生化考试复习题汇总及答案整理
生物生化考试题及答案
生物生化考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 细胞内负责合成蛋白质的细胞器是：A. 线粒体B. 高尔基体C. 内质网D. 核糖体答案：D2. 下列哪项不是酶的特性？A. 高效性B. 专一性C. 可逆性D. 催化性答案：C3. DNA复制过程中，新链的合成方向是：A. 5'到3'B. 3'到5'C. 双向D. 随机答案：A4. 光合作用中，光反应和暗反应的主要区别在于：A. 是否需要光照B. 是否产生氧气C. 是否消耗ATPD. 是否产生葡萄糖答案：A5. 下列哪项不是细胞周期的阶段？A. G1期B. S期C. G2期D. G0期答案：D6. 细胞凋亡的调控机制不包括：A. 内源性途径B. 外源性途径C. 细胞自噬D. 线粒体途径答案：C7. 蛋白质合成过程中，终止密码子不编码：A. 氨基酸B. 终止因子C. 转运RNAD. 核糖体答案：A8. 细胞膜上的糖蛋白的主要功能是：A. 细胞识别B. 细胞间物质交换C. 细胞间信号传递D. 细胞间结构支持答案：A9. 细胞呼吸过程中，产生ATP最多的阶段是：A. 糖酵解B. 柠檬酸循环C. 电子传递链D. 氧化磷酸化答案：D10. 遗传信息的流动方向是：A. DNA → RNA → 蛋白质B. RNA → DNA → 蛋白质C. 蛋白质→ RNA → DNAD. DNA → 蛋白质→ RNA答案：A二、填空题（每空1分，共20分）1. 细胞周期包括____、____、____和____四个阶段。
答案：G1期、S期、G2期、M期2. 真核细胞中，DNA复制主要发生在____。
答案：细胞核3. 光合作用中，光能被____捕获，并通过____转化为化学能。
答案：叶绿素、光合色素4. 细胞凋亡是由____控制的程序性细胞死亡过程。
答案：基因5. 蛋白质合成的起始密码子是____。
答案：AUG6. 细胞膜的流动性主要依赖于____的存在。
生化期末考试题库及答案
生化期末考试题库及答案一、选择题1. 酶的催化作用主要依赖于：A. 酶的浓度B. 酶的活性中心C. 底物的浓度D. 酶的分子量答案：B2. 以下哪种物质不属于核酸？A. DNAB. RNAC. 胆固醇D. 脂多糖答案：C3. 细胞呼吸过程中，产生能量最多的阶段是：A. 糖酵解B. 丙酮酸氧化C. 三羧酸循环D. 电子传递链答案：D二、填空题4. 蛋白质的四级结构是指由多个多肽链通过_________相互连接形成的结构。
答案：非共价键5. 细胞膜的流动性主要归功于其组成成分中的_________。
答案：磷脂分子三、简答题6. 简述糖酵解过程中产生的ATP与氧气无关的原因。
答案：糖酵解是细胞内葡萄糖分解产生能量的过程，它不依赖于氧气。
在糖酵解的第一阶段，葡萄糖被磷酸化为葡萄糖-6-磷酸，这个过程消耗了两个ATP分子。
在第二阶段，两个3碳的丙酮酸分子被产生，同时产生了4个ATP分子。
因此，糖酵解过程总共产生了2个ATP分子，这个过程是厌氧的，不需要氧气参与。
7. 描述DNA复制的基本过程。
答案：DNA复制是一个半保留的过程，首先需要解旋酶将双链DNA解旋成两条单链。
随后，DNA聚合酶识别模板链并沿着模板链合成新的互补链。
新的链以5'至3'方向合成，而模板链则以3'至5'方向。
复制过程中，原始的两条链作为模板，每条链合成一条新的互补链，最终形成两个相同的DNA分子。
四、计算题8. 如果一个细胞在有氧呼吸过程中消耗了1摩尔葡萄糖，计算该细胞释放的能量（以千卡为单位）。
答案：有氧呼吸过程中，1摩尔葡萄糖可以产生38摩尔ATP。
