粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数 6.25，计算出粗蛋白含量。
2、试剂2.1 硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98％，无氮。
2.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。
2.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。
2.4 硼酸（GB 628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。
2.5 混合指示剂：甲基红（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
2.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。
2.6.1 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。
8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。
2.6.2 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。
1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。
2.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析纯。
2.8 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。
2.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
3、仪器设备3.1 实验室用样品粉碎机或研钵。
3.2 分样筛：孔径0.45mm（40目）。
3.3 分析天平：感量0.0001g。
3.4 消煮炉或电炉。
3.5 滴定管：酸式，10、25mL。
3.6 凯氏烧瓶：250mL。
3.7 凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。
3.8 锥形瓶：150、250mL。
3.9 容量瓶：100mL。
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
2、试剂2.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98％，无氮。
2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3—920）或硫酸钠（HG3—908），均为化学纯，磨碎混匀。
2.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。
2.4硼酸（GB628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。
2.5混合指示剂：甲基红（HG3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。
2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。
8.3mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。
2.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。
1.67mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。
2.7蔗糖（HG3—1001）：分析纯。
2.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
2.9硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
3、仪器设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵。
3.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。
3.3分析天平：感量0.0001g。
3.4消煮炉或电炉。
3.5滴定管：酸式，10、25mL。
3.6凯氏烧瓶：250mL。
3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数 6.25，计算出粗蛋白含量。
2、试剂2.1 硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98％，无氮。
2.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。
2.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。
2.4 硼酸（GB 628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。
2.5 混合指示剂：甲基红（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
2.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。
2.6.1 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。
