放线菌检测
细菌 、放线菌 、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
放线菌的分离与筛选方法
放线菌的分离与筛选方法放线菌介于细菌和丝状真菌的一类丝状原核生物，多为腐生，少数寄生。
腐生型在自然界物质循环中起着重要作用。
放线菌突出特性产生抗菌素，常以孢子或菌丝状态存在，以土壤最多，常存在肥土农田土中性或偏碱性土壤中。
1.拮抗放线菌的筛选方法：1.1平板划线法：待测菌株与检测病原菌通用培养基制成平板，在平板中央划线接种待测菌株，28-30℃ 3-5d，将病原菌垂直方向划线于待测菌生长线的两侧，不能与待测菌相连，在37℃ 24h取出观察。
如果待测菌株对病原菌有抑制活性，病原菌靠近待测菌的一端生长会受到待测菌抑制产生抑菌带。
可根据抑菌带的长短来判断待测菌活性强弱。
选择抑制活性强的复筛。
1.2抑菌圈法或十字交叉法：常用的初筛方法将待测菌接种于平板，长出成熟菌落后，用打孔器将供试病原菌苔打成直径5-6mm小菌块，并将其移入到病原菌平板培养基中，将待测菌与病原菌呈十字交叉排列，即病原菌在中央，待测菌置于病原菌的四周，培养3-4d。
若有抑菌活性在待测菌周围形成一个没有生长病原菌抑菌圈。
若菌块厚度大小一致的，抑菌圈的大小可直观反应待测菌抑菌活性的强弱。
1.3纸片法或生长速率法：主要测定发酵液的抑菌活性，即将相同灭菌后的圆形滤纸片放于待测发酵液中，取出并黏贴在接种有病原菌的平板培养基，培养后观察有无抑菌圈或抑菌圈的大小。
2.放线菌分离与筛选.2.1培养基；2.1.1改良高1号：可溶性淀粉20g/L KH2PO40.5g/L NaC10.5g/L MgSO40.2-0.5g/L KNO3 1g/L FeSO40.01g/L 重铬酸钾（3%）3.3mL/L PH7.2-7.4（分离保存用）每100ml培养基加入1ml0.1℅的FeSO4溶液。
2.1.2淀粉培养基和秸秆腐解物培养基2.1.3拮抗试验培养基：高1号牛蛋 PDA改良培养基加3g牛肉膏2.2抑菌剂的选择：有效降低细菌真菌的数量，细菌扩散真菌蔓延速度迅速。
土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法
土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法微生物因为体积小、质量轻、适应性强、繁殖能力强等特点，广泛分布于自然界中。
它们存在于食品、化妆品、饲料、环境等人们能触及的各个角落中。
某些微生物对产品的污染，不仅影响到产品本身的质量，更严重的是它危及消费者的健康和安全。
科标检测研究院凭借多年的微生物检测经验，可提供快速、高效、权威的第三方微生物检测服务，赢得社会业内广泛认可。
主要针对食品、医药、化妆品、农产品、一次性产品以及工业产品等进行微生物检测以及产品微生物污染分析。
以下介绍几种菌的分离方法：一、从土壤中分离放线菌1.制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
2.称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。
振荡10分钟，制成10-1菌悬液。
按照连续稀释分离法，进一步制成10-3菌悬液。
3.用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。
然后将培养皿倒置于25-30℃温箱中，培养7-10天，培养基上会出现微生物菌落。
如果菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质紧密结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落。
4.挑取放线菌菌落，接种于斜面培养基上。
二、从土壤中分离霉菌1.制作豆芽汗葡萄糖培养基，并添加80%乳酸数滴，以抑制细菌生长。
将培养皿中，凝成平板，待用。
2.称取10克土壤，按上述分离放线菌的方法制成10-4或10-5的菌悬液。
3.取0.1毫升菌悬液注入培养皿内培养基上，用玻璃刮刀涂抹均匀。