每摩尔ATP水解释放的能量为7.3千卡。
因此，1摩尔葡萄糖通过有氧呼吸产生的总能量为：38摩尔ATP × 7.3千卡/摩尔ATP = 277.4千卡。
五、论述题9. 论述细胞周期的四个阶段及其在细胞生长和分裂中的作用。
答案：细胞周期包括四个阶段：G1期、S期、G2期和M期。
生物化学检验复习题(含答案)
生物化学检验复习题（含答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、以NAD+还原成NADH反应为基础的生化分析,采用的波长及吸光度变化为A、340nm,从小到大B、340nm,从大到小C、405nm,从小到大D、405nm,从大到小E、280nm,从小到大正确答案：A2、可作为甲状腺功能紊乱治疗后的停药指标的是A、甲状腺自身抗体试验B、T3抑制试验C、血清总三碘甲状腺原氨酸测定D、血清总甲状腺素测定E、促甲状腺激素测定正确答案：C3、参与胆固醇的逆向转运的脂蛋白是A、CMB、VLDLC、LDLD、HDLE、IDL正确答案：D4、常用的铁代谢检测指标不包括A、转铁蛋白B、血淸铁C、骨髄细胞内铁D、血清总铁结合力E、血清铁蛋白正确答案：C5、"患儿男，9岁。
水肿、血尿10天，进行性少尿8天，10天前晨起发现双眼睑水肿，尿色发红。
8天前尿色变浅，但尿量进行性减少。
查体：T36.9℃，R24次/分，BP145/80mmHg，发育正常，营养中等，重病容，精神差，结膜稍苍白，巩膜无黄染。
化验尿蛋白(++)，镜检白细胞(+)/HP、红细胞(++)/HP，补体C0.48g/L，ASO800IU/L。
"少尿"是指24小时尿量少于 A.17ml B.100ml C.400ml D.500ml E.800ml"A、17mlB、100mlC、400mlD、500mlE、800ml正确答案：C6、评价胰岛B细胞生成和分泌胰岛素能力的是A、C肽B、醛固酮C、肾上腺素D、糖化血红蛋白E、胰岛素增敏剂正确答案：A7、患者男,50岁。
骤发剧烈腹痛,初起时剑突下偏右呈发作性胀痛,迅速波及全腹,呈持续性,并向腰背放射伴恶心、呕吐。
体温39°C,全腹膨隆伴明显肿大,尤以胰头、胰体明显。
血红蛋白97g/L,白细胞20x10^9/L,AST211U/L,BUN9.9mmol/L,AMY1920U/L,Ca1.75mmol/L。
生化复习题答案
生化复习题答案一、选择题1. 酶的催化作用机制是什么？A. 酶可以降低反应的活化能B. 酶可以提高反应的活化能C. 酶可以改变反应的平衡常数D. 酶可以改变反应的速率常数答案：A2. 以下哪个过程属于原核生物的基因表达调控？A. 转录后修饰B. 转录前修饰C. 转录过程中修饰D. 转录后剪接答案：B3. 细胞周期中，DNA复制发生在哪个阶段？A. G1期B. S期C. G2期D. M期答案：B二、填空题4. 细胞膜的主要成分是_______和_______。
答案：磷脂、蛋白质5. 糖酵解过程中，ATP的生成主要发生在_______阶段。
答案：糖酵解的后半阶段三、简答题6. 简述呼吸链的组成和功能。
答案：呼吸链是一系列电子传递体组成的复合体，位于线粒体内膜上。
它通过一系列氧化还原反应，将电子从NADH和FADH2传递至氧气，同时将能量转化为ATP。
7. 描述DNA复制的机制。
答案：DNA复制是一个半保留的过程，由DNA聚合酶催化。
首先，DNA双链被解旋酶解旋，形成复制叉。
接着，引物酶合成RNA引物，为DNA聚合酶提供起始点。
DNA聚合酶沿模板链合成新的DNA链，形成两个新的DNA双螺旋。
四、论述题8. 论述细胞凋亡与细胞坏死的区别。