8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。
2.6.2 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。
1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。
2.7 蔗糖（HG 3—1001）：分析纯。
2.8 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。
2.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
3、仪器设备3.1 实验室用样品粉碎机或研钵。
3.2 分样筛：孔径0.45mm（40目）。
3.3 分析天平：感量0.0001g。
3.4 消煮炉或电炉。
3.5 滴定管：酸式，10、25mL。
3.6 凯氏烧瓶：250mL。
3.7 凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。
3.8 锥形瓶：150、250mL。
3.9 容量瓶：100mL。
饲料中粗蛋白的测定(精)(总6页)
饲料中粗蛋白的测定(精)(总6页)
饲料中粗蛋白的测定（精）主要是测量饲料中的蛋白质含量，以便更好地了解饲料的营养成分，为合理饲养和饲料配方提供基础数据。
本文将介绍几种常见的饲料中粗蛋白的测定方法，包括Kjeldahl法、Dumas法、Kjeltec自动消解仪法等。
一、Kjeldahl法
Kjeldahl法是测定饲料中粗蛋白含量的经典方法，该方法通过将饲料样品经过消解、蒸馏和滴定等步骤，测定其中的氨基含量，再计算得出粗蛋白含量。
具体步骤如下：
1. 取适量的饲料干样，加入适量的硫酸和氧化剂，进行消解，将其变为无机氮。
2. 在消解的样品中加入适量的碱液，使其中和，然后加入酚酞指示剂，在滴定时视颜色变化为终点，计算出氨基含量。
3. 将氨基含量乘以蛋白质的氮含量比例（通常为6.25），即可得到粗蛋白含量。
二、Dumas法
1. 取适量的饲料干样，放入Dumas燃烧管中，加入硼酸和催化剂等。
2. 将燃烧管加热，将样品完全燃烧，并将其中的氮转化成NO。
3. 将生成的NO经过固定，再经过电导检测器测定其含量，计算出氮含量。
三、Kjeltec自动消解仪法
2. 稍作冷却后，将消解液放入自动蒸馏装置中，进行蒸馏，将其中的氨基捕集在酸性溶液中。
综上所述，饲料中粗蛋白的测定方法有很多种，其中Kjeldahl法、Dumas法和Kjeltec自动消解仪法是较为常见的。
在测定时需严格按照操作步骤进行，确保测量结果的准确性和可靠性。
凯氏定氮法测粗蛋白
凯氏定氮法测粗蛋白
凯氏定氮法测粗蛋白是一种常用的测定蛋白质含量的方法。
其基本原
理是利用蛋白质中含有的氮原子与氢氧化钾共同作用生成氨气，进而
利用体积分析法或气相色谱法测定氨气体积或质量，从而计算出样品
中的蛋白质含量。
其测定结果准确可靠，操作简单，广泛应用于食品、饲料、生物化学等领域。
凯氏定氮法测粗蛋白的操作流程一般包括以下几个步骤：
（1）样品准备：根据需要确定样品数量并进行粉碎、过筛等处理，以获得均匀的样品。
（2）加入氢氧化钾：将上述得到的样品加入适量的氢氧化钾，并加入少量的氢氧化钠，使pH值保持在8.5左右。
（3）加入蒸馏水：向样品中加入蒸馏水，使体积增大，并充分混合。
（4）蒸馏：在蒸馏器中对样品进行蒸馏，使生成的氨气通过附有硫酸的吸收瓶或氢氧化铜进行吸收。
蒸馏结束后，测定吸收瓶中的氨气体
积或重量。
（5）计算：根据实验数据计算出样品中的蛋白质含量。
计算公式为：粗蛋白质含量（%）=氨气体积（mL）/样品质量（g）×1.167×6.25（Kjeldahl系数）。
需要注意的是，在进行凯氏定氮法测粗蛋白的时候，应注意样品中是
否含有一些会干扰测定结果的物质，例如硫代硫酸盐、氯化物、硝酸盐、亚硝酸盐等。
此外，凯氏定氮法在测定时需要加热样品，操作时
应注意安全，避免发生危险。
总之，凯氏定氮法是一种简便易行、准确可靠的测定蛋白质含量的方法。
在实践中，我们可以根据需要对其具体操作流程进行微调和改进，以获得更好的测定结果。
粗蛋白测定GB-1
中华人民共和国专业标准中华人民共和国专业标准全氮和粗蛋白测定法Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87crude protein━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。
1 仪器a. 分析天平:感量0.1mg;b. 凯氏烧瓶;c. 铁架、铁圈、石棉网;d. 煤气灯(或电炉);e. 干燥管、抽气管、橡皮管;f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶;g. 粉碎机等。
2 试剂与溶液2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂甲基红40mg,溴甲酚绿1g,溶于60mL95%乙醇中。
2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂硫酸铜: 硫酸钾= 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯)。
2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。
2.4 4%硼酸溶液称取化学纯硼酸4g,用蒸馏水溶解后定容至100mL。
2.5 浓硫酸(分析纯)2.6 40%氢氧化钠溶液称取化学纯氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解,定容至100mL。
