质粒提取总结
质粒提取总结原理小提中提浓度测定
碱裂解法抽提质粒原理溶液I，５0mM葡萄糖/25 ｍM Trｉs—Cl / 10ｍM EDTA,pH８。
０;（溶菌酶：使细胞壁裂解;RNase:将裂解完的ＲNA去除，防止RNA污染)溶液II,０。
２N NaOH/ 1％SＤS;溶液IＩI，3M醋酸钾/ 2 M醋酸。
溶液I的作用:①任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当ｐＨ值的Tris —Ｃｌ溶液。
②５0ｍＭ葡萄糖：加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部.因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言,几乎没有任何影响.所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。
③EＤTA:ＥDTA是Ca2＋和Mｇ2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性和抑制微生物生长.在溶液I中加入高达10 mM的EDTA，无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。
如果不加EDTＡ,其实也没什么大不了的，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DＮA会迅速被降解,因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。
如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提质粒呢?只要用等体积的水,或LB培养基来悬浮菌体就可以了.有一点不能忘的是,菌体一定要悬浮均匀，不能有结块。
溶液II:这是用新鲜的0.4 N的NaＯH和2％的SDS等体积混合后使用的。
要新从浓ＮaOH稀释制备０.4N的NaOＨ，是为了保证ＮaOH没有吸收空气中的CＯ2而减弱了碱性.其实破细胞的主要是碱，而不是SＤS,所以才叫碱法抽提。
事实上NａOH是最佳的溶解细胞的试剂,不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞,碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜）结构向micelle（微囊)结构的相变化所导致。
用了不新鲜的0.4 N NａOH,即便是有ＳＤＳ也无法有效溶解大肠杆菌,自然就难高效率抽提得到质粒.如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为SＤS也是碱性的,只是弱了点而已。
质粒dna的提取实验报告
质粒dna的提取实验报告质粒DNA的提取实验报告引言：DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一，通过提取DNA可以进一步进行PCR扩增、基因克隆等实验。
本实验旨在提取质粒DNA，质粒DNA是存在于细菌细胞质中的环状DNA分子，具有重要的研究价值。
本文将详细介绍实验的步骤、原理以及结果分析。
材料与方法：1. 细菌培养液：选择含有目标质粒的细菌进行培养，如大肠杆菌。
2. 细菌培养基：选择适宜的培养基，如LB培养基。
3. 细菌培养器具：如培养皿、离心管等。
4. DNA提取试剂盒：选择适合的DNA提取试剂盒，如酚/氯仿法或硅胶柱法。
5. 离心机：用于离心细菌培养液以获取细菌沉淀。
6. 紫外可见分光光度计：用于检测DNA的纯度和浓度。
实验步骤：1. 细菌培养：将含有目标质粒的细菌接种于LB培养基中，培养过夜，使细菌充分繁殖。
2. 收集细菌：将培养液离心，以12000转/分钟离心10分钟，将细菌沉淀收集。
3. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解缓冲液，使细菌细胞裂解，释放DNA。
4. 蛋白质沉淀：加入酚/氯仿混合液，离心分离上层的DNA溶液和下层的蛋白质。
5. DNA沉淀：将DNA溶液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，轻轻倒置离心管，使DNA沉淀出来。
6. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除残余的盐和杂质。
7. DNA溶解：用适量的去离子水溶解DNA沉淀，得到纯净的DNA溶液。
8. DNA浓度检测：用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
结果与分析：通过实验，成功提取了质粒DNA，并进行了浓度检测。
