虾青素检测方法
虾青素分析测定方法的研究
虾青素分析测定方法的研究【摘要】选择分光光度法及高效液相色谱法对测定虾青素的分析条件进行研究，从而得出最佳的测定条件。
用分光光度法和高效液相色谱法测定虾青素，标准曲线的回归方程的r2都超过了0.99。
用分光光度法测定虾青素，回收率范围为99.3-101%，相对标准偏差rsd值为0.78-1.3%；用液相色谱法测定虾青素，回收率范围为100-102% ，相对标准偏差rsd为0.62-1.4%。
这些值都在定量分析所要求的阈值范围内，可以用于定量分析。
【关键词】分光光度法；高效液相色谱法；虾青素abstract： choice two based on the spectrophotometry and high performance liquid chromatography (hplc) were developed for determination the astaxanthin. and the optimum conditions was investigated in detail. the total amount of astaxanthin was measured by spectrophotometry, the recoveries were in the range of 99.3-101%, and rsd were in the range of 0.78 %-1.3 %. also the astaxanthin was determined by hplc, and the recoveries were in the range of 100% -102%, rsd were in the range of 0.62%-1.4%. all these values were within the range of permissive threshold value on quantitative analysis, which showed that it’s feasible for measuring the content of astaxanthin by these two methods.key words: spectrophotometry；hplc；astaxanthin从动植物及菌类中提取虾青素目前还处于实验研究的基础阶段，要实现产业化生产虾青素，还必须对其提取工艺进行广泛深入的研究。
虾青素化学分析方法
虾青素化学分析方法富士化学测试方法：虾青素含量的高效液相色谱分析包括两个重要步骤：海藻粉中的虾青素的提取及之后的脱脂过程。
这两个过程都会影响色谱分析结果，而分光光度计法则只要求虾青素的提取过程完全彻底即可。
因为微藻体内的虾青素在化学结构上有两个羟基（3和3’位置上），因此其往往与脂肪酸结合形成酯类，故虾青素存在形式主要有三种：二酯、单酯和自由体，不同藻系三种形式的含量不同，一般二酯成分最高70-80%左右，单酯10%左右，而自由体仅占5%左右。
相比较二酯和单酯形式自由体的极性更强。
采用分光光度法测定了类胡萝卜素在474nm波长处的吸光度，并计算了类胡萝卜素的含量量中包含其他一些类胡萝卜素成分，如β-类胡萝卜素、角黄素和叶黄素等，因此不甚准确；而在hplc分析中，很难对酯化虾青素成分进行精确定量，因此常常采用酶水解的方法将二酯和单酯结构的虾青素水解为自由体，然后进行色谱分析。
一般化学脱脂反应如皂化反应不能用于虾青素脱脂，因为皂化反应条件易造成虾青素的氧化和降解，使得测量结果偏低。
在hplc分析中，若酶水解不完全，在色谱图中11min左右的反式结构的虾青素色谱峰会相对较小，且在保留时间约20-30min处会看到大量酯化成分的色谱峰，可作为判断样品是否完全水解的依据。
试剂和设备：试剂：0.05 mtris HCl缓冲液（pH7.0）；胆固醇酯酶；反式-bata-apo-8'-胡萝卜素虾青素；1%（v/v）磷酸；丙酮；正己烷，石油醚，甲醇；甲基异丁基谜；十水硫酸钠；无水硫酸钠。
设备：10ml离心管；30ml、100ml、200ml、500ml容量瓶；0.45微米注射器过滤器；水浴锅；分析天平；离心机；超声波破碎仪；分光光度计；hplc；色谱柱。
（具体试剂及设备型号见文献）实验步骤：2.0水解酶的配置：准确称量一定量的胆固醇酯酶，并将其溶解在50mmtris HCl（pH7.0）中，使最终酯酶浓度为4单位/毫升。
标准 虾青素 测定
