猪抗原抗体检测方案PPT课件
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猪场抗原抗体检测报告分析学习
4、检测用试剂盒一般都采用进口IDEXX试剂盒，国产试剂盒目前检测
结果不够准确，但检测价位较低 5、同一份样品，不同的设备、不同的实验室、不同的人员检测，可能
结果有所差异；同一份样品，同一个实验室，同样的人员和设备，检
测出来的结果可能也有稍许的差别。但对检测结果要进行正面分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
例3：练习—伪狂犬
样品序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 17 18 19 20 21 22 26 27 31 32 33 34 36 37 38 39 40 41 42 注射器原始编号 4 6 10 3 7 5 18 16 12 34 1 20 27 30 9 15 17 37 44 43 40 41 46 47 49 50 51 52 53 54 55 样品OD值 0.695 0.218 0.477 0.623 0.303 0.296 0.302 0.213 0.205 0.375 0.273 0.266 0.364 0.278 0.541 0.733 0.88 0.766 0.442 0.489 0.61 0.838 0.723 0.888 1.205 0.833 1.701 1.414 1.409 1.624 1.6 S/N值 0.432 0.135 0.296 0.387 0.188 0.184 0.188 0.132 0.127 0.233 0.170 0.165 0.226 0.173 0.336 0.455 0.546 0.476 0.274 0.304 0.379 0.520 0.449 0.551 0.748 0.517 1.056 0.878 0.875 1.008 0.993 结果判断 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ --+++ ----------备注 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 分娩7天母猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗
[医学]猪抗原抗体检测方案
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毒株
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
（2）在阳性率很高的种猪群，保证引入阴 性后备母猪和种公猪，加强免疫。每季度 抽样监控野毒阳性比例防止感染扩大并用 PRV-gB评估免疫抗体水平，三年可见效。
（2）PRVgE（I）：野毒抗体
（3）通过PRV-gB和PRV-gI抗体检测可了解 本场伪狂犬病的流行状况，制定相应的免 疫方案及措施。
伪狂犬清除计划
（1）在阳性率低的种猪群，建议一次性淘 汰所有阳性种猪。每个季度筛选一次，加 强疫苗免疫，同时保证引入阴性后备母猪 和种公猪，一般一年见效。
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
防止引入不稳定猪只 全部
经产母猪 2个月一次个月一次 了解猪群稳定性
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
（2）在阳性率很高的种猪群，保证引入阴 性后备母猪和种公猪，加强免疫。每季度 抽样监控野毒阳性比例防止感染扩大并用 PRV-gB评估免疫抗体水平，三年可见效。
（2）PRVgE（I）：野毒抗体
（3）通过PRV-gB和PRV-gI抗体检测可了解 本场伪狂犬病的流行状况，制定相应的免 疫方案及措施。
伪狂犬清除计划
（1）在阳性率低的种猪群，建议一次性淘 汰所有阳性种猪。每个季度筛选一次，加 强疫苗免疫，同时保证引入阴性后备母猪 和种公猪，一般一年见效。
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
防止引入不稳定猪只 全部
经产母猪 2个月一次个月一次 了解猪群稳定性
抗猪γ-干扰素单克隆抗体的制备及定量抗原捕获ELISA检测方法的初步建立(共29张PPT)
0目5前9，只因对而商可品判化定人为IF无N-交γ 叉样反品响进。行了特异性试验。