然后将培养皿倒置于2 5-30℃温箱内培养3-4天。
培养基上会出现微生物菌落。
霉菌菌落常长成绒状、棉絮状或蜘蛛网状，可根据这一特征寻找霉菌菌落。
4.挑取培养皿内的霉菌菌落接种于斜面培养基上三、从饮水中分离大肠杆菌1.制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。
2.用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1:10稀释。
放线菌的分离和鉴定
放线菌的分离和鉴定放线菌的分离和鉴定实验器材：1.⼟壤材料 5 ---10cm 处⼟壤，放于采集袋中带回实验室。
2.培养基淀粉琼脂培养基（⾼⽒Ⅰ号培养基( w /v)）可溶性淀粉2%，KNO3 0. 1%，NaCL 0. 05%，K2HP04 0. 05%，MgSO4 0. 05%，FeSO4 0. 001%，琼脂2% 3.溶液和试剂（1) 20% ⽢油( 2) 0. 1%美蓝 A 液: 美蓝0. 3g ，95% ⼄醇300ml;B 液: 0. 01% KOH 100ml 混合A 和B 液即成⾰兰⽒染液3( 1) 结晶紫染⾊液: 甲液结晶紫2g，95% ⼄醇20ml;⼄液草酸铵0. 8g，蒸馏⽔80ml。
甲⼄液先分别溶解，然后混合在⼀起，过滤除去残渣后装⼊滴瓶中备⽤。
( 2) 碘液: 碘1g，碘化钾2 个，蒸馏⽔100ml 先取少量蒸馏⽔加⼊碘和碘化钾，使碘完全溶解后再加⼊全部蒸馏⽔，分装于滴瓶中备⽤。
( 3) 复红酒精溶液: 碱性复红0. 4g，95%⼄醇100ml，溶解装⼊滴瓶备⽤。
4.仪器和其他⽤品⽆菌纸、带玻璃珠的三⾓烧瓶、1ml⽆菌吸管、⽆菌试管、⽆菌培养⽫⼀.⽬的要求：1. 掌握倒平板的⽅法和常⽤分离纯化微⽣物的基本操作。
2. 初步观察⼟壤中放线菌菌落形态。
3. 初步了解掌握微⽣物分类的基本⽅法。
⼆.实验原理：放线菌在⾃然界中主要⽣存于陆地和淡⽔中，⼟壤为这类微⽣物的主要习居场所，⽆论在种类和数量上都⽐其他地⽅繁多。
在中性或偏碱性的⼟壤和有机质等丰富的⼟壤中较多。
放线菌以孢⼦和菌丝⽚段的形式存在于⼟壤，每克⼟壤内含有数万、数⼗万的孢⼦。
放线菌的⽣活史和形态特征放线菌的孢⼦和孢囊孢⼦在适宜的环境下吸收⽔分，膨胀萌发，⽣出芽管1 －3 个，芽管伸长长出分枝，分枝越来越多，形态菌丝体。
因其菌丝体在培养基内，即基内菌丝或称营养菌丝体。
基内菌丝体⼀般没有横隔，由于菌丝体长⼊培养基内和培养基表⾯，并纠缠在⼀起形成密集的菌落，所以⽤接种针将整个菌落培养基挑起⽽不破裂。
放线菌实验报告
放线菌实验报告放线菌实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于土壤和水体中的微生物，其具有重要的生物学意义和应用价值。
本次实验旨在通过对放线菌的培养、鉴定和抗菌活性测试，了解放线菌的特性和应用前景。
二、材料与方法1. 放线菌培养基的制备：将葡萄糖、酵母粉、肉膏粉、胰蛋白胨等按一定比例溶解于蒸馏水中，加热煮沸，倒入培养瓶中，待冷却后加入抗生素。
2. 放线菌的采集：在适宜的环境中采集土壤或水样，并将样品分装于离心管中。
3. 放线菌的分离：取适量样品并加入适量的生理盐水，摇匀后进行稀释，取适量稀释液分别均匀涂布于放线菌培养基上。
4. 放线菌的纯化：从培养基上挑选出单菌落，进行连续传代，直至获得纯种放线菌。
5. 放线菌的鉴定：通过形态特征、生理生化特性和分子生物学方法对放线菌进行鉴定。
6. 抗菌活性测试：采用平板扩散法或孔隙扩散法，将放线菌菌液或提取物涂布于琼脂平板上，观察抑菌圈的形成情况。
三、结果与分析经过培养和分离，我们成功获得了多个放线菌菌株。
在鉴定过程中，我们观察到这些放线菌菌株形态各异，有的呈现棕黄色，有的呈现淡黄色，有的呈现灰白色。
此外，通过生理生化特性的检测，我们发现这些放线菌菌株对某些碳源和氮源具有不同的利用能力。
进一步的分子生物学分析结果显示，这些放线菌菌株属于不同的物种。
在抗菌活性测试中，我们选取了几个放线菌菌株进行了评估。
结果显示，这些放线菌菌株对多种细菌具有一定的抑制作用。
