乳酸脱氢酶同工酶
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简介：
LDH5最多，而肺、脾、胰、甲状腺、肾上 腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。后来从 睾丸和精子中发现了LDHx，其电泳迁移率 介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型) 和M(骨骼肌型)两类亚基组成，分别形成 LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、 LDH4(HM3)、LDH5(M4)。
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临床意义：
血清LDH4>LDH5较为常见。 肾皮质以LDH1 和LDH2含量较高，肾髓质以LDH4和LDH5活 性较强。患急性肾小管坏死、慢性肾盂肾 炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时， 血清LDH5均可增高。 肺含LDH3较多，肺 部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时 LDH3和LDH4相等，LD
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正常值： DH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5。
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相关检查： 血清乳酸脱氢酶（LDH）、血清α-羟丁酸 脱氢酶（α-HBDH）、乳酸脱氢酶同工酶、 乳酸脱氢酶(LDH,LD)。
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临床意义：
肠梗阻等。 肌营养不良病人肌肉中LDH1、 LDH2明显增高，LDH5显著下降;而血清则 相反，LDH1、LDH2明显减少，LDH4、LDH5 显著，表明血清LDH同工酶主要来自肌肉 组织。煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1、 LDH2下降，LDH4、LDH5升高。
实验7 琼脂糖凝胶电泳法测定血清乳酸脱氢酶同工酶
（4）恶性贫血 溶血性疾病、幼红细胞贫血症LD活性极度 升高，伴有LD1明显升高，LD1＞LD2。
（5）骨骼肌损伤时LD4和LD5可发生增高。
[注意事项]
1．红细胞中LD1、LD2活性很高，因此必须避免标本溶血。 2．LD4与LD5对热很敏感，因此底物-显色液的温度不能过
6．区带观察 观察显色的区带情况（数目、深浅等）。 7．定量 将各区带切开，分别装入试管中，加入400g/L尿素
4ml，于沸水浴中加温5min，取出冷却后以 575nm波长比色。 空白管取大小相同但无同工酶区带的凝胶，用上述相同的方 法处理。比色后根据各管吸光度值计算各同工酶的百分含量。
[计算]
A总＝A1+A2+A3+A4+A5 式中，A1～A5为各同工酶区带的吸光度。 各同工酶百分率（%）为：
实验7 琼脂糖凝胶电泳法分离（测定） 血清乳酸脱氢酶同工酶
[原理]
乳酸脱氢酶（LD）广泛存在于人体各组织细胞中，以 肾、心肌、肌肉、肝、红细胞含量最多。LD是由两种不同 亚基（M和H）组成的四聚体，共有5种同工酶形式，按电 泳的快慢命名为LD1、LD2、LD3、LD4和LD5。
5种同工酶大体可分为三大类：第一类以LD1为主，主 要存在于心肌，含量最多，可占总LD的50%左右；第二类 以 LD5 为 主 ， 以 横 纹 肌 为 代 表 ， 肝 脏 中 也 有 ； 第 三 类 以 LD3为主，存在于脾、肺。各组织LD同工酶的类型、含量 均有所差异。LD同工酶的测定相对于总活性的测定更具有 组织器官特异性，灵敏度也更高。
高（<50℃），否则易使其变性失活，不能显色。 3．LD4和LD5对冷不稳定，易发生失活，故最好采用新鲜标
乳酸脱氢酶同工酶在临床上的应用
乳酸脱氢酶同⼯酶在临床上的应⽤乳酸脱氢酶同⼯酶在临床上的应⽤陆明旭（⼴西医科⼤学基础医学院⼴西青秀区530021）联系⽅式：152******** 摘要：本⽂通过阅读⼤量的⽂献资料⽽汇总乳酸脱氢酶同⼯酶在临床上的研究成果。
主要介绍了乳酸脱氢酶同⼯酶的性质以及其与各种疾病的诊断，以便乳酸脱氢酶同⼯酶在临床上得到更好的应⽤，更好地为病⼈服务。