0阴5性9，对因照而为可相判同定浓为度无的交非叉标反记响卵。黄抗体；
不与哺乳动物血清中的类风湿因子反响，与哺乳动物 抗高原灵特 敏异度性：由IgY于的每纯个化亲和素分子可结合4个生物素分子，其结合常数高达1015mol/L，远远大于抗原抗体的结合常数〔105-11mol/L〕，
0
3.9
7.8 15.6 31.3 62.5 125 250 500 1000 2000 4000
rpIFN-g浓度（ng/mL）
被检抗原浓度在7.8-1000ng/mL范围内能形成一条 近似线性曲线。
x
灵敏度确实定
用稀释液作为空白对照，共设24个重复。那么检 测灵敏度为〔OD450平均值+2SD〕在标准曲线上 所对应的rpIFN- 浓度 。
疏水性比IgG强，因而更容易包被于ELISA板和乳胶微球 A不抗加：与原上P细 特 系 M菌异统A刺或性的激哺高IgYP乳灵的B动敏M纯物性C化；，Fc因受而体使结试合剂，经因得而起不高能倍激稀活释补，体从系而统大大减少了通常免疫反响中出现的非特异性作用。 外表 单本抗实的 验间是接在免哈疫尔荧滨光兽〔医研IFA究〕所分兽析医生物技术国家重点实验室生物二室完成的。
报告内容
❖ 研究背景 ❖ 研究思路与策略 ❖ 试验方法及结果 ❖ 讨论 ❖ 小结与展望 ❖ 研究成果
研究背景
-干扰素概述
-干扰素〔IFN-〕是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和 免疫调节功能的重要细胞因子。它主要由激活的T细
胞、激活的NK细胞和巨噬细胞产生。
猪IFN-全基因编码166个氨基酸残基，包括20aa的 信号肽(Dijkmans,1990)。
0阴5性9，对因照而为可相判同定浓为度无的交非叉标反记响卵。黄抗体；
不与哺乳动物血清中的类风湿因子反响，与哺乳动物 抗高原灵特 敏异度性：由IgY于的每纯个化亲和素分子可结合4个生物素分子，其结合常数高达1015mol/L，远远大于抗原抗体的结合常数〔105-11mol/L〕，
0
3.9
7.8 15.6 31.3 62.5 125 250 500 1000 2000 4000
rpIFN-g浓度（ng/mL）
被检抗原浓度在7.8-1000ng/mL范围内能形成一条 近似线性曲线。
x
灵敏度确实定
用稀释液作为空白对照，共设24个重复。那么检 测灵敏度为〔OD450平均值+2SD〕在标准曲线上 所对应的rpIFN- 浓度 。
疏水性比IgG强，因而更容易包被于ELISA板和乳胶微球 A不抗加：与原上P细 特 系 M菌异统A刺或性的激哺高IgYP乳灵的B动敏M纯物性C化；，Fc因受而体使结试合剂，经因得而起不高能倍激稀活释补，体从系而统大大减少了通常免疫反响中出现的非特异性作用。 外表 单本抗实的 验间是接在免哈疫尔荧滨光兽〔医研IFA究〕所分兽析医生物技术国家重点实验室生物二室完成的。
报告内容
❖ 研究背景 ❖ 研究思路与策略 ❖ 试验方法及结果 ❖ 讨论 ❖ 小结与展望 ❖ 研究成果
研究背景
-干扰素概述
-干扰素〔IFN-〕是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和 免疫调节功能的重要细胞因子。它主要由激活的T细
胞、激活的NK细胞和巨噬细胞产生。
猪IFN-全基因编码166个氨基酸残基，包括20aa的 信号肽(Dijkmans,1990)。
猪场抗原抗体检测报告分析学习ppt课件
猪场抗原抗体检 测法。 1、猪群是否存在某种疾病 2、疾病诊断的一种有效工具 3、疾病感染或免疫程度的掌握 4、免疫程序的最合理制定
猪场检测抗原抗体意义
什么叫抗原？ 指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫 应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫 效应（特异性反应）的物质 完全抗原 半抗原
4、检测用试剂盒一般都采用进口IDEXX试剂盒，国产试剂盒目前检测
结果不够准确，但检测价位较低 5、同一份样品，不同的设备、不同的实验室、不同的人员检测，可能
结果有所差异；同一份样品，同一个实验室，同样的人员和设备，检
测出来的结果可能也有稍许的差别。但对检测结果要进行正面分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
例3：练习—伪狂犬