虾青素的测定主要有分光光度法和高效液相色谱法两种方法。
分光光度法：这种方法主要是利用虾青素的最高吸收峰为478，因此在波长为478下进行比色即可测定虾青素的含量。
由于该种方法比较简单，可能存在的误差也较大，所以高效液相色谱法是检测虾青素的主流方法。
高效液相色谱法：这是一种分离效果好、灵敏度高、检测速度快的方法，是最为常见的虾青素检测方式。
例如，GB/T 31520-2015就规定了用液相色谱法检测红球藻中虾青素。
请注意，虾青素的测定方法具有一定的复杂性，需要专业的技术人员进行操作。
虾青素旋光异构体含量的测定 液相色谱法
虾青素是一种重要的生物类化合物，是虾类和其他甲壳动物体内的一种天然色素。
虾青素旋光异构体含量的测定是一项具有挑战性的任务，因为它涉及到对虾青素的结构特点和化学性质的深入了解，同时需要精密的实验操作和仪器设备。
本文将以液相色谱法为主要手段，探讨虾青素旋光异构体含量的测定方法，以期为相关研究和实践提供有益的参考。
一、虾青素旋光异构体的含义和重要性虾青素旋光异构体是指虾青素分子中存在的能够使光线发生偏振转动的结构特征。
虾青素分子因其立体构型的不同而存在多种旋光异构体，它们在生物学和药理学领域具有重要的生物活性和药理活性。
准确测定虾青素旋光异构体的含量，对于研究其生物活性和应用价值具有重要意义。
二、液相色谱法测定虾青素旋光异构体含量的原理和方法（一）样品预处理在液相色谱法中，样品的预处理是非常重要的一步。
首先需要将样品中的虾青素提取出来，并进行适当的纯化处理，以确保样品的纯度和稳定性。
这一步通常可以借助柱层析、溶剂萃取等方法来实现。
（二）色谱条件的选择选择合适的色谱条件对于准确测定虾青素旋光异构体含量至关重要。
包括色谱柱的选择、流动相的配制、流速和温度的控制等都需要进行仔细的考虑和优化。
（三）检测方法的建立在液相色谱法中，常用的检测方法包括紫外-可见吸收检测法、荧光检测法等。
针对虾青素旋光异构体的特性，可以选择合适的检测波长和检测模式，并进行相应的方法验证和精密度检验。
（四）浓度计算和结果分析根据色谱峰面积或峰高的测定结果，结合已建立的标准曲线或内标法，对虾青素旋光异构体的含量进行计算和分析，得出准确的测定结果。
三、虾青素旋光异构体含量测定方法的优缺点及改进方向液相色谱法作为一种常用的分析方法，具有操作简便、分析速度快、准确性高等优点。
然而，也存在样品制备繁琐、实验仪器昂贵等缺点。
未来可以通过改进柱填料、优化流动相配比、引入自动化技术等手段，进一步提高虾青素旋光异构体含量的测定方法的灵敏度和稳定性。
四、个人观点和理解在现代生物医药领域，虾青素及其旋光异构体的研究具有重要的意义。
虾青素检测方法
虾青素检测方法虾青素分析方法1.仪器：Agilent 1100 旋转蒸发器超声波2.试剂：无水乙醇三氯甲烷正己烷（HPLC）丙酮（HPLC）3.检测方法：色谱柱：ZORBAX RX-SIL 4.6×250mm,5um流动相：正己烷：丙酮=86：14柱温：25℃检测波长：470nm（VWD）流速：1.2ml/min进样体积：20ul4.溶液配制供试品溶液：精密称取虾青素（微粒）样品100mg，置于250ml容量瓶中，加5ml水，50℃水温超声10min，使样品完全溶解。
冷却到室温，加100ml无水乙醇，用三氯甲烷定容。
取一定量的溶液离心，转速2500/min，5min。
移取上清液5ml于蒸馏烧瓶中，50℃旋转蒸发，残渣用4ml三氯甲烷溶解，移入50ml容量瓶中，并用正己烷定容。
此溶液为供试品溶液。
标准品溶液：精密称取虾青素对照品10.0mg，置于100ml容量瓶中，加10ml 三氯甲烷，冷水超声溶解，加正己烷稀释至刻度，摇匀。
移取此溶液5ml于50ml容量瓶中，加4ml三氯甲烷，用正己烷稀释至刻度，摇匀，此溶液为标准品溶液。
5.计算虾青素含量＝样品峰面积×标准品质量×250×10×标准品含量×100％÷标准品峰面积÷样品质量÷100÷1010%虾青素干粉的紫外检测方法1.样品液配制取待测样品100毫克干粉至250毫升棕色容量瓶中，加5毫升去离子水，在50摄氏度条件下超声溶解5min，冷却后，加100毫升无水乙醇摇匀，再用氯仿定容，过滤。
取5毫升上述溶液至50毫升容量瓶中，再用氯仿定容至刻度。
2.虾青素空白溶液用氯仿做空白。
在474nm处测最大吸收值。