答案：细胞凋亡是一种程序化的细胞死亡过程，它是由细胞内部的信号触发的，通常伴随着细胞结构的有序降解，不引起炎症反应。
而细胞坏死是一种非程序化的细胞死亡，通常由外部因素如缺氧、毒素等引起，细胞结构破裂，释放内容物，可能引起炎症反应。
五、计算题9. 如果一个细胞在培养中每30分钟分裂一次，那么在4小时内，这个细胞能分裂多少次？答案：4小时共有8个30分钟周期，因此细胞可以分裂8次。
六、实验设计题10. 设计一个实验来验证酶的专一性。
答案：实验设计可以包括以下步骤：a. 选择一种酶，例如淀粉酶。
b. 准备淀粉和非淀粉底物，如蔗糖。
c. 将淀粉酶分别加入两种底物中。
d. 观察并记录反应产物，淀粉酶应仅催化淀粉水解，而对蔗糖无催化作用。
生物化学复习题与参考答案
生物化学复习题与参考答案1、（）胰液中的蛋白水解酶最初以酶原形式存在的意义是A、保证蛋白质在一定时间内发挥消化作用B、有利于酶的自身催化C、保护自身组织D、促进蛋白酶的分泌E、抑制蛋白酶的分泌答案：C2、下列不属于水溶性维生素的是（）A、维生素EB、泛酸C、尼克酸D、叶酸E、维生素C答案：A3、下列物质氧化中哪个不需经NADH氧化呼吸链（）A、琥珀酸B、苹果酸C、β-羟丁酸D、谷氨酸E、异柠檬酸答案：A4、糖酵解的限速酶是( )A、磷酸化酶B、6-磷酸葡萄糖脱氢酶C、磷酸果糖激酶-1D、果糖二磷酸酶E、醛缩酶答案：C5、下列对NADPH功能的描述错误的是（）A、为合成代谢提供氢原子B、参与羟化反应C、使GSH保持还原型D、直接经电子传递链氧化供能E、参与脱氧核苷酸生成6、识别转录起始点的是( )A、核心酶B、dnaB 蛋白C、σ 因子D、RNA 聚合酶的α 亚基E、ρ 因子答案：C7、RNA合成的主要方式是（）A、复制B、转录C、逆转录D、翻译E、修复答案：B8、丙酮酸羧化酶是下列那种反应的限速酶（）A、糖的有氧氧化B、糖原合成C、糖酵解D、糖原分解E、糖异生答案：E9、下面关于体内生物转化作用的叙述哪一项是错的：（）A、结合反应主要在肾脏进行B、使非营养物生物活性降低或消失C、对体内非营养物质的改造D、可使非营养物溶解度增加E、使非营养物从胆汁或尿液中排出体外答案：A10、夜盲症是由于缺乏以下哪种维生素导致的（）A、VitDB、VitPPC、VitAD、VitB1E、VitK11、DNA双螺旋结构模型描述正确的是( )A、DNA双链的走向是反向平行B、碱基A与C之间可以配对C、碱基对之间通过共价键相连D、为一单链的螺旋结构E、DNA双螺旋结构模型是左手螺旋答案：A12、关于RNA，下列哪种说法是错误的( )A、mRNA中含有遗传密码B、有mRNA、tRNA和rRNAC、rRNA主要存在于细胞核中D、rRNA是蛋白质合成的部位E、tRNA含有稀有碱基答案：C13、酶促反应中决定酶专一性的是( )A、催化基团B、辅酶或辅基C、金属离子D、结合基团E、酶蛋白答案：E14、核酸对紫外光的最大吸收峰在（）处。
生化习题库(含答案)
生化习题库（含答案）一、单选题（共70题，每题1分，共70分）1、不能进行糖异生的物质是A、甘油B、生糖氨基酸C、脂肪酸D、丙酮酸E、乳酸正确答案：C2、糖类、脂类、氨基酸氧化分解时进入TAC的主要物质是A、乙酰CoAB、丙酮酸C、柠檬酸D、α-酮戊二酸E、乳酸正确答案：A3、生物体内氨基酸脱氨基的主要方式是A、氧化脱氨基B、嘌呤核苷酸循环C、转氨基D、联合脱氨基E、还原脱氨基正确答案：D4、关于水溶性维生素的叙述，错误的是A、在人体内只有少量储存B、每日必需通过膳食提供足够的数量C、易随尿液排出D、在人体内主要储存于脂肪组织E、当膳食供应不足时易导致人体出现相应的缺乏症正确答案：D5、