其中，某一放线菌菌株对金黄色葡萄球菌表现出了较强的抗菌活性，形成了较大的抑菌圈。
这表明该放线菌菌株可能具有潜在的抗生素生产能力。
四、讨论与展望通过本次实验，我们成功地获得了多个放线菌菌株，并对其进行了鉴定和抗菌活性测试。
然而，由于时间和设备的限制，我们并未对放线菌的抗生素产物进行深入研究。
因此，未来可以进一步探索这些放线菌菌株的抗生素产物，并对其进行分离、纯化和结构鉴定，以期发现新的抗生素。
此外，放线菌不仅具有抗菌活性，还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗病毒物质等。
临床微生物与检验 第18章 放线菌
❖ 5.牛心脑浸液琼脂平板 直径0.03～0.06mm，蛛网状微 菌落。——有助于鉴定放线菌。
❖ 6.牛放线菌在牛心脑浸液琼脂培养基上 扁平、光滑、
边缘整，呈颗粒状微小菌落
菌落增大。
衣氏放线菌在厌氧血平板上粗糙型菌落a 衣氏放线菌在厌氧血平板上粗糙型菌落b 衣氏放线菌硫磺颗粒及压片
生化反应
衣氏放线菌与牛放线的生化特征
2.巴西诺卡菌—菌由外伤侵入皮下组织产 生慢性化脓性肉芽组织 。
诊断与治疗
１.标本：采集组织渗出液、痰、脊髓液或其他病理材料， 查找黄红或黑色颗粒 .
２.检验方法：
(1)
(2)
❖ 在患者病灶组织和脓样物质中可见黄色 小颗粒——硫磺颗粒（sulfur granule)， 是放线菌在组织中形成的菌落。将硫磺
衣氏放线菌（革兰染色）
培养特点
❖ 1.培养比较困难。厌氧或微需氧;初分离需CO2
❖ 2.葡萄糖肉汤
培养基底部形成灰白色球形小颗粒沉
淀物。
❖ 3.硫乙醇酸钠肉汤 下层形成白色或灰白色雪花样生长
❖ 4.血平板→灰白色/淡黄色粗糙而不规则的菌落，不溶血。
多次移种可形成光滑、柔软、白色、有光泽易于钩取的菌 落。
能使蔗糖变成胶状葡聚糖，附着于齿面、形成齿斑。 乳酸杆菌则在齿斑上进一步发酵蔗糖或其他食品中 的糖类产生乳酸。溶解齿质及法朗质中的磷酸钙， 使之脱钙，使其他细菌经牙质小管侵入牙髓，造成 牙根端脓肿等。最后形成龋齿
免疫性
放线菌病患者血清中可检 测到多种特异性抗体，但这种 抗体无诊断意义．机体对放线 菌的免疫主要靠细胞免疫．
❖ 短链诺卡菌(N.brevicatena)
❖ 鼻疽诺卡菌(N.farcinica)
❖ 肉色诺卡菌(N.carnea)
放线菌检测标准版本
微生物总数检测方法(放线菌）一、检测用培养基配方与培养条件1.培养基：高氏1号培养基配方：可溶性淀粉 2g ，KNO30.1g ，K2HPO4 0.05g ，MgSO4• 7H2O 0.05g ，NaCl0.05g ，FeSO4• 7H2O 0.001g （母液），琼脂 2g ，自来水 100mL 。
先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。
在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。
调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
2. 培养条件：温度：27℃-30℃；时间：36--48小时。
二、检测与计数方法1. 系列稀释称取适量的样品，加入带玻璃珠的三角瓶中，加入100mL的无菌水（无菌水中事先加入了分散剂1—2滴，分散剂可以是吐温，OP—10，用来分散菌团），用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后上旋转式摇床200 r/min充分振荡40—60 min，,即成母液菌悬液（基础液）。
2. 用1mL无菌移液管分别吸取1.0mL上述母液菌悬液加入9 mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:1×k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。
3. 加样及培养取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。