根据实验结果，我们可以得到DNA的浓度和纯度信息，这对于后续的实验设计和操作非常重要。
此外，实验中还可以通过凝胶电泳等方法对提取的DNA进行进一步的分析，如确定DNA的大小和完整性。
结论：本实验成功提取了质粒DNA，并获得了纯净的DNA溶液。
通过浓度检测和进一步的分析，我们可以进一步了解DNA的特性和应用。
提取质粒实验报告
提取质粒实验报告提取质粒实验报告引言：质粒提取是分子生物学中常用的实验技术之一，通过提取质粒，可以获得目标基因的DNA序列，进而进行进一步的研究和应用。
本实验旨在通过一系列步骤，从细菌中提取质粒，并对提取的质粒进行分析和鉴定。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养液- 质粒DNA提取试剂盒- 离心管- 离心机- 试剂盒中的缓冲液、溶解液、洗涤液、洗涤缓冲液、洗涤液浓缩液、洗涤缓冲液浓缩液、洗涤缓冲液浓缩液2、洗涤缓冲液浓缩液3、洗涤缓冲液浓缩液4、洗涤缓冲液浓缩液5、洗涤缓冲液浓缩液6、洗涤缓冲液浓缩液7、洗涤缓冲液浓缩液8、洗涤缓冲液浓缩液9、洗涤缓冲液浓缩液10- 水浴锅- 离心管架2. 实验方法：- 步骤一：将大肠杆菌培养液离心，收集菌体沉淀。
- 步骤二：将收集的菌体沉淀加入溶解液中，使其充分溶解。
- 步骤三：加入缓冲液，进行离心分离。
- 步骤四：将上清液转移到新的离心管中，加入洗涤液进行洗涤。
- 步骤五：加入洗涤缓冲液进行洗涤。
- 步骤六：加入洗涤缓冲液浓缩液进行洗涤。
- 步骤七：加入洗涤缓冲液浓缩液2进行洗涤。
- 步骤八：加入洗涤缓冲液浓缩液3进行洗涤。
- 步骤九：加入洗涤缓冲液浓缩液4进行洗涤。
- 步骤十：加入洗涤缓冲液浓缩液5进行洗涤。
- 步骤十一：加入洗涤缓冲液浓缩液6进行洗涤。
- 步骤十二：加入洗涤缓冲液浓缩液7进行洗涤。
- 步骤十三：加入洗涤缓冲液浓缩液8进行洗涤。
- 步骤十四：加入洗涤缓冲液浓缩液9进行洗涤。
- 步骤十五：加入洗涤缓冲液浓缩液10进行洗涤。
- 步骤十六：将洗涤后的质粒DNA溶解于水中。
实验结果与讨论：在本实验中，我们成功地从大肠杆菌中提取到了质粒DNA，并进行了分析与鉴定。
通过对提取的质粒DNA进行电泳分析，我们观察到了明显的DNA条带，表明质粒DNA的提取是成功的。
此外，我们还对提取的质粒DNA进行了鉴定。
通过使用限制性内切酶对质粒DNA进行切割，并进行电泳分析，我们可以确定质粒中是否存在目标基因。
质粒提取实验报告
质粒提取实验报告质粒提取实验报告引言：质粒提取是分子生物学中常用的实验技术之一，它的目的是从细菌中提取质粒DNA。
质粒是一种环状的DNA分子，存在于细菌细胞质中，具有自主复制的能力。
质粒提取实验对于研究基因功能、基因工程以及遗传学等领域具有重要意义。
实验材料与方法：本次实验所用材料包括细菌培养物、质粒DNA提取试剂盒、离心管、离心机等。
实验步骤如下：1. 选择合适的细菌培养物，如大肠杆菌。
2. 将细菌培养物转移到含有适当抗生素的琼脂平板上，孵育过夜。
3. 从琼脂平板上挑取单个菌落，接种到含有适当抗生素的培养基中，培养过夜。
4. 将过夜培养的细菌转移到含有适当抗生素的液体培养基中，继续培养。
5. 收集培养物，离心沉淀细菌细胞。
6. 使用质粒DNA提取试剂盒进行质粒提取。
实验结果与讨论：经过以上步骤，我们成功地从细菌中提取到质粒DNA。
提取的质粒DNA经过琼脂糖凝胶电泳分析，显示出明亮的DNA条带。
这些条带的大小与我们预期的质粒大小相符，证明提取的质粒DNA质量良好。
质粒提取实验的成功与否受到多个因素的影响。
首先，选择合适的细菌培养物非常重要。
常用的大肠杆菌是质粒提取实验的理想选择，因为大肠杆菌具有较高的质粒含量。
其次，培养条件的控制也是关键。
适当的培养时间和培养温度可以提高质粒的复制效率。
此外，质粒提取试剂盒的选择和使用方法也会对实验结果产生影响。
正确操作试剂盒中的各个步骤，如细胞破裂、DNA纯化和洗涤等，是保证实验成功的关键。
质粒提取实验在科学研究和应用中有着广泛的应用。
首先，通过质粒提取实验可以获得大量的质粒DNA，为基因克隆、基因测序等实验提供了材料基础。
其次，质粒提取实验也是进行基因工程技术的前提。
通过将目标基因插入质粒中，可以实现基因的定向表达和转基因等操作。
此外，质粒提取实验还可以用于研究细菌的耐药性、毒力因子等重要基因的分析。
然而，质粒提取实验也存在一些局限性。
首先，质粒提取实验只能提取到细菌中的质粒DNA，无法获取真核生物的质粒。
质粒提取实验报告分析
质粒提取实验报告分析引言质粒提取是分子生物学实验中常用的技术手段之一，可以用于获取目标质粒并纯化。
在本次质粒提取实验中，我们使用了传统的琼脂糖凝胶柱层析法提取目标质粒。
本报告将对实验过程、结果和讨论进行详细的分析。
实验方法1. 质粒培养和提取1. 选取目标质粒进行大规模培养，添加适量的抗生素并摇床培养。
2. 收集培养液，离心沉淀并洗涤。
3. 使用琼脂糖凝胶柱层析法提取目标质粒。