除维生素VitB12外，下列哪种维生素缺乏也可引起巨幼红细胞性贫血A、泛酸B、生物素D、VitPPE、VitB1正确答案：C6、嘌呤核苷酸分解代谢的特征性产物是：A、乳酸B、β-羟丁酸C、α-酮酸D、尿酸E、丙酮酸正确答案：D7、全酶是指A、酶蛋白与辅助因子的结合物B、酶与抑制剂的复合物C、酶与抑制剂的复合物D、结构完整的酶E、酶与激活剂的复合物正确答案：A8、呼吸链中的酶是A、6-磷酸葡萄糖脱氢酶B、苹果酸脱氢酶C、丙酮酸脱氢酶D、NADH脱氢酶E、葡萄糖-6-磷酸酶正确答案：D9、糖酵解途径中的关键酶是A、果糖二磷酸酶-1B、6-磷酸果糖激酶C、HMGCoA还原酶D、磷酸化酶E、HMGCoA合成酶正确答案：B10、下列脂肪酸中属必需脂肪酸的是A、亚油酸C、硬脂酸D、油酸E、软脂酸正确答案：A11、酮体肝外氧化，原因是肝内缺乏A、乙酰乙酰CoA硫解酶B、乙酰辅酶A羧化酶C、HMGCoA裂解酶D、HMGCoA氧化酶E、HMGCoA还原酶正确答案：A12、测得患者某天蛋白质的摄入量为85g，通过尿液和粪便排出的氮量为12g，呈A、正氮平衡B、总氮平衡C、负氮平衡D、氮平衡E、蛋白质互补正确答案：A13、“peptide”一词的中文释义是：A、核酸B、肽C、生物化学D、氨基酸E、蛋白质正确答案：B14、关于脂溶性维生素的描述，正确的是A、易被消化道吸收B、体内不能储存C、过少或过多都可能引起疾病D、可在体内大量合成E、都是构成辅酶的成分正确答案：C15、核酸对紫外线的最大吸收峰在A、200nmB、340nmC、505 nmD、220nmE、260nm正确答案：E16、胆固醇和酮体合成的共同中间产物是A、HMGCoAB、β－羟丁酸C、琥珀酰-CoAD、磷酸二羟丙酮E、草酰乙酸正确答案：A17、蛋白质的一级结构及高级结构决定于A、亚基B、氢键C、分子和分子间的D、盐键E、氨基酸组成和顺序正确答案：E18、不属于初级结合型胆汁酸的是A、甘氨胆酸B、牛磺胆酸C、甘氨脱氧胆酸D、牛磺鹅脱氧胆酸E、甘氨鹅脱氧胆酸正确答案：C19、具有催化活性的物质是A、酶蛋白B、辅酶C、酶原D、同工酶E、煮沸的唾液正确答案：D20、含唾液淀粉酶的唾液透析后，水解淀粉能力下降，其原因是A、酶水解B、酶蛋白变性C、失去了Cl－D、失去了酶蛋白E、酶含量减少正确答案：C21、成熟红细胞的能量主要来源于A、磷酸戊糖途径B、酮体的氧化作用C、脂肪酸的氧化D、无氧氧化E、糖的有氧氧化正确答案：D22、足月儿，产钳助产，出生后数分钟出现惊厥，头颅CT判断为硬膜下出血，脑脊液检查压力增高，血性镜检见皱缩的红细胞。
生化考试复习题汇总及答案整理
⽣化考试复习题汇总及答案整理核酸化学及研究⽅法⼀、名词解释1.正向遗传学：通过研究突变表型确定突变基因的经典遗传学⽅法。
2.核⼩体组蛋⽩修饰：组成核⼩体组蛋⽩，其多肽链的N末端游离于核⼩体之外，常被化学基团修饰，修饰类型包括：⼄酰化、甲基化、磷酸化和泛素化，修饰之后会改变染⾊质的结构和活性。
3.位点特异性重组：位点特异性重组是遗传重组的⼀类。
这类重组依赖于⼩范围同源序列的联会，重组只发⽣在同源短序列的范围之内，需要位点特异性的蛋⽩质分⼦参与催化。
4.转座机制：转座酶上两个不同亚基结合在转座⼦的特定序列上，两个亚基靠在⼀起形成有活性的⼆聚体，切下转座⼦，转座酶-转座⼦复合物结合到靶DNA上，通过转座酶的催化将转座⼦整合到新位点上。
5.基因敲除：利⽤DNA同源重组原理，⽤设计的外源同源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的靶基因发⽣重组，从⽽将外源DNA整合到受体细胞的基因组中，产⽣精确的基因突变，完成基因敲除。