样品序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 17 18 19 20 21 22 26 27 31 32 33 34 36 37 38 39 40 41 42 注射器原始编号 4 6 10 3 7 5 18 16 12 34 1 20 27 30 9 15 17 37 44 43 40 41 46 47 49 50 51 52 53 54 55 样品OD值 0.695 0.218 0.477 0.623 0.303 0.296 0.302 0.213 0.205 0.375 0.273 0.266 0.364 0.278 0.541 0.733 0.88 0.766 0.442 0.489 0.61 0.838 0.723 0.888 1.205 0.833 1.701 1.414 1.409 1.624 1.6 S/N值 0.432 0.135 0.296 0.387 0.188 0.184 0.188 0.132 0.127 0.233 0.170 0.165 0.226 0.173 0.336 0.455 0.546 0.476 0.274 0.304 0.379 0.520 0.449 0.551 0.748 0.517 1.056 0.878 0.875 1.008 0.993 结果判断 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ --+++ ----------备注 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 分娩7天母猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗
猪场检测抗原抗体意义
什么叫抗原？ 指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫 应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫 效应（特异性反应）的物质 完全抗原 半抗原
4、检测用试剂盒一般都采用进口IDEXX试剂盒，国产试剂盒目前检测
结果不够准确，但检测价位较低 5、同一份样品，不同的设备、不同的实验室、不同的人员检测，可能
结果有所差异；同一份样品，同一个实验室，同样的人员和设备，检
测出来的结果可能也有稍许的差别。但对检测结果要进行正面分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
例3：练习—伪狂犬
样品序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 17 18 19 20 21 22 26 27 31 32 33 34 36 37 38 39 40 41 42 注射器原始编号 4 6 10 3 7 5 18 16 12 34 1 20 27 30 9 15 17 37 44 43 40 41 46 47 49 50 51 52 53 54 55 样品OD值 0.695 0.218 0.477 0.623 0.303 0.296 0.302 0.213 0.205 0.375 0.273 0.266 0.364 0.278 0.541 0.733 0.88 0.766 0.442 0.489 0.61 0.838 0.723 0.888 1.205 0.833 1.701 1.414 1.409 1.624 1.6 S/N值 0.432 0.135 0.296 0.387 0.188 0.184 0.188 0.132 0.127 0.233 0.170 0.165 0.226 0.173 0.336 0.455 0.546 0.476 0.274 0.304 0.379 0.520 0.449 0.551 0.748 0.517 1.056 0.878 0.875 1.008 0.993 结果判断 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ --+++ ----------备注 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 分娩7天母猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗
非洲猪瘟病毒P72单克隆抗体的制备及抗体检测方法的建立课件
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研究背景
研究背景
➢ VP72
参与病毒吸附和进入细胞的四种主要蛋白之一。 占病毒粒子蛋白的32%，是一种非常保守的抗原