4. 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。
当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。
5. 菌落计数以出现20—150个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。
有效菌平均菌落数在20—150之间时，则以该菌落数计算。
放线菌的实验报告
放线菌的实验报告放线菌的实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，以其独特的形态和生物学特性而备受研究者的关注。
本实验旨在通过对放线菌的分离培养、形态观察和抗生素产生能力的检测，进一步了解放线菌的特点和应用潜力。
二、材料与方法1. 放线菌分离培养：将土壤样品取自自然环境中，加入到含有适宜培养基的培养皿中，进行稀释均匀。
然后将培养皿密封，置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，直至观察到单个菌落的形成。
2. 放线菌形态观察：取一颗单个菌落，用显微镜观察其形态特征，包括菌丝的形状、颜色、分枝情况等。
3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察菌落周围是否出现抑制圈。
三、结果与讨论1. 放线菌的分离培养：经过一段时间的培养，观察到培养皿中出现了单个菌落。
将这些菌落通过传代培养，得到纯种的放线菌菌株。
2. 放线菌的形态观察：在显微镜下观察到放线菌菌丝呈分枝状，颜色多样，有的呈白色、黄色或橙色。
菌丝通常呈直线状，但也有少数呈弯曲或环状。
3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察到菌落周围出现了抑制圈。
这表明放线菌具有抗生素产生的能力，可以对其他细菌产生抑制作用。
放线菌作为一类重要的微生物资源，具有广泛的应用前景。
其产生的抗生素被广泛应用于医药领域，用于治疗各种感染性疾病。
此外，放线菌还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗氧化物质等。
因此，对放线菌的深入研究具有重要意义。
在本次实验中，我们成功地从自然环境中分离出了放线菌，并观察到了其形态特征和抗生素产生能力。
然而，实验中仍存在一些不足之处。
首先，由于实验时间有限，我们只对放线菌的形态进行了简单的观察，没有进行更深入的分类和鉴定。
其次，我们只检测了放线菌的抗生素产生能力，而未对其产生的抗生素进行具体的鉴定和分析。
为了更好地发掘和利用放线菌的潜力，今后的研究可以从以下几个方面展开：1. 对分离得到的放线菌菌株进行进一步的形态学和生理学研究，以了解其多样性和适应能力；2. 对放线菌产生的抗生素进行鉴定和分析，以寻找新的抗生素种类和开发新的药物；3. 利用基因工程技术改造放线菌，提高其抗生素产量和质量。
细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落测定
细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落测定一、目的要求1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。
2．学习细菌菌落制片的方法。
二、墓本原理菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。
细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初步识别、鉴定微生物，方法简便快速，在科研和生产实践中常被采用。
利用血液培养基富有营养及粘性等特性来培养细菌，在此培养基上生长的菌落在固定时粘性很大，能够牢固地附着在载玻片或盖玻片上，便于制片和观察。
另外，血液培养基又是较好的保存菌种用培养基，故由此培养基所制的菌落制片能保存较长时间。