6.Sanger双脱氧终⽌法：核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧碱基存在的条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按⽐例引⼊四种双脱氧碱基，若双脱氧碱基掺⼊链端，该链便停⽌延长，若单脱氧碱基掺⼊链端，该链便可继续延伸。
如此每管反应体系中便合成了以共同引物为5’端，以双脱氧碱基为3’端的⼀系列长度不等的核酸⽚段。
反应终⽌后，分四个泳道进⾏电泳，以分离长短不⼀的核酸⽚段（长度相邻者仅差⼀个碱基），根据⽚段3’的双脱氧碱基，便可依次阅读合成⽚段的碱基排列顺序。
7.荧光实时PCR技术原理探针法：TaqMan探针是⼀⼩段可以与靶DNA序列中间部位结合的单链DNA，它的5’和3’端分别带有⼀个荧光基团，这两个荧光基团由于距离过近，相互发⽣淬灭，不产⽣绿⾊荧光。
PCR反应开始后，靶DNA变性，产⽣单链DNA，TaqMan探针结合到与之配对的靶DNA序列上，之后被Taq DNA聚合酶切除降解，从⽽解除荧光淬灭，荧光基团在激发光下发出荧光，最后可根据荧光强度计算靶DNA的数量。
生化试题及答案
生化试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 以下哪种酶是DNA聚合酶？A. 核糖核酸酶B. 脱氧核糖核酸酶C. 逆转录酶D. DNA聚合酶答案：D2. 蛋白质合成过程中，氨基酸的活化发生在哪个细胞器？A. 核糖体B. 线粒体C. 内质网D. 高尔基体答案：C3. 以下哪种物质不是糖酵解的中间产物？A. 葡萄糖-6-磷酸B. 果糖-1,6-二磷酸C. 丙酮酸D. 柠檬酸答案：D4. 以下哪种维生素是辅酶A的组成部分？A. 维生素AB. 维生素B1C. 维生素B2D. 维生素B5答案：D5. 以下哪种氨基酸是必需氨基酸？A. 丙氨酸B. 甘氨酸C. 亮氨酸D. 丝氨酸答案：C6. 以下哪种物质是细胞膜的主要组成成分？A. 胆固醇B. 核酸C. 蛋白质D. 糖原答案：A7. 以下哪种物质是三羧酸循环中的关键中间产物？A. 柠檬酸B. 丙酮酸C. 果糖-1,6-二磷酸D. 葡萄糖-6-磷酸答案：A8. 以下哪种氨基酸含有硫原子？A. 赖氨酸B. 色氨酸C. 半胱氨酸D. 苏氨酸答案：C9. 以下哪种酶是DNA复制过程中的引物酶？A. DNA聚合酶B. 逆转录酶C. 拓扑异构酶D. 引物酶答案：D10. 以下哪种物质是细胞呼吸的最终电子受体？A. 氧气B. 二氧化碳C. 水D. 丙酮酸答案：A二、填空题（每题2分，共20分）1. 核酸根据五碳糖的不同可以分为______和______。
答案：脱氧核糖核酸（DNA）；核糖核酸（RNA）2. 蛋白质的一级结构是指______的线性排列顺序。
答案：氨基酸3. 糖酵解过程中，NAD+被还原成______。
答案：NADH4. 三羧酸循环中，柠檬酸合成酶的底物是______和______。
答案：乙酰辅酶A；草酰乙酸5. 脂肪酸的合成过程中，需要______的参与。
答案：ATP6. 细胞色素C是______链中的一个关键电子传递体。
答案：电子传递7. 核糖体是由______和______组成的。
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核酸化学及研究方法一、名词解释1.正向遗传学：通过研究突变表型确定突变基因的经典遗传学方法。
2.核小体组蛋白修饰：组成核小体组蛋白，其多肽链的N末端游离于核小体之外，常被化学基团修饰，修饰类型包括：乙酰化、甲基化、磷酸化和泛素化，修饰之后会改变染色质的结构和活性。