性蛋白,对自然感染具有免疫原性。 是血清学检测的理想抗原。
研究目的及意义
➢ 诊断的意义
目前尚无理想的疫苗对非洲猪瘟进行预防。
➢ 抗体诊断的目的
发病猪产生的IgG抗体在体内能持续很长时间，特 别适用于亚急性和慢性病例的检出。
1
2
M
KD
↖
117
↖
85
49
34
泳道1：pGEX-VP72未诱导全菌 25
泳道2：pGEX-VP72诱导沉淀
19 M：蛋白质预染Marker。
检测用抗原的制备
重组细菌 pGEX-VP72S
IPTG诱导
表达GST-VP72S
4℃或 -20 ℃ 保存备用
Glutathione Sepharose 4B
统计学t测验分析p0321005差异不显著统计学t测验分析p0190005差异不显著获得获得55株抗株抗asfasfvp72vp72阳性的杂交瘤细胞株阳性的杂交瘤细胞株腹水效价可达到腹水效价可达到221616亚类鉴定为亚类鉴定为igg2bigg2b建立了间接建立了间接elisaelisa抗体检测方法抗体检测方法4ugml4ugml的融合蛋白的融合蛋白gstgstvp72svp72s作为包被抗原作为包被抗原碳酸盐缓冲液为包被液碳酸盐缓冲液为包被液3737包被包被2h2h作为包被条件作为包被条件55脱脂乳作为封闭液脱脂乳作为封闭液4封闭过夜作为封闭条件封闭过夜作为封闭条件05mnaclpbst05tween05mnaclpbst05tween2020为冲洗液为冲洗液单抗腹水的工作浓度为单抗腹水的工作浓度为11
研究背景
研究背景
➢ VP72
参与病毒吸附和进入细胞的四种主要蛋白之一。 占病毒粒子蛋白的32%，是一种非常保守的抗原
性蛋白,对自然感染具有免疫原性。 是血清学检测的理想抗原。
研究目的及意义
➢ 诊断的意义
目前尚无理想的疫苗对非洲猪瘟进行预防。
➢ 抗体诊断的目的
发病猪产生的IgG抗体在体内能持续很长时间，特 别适用于亚急性和慢性病例的检出。
1
2
M
KD
↖
117
↖
85
49
34
泳道1：pGEX-VP72未诱导全菌 25
泳道2：pGEX-VP72诱导沉淀
19 M：蛋白质预染Marker。
检测用抗原的制备
重组细菌 pGEX-VP72S
IPTG诱导
表达GST-VP72S
4℃或 -20 ℃ 保存备用
Glutathione Sepharose 4B
统计学t测验分析p0321005差异不显著统计学t测验分析p0190005差异不显著获得获得55株抗株抗asfasfvp72vp72阳性的杂交瘤细胞株阳性的杂交瘤细胞株腹水效价可达到腹水效价可达到221616亚类鉴定为亚类鉴定为igg2bigg2b建立了间接建立了间接elisaelisa抗体检测方法抗体检测方法4ugml4ugml的融合蛋白的融合蛋白gstgstvp72svp72s作为包被抗原作为包被抗原碳酸盐缓冲液为包被液碳酸盐缓冲液为包被液3737包被包被2h2h作为包被条件作为包被条件55脱脂乳作为封闭液脱脂乳作为封闭液4封闭过夜作为封闭条件封闭过夜作为封闭条件05mnaclpbst05tween05mnaclpbst05tween2020为冲洗液为冲洗液单抗腹水的工作浓度为单抗腹水的工作浓度为11
非洲猪瘟病毒P72单克隆抗体的制备及抗体检测方法的建立ppt课件
细胞株上清 P/N值 效价
3E9
3E11 4A8 4H2 6E5
10.1
5.7 3.4 6.7 10.5
212
27 27 28 212
结论：细胞上清效价在27~212之间，腹水效价可达216。
单克隆抗体的亚类鉴定
细胞上清 3E9 3E11 4A8 4H2 6E5 阴性对照 IgA 0.203 0.170 0.194 0.232 0.217 0.221 IgG1 0.254 0.215 0.259 0.301 0.334 0.222 IgG2a 0.141 0.177 0. 198 0.242 0.174 0.223 IgG2b 1.2 0.859 0.915 0.95 2.261 0.306 IgG3 0.215 0.284 0.305 0.263 0.262 0.257 IgM 0.36 0.491 0.322 0.38 0.352 0.358
45
43
←
45
31
M：低分子量蛋白质marker 1：未纯化的GST-VP72s 2：纯化过的GST-VP72s
筛 选
方法
GST-VP72s GST
包被96孔板
{
抗GST-VP72s阳性 抗GST阳性
√
×
结果
筛选到五株阳性克隆，命名为3E9、3E11、4A8、 4H2、6E5。
单克隆抗体的效价测定