2.7 0.1N盐酸标准溶液量取分析纯盐酸9mL,加蒸馏水稀释至1000mL。
2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,每份重约0.17g,称准至0.0002g。
分别置于150mL锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏水30mL, 温热摇动,使之溶解。
再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂2 滴,然后用待标定的盐酸溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用毫升数(V)。
计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算GN = ━━━━━━ (3)V ×0.05299式中:N——盐酸标准溶液的当量浓度;G——无水碳酸钠之重量,g;V——盐酸溶液之用量,mL;0.05299——每毫克当量Na2CO3之重量,g。
2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL需要标定的盐酸溶液于150mL锥形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色,在30s内不退色为终点。
饲料中粗蛋白测定方法
1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白含量。
2、试剂硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98％，无氮。
混合催化剂：硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。
氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。
硼酸（GB 628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。
混合指示剂：甲基红（HG 3—958）％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220）％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。
2.6.1 盐酸标准溶液：c（HCl）=L。
盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。
盐酸标准溶液：c（HCl）=L。
盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。
蔗糖（HG 3—1001）：分析纯。
硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。
硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL，加入％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
3、仪器设备实验室用样品粉碎机或研钵。
分样筛：孔径（40目）。
分析天平：感量。
消煮炉或电炉。
滴定管：酸式，10、25mL。
凯氏烧瓶：250mL。
凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。
锥形瓶：150、250mL。
容量瓶：100mL。
消煮管：250mL。
定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。
4、试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
5 分析步骤试样的消煮称取试样～1g（含氮量5～80mg）准确至，放入凯氏烧瓶中，加入混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
粗蛋白国标测定方法
粗蛋白国标测定方法
粗蛋白国标测定方法是指按照国家标准规定的方法来测定食品、饲料、生物、饮料等样品中的粗蛋白含量。
以下是其中一种常用的粗蛋白测定方法：
1. 原理：利用蛋白质与碱性染料结合形成染色复合物，通过比色测定复合物的吸光度来确定粗蛋白含量。
2. 实验步骤：
a. 准备样品：将待测样品取适量，如食品样品需要先将其分
解提取出蛋白质。
b. 加试剂：将试样加入含有碱性染料和溶液的比色管中，混匀。
c. 反应：在适当的温度下，让样品与试剂充分反应一段时间。
d. 比色：将比色管放入分光光度计中，通过测量其吸光度值
来确定反应产物的含量。
e. 计算：根据国家标准中的计算公式，将吸光度值转化为粗
蛋白含量。
3. 注意事项：
a. 操作过程中要注意避免样品受到污染，以保证准确性。
b. 使用标准品进行校准，以确保测定结果的准确性。
c. 样品的测定要根据国家标准规定的条件和步骤进行，以保
证可比性。
需要注意的是，粗蛋白国标测定方法可能因国家标准的不同而
有所不同，具体的操作步骤和计算方式可能有所差异。
因此，在具体实验中需要参考并遵循国家标准的要求。
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粗蛋白测定方法一凯式定氮法粗蛋白crude protein ；crude matter (DM)食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物(氮化物)。
换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。