关键词：乳酸脱氢没、同⼯酶、应⽤乳酸脱氢酶是糖醉解途径中⼀种重要的酶。
它可逆地催化下述反应：乳酸+辅酶Ⅰ在乳酸脱氢没的催化下可逆⽣成丙酮酸+还原酶Ⅰ1959年Markert（1）发现⽜⼼乳酸脱氢没（LDH）结晶经淀粉胶电泳，可分成五条区带，⾸先提出了“同⼯酶”的概念。
同⼯酶⼀般指在同⼀种属内, 能催化同⼀底物进⾏相同反应⽽分⼦结构和理化性质不同的酶。
⼀、LDH 同⼯酶的分布、组成和性质LDH ⼴泛分布于动物各种组织、植物和微⽣物之中。
⼈体以肾含量最⾼, ⼼肌、⾻骼肌次之, 红细胞的LDH 含量约为正常⼈⾎清的100 倍。
电泳法可将⼈和动物组织LDH 分离成五种同⼯酶。
靠近阳极⼀端的称LDH1 , 靠近阴极⼀端的称LDH5。
其余三种, 从阳极到阴极依次命名为LDH2 、LDH3和LDH 4。
⼈⼼肌、肾和红细胞以LDH1和LDH2 最多, 肝和⾻骼肌以LDH5 和LDH4 最多, 脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等以LDH3最多。
这说明LDH同⼯酶的分布有明显的组织特异性。
LDH 同⼯酶的分⼦量都在140,000 左右,实验证明都是由四个亚单位组成的四聚体（表1）表⼀ LDH同⼯酶的亚单位组成为什么不同组织的LDH同⼯酶谱不同呢？主要是因为A、B两种亚单位的含量不同, ⼈⾻骼肌和肝细胞的A∶B为10∶1, ⽽⼈⼼肌为1∶20，肾为1∶10。
A亚单位和B 亚单位的⽣物合成分别受染⾊体上LDHA和 LDHB基因单位点的控制, 实验证明, ⼈LDHA位点位于第11 号染⾊体上, LDHB位点位于第12号染⾊体上（2）。
乳酸脱氢酶同工酶
胰蛋白酶 (Trypsin in Pancreas)
一级结构
胰凝乳蛋白酶的活性中心
空间结构
活性中心
酶分子中的化学基团：
结合基团：结合底物
活性中心内
必需
催化基团：催化底物转变成产物
基团
所有
活性中心外的必需基团：维持酶空间构象等
• 骨骼肌中：主要是 LDH5 ，对 NADH 亲和力大，不易 受丙酮酸抑制，作用是使丙酮酸还原生成乳酸，有利 于骨骼肌产生乳酸。
肌酸激酶（ creatine kinase－CK ) 同工酶 ：
二聚体酶，两种亚基：
肌型（M型） 脑型（B型）
脑中含 CK1 ( BB型 ) 心肌中含 CK2 ( MB型 ) 骨骼肌中含 CK3 ( MM型 ) 血清CK2活性的测定对于早期诊断心肌梗死有一定意义 。
3.特点
⑴ 由于分子结构差异，具有不同的电泳速度 ：由1→5 递减。
⑵ 对同一底物表现不同的 Km 值。 ⑶ 单个亚基无酶的催化活性。 ⑷ LDH 同工酶在不同组织器官中的含量与分布比例不同，
使不同组织与细胞具有不同的代谢特点。
• 心肌中：主要是 LDH1，对 NAD＋有较大亲和力，易受 丙酮酸抑制，作用是使乳酸脱氢生成丙酮酸，便于心 脏利用乳酸氧化供能。
（五）生理及临床意义
1．在代谢调节上起着重要的作用； 2．用于解释发育过程中阶段特有的代谢特征； 3．同工酶谱的改变有助于对疾病的诊断； 4．同工酶可以作为遗传标志，用于遗传分析研究。
酶
活
心肌梗死酶谱
性
正常酶谱 肝病酶谱
12 3 45
第四章实验五乳酸脱氢酶_LDH_同工酶的分离纯化
NAD+：10 mL NBT：10 mL PMS：2 mL 0.5 M PH7.6 Tris-HCl: 15 mL 0.5 M乳酸钠：15 mL 0.1NaCl：5 mL 去离子水：43 mL
共计100 mL
四、实验操作
1.样品处理：1 g 组织切碎，加 pH 7.4 Tris-HCl缓 冲液10 mL，匀浆，10,000 g ，4℃，离心10 min，上
离子交换剂结构：以Sephadex-QAE A-50为例
葡聚糖 -N+(CH3)3 –Cl基质 功能基团 平衡离子
电荷基团 反离子
离子交换剂的种类
1 按基质种类不同： 离子交换树脂，离子交换纤维素，离子交换凝胶等
2 按功能基团不同： 强酸型 含磺酸基团 (R-SO3H)， 中等酸型 含磷酸基团 (-O-PO2H4) 弱酸型 含酚基、羧基 强碱型 含季胺基团 [-N+(CH3)3]，弱碱型 含叔胺、伯胺基团[-N(CH3)2] 3 按平衡离子的性质不同：
ABC
D
E
A280
5 10 15 20 25 30 35 40 50
洗脱体积
4.聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定：活性电泳 只做分离胶，胶倒好直接插上试样梳，进行聚合
编号 1 2 3 4 5