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研究背景
VP72
参与病毒吸附和进入细胞的四种主要蛋白之一。 占病毒粒子蛋白的32%，是一种非常保守的抗原 性蛋白,对自然感染具有免疫原性。 是血清学检测的理想抗原。
研究背景
常规实验室诊断技术
3E9
3E11 4A8 4H2 6E5
10.1
5.7 3.4 6.7 10.5
212
27 27 28 212
结论：细胞上清效价在27~212之间，腹水效价可达216。
单克隆抗体的亚类鉴定
细胞上清 3E9 3E11 4A8 4H2 6E5 阴性对照 IgA 0.203 0.170 0.194 0.232 0.217 0.221 IgG1 0.254 0.215 0.259 0.301 0.334 0.222 IgG2a 0.141 0.177 0. 198 0.242 0.174 0.223 IgG2b 1.2 0.859 0.915 0.95 2.261 0.306 IgG3 0.215 0.284 0.305 0.263 0.262 0.257 IgM 0.36 0.491 0.322 0.38 0.352 0.358
45
43
←
45
31
M：低分子量蛋白质marker 1：未纯化的GST-VP72s 2：纯化过的GST-VP72s
筛 选
方法
GST-VP72s GST
包被96孔板
{
抗GST-VP72s阳性 抗GST阳性
√
×
结果
筛选到五株阳性克隆，命名为3E9、3E11、4A8、 4H2、6E5。
单克隆抗体的效价测定
返回
研究背景
VP72
参与病毒吸附和进入细胞的四种主要蛋白之一。 占病毒粒子蛋白的32%，是一种非常保守的抗原 性蛋白,对自然感染具有免疫原性。 是血清学检测的理想抗原。
研究背景
常规实验室诊断技术
猪群健康监测-养猪技术PPT
频率
1次/月 1次/季度
猪场水质和水线监控
定期水线消D的必要性
饮水系统是猪只再次感染病D（PRRSV、PCV-2、ASFV），以及消化道紊乱细菌的重要来源。
原水和药物（投药过后里面覆盖一层生物膜）致使水线内壁的污垢多，细菌菌落数很容易超标。
定期用过氧乙酸对输水线路进行消D，频率结合水质监测确定。
卢美宜编号取样点菌落数是否合格1隔离栏杆0合格2母猪地面0合格3保温箱地面0合格4保温箱墙壁20cm以下0合格5墙壁3合格6产床栏杆0合格7母猪料槽0合格8母猪后门0合格球虫监测抗体抗原检测应用季度抗体监测序号内容1查情公猪和后备舍超期母猪容易出现漏免2跟胎或一年三次普免猪瘟母源抗体能持续到35日龄3后备猪猪瘟二次免疫后群体有效保护可持续4个月4一年三次普免伪狂犬母源抗体能持续到70日龄5对于ped高水平的elisa抗体仍然丌能阻止发病6溶血严重样品会影响抗体结果判断要避免溶血7免疫口蹄疫oa苗后o型抗体阳性率高于a型抗体?血清季度抗体检测对我们在制定合理的免疫程序评估免疫和驯化效果以及疾病监测方面提供很好的数据参考与支撑
抽取生理盐水
1
抽加25ml到J液瓶
2
消D规格板
3
生理盐水湿润棉签
4
棉签擦拭规格板内全部面积
5
剪掉手持部分后放入瓶中
6
规范栏舍洗消消D药用量
消D药用量规范前
消D药用量规范后
FC场栏舍细菌计数抽检表（目标菌量60个/cm2）
日期：
编号
取样点
菌落数 是否合格
1
隔离栏杆
123 不合格
2
母猪地面
301 不合格
季度抗体监测-调整免疫程序
基础母猪一年普免3次，后备猪在18日龄、45日龄、135日龄分别免疫一次。从结果看，公猪母猪抗体水平非常好 （阻断平均值＞0.7，离散度＜25%）。8、12、15周龄的后备猪猪W抗体水平很差。 存在母源抗体干扰，造成2免 后抗体依然较差。
猪抗原抗体检测方案
毒株
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
（9）母猪群间隔1-2个月对群体进行监控， 了解猪群等稳定状态
（10）仔猪了解病毒的感染时间，加强药 物保健
非免猪 非免猪 免疫猪
免疫猪
稳定
不稳定 稳定
稳定性标准
S/P≤1.0者比例≥90%者比 例≥90% S/P<1.0者比例<90% S/P≤2.0者比例≥90%者比 例≥90%
不稳定 S/P<2.0者比例<90%
PRRSV判定标准:S/P值大于等于0.4判定为阳性；S/P值小于0.4判定为阴 性
编号 原种场一场52 原种场一场54 原种场一场58 原种场一场66 原种场一场61 原种场一场68 原种场一场71 原种场一场75
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