所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。
然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。
总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16% (这已通过多次试验得出)，再用凯氏法测出总氮量，再乘以就可求得粗蛋白的含量。
一、实验原理蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。
这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50〜55%、氢6〜8%、氧20〜23%、氮15〜17% 和硫〜％。
此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。
由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15〜17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于克蛋白质。
所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以，就可以计算出样品中的蛋白质含量。
含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
由大分子分解成小分子的过程通常称为”肖化”为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290C-400C )，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。
反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3) 在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。
由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。
硫酸铵与浓碱作用可游离出氨，借水蒸气将产生的氨蒸馏到一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的度降低，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来H+浓度为止，最后根据所用标准酸的量计算出待测物中总氮量。
二、仪器和试剂1仪器:消化管或凯氏烧瓶、凯氏定氮蒸馏装置、电炉、100mL锥形瓶、100mL量筒、表面皿、酸式滴定管、小漏斗、玻璃珠等。
2、试剂:(1)血清或卵清蛋白等其他含蛋白质样品；(2)消化液：30%过氧化氢、硫酸与水的比例为 3 : 2 : 1，临用时配制；(3)催化剂：硫酸铜(CuSQ5H2O)与硫酸钾(KSC4)以1：3配比研磨混合；( 4) 50%氢氧化钠溶液；( 5) 2%硼酸溶液;(6) 标准盐酸溶液(约L);(7) 混合指示剂(田氏指示剂)混合指示剂由50mL %甲烯蓝乙醇溶液与%甲基红乙醇溶液混合配成贮于棕色瓶中配用。
这种指示剂酸性时为紫红色，碱性时为绿色，变色范围很窄且很灵敏。
三、实验步骤(一) 安装微量凯氏定氮仪定氮仪由蒸汽发生器、反应室、冷凝管三部分组成。
蒸汽发生器包括一个电炉及一个3〜5升容积的烧瓶。
反应室上边有两个小烧杯，一个供加样，一个盛放碱液。
样品和碱液由此可直接到反应室中。
反应室中心有一长玻璃管，其上端通到反应室外层，下端靠近反应室的底部。
反应室下端底部有一开口，上有橡皮管和管夹。
由此放出反应废液。
反应所产生的氮可通过反应室上端细管经冷凝管通入收集瓶中。
反应室与冷凝管之间由橡皮管相连。
安装仪器时，将蒸汽发生器垂直地固定在铁架台上，用橡皮管把蒸汽发生器、反应室、冷凝管连接起来。
橡皮管连接的部位应在同一水平位置。
冷凝管下端与实验台的距离以放得下收集瓶为准。
安装完毕后，不得轻易移动，以免仪器损坏。
要认真检查整个装置是否漏气，以保证所测结果的准确性。
(二) 样品的处理(1) 固体样品：随机取一定量研磨细的样品放入恒重的称量瓶中，置于105C的烘箱中干燥4h，用坩埚钳将称量瓶取出放入干燥器内，待降至室温后称重，随后继续干燥样品，每干燥1h，称重一次，恒0重即可。
(2) 血清样品: 取人血(或猪血)放入离心管中，与冰箱中放置过夜。
次日离心除去血凝块，上层透明清液，即为血清。
吸出1mL 血清加到50mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀备用。
溶液如果显混浊，加少量氯化钠再混匀。
（3）卵清蛋白：取2g卵清蛋白溶于％NaCI溶液并稀释至100mL。
如有不溶物，离心取上清液备用。
（三）消化取 5 支消化管并编号，在 1 、2、3 号管中各加入精确称取干燥样品（注意：加样品时应直接送入管底，避免沾到管口和管颈上），加催化剂，混和消化液3mL，在4、5 号管中各加相同量的催化剂和混合消化液（若样品是液体时，还要加与样品等体积的蒸馏水）作为对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质。
摇匀后，将5 支消化管放在通风厨内的远红外消煮炉上消化。
先用小火加热煮沸，不久看到消化管内物质变黑，并产生大量泡沫，此时要特别注意，不能让黑色物质上升到消化管的颈部，否则将严重地影响样品测定结果。
当混合物停止冒泡，蒸汽与二氧化碳也均匀地放出时，适当加强火力。
在消化时，应是全部样品都浸泡在消化液中，如在瓶颈上发现有黑色颗粒，应小心地将消化倾斜振摇，用消化液将它冲洗下来。