2. 质粒浓度检测1. 取提取得到的质粒样品，使用纳米比色计测量DNA的浓度。
2. 根据测量结果计算质粒的浓度。
实验结果1. 质粒提取情况根据琼脂糖凝胶柱层析法分离得到的质粒经紫外线照射后观察，发现提取效果良好，目标质粒很大程度上得到了纯化。
2. 质粒浓度检测根据纳米比色计的测量结果，计算得到质粒的浓度为XX ng/μl。
测量的标准曲线显示结果可靠。
结果分析1. 实验验证质粒提取的过程中，通过琼脂糖凝胶柱层析法有效地分离出了目标质粒，并得到了相对较纯的质粒样品。
通过紫外线照射观察质粒形态，进一步确认了提取效果良好。
2. 质粒浓度结果根据浓度检测结果，我们可以初步了解到质粒的含量。
这对后续实验的设计和操作非常重要。
结论通过本次实验使用琼脂糖凝胶柱层析法提取质粒，成功获得了相对纯净的目标质粒样品。
质粒的浓度检测结果进一步验证了实验的成功。
这为后续的实验研究和应用提供了基础数据。
改进和展望1. 实验中可以尝试使用其他提取方法，比较不同方法的效果并选取最佳方案。
2. 在质粒浓度检测方面，可以引入其他的分析方法，如凝胶电泳等，以更全面地评估质粒的品质。
参考文献[1] 张三, 李四. 质粒提取实验方法综述[J]. 生物技术通讯,20XX,XX(XX):XX-XX.。
质粒提取总结(原理、小提、中提、浓度测定)
如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的纳离子形成了不溶性的PDS，而高浓度的盐，使得沉淀更完全。SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。这个过程不难想象，因为基因组DNA太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合。
质粒小提
质粒小提（这里试剂盒没有柱平衡步骤）：
1、大离心管4000rpm离心5min，吸除上清；
2、每5ml菌液、加入250μlP2，上下颠倒6-8次，温和，＜5min；
4、加入350μlP3，上下颠倒6-8次，温和；12000rpm离心10min；
5、取上清，加到柱子里，12000rpm离心2min，弃废液；
6、加入去蛋白液HB 500μl，12000rpm离心1min，弃废液；
7、加入75%乙醇700μl，12000rpm离心1min，弃废液；
8、重复上一步；
9、空离一次，12000rpm离心2min，弃收集管；
10、晾干；
11、加ddH2O溶解，放2min，12000rpm离心2min。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μl溶液P1（先检查是否加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；
质粒提取实验报告
1. 学习并掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和操作步骤。
2. 掌握DNA琼脂糖凝胶电泳技术，用于检测提取的质粒DNA。
3. 熟悉实验室安全操作规程，提高实验技能。
二、实验原理质粒是细菌细胞质中独立于染色体之外的小型环状双链DNA分子，具有自主复制能力。
在基因工程中，质粒常作为载体携带外源基因进行扩增和表达。
本实验采用碱裂解法提取质粒DNA，其原理是利用碱性环境使细菌细胞壁和细胞膜破裂，蛋白质变性，从而使质粒DNA与蛋白质等杂质分离。
随后，通过酚-氯仿抽提、乙醇沉淀等步骤纯化质粒DNA。
三、实验材料1. 大肠杆菌菌种（含有质粒）2. LB液体培养基3. 碱裂解液（含SDS、NaOH）4. 酚-氯仿5. 乙醇6. TE缓冲液7. 琼脂糖8. 电泳缓冲液9. DNA分子量标准10. 紫外线灯11. 凝胶电泳仪12. 离心机13. 微量移液器14. 玻璃棒1. 菌液制备：将含有质粒的大肠杆菌接种于LB液体培养基中，37℃培养过夜。
2. 离心：取1.5ml菌液，4000r/min离心5min，弃上清液。
3. 碱裂解：向沉淀中加入100μl碱裂解液，混匀，室温放置5min。
4. 酚-氯仿抽提：取1/3体积的酚-氯仿，加入上述裂解液，混匀，室温放置10min。
5. 离心：4000r/min离心10min，取上清液。
6. 乙醇沉淀：向上清液加入等体积的乙醇，混匀，-20℃放置1h。
7. 离心：8000r/min离心10min，弃上清液。
8. 溶解：用50μl TE缓冲液溶解沉淀，即为提取的质粒DNA。
9. DNA琼脂糖凝胶电泳：取5μl提取的质粒DNA，加入1μl DNA分子量标准，进行琼脂糖凝胶电泳。
10. 观察：打开紫外线灯，观察电泳结果。
五、实验结果1. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，提取的质粒DNA在相应位置出现条带，与DNA分子量标准相符。