3.位点特异性重组：位点特异性重组是遗传重组的一类。
这类重组依赖于小范围同源序列的联会，重组只发生在同源短序列的范围之内，需要位点特异性的蛋白质分子参与催化。
4.转座机制：转座酶上两个不同亚基结合在转座子的特定序列上，两个亚基靠在一起形成有活性的二聚体，切下转座子，转座酶-转座子复合物结合到靶DNA上，通过转座酶的催化将转座子整合到新位点上。
5.基因敲除：利用DNA同源重组原理，用设计的外源同源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的靶基因发生重组，从而将外源DNA整合到受体细胞的基因组中，产生精确的基因突变，完成基因敲除。
6.Sanger双脱氧终止法：核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧碱基存在的条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧碱基，若双脱氧碱基掺入链端，该链便停止延长，若单脱氧碱基掺入链端，该链便可继续延伸。
如此每管反应体系中便合成了以共同引物为5’端，以双脱氧碱基为3’端的一系列长度不等的核酸片段。
反应终止后，分四个泳道进行电泳，以分离长短不一的核酸片段（长度相邻者仅差一个碱基），根据片段3’的双脱氧碱基，便可依次阅读合成片段的碱基排列顺序。
7.荧光实时PCR技术原理探针法：TaqMan探针是一小段可以与靶DNA序列中间部位结合的单链DNA，它的5’和3’端分别带有一个荧光基团，这两个荧光基团由于距离过近，相互发生淬灭，不产生绿色荧光。
PCR反应开始后，靶DNA变性，产生单链DNA，TaqMan探针结合到与之配对的靶DNA序列上，之后被Taq DNA聚合酶切除降解，从而解除荧光淬灭，荧光基团在激发光下发出荧光，最后可根据荧光强度计算靶DNA的数量。
染料法：荧光染料（如SYBR GreenⅠ）能与双链DNA发生非序列特异性结合，并激发出绿色荧光。
PCR反应开始后，随着DNA的不断延伸，结合到DNA上的荧光染料也相应增加，被激发产生的荧光也相应增加，可根据荧光强度计算初始模板的数量。
8.双分子荧光互补(BiFC)技术原理将荧光蛋白在某些特定的位点切开，形成不发荧光的N片段和C片段。
这2个片段在细胞内共表达或体外混合时，不能自发地组装成完整的荧光蛋白，不能产生荧光。
但是，当这2个荧光蛋白的片段分别连接到一组有相互作用的目标蛋白上，在细胞内共表达或体外混合这两个目标蛋白时，由于目标蛋白质的相互作用，荧光蛋白的2个片段在空间上互相靠近互补，重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，并在该荧光蛋白的激发光激发下，发射荧光。
简言之，如果目标蛋白质之间有相互作用，则在激发光的激发下，产生该荧光蛋白的荧光。
反之，若目标蛋白质之间没有相互作用，则不能被激发产生荧光。
二.问答题：1.怎样将一个基因克隆到pET32a载体上；原核表达后，怎样纯化该蛋白？2.通过哪几种方法可以获得cDNA的全长？简述其原理。
（一）已知序列信息1.同源序列法：根据基因家族各成员间保守氨基酸序列设计简并引物，利用简并引物进行RT-PCR扩增，得到该基因的部分cDNA序列，然后再利用RACE（cDNA末端快速扩增技术）获得cDNA全长。
2.功能克隆法：cDNA文库；基因组文库（二）未知序列信息：1.基于基因组DNA的克隆：是在鉴定已知基因的功能后，进而分离目标基因的一种方法。