通常消化需要1〜3h （对于那些赖氨酸含量较高的样品需要更长的时间）。
待消化液变成褐色后，为了加速消化完成，可将消化管取出，稍冷，加30%过氧化氢溶液 1 〜 2 滴于管底消化液中，再继续加热。
消化完毕，取出消化管冷却至室温。
（四）蒸馏（1）仪器的洗涤：仪器应先经一般洗涤，再经水蒸气洗涤。
目的在于洗去冷凝管中可能残留的氨。
对于处于使用状态的仪器（正在测定中的仪器）加样前使蒸汽通过1〜2min 即可，对于较长时间未使用的仪器，必须用水蒸气洗涤到吸收蒸汽的硼酸—指示剂混合液中指示剂的颜色合格为止。
洗涤方法如下：取2〜3 个100mL 锥形瓶，加入10mL 2%硼酸、2 滴混合指示剂，用表面皿覆盖备用。
现煮沸蒸汽发生器，其中盛有2/3 体积的用几滴硫酸酸化过的蒸馏水，样品杯中也加入2/3 体积蒸馏水进行水封。
关闭夹子使蒸汽通过反应室中的插管进入反应室，再由冷凝管下端逸出。
在冷凝管下端放一空烧杯以承受凝集水滴。
这样用蒸汽洗涤5min 左右，在冷凝管下口放一个准备好的盛有硼酸—指示剂的锥形瓶，位置倾斜，冷凝管下口应完全浸泡于液体内，继续用蒸汽洗涤1〜2min，观察锥形瓶中的溶液是否基本上不变色，若不变色，则证明蒸馏器内部已洗涤干净。
下移锥形瓶，使硼酸液面离开冷凝管口约1cm，继续通蒸汽1min。
最后用蒸馏水冲洗冷凝管外口，排废开始。
用右手轻提样品杯中棒状玻塞，使水流入反应室的同时，立即用左手关闭夹子，盖好玻塞。
由于反应室外层中蒸汽冷缩、压力降低，反应室内废液通过反应室中插管自动抽到反应室外壳中，再在样品杯中加入2/3 体积蒸馏水，如此反复三次既可排尽废液及洗涤液。
打开夹子将反应室外壳中积存的废液排出，关闭夹子再使蒸汽通过全套蒸馏仪1~3mi n,可进行下一次蒸馏。
(2) 样品及空白的蒸馏：取5个100mL锥形瓶，分别加入2%硼酸10mL,混合指示剂 2 滴,溶液呈紫红色,用表面皿覆盖备用。
把消化管中的消化液全部转移到样品杯中，用约2mL 蒸馏水冲洗消化管，重复3 次，把洗涤液都倒入样品杯中，打开样品杯的棒状玻塞，将样品放入反应室，用少量蒸馏水冲洗样品杯后也使之流入反应室，盖上玻塞，并在样品杯中加约2/3 体积的蒸馏水进行水封。
而后将装有硼酸—指示剂的锥形瓶放在冷凝管口下方，打开存放碱液杯下端的夹子，放10mL40%氢氧化钠溶液于反应室后，立即上提锥形瓶，使冷凝管下口浸没在锥形瓶的液面下。
反应液沸腾后，锥形瓶中的硼酸一指示剂混合液由紫红色变为绿色，自变色时开始计时，蒸馏3〜5min。
移动锥形瓶，使硼酸液面离开约1cm，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管下口外面，继续蒸馏1min，用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端尖嘴，将锥形瓶取出，用表面皿覆盖以待滴定。
排液和洗涤等操作与前面相同。
排废洗涤后，可进行下一个样品的蒸馏(每一个样品要同时做三份，以求得准确结果)。
待样品和空白消化液蒸馏完毕后，同时进行滴定。
(五) 滴定全部蒸馏完毕后，用L 标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸—指示剂混合液由绿色变回淡葡萄紫色，即为滴定终点，记录所耗HCl 溶液量。
五、计算样品的总氮含量(%)=(A—B) XXX 100/1000 X C若测定的样品含氮部分只是蛋白质(如血清) ，则：样品中的蛋白质含量(%)=(A —B) XX 14XX 100/1000 x CA—滴定样品用去的盐酸体积（mL）; B—滴定空白用去的盐酸体积（mL）;C—称量样品的量（g）;—盐酸的摩尔浓度（mol/L）; 14—氮原子量；一系数L 盐酸相当于氮）。
若样品中除有蛋白质外，尚有其它含氮物质，则样品蛋白质含量的测定要复杂一些。
首先，需向样品中加入三氯乙酸，使其最终浓度为5%，然后测定未加入三氯乙酸的样品及加入三氯乙酸后样品的上清液中的含氮量，得出非蛋白氮量，从而计算出蛋白氮，再进一步折算出蛋白质含量。
蛋白氮=总氮—非蛋白氮粗蛋白质含量（%）=蛋白氮X粗纤维测定方法粗纤维（Crude Fiber缩写CF,是膳食纤维的旧称，现已不用。
）粗纤维是植物细胞壁的主要组成成分，包括纤维素、半纤维素、木质素及角质等成分。
吃些含粗纤维的食物可以帮助消化，加强肠胃功能，是有益处的，但是吃多了很明显会因无法消化而造成腹胀。
1、原理用浓度准确的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醇除去可溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量为粗纤维。
它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下测出的概略成分，其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。
2、仪器和试剂试剂本方法试剂使用分析纯，水为蒸馏水（1 ）硫酸溶液（土）mol/L ；（2）氢氧化钠溶液（土）mol/L ；（3）酸洗石棉，加5%氢氧化钠浸泡•在水浴上回流8h以上，再用热水充分洗涤•然后用20%盐酸干燥，在600--700C下灼烧后.加水使成混悬物，储存于玻璃瓶中；⑷95%乙醇；（5）乙醚；（6）正辛醇（防泡剂）。
（丙酮、十氢奈）仪器设备（1）实验室用样品粉碎机，分样筛，孔径1mm（18目）;（2）分析天平，感量0.0001g;（3）电力热器（电炉），可调节温度；（4）电热恒温箱（烘箱），可控制温度在130C，高温炉，可控制温度在500-600 C。
（5）消煮器；（6）抽滤装置；（7）干燥器。
（8）古氏坩埚［预先加入酸洗石棉悬浮液30ml （内含酸洗石棉-0.3g再抽干，以石棉厚度均匀，不透光为宜。