2. 提取的质粒DNA纯度较高，无杂质。
六、实验讨论1. 碱裂解法提取质粒DNA操作简便，效率较高，是实验室常用的提取方法。
三种提取质粒的方法及原理
三种提取质粒的方法及原理《三种提取质粒的方法及原理》一、离心法离心法是最常用的一种提取质粒的方法，它通过离心力的作用，使细胞或质粒（例如DNA、RNA等）从悬浮液中分离出来，从而得到提取的质粒。
分离过程如下：1.从对象（例如细胞）上提取纯化的质粒，使其形成悬浮液。
2.将所得悬浮液置于微量离心机中，加入适当的离心剂，并配置合适的离心条件（如离心速度，离心时间）。
3.根据离心力，细胞及其他悬浮液的组分会在离心机的内壁及底部形成层，质粒则聚集在中心处，形成离心质粒。
4.把离心质粒从中心处取出，即可得到纯化的质粒。
二、丙酮离心法丙酮离心法是一种以丙酮、乙醇和水作为分离剂的提取质粒方法，它可用于提取活性质粒，如抗体、RNA和DNA等，这是因为丙酮和乙醇可以良好地维持质粒的活性，并可以使悬浮液以柱状分离，有利于质粒的提取。
丙酮离心法的分离过程如下：1.将所要提取的对象加入适当的提取液（如200 ml丙酮），形成悬浮液。
2.将悬浮液置于微量离心机中，并配置合适的离心条件。
3.由于丙酮和乙醇的作用，悬浮液以柱状分离，并形成梁状质粒在柱峰中。
4.把梁状质粒从柱峰中取出，即可得到纯化的质粒。
三、超滤法超滤法是一种用于提取质粒的物理分离方法，它通过扩散作用及滤膜孔径的大小，可以有效地将非蛋白质物质等从悬浮液中分离出来，而不改变其本身的结构和性质。
超滤法的分离过程如下：1.将所要提取的对象加入适当的提取液（如水），形成悬浮液。
2.将所得悬浮液置于微量超滤器中，并配置合适的超滤条件（如超滤压力、超滤温度）。
3.根据超滤的原理，液体及其他悬浮物质会被超滤滤膜过滤，而质粒则不会被过滤，从而被滤过的液体中提取出质粒。
4.把质粒从超滤液中取出，即可得到纯化的质粒。
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碱裂解法抽提质粒原理溶液I，50 mM葡萄糖 /25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH ；（溶菌酶：使细胞壁裂解；RNase：将裂解完的RNA去除，防止RNA污染）溶液II， N NaOH / 1% SDS；溶液III，3M醋酸钾 / 2 M醋酸。
溶液I的作用：①任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液。
②50mM葡萄糖：加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。
因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言，几乎没有任何影响。
所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。
③EDTA：EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性和抑制微生物生长。
在溶液I中加入高达10 mM的EDTA，无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。
如果不加EDTA，其实也没什么大不了的，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。
如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提质粒呢只要用等体积的水，或LB培养基来悬浮菌体就可以了。
有一点不能忘的是，菌体一定要悬浮均匀，不能有结块。
溶液II：这是用新鲜的 N的NaOH和2％的SDS等体积混合后使用的。
要新从浓NaOH稀释制备的NaOH，是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。
其实破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。
事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化所导致。
用了不新鲜的 N NaOH，即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌，自然就难高效率抽提得到质粒。
如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为SDS也是碱性的，只是弱了点而已。
很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA变性，以便沉淀，这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。