3.结果计算C=A*2500/（1830*W）A为吸光系数W为样品重量虾青素晶体、油悬检测方法1.样品液配制取待测样品20毫克晶体（或油悬液60毫克）至100毫升棕色容量瓶中，加入10毫升氯仿溶解，加正己烷定容，摇匀，取1毫升上述溶液至100毫升容量瓶中，再用正己烷定容至刻度。
高效液相色谱法对水产品中虾青素的测定
高效液相色谱法对水产品中虾青素的测定作者：吴祥庆，黎小正，杨妹丽，等来源：《湖北农业科学》 2014年第20期吴祥庆，黎小正，杨姝丽，吴明媛，谢宗升，陈静，秦振发，黄鸾玉（广西水产科学研究院广西渔业病害防治环境监测和质量检验中心，南宁５３００２１）摘要：建立水产品中虾青素含量的高效液相色谱测定方法。
样品经乙腈萃取、超声提取、离心后，将上清液旋转蒸发、定容，用液相色谱－紫外检测器检测，外标法定量。
虾青素浓度在０．０２～１０.00 μｇ／ｍＬ范围内线性关系好，相关系数０．９９９５；加标回收率为９１．９％～９５．８％，检出限为１０.00 μｇ／ｋｇ。
该方法准确度高，重现性好，易操作，适用于水产品中虾青素含量的测定。
关键词：高效液相色谱法；虾青素；水产品中图分类号：Ｏ６５７．６文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０14）20－4958-02ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ0４３９－８１１４．２０１４．２０．０50收稿日期：２０１４－０４－２８基金项目：广西区直属公益性科研院所基本科研项目（ＧＸＩＦ－２０１２－９）作者简介：吴祥庆（１９７７－），男，广西玉林人，副研究员，主要从事渔业生态环境和水产品检测技术研究工作，（电话）０７７１－５３１４６４３（电子信箱）ｗｕｘｉａｎｇｑｉｎｇ１９＠１６３．ｃｏｍ；通讯作者，杨姝丽，工程师，主要从事渔业生态环境和水产品检测技术研究工作，（电话）０７７１－５３１４６４３（电子信箱）１３０４２６０６＠ｑｑ．ｃｏｍ。
虾青素（Ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎ）化学名称为３，３′－二羟基－４，４′－二酮基－β，β′－胡萝卜素，分子式为Ｃ４０Ｈ５２Ｏ４，广泛存在于生物中，其抗氧化活性是维生素Ｅ的５００倍以上［１，２］，具有抗肿瘤、降血脂以及增强人体免疫的功能［３，４］。
虾青素为海洋甲壳类动物和鱼类色素的主要成分，鲑鱼、龙虾等海产品红润的肉色即为虾青素所体现，但人工养殖的水产品无法合成虾青素，须在饲料中补给［５］。
一种全反式虾青素含量测定方法
一种全反式虾青素含量测定方法
一种全反式虾青素含量测定方法是利用高效液相色谱-质谱（HPLC-MS/MS）技术进行测定的方法。
1. 检测前样品准备
首先，需要将新鲜的虾青素样品在离心管中进行离心，保留上清液。
将上清液转移至经过滤的2ml微离心管中，加入甲醇进行稀释。
然后进行涡旋混合，再进行离心，将上清液转移到色谱小瓶中，进行
进一步的测定。
2. 仪器设置
采用HPLC-MS/MS系统进行虾青素含量的测定，HPLC参数为：色
谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱（2.1mm×50mm，
1.8μm），流动相为乙腈和0.1%乙酸水溶液（V/V=8∶92），流速为
0.4 mL/min，柱温为40℃；MS/MS参数为：电喷雾离子化（ESI）正离
子模式，离子传输电压为1500 V，锥形电势为20 V，源温度为400℃，电离二次质量过滤器轻/重离子转换时间为50/950 ps，扫描模式为多
反应监测（MRM）模式。
3. 测定
将样品注射进入HPLC-MS/MS系统，进行检测和分析。
根据HPLC-MS/MS数据处理软件的分析结果得到各样品中虾青素的含量，并进行结果分析。
4. 结果分析
通过该全反式虾青素含量测定方法，可以得到准确、可靠的含量值。
同时，该方法还能检测出一些与虾青素相关的化合物，为后续药
物研究提供了更多的信息。
综上所述，该全反式虾青素含量测定方法具有测定精度高、灵敏
度高、可重复性好、同时还具备检测一些与虾青素相关的化合物的优点，可为虾青素的研究开发提供更多的技术支持。
反相高效液相色谱法检测虾青素_陈晋明
反相高效液相色谱法检测虾青素*陈晋明1,2 王世平1 陈 敏1(1.中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京 100083; 2.山西农业大学食品科学与工程学院,太谷 030801) 摘要 建立了一种快速检测虾青素的高效液相色谱法。
