ΔA0值应控制在0.3以上。
4 仪器
4.1 分光光度计或相应测定仪。
4.2常量天平。
4.3 恒温水浴或恒温箱
5 分析步骤
5.1 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL 缓冲溶液，静制十五分钟，之间需振荡几次，待用。
5.2 对照溶液测试：先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，依次加入0.lmL酶液、0.1mL显色剂、0.lmL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3 min的吸光度变化值ΔA0。
5.3 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，但在加底物之前必须放置15分钟，记录反应3min的吸光度变化值ΔAt。
6 结果的表述计算
6.1 结果计算
检测结果按公式计算：抑制率(%)=[ (ΔA0-ΔA t)/ ΔA0]×100式中：ΔA0－对照溶液反应3min吸光度的变化值；
ΔA t－样品溶液反应3min吸光度的变化值；
6.2 结果判定
结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。
当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。
阳性结果的样品需要重复检验2次以上。
对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。
7 附则
7.1酶抑制率法技术指标
7.1.1 灵敏度指标：酶抑制率法对部分农药的检出限见表2酶抑制率法对部分农药的检出限
表2 酶抑制率法对部分农药的检出限
7.1.2 符合率：在检出的抑制率≥50％的30份以上样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应该在80％以上。
8说明
8.1葱、蒜、萝卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的次生物质，容易产生假阳性。
处理这类样品时，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面测定法。
对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，减少色素的干扰。
8.2 当温度条件低于37度，酶反应的速度随之放慢，加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相应延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶空白对照测试3min吸光度变化差值在0.3以上，即可往下操作。
注意样品放置时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。
胆碱酯酶空白对照测试3min吸光度变化差值在0.3以下的原因：一是酶的活性不够，二是温度太低。