有人不禁要问，既然是NaOH溶解的细胞，那为什么要加SDS呢那是为下一步操作做的铺垫。
这一步要记住两点：第一，时间不能过长，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合，不然基因组DNA也会断裂。
基因组DNA的断裂会带来麻烦，后面我再详细说明。
溶液III溶液III加入后就会有大量的沉淀，最容易产生的误解是，当SDS碰到酸性后发生的沉淀。
如果你这样怀疑，往1%的SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是这么回事了。
大量沉淀的出现，显然与SDS的加入有关系。
如果在溶液II中不加SDS会怎样呢，也会有少量的沉淀，但量上要少得多，显然是盐析和酸变性沉淀出来的蛋白质。
既然SDS不是遇酸发生的沉淀，那会不会是遇盐发生的沉淀呢在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，你会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的。
因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀。
但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你会发现沉淀的量要多的多。
这其实是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate,PDS），而PDS是水不溶的，因此发生了沉淀。
如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的纳离子形成了不溶性的PDS，而高浓度的盐，使得沉淀更完全。
SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。
这个过程不难想象，因为基因组DNA 太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合。
那么2M的醋酸又是为什么而加的呢是为了中和NaOH，因为长时间的碱性条件会打断DNA，所以要中和之。
基因组DNA一旦发生断裂，只要是50－100 kb大小的片断，就没有办法再被PDS共沉淀了。
所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入，琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。
很多人误认为是溶液III加入后基因组DNA无法快速复性就被沉淀了，这是天大的误会，因为变性的也好复性的也好，DNA分子在中性溶液中都是溶解的。
NaOH本来是为了溶解细胞而用的，DNA分子的变性其实是个副产物，与它是不是沉淀下来其实没有关系。
溶III加入并混合均匀后在冰上放置，目的是为了PDS沉淀更充分一点。
不要以为PDS沉淀的形成就能将所有的蛋白质沉淀了，其实还有很多蛋白质不能被沉淀，因此要用酚/氯仿/异戊醇进行抽提，然后进行酒精沉淀才能得到质量稳定的质粒DNA，不然时间一长就会因为混入的DNase 而发生降解。
这里用25/24/1的酚/氯仿/异戊醇是有很多道理的，这里做个全面的介绍。
酚对蛋白质的变性作用远大于氯仿，按道理应该用酚来最大程度将蛋白质抽提掉，但是水饱和酚的比重略比水重，碰到高浓度的盐溶液（比如4M的异硫氰酸胍），离心后酚相会跑到上层，不利于含质粒的水相的回收；但加入氯仿后可以增加比重，使得酚/氯仿始终在下层，方便水相的回收；还有一点，酚与水有很大的互溶性，如果单独用酚抽提后会有大量的酚溶解到水相中，而酚会抑制很多酶反应（比如限制性酶切反应），应此如果单独用酚抽提后一定要用氯仿抽提一次将水相中的酚去除，而用酚/氯仿的混合液进行抽提，跑到水相中的酚则少得多，微量的酚在乙醇沉淀时就会被除干净而不必担心酶切等反应不能正常进行。
至于异戊醇的添加，其作用主要是为了让离心后上下层的界面更加清晰，也方便了水相的回收。
回收后的水相含有足够多的盐，因此只要加入2倍体积的乙醇，在室温放置几分钟后离心就可以将质粒DNA沉淀出来。
这时候如果放到-20℃，时间一长反而会导致大量盐的沉淀，这点不同于普通的DNA酒精沉淀回收，所以不要过分小心了。
高浓度的盐会水合大量的水分子，因DNA分子之间就容易形成氢键而发生沉淀。
如果沉淀，就用70％的乙醇多洗几次，每次在室温放置一个小时以上，并用tip将沉淀打碎，就能得到好的样品。
得到的质粒样品一般用含RNase（50ug/ml）的TE缓冲液进行溶解，不然大量未降解的RNA会干扰电泳结果的。
琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况下你能看到三条带，但千万不要认为你看到的是超螺旋、线性和开环这三条带。
碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，不信的话你用EcoRI来线性化质粒后再进行琼脂糖电泳，就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。
其实这三条带以电泳速度的快慢而排序，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。
如果你不小心在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。
质粒小提质粒小提（这里试剂盒没有柱平衡步骤）：1、大离心管4000rpm离心5min，吸除上清；2、每5ml菌液加入250μl P1（4℃），彻底悬浮，移到 EP离心管中；3、加入250μl P2，上下颠倒6-8次，温和，＜5min；4、加入350μl P3，上下颠倒6-8次，温和；12000rpm离心10min；5、取上清，加到柱子里，12000rpm离心2min，弃废液；6、加入去蛋白液HB 500μl，12000rpm离心1min，弃废液；7、加入75%乙醇700μl，12000rpm离心1min，弃废液；8、重复上一步；9、空离一次，12000rpm离心2min，弃收集管；10、晾干；11、加ddH2O溶解，放2min，12000rpm离心2min。
12、测浓度质粒小提试剂盒（离心柱型）：天跟本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。
1、柱平衡：向吸附柱CP3（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm 离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；2、取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12000rpm离心1min，尽量吸除上清；注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μl溶液P1（先检查是否加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；4、向离心管中加入250μl溶液P2（使用后立即盖上瓶盖，以免空气中的CO2中和P2中的NaOH反应，降低溶菌效率），温和地上下翻转6-8次，使菌液充分裂解；注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。
此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒收到破坏，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5、加入350μl溶液P3，立即温和地上下翻转6~8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀，12000rpm离心10min；注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6、吸取上一步上清液转移至吸附柱CP3中（吸附柱放入离心管中），尽量不要吸出沉淀，12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液，将吸附柱放入收集管中；7、可选步骤：向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3重新放回收集管中。
如果宿主菌是end A+宿主菌（TG1，BL21，HB101，JM系列，ET12567等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，推荐采用此步。
如果宿主菌是end A-宿主菌（DH5α，TOP10等），此步可省略。
8、向吸附柱CP3中加入600μl漂洗液PW（先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；9、重复操作步骤8；10、将吸附柱CP3放入收集管中，12000rpm离心两分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP3开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
11、将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100μl洗脱缓冲液EB，室温放置2min，12000rpm离心2min将质粒溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。