(1)图位克隆；（2）T-DNA标签法和转座子标签法3.什么是DNA探针、种类及标记的方法有哪些？DNA探针：人工合成的带有放射性或生物素标记的单链 DNA 片段，它能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂交后可用特殊方法检测。
探针种类：⑴基因组DNA探针：它是某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列；⑵cDNA探针：以mRNA为模板经逆转录酶催化产生的互补于mRNA的DNA链；⑶RNA探针：以DNA两条链中的任意一条为模板转录生成RNA；⑷寡核苷酸探针：人工合成的碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段。
探针标记方法：⑴随机引物法：寡核苷酸引物与已变性的DNA单链结合，在大肠杆菌DNA聚合酶I 的Klenow片段作用下，以同位素标记的dNTP为原料，从3'-OH端开始沿5'至3'方向延伸，合成一条与模板互补的新DNA链。
⑵切口平移法：利用微量的胰DNA酶Ⅰ使待标记的双链DNA分子产生若干切口，然后利用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的5'→3'外切酶活性从切口的5'端除去核苷酸;同时利用该酶5'→3'的聚合酶活性将反应体系中的核苷酸底物连接到切口的3'羟基末端。
由于切去核苷酸的同时又在切口的3'端补上核苷酸,从而使切口沿着DNA链移动,此时若反应体系中含有标记的核苷酸，它们就会掺入到新合成的链中，获得带有标记的DNA探针。
⑶末端标记法：分为5'端标记法和3'端标记法。
5'端标记法：用碱性磷酸酶切除DNA双链分子或RNA单链5'末端的磷酸基团，使其成为5'-OH，然后经T4噬菌体多苷酸激酶催化，将（ATP-γ35S）γ位上的35S转移到DNA或RNA分子的5'-OH末端，使DNA片段5'端带有35S标记。
3'端标记法：利用TdT 在DNA的3'末端掺入SH-GTP，因-SH不稳定，常用顺丁烯二酰亚胺进行偶联反应4.哪些方法可以检测转录水平(mRNA水平)的表达差异？简述原理。
1.Northern印迹杂交。
原理：基因若能正常表达，细胞内会有特异mRNA的生成。
将提取的mRNA用变性凝胶电泳分离，不同的mRNA分子将按分子质量大小依次排布在凝胶上，之后将他们原位转移到固定膜上，在适宜的离子强度及温度条件下，将DNA探针与特异mRNA进行杂交，杂交带的宽度越宽和亮度越大，表明mRNA的表达水平越高。
2.荧光实时定量PCR。
原理：基因若能正常表达，细胞内会有特异mRNA的生成。
将提取的mRNA逆转录成cDNA，补齐成双链DNA后，在具有荧光探针的体系中进行PCR。
荧光强度越高，表明cDNA量越多，也就表明mRNA 的表达水平越高。
3.RT-PCR。
原理：将一条mRNA链逆转录成为cDNA，补齐成双链DNA后，通过PCR进行DNA扩增，将扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，根据条带的有无，确定某种mRNA表达与否。
4.基因芯片:原理：将大量已知序列的核酸片段集成在同一基片上，组成密集分子排列的基因芯片，然后用mRNA 反转录出的cDNA与已知核酸片段进行杂交，根据杂交信号的强弱，检测出mRNA表达水平的高低。
5.试述绿色荧光蛋白的结构特征及其在分子生物学中的应用。
绿色荧光蛋白的结构特征：荧光蛋白具有238个氨基酸残基，其中央是一个圆柱形水桶样结构，长420nm，宽240nm，三维结构由11个反向平行的β-折叠环绕成1个桶状结构，一个较长的α-螺旋从桶的中心穿过，这些β-折叠和α-螺旋之间通过Loop环连接起来。