总体积
溶液名称 30% Acr –0.8% Bis pH 8.9 Tris -HCl TEMED 10% AP H2O
三、实验试剂
1、20 mM Tris-HCl，pH 7.4缓冲液； 2、A液: 20 mM Tris-HCl，pH 6.3缓冲液 3、B液: A液含60 mM NaCl 4、C液: A液含100 mM NaCl 5、D液: A液含150 mM NaCl 6、E液: A液含240 mM NaCl 7、QAE-Sephadex A-50准备：取1克QAE-Sephadex A-50于烧杯中加入100 mL A
乳酸脱氢酶;肌酸激酶;肌酸激酶同工酶
乳酸脱氢酶、肌酸激酶和肌酸激酶同工酶是人体生理过程中不可或缺的重要酶类。
它们在能量代谢、肌肉损伤和疾病诊断等方面发挥着重要的作用。
本文将分别从乳酸脱氢酶、肌酸激酶和肌酸激酶同工酶的功能、结构及临床应用等方面进行介绍和探讨。
一、乳酸脱氢酶1.功能乳酸脱氢酶（LDH）是一种存在于细胞质中的酶，它参与了乳酸的代谢过程。
在有氧环境下，LDH将乳酸转化为丙酮酸，从而释放出能量。
而在缺氧环境下，LDH则参与乳酸的产生过程，帮助细胞维持能量代谢的平衡。
2.结构LDH是由四个亚基构成的四聚体蛋白质，这四个亚基可以分为两种类型：M亚基和H亚基。
在人体中，有5种不同的亚基组合形式，它们分别存在于不同的组织和细胞中。
3.临床应用LDH在临床上是一个重要的生化指标，它可以用于辅助诊断心肌梗死、溶血性贫血、癌症和肝脏疾病等疾病。
通过LDH的测定，可以帮助医生判断疾病的严重程度、进行病情的监测和评估治疗效果。
二、肌酸激酶1.功能肌酸激酶（CK）是一种主要存在于肌肉组织中的酶，它参与了肌肉中肌酸磷酸酶系统的能量代谢过程。
在肌肉受损或缺氧的情况下，肌酸激酶会被释放到血液中，因此成为了一种用于诊断和监测肌肉损伤的生化指标。
2.结构肌酸激酶是一个由两个亚基构成的二聚体酶，这两个亚基分别被称为B亚基和M亚基。
在人体中，有三种不同类型的肌酸激酶异构体，它们分别被称为CK-MM、CK-MB和CK-BB。
3.临床应用在临床实践中，CK的测定常用于评估心肌梗死、肌肉疾病、运动损伤、中风和肝脏疾病等疾病。
通过监测血清中CK水平的变化，可以帮助医生对患者的病情进行评估和诊断。
三、肌酸激酶同工酶1.功能肌酸激酶同工酶（CK-M）是肌酸激酶中的一种同工酶，与肌酸激酶具有相似的生物学功能和结构。
它主要存在于心肌组织和脑组织中，因此也被用作评估心肌和脑组织损伤的生化指标。
2.结构肌酸激酶同工酶和肌酸激酶有着相似的二聚体结构，但其在组织分布和生物学特性上有所不同。
组织ldh检测方法
组织ldh检测方法
乳酸脱氢酶同工酶（LDH）检测方法包括电泳法、离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法等，但迄今最好的和用得最多的是电泳法。
具体操作如下：
1. 将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
2. 吸去培养液，用PBS液洗涤一次。
换新鲜培养液（推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液），将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养液孔（背景空白对照孔），未经药物处理的对照细胞孔（样品对照孔），未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞孔（药物处理样品孔），并做好标记。
按照实验需要给予适当药物处理（如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，
不同处理时间，对照孔中需加入适当的药物溶剂对照），继续按常规培养。
到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供的LDH释放试剂，加入量为原有培
养液体积的10%。
加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育。
3. 到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。
分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
4. 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