色谱柱为D ik m a D i amonsil T M-C18(250mm×4.6mm .i d.,5μm),柱温为25℃,甲醇为流动相,检测波长为478n m。
虾青素的质量浓度在1～10μg/mL内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9997,该方法测定结果的相对标准偏差为0.38%(n=6),回收率为99.7%。
关键词 虾青素 高效液相色谱 雨生红球藻 侧金盏花 虾青素(A staxan t h i n,3,3′-二羟基-4,4′-二酮基-β,β′-胡萝卜素),又名虾黄质、龙虾壳色素,是海洋生物体内主要的类胡萝卜素之一[1～2]。
近年来大量的研究表明,虾青素具有许多重要的生物学功能,可作为维生素A原,其抗氧化性强于β-胡萝卜素和维生素E,虾青素能清除体内由紫外线照射产生的自由基、抑制多不饱和脂肪酸的氧化、调节免疫功能、改善视力、加速色素形成以及抗肿瘤等[3]。
同时,虾青素具有特殊的鲜艳粉红色,可用于食品、化妆品的着色以及作为水产养殖的饲料添加剂。
目前,虾青素的生产已形成一定规模,其销售额达数亿美元,市场前景十分广阔[4]。
因此对虾青素的分析检测引起了人们的重视,国内外已有文献报道虾青素的分析检测方法[5～7],但这些方法多数分析时间较长或分析过程较复杂。
笔者采用反相高效液相色谱法对雨生红球藻粉及侧金盏花粉中的虾青素进行了快速的定性、定量分析,分析灵敏度高,结果可靠,为虾青素的综合利用提供了科学依据。
1 实验部分1.1 主要仪器与试剂 高效液相色谱仪:LC-10ATVP型,日本岛津公司; 紫外-可见分光光度检测器:SPD-10AVP型,日本岛津公司; 双光束紫外可见光光度计:TU-1901型,北京普析通用仪器有限公司; 水浴恒温振荡器:PHZ-82型,常州国华电器公司; 高速冷冻离心机:TGL-16G-A,上海安亭科学仪器厂; 虾青素标准品:美国Sig m a公司; 甲醇:色谱纯; 甲醇、二氯甲烷:分析纯; 雨生红球藻粉样品:市售; 侧金盏花:某农科院; 虾青素标准储备液:0.1m g/m L。
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虾青素分析方法
1.仪器：Agilent 1100 旋转蒸发器超声波
2.试剂：无水乙醇三氯甲烷正己烷（HPLC）丙酮（HPLC）
3.检测方法：
色谱柱：ZORBAX RX-SIL 4.6×250mm,5um
流动相：正己烷：丙酮=86：14
柱温：25℃
检测波长：470nm（VWD）
流速：1.2ml/min
进样体积：20ul
4.溶液配制
供试品溶液：
精密称取虾青素（微粒）样品100mg，置于250ml容量瓶中，加5ml水，50℃水温超声10min，使样品完全溶解。
冷却到室温，加100ml无水乙醇，用三氯甲烷定容。
取一定量的溶液离心，转速2500/min，5min。
移取上清液5ml于蒸馏烧瓶中，50℃旋转蒸发，残渣用4ml三氯甲烷溶解，移入50ml容量瓶中，并用正己烷定容。
此溶液为供试品溶液。
标准品溶液：
精密称取虾青素对照品10.0mg，置于100ml容量瓶中，加10ml三氯甲烷，冷水超声溶解，加正己烷稀释至刻度，摇匀。
移取此溶液5ml于50ml容量瓶中，加4ml三氯甲烷，用正己烷稀释至刻度，摇匀，此溶液为标准品溶液。
5.计算
虾青素含量＝样品峰面积×标准品质量×250×10×标准品含量×100％÷标准品峰面积÷样品质量÷100÷10
10%虾青素干粉的紫外检测方法
1.样品液配制
取待测样品100毫克干粉至250毫升棕色容量瓶中，加5毫升去离子水，在50摄氏度条件下超声溶解5min，冷却后，加100毫升无水乙醇摇匀，再用氯仿定容，过滤。
取5毫升上述溶液至50毫升容量瓶中，再用氯仿定容至刻度。
2.虾青素空白溶液
用氯仿做空白。
在474nm处测最大吸收值。
3.结果计算
C=A*2500/（1830*W）
A为吸光系数
W为样品重量
虾青素晶体、油悬检测方法
1.样品液配制
取待测样品20毫克晶体（或油悬液60毫克）至100毫升棕色容量瓶中，加入10毫升氯仿溶解，加正己烷定容，摇匀，取1毫升上述溶液至100毫升容量瓶中，再用正己烷定容至刻度。
2.虾青素空白溶液
用正己烷做空白。
在470nm处测最大吸收值。
3.结果计算
C=A*10000/（2100*W）
A为吸光系数
W为样品重量。