GFP的发色团位于桶中心的α-螺旋上，由荧光蛋白通过自体催化，将3个氨基酸残基Ser65-Tyr66-Gly67进行环化。
GFP蛋白在分子生物学中的应用：1.GFP作为报告基因用于转基因研究；2.GFP作为报告蛋白用于基因表达调控效果的研究；3.GFP融合蛋白用于研究蛋白质的定位、迁移和相互作用；4.CFP用于对细胞的追踪。
6.试述RNA沉默的机理及其应用。
RNA沉默的机理：将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的dsRNA导入细胞后，dsRNA会被一种名为Dicer的酶识别，并将dsRNA加工成21nt的小片段。
之后，这些小片段与RNA沉默复合体（RISC）结合，RISC除去其中一条链，留下另一条链与自己结合在一起。
接着，RISC寻找与自己携带的RNA 匹配的mRNA分子，一旦发现，就会与该mRNA结合，发生特异性的降解，导致产生相应的基因沉默。
RNA沉默的应用：⑴基因消减：利用RNAi会降低或停止目标基因的表达；⑵作物品质改良；⑶产生抗病毒植物：植物可利用PTGS（转录后基因沉默）来抵抗病毒侵染。
7.试述CRISPR/Cas系统结构、CRISPR/Cas技术的原理及应用？CRISPR/Cas系统结构：它包括一个前导区、多个短而高度保守的重复序列区、多个间隔区以及一系列与CRISPR相关的蛋白的基因cas。
细菌体内CRISPR/Cas作用原理：（1）CRISPR的高度可变的间隔区的获得：外来入侵的噬菌体或质粒DNA进入细菌体内后，它们的一小段DNA序列会被整合到宿主菌的基因组中，整合的位置位于CRRSPR的两个重复序列之间的间隔区。
（2）CRIPSR基因座的表达(包括转录和转录后的成熟加工)：CRISPR基因座被转录成前体pre-RNA，然后由tracrRNA(与pre-crRNA重复序列互补的序列)指导，在Cas蛋白或是核酸内切酶的作用下，pre-RNA被剪切成一些小的RNA单元，这些小RNA即为成熟crRNA。
（3）CRISPR/Cas系统发挥活性，对外源遗传物质的干扰：成熟的crRNA与特异的Cas蛋白形成核糖核蛋白复合物，再与外源DNA结合并扫描到外源DNA，寻找其上的靶序列，crRNA的间隔序列与靶序列互补配对，外源DNA在配对的特定位置被核糖核蛋白复合物切割。
CRISPR/Cas技术用于敲除基因原理：根据待敲除基因的上下游的DNA序列分别设计一条向导RNA（向导RNA1，向导RNA2），将向导RNA的基因（相当于是细菌间隔区的基因）与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中，转录加工后，向导RNA（相当于crRNA）与Cas9蛋白结合，之后通过碱基互补配对可以靶向PAM附近的目标序列，对目标序列进行切割，从而切断待敲除基因上下游的DNA双链，实现基因敲除。
CRISPR/Cas技术的应用：作为一种新的基因编辑技术，可以对动植物、微生物的基因进行修饰，具有多样的基因调控方式，例如敲除、插入、抑制、激活等。
8.哪几种方法可以检测蛋白质和DNA之间的相互作用，简述原理。
（1）酵母单杂交技术（yeast one-hybrid）技术原理：GAL4是酵母自身的转录因子，该蛋白质包括两个结构域：DNA结合结构域（BD）和转录激活结构域（AD），两结构域可完全独立地发挥作用，BD区负责与顺式作用元件的结合，AD区负责激活启动子。
利用这一特性，我们可以用酵母单杂交技术来检测蛋白质和DNA之间的相互作用。