三、器材圆褐固氮菌，枯草芽孢杆菌，灰色链霉菌，酿酒酵母，青霉的单个菌落平板，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；Bouin氏固定液，0．01％结晶紫溶液，羊血或兔血，肉膏蛋白胨琼脂培养基，酒精等。
四、操作步骤1．观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征，并按实验一菌落特征描述的方法记录结果。
2．血液琼脂培养基的制备：(1)成分pH7．6肉膏蛋白胨琼脂培养基10ml，无菌脱纤维羊血（或兔血）1ml。
(2)将肉膏蛋白胨琼脂培养基加热溶化。
(3)待冷至45℃时，以无菌操作加1ml无菌脱纤维羊血于培养基内，立即摇荡使血液和琼脂培养基充分混匀。
(4)迅速以无菌操作倒入平板，使成血液琼脂平板，注意不要产生气泡。
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以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。
(5)置37℃过夜，如无菌生长即可使用。
(6)将无菌的平板取出进行划线接种分离单个菌落，因要保持琼脂表面完整，接种改用圆头光滑玻棒，注意不要把琼脂划破。
牛放线菌病的诊治
病原和传播途径
病原
牛放线菌病的病原是一种革兰氏阳性细菌，属于放线菌科。 这种细菌广泛分布于土壤、水和植物中，也存在于健康牛的 口腔和胃肠道内。
传播途径
该病主要通过口腔和皮肤伤口感染。当牛口腔或皮肤有损伤 时，放线菌会侵入体内，引起局部炎症和组织损伤，并可随 血液扩散至全身。
流行病学
易感动物
季节性
未来发展趋势
随着分子生物学和生物技术的发展 ，未来的研究将更加深入地揭示牛 放线菌病的发病机制和免疫逃逸机 制，为疾病的预防和治疗提供新思 路。
VS
免疫预防和药物防治将更加注重绿 色、安全和高效，以保障食品安全 和牛产业的可持续发展。同时，综 合防控措施的研究将更加注重与实 际生产的结合，以提高生产效率和 经济效益。
治疗效果
经过7天的治疗，病牛症状逐渐消失 ，恢复正常。
成功治疗案例二
发病情况
某规模化奶牛场，部分牛只 出现精神沉郁、食欲减退、 颌下和颈部淋巴结肿胀等症 状。
诊断过程
通过病理学检查和细菌学检 验，确诊为牛放线菌病。
治疗措施
采用抗真菌药物和抗生素联 合治疗，并对病牛进行对症 治疗。
治疗效果
经过10天的治疗，病牛症状 明显缓解，逐渐恢复正常。
研究展望
免疫预防研究
探索利用疫苗和免疫调节剂等手段提高牛群的免疫力，降低疾 病的发生率和危害程度。
药物防治研究
开展新药筛选和药效学研究，寻找更有效的药物防治方法，减 少疾病对牛产业的损失。
综合防控措施研究
进一步研究疾病的综合防控措施，包括生物安全措施、饲养管 理和环境控制等，以全面提高牛群的健康水平。
牛放线菌病的诊治
2023-11-07
目 录
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放线菌检测
菌种鉴定菌丝长度检测
放线菌鉴定生理指标检测微生物检测
（14-1-22）放线菌（Actinomycete）是原核生物的一个类群。
因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。
大多数有发达的分枝菌丝。
菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。
可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。
科标生物检测中心检测项目：菌落特征生理指标，菌丝长度计数，生长量等检测项目
检测方法：生长量测定法，称干重法，比浊法，菌丝长度测量法，微生物计数法，血球计数板法，比例计数法，液体稀释法，平板菌落计数法，试剂纸法，膜过滤法，生理指标法，等等。
科标生物检测中心从事饲料、土壤肥料、微生物及生物制剂、化妆品及日化用品、木材及木制品、其他生物材料等生物相关产品的性能测试、成分分析以及配方研发等工作。
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