（9）母猪群间隔1-2个月对群体进行监控， 了解猪群等稳定状态
（10）仔猪了解病毒的感染时间，加强药 物保健
非免猪 非免猪 免疫猪
免疫猪
稳定
不稳定 稳定
稳定性标准
S/P≤1.0者比例≥90%者比 例≥90% S/P<1.0者比例<90% S/P≤2.0者比例≥90%者比 例≥90%
不稳定 S/P<2.0者比例<90%
PRRSV判定标准:S/P值大于等于0.4判定为阳性；S/P值小于0.4判定为阴 性
编号 原种场一场52 原种场一场54 原种场一场58 原种场一场66 原种场一场61 原种场一场68 原种场一场71 原种场一场75
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辰丰生物
猪抗原抗体检测方案
检测的目的
1．疾病预警 （1）了解疾病在场内的污染状况，制定相应策 略 （2）提前了解免疫抗体的高低及整齐度，及时 纠正 2．免疫程序的评估与优化 （1）了解母源抗体的消长情况 （2）疫苗接种的效果-----免疫抗体监控 3．疾病控制和清除计划：通过系统检测和措施， 实施疾病的控制或清除计划 4．疾病诊断
（2）PRVgE（I）：野毒抗体
（3）通过PRV-gB和PRV-gI抗体检测可了解 本场伪狂犬病的流行状况，制定相应的免 疫方案及措施。
伪狂犬清除计划
（1）在阳性率低的种猪群，建议一次性淘 汰所有阳性种猪。每个季度筛选一次，加 强疫苗免疫，同时保证引入阴性后备母猪 和种公猪，一般一年见效。
C. 猪瘟抗体检测结果分析
1）Cutoff值是 >1：16代表抗体阳性
2）实际生产中至少要在1：64以上才有一 定的保护，经产母猪多次疫苗免疫后抗体 水平一般会在1：256到1：1024左右波动。
D. 猪瘟抗体 ELISA检测时间表
品项 日常评估
种类 后备母猪 经产母猪
时间
目的
取样数量
在配种前
S/P值 0.652 0.693 1.322 0.378 0.258 0.237 4.171 2.746
结果 + + + + +
阴性对照 阴性平均值
0.072 0.078 0.075
成立
阳性对照 阳性平均值
0.735
0.734 0.7345
成立
蓝耳病抗体检测时间表
品项
种类
时间
目的
取样数量
日常评估 后备母猪 在配种前
不稳定 S/P<2.0者比例<90%
PRRSV判定标准:S/P值大于等于0.4判定为阳性；S/P值小于0.4判定为阴 性
编号 原种场一场52 原种场一场54 原种场一场58 原种场一场66 原种场一场61 原种场一场68 原种场一场71 原种场一场75
OD值 0.505 0.532 0.947 0.324 0.245 0.231 2.449 1.886
（2）在阳性率很高的种猪群，保证引入阴 性后备母猪和种公猪，加强免疫。每季度 抽样监控野毒阳性比例防止感染扩大并用 PRV-gB评估免疫抗体水平，三年可见效。
野毒感染和抗体水平
全部
3个月一次个月一 评估母猪群的健康状态和抵抗 20
次
力
商品猪
二免后4-6周4-6周 监控免疫效果
20
首免日龄 仔猪
21日龄日龄 28日龄日龄 35日龄日龄 42日龄日龄
评估母源抗体衰减水平，选择 15 最佳首免时间
15
15
15
蓝耳病的主要问题
（1）毒株的变异与交叉保护 （2）疫苗的选择：灭活疫苗、弱毒疫苗、
（8）公猪抗体阳性值SP>2.5的最好不要使 用
（9）母猪群间隔1-2个月对群体进行监控， 了解猪群等稳定状态
（10）仔猪了解病毒的感染时间，加强药 物保健
非免猪 非免猪 免疫猪
免疫猪
稳定
不稳定 稳定
稳定性标准
S/P≤1.0者比例≥90%者比 例≥90% S/P<1.0者比例<90% S/P≤2.0者比例≥90%者比 例≥90%
防止引入不稳定猪只 全部
经产母猪 2个月一次个月一次 了解猪群稳定性
20
商品猪 3个月一次个月一次 监控免疫效果和稳定性 20
伪狂犬的主要问题
（1）种猪群野毒抗体（gE抗体）阳性率居 高不下
（2）中大猪的呼吸道问题 （3）散发性母猪繁殖障碍 （4）净化方案的选择
伪狂犬的检测方法
（1）PRVgB：总抗体，S/N值和阻断率 （BLOCK值）
结果 + + + + + -
成立
成立
CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
B. 剔除持续感染猪或无抗体反应 猪
个猪群的感染源。
2）首次使用应对母猪群进行检测，对抗 体低下猪只进行补针后6周复检。若仍然没 有抗体产生，应进行淘汰。
（4）当S/P >2.5 – 病毒血症 （5）当S/P >3.5-高于5.0 – 急性感染