混匀，室温（约25℃）避光孵育30min（可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动）。
然后在490nm处测定吸光度。
使用600nm或大于600nm的任一波长作为参考波长进行双波长测定。
以上信息仅供参考，具体操作建议咨询专业人士。
乳酸脱氢酶是同工酶
乳酸脱氢酶是同工酶乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，简称LDH）是一种广泛存在于动物、植物和微生物中的酶，它在细胞内起着重要的生物催化作用。
乳酸脱氢酶是一类同工酶，即存在多个亚单位组成的异构体。
不同亚单位的组合形式决定了乳酸脱氢酶的组织特异性和催化活性。
乳酸脱氢酶的功能是将乳酸氧化为丙酮酸，同时还能将丙酮酸还原为乳酸。
这个反应在许多生物体代谢过程中都扮演着重要角色。
乳酸脱氢酶在有氧条件下主要起到将乳酸氧化为丙酮酸的作用，而在无氧条件下则起到将丙酮酸还原为乳酸的作用，从而维持细胞内的氧化还原平衡。
乳酸脱氢酶的同工酶分为LDH-1、LDH-2、LDH-3、LDH-4和LDH-5五个亚型。
它们的组织分布和催化活性有所不同。
在人类和其他哺乳动物中，LDH-1主要分布在心肌和红细胞中，LDH-5主要分布在肝脏和骨骼肌中，而LDH-2、LDH-3和LDH-4则分布在其他组织中。
这种组织特异性的分布使得乳酸脱氢酶的同工酶在临床诊断和疾病监测中具有重要的意义。
乳酸脱氢酶同工酶的产生与基因表达密切相关。
人体中的乳酸脱氢酶基因编码了五个亚单位，它们的组合形式决定了同工酶的种类。
这些基因的表达受到多种调控机制的影响，包括转录因子的作用、DNA甲基化和组蛋白修饰等。
许多疾病也会影响乳酸脱氢酶同工酶的表达和活性，因此乳酸脱氢酶同工酶的检测在临床上具有一定的价值。
乳酸脱氢酶同工酶的测定方法主要有电泳法、免疫学方法和生物化学法等。
其中，电泳法是最常用的方法之一。
通过电泳分离乳酸脱氢酶同工酶，可以得到不同亚型的相对含量，并进一步判断患者的疾病情况。
免疫学方法则是利用抗体与乳酸脱氢酶结合，通过检测抗原-抗体反应来测定同工酶的活性。
生物化学法则是利用乳酸脱氢酶催化乳酸和丙酮酸之间的转化反应，通过测定反应物和产物的浓度变化来计算乳酸脱氢酶的活性。
乳酸脱氢酶同工酶在临床上具有较高的敏感性和特异性，可作为某些疾病的辅助诊断指标。
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乳酸脱氢酶同工酶
乳酸脱氧酶有5种同工酶形式，即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5，可用电泳法进行分离。
人体心肌、肾、红细胞以LDH1和LDH2为最多。
肝和横纹肌则以LDH4和LDH5为主。
脾、胰、甲状腺、肾上腺中LDH3较多。
乳酸脱氢酶同工酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的指标之一。
一、正常值
琼脂糖电泳法：LDH2＞LDH1＞LDH3＞LDH4＞LDH5
二、临床意义
(1)、乳酸脱氢酶同工酶结果要与临床症状结合才能做出准确判断。
(2)、LDH1和LDH2升高，且LDH1/LDH2>1见于：急性心肌梗死、溶血性贫血、急性镰刀型红细胞贫血、巨幼红细胞贫血等恶性贫血。
急性肾皮质坏死及各种血管内外溶血症(若无LDH1升高，可排除溶血性贫血)。
(3)、LDH5升高：骨骼肌炎症、损伤及退化、肝损伤(肝硬变、肝炎、肝过度充血)、癌。
(4)、单纯LDH1升高：细菌性细胞瘤(如，畸胎瘤、睾丸细胞瘤及卵巢坏死性细胞瘤)。
(5)、总LDH升高而同工酶谱正常见于：心脏病、肝病、骨骼肌病、瘤及其他功能性失调症。
对部分癌症患者LDH值越高，预后越不良。
(6)、LDH2、LDH3及LDH4均升高：大量血小板破坏(如：肺栓塞、大量输血等)、淋巴系统疾病(如：传染性单核细胞增多症、淋巴瘤及淋巴性白血病等)。
三、注意事项
(1)、溶血可使LDH1/LDH2失去意义。
(2)、LDH同工酶分布有组织差异性。
①LDH1：心肌(占酶总量50%以上)>肾>胰腺>膈肌>红细胞。
②LDH5：肝(占酶总量50%以上)>皮肤>骨髓>关节滑液>白细胞>血小板>胆汁。
③LDH3：肺>脾>脑>肠>淋巴液>内分泌腺。
④LDHX(或LD-C2)由成熟睾丸合成，为精子独有，据认为LDHX很可能是乙醇脱氢酶。
⑤LDH的H亚基突变频度比M亚基高，黑人比白人高且有家族性。
H1和M1与H、M性质不同，故电泳谱上可出现复带。