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2019/7/20
蓝耳病的抗体检测结果分析
（6）6-7周龄时，多数仔猪抗体可变为阴性 （无病毒循环）
（7）引进种猪，要剔出阳性值SP>1.2的猪 只，保证种群的稳定
重点进行监测四大猪病：猪瘟、蓝耳、伪狂犬、圆环
1. 猪瘟主要问题 （1）抗体水平偏低 （2）疫苗的选择及剂量：细胞苗？脾淋苗
？，150 RID = 37 PD50 （3）持续性感染猪的存在
猪瘟抗原检测
（1）常用方法：PCR、荧光抗体和ELISA
（2）检测目的：引进种猪或后备母猪时的 检查，疑似病例的确诊，猪群带毒率的定 期评估
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
毒株
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
表1：猪血清CSFV抗体检测结果
编号 6306 5841 5805 3711 保1 后备
阴性对照
阴性平均值
阳性对照
阳性平均值
OD值 0.347 0.277 0.218 0.172 0.159 0.699 0.818 0.817
0.8175 0.073 0.057
0.065
阻断率 0.625 0.718 0.797 0.858 0.875 0.157
猪抗原抗体检测方案
检测的目的
1．疾病预警 （1）了解疾病在场内的污染状况，制定相应策 略 （2）提前了解免疫抗体的高低及整齐度，及时 纠正 2．免疫程序的评估与优化 （1）了解母源抗体的消长情况 （2）疫苗接种的效果-----免疫抗体监控 3．疾病控制和清除计划：通过系统检测和措施， 实施疾病的控制或清除计划 4．疾病诊断
（2）PRVgE（I）：野毒抗体
（3）通过PRV-gB和PRV-gI抗体检测可了解 本场伪狂犬病的流行状况，制定相应的免 疫方案及措施。
伪狂犬清除计划
（1）在阳性率低的种猪群，建议一次性淘 汰所有阳性种猪。每个季度筛选一次，加 强疫苗免疫，同时保证引入阴性后备母猪 和种公猪，一般一年见效。
C. 猪瘟抗体检测结果分析
1）Cutoff值是 >1：16代表抗体阳性
2）实际生产中至少要在1：64以上才有一 定的保护，经产母猪多次疫苗免疫后抗体 水平一般会在1：256到1：1024左右波动。
D. 猪瘟抗体 ELISA检测时间表
品项 日常评估
种类 后备母猪 经产母猪
时间
目的
取样数量
在配种前
S/P值 0.652 0.693 1.322 0.378 0.258 0.237 4.171 2.746
结果 + + + + +
阴性对照 阴性平均值
0.072 0.078 0.075
成立
阳性对照 阳性平均值
0.735
0.734 0.7345
成立
蓝耳病抗体检测时间表
品项
种类
时间
目的
取样数量
日常评估 后备母猪 在配种前
不稳定 S/P<2.0者比例<90%
PRRSV判定标准:S/P值大于等于0.4判定为阳性；S/P值小于0.4判定为阴 性
编号 原种场一场52 原种场一场54 原种场一场58 原种场一场66 原种场一场61 原种场一场68 原种场一场71 原种场一场75
OD值 0.505 0.532 0.947 0.324 0.245 0.231 2.449 1.886
（2）在阳性率很高的种猪群，保证引入阴 性后备母猪和种公猪，加强免疫。每季度 抽样监控野毒阳性比例防止感染扩大并用 PRV-gB评估免疫抗体水平，三年可见效。
野毒感染和抗体水平
全部
3个月一次个月一 评估母猪群的健康状态和抵抗 20
次
力
商品猪
二免后4-6周4-6周 监控免疫效果
20
首免日龄 仔猪
21日龄日龄 28日龄日龄 35日龄日龄 42日龄日龄
评估母源抗体衰减水平，选择 15 最佳首免时间
15
15
15
蓝耳病的主要问题
（1）毒株的变异与交叉保护 （2）疫苗的选择：灭活疫苗、弱毒疫苗、
（8）公猪抗体阳性值SP>2.5的最好不要使 用
（9）母猪群间隔1-2个月对群体进行监控， 了解猪群等稳定状态
（10）仔猪了解病毒的感染时间，加强药 物保健
非免猪 非免猪 免疫猪
免疫猪
稳定
不稳定 稳定
稳定性标准
S/P≤1.0者比例≥90%者比 例≥90% S/P<1.0者比例<90% S/P≤2.0者比例≥90%者比 例≥90%
防止引入不稳定猪只 全部
经产母猪 2个月一次个月一次 了解猪群稳定性
20
商品猪 3个月一次个月一次 监控免疫效果和稳定性 20
伪狂犬的主要问题
（1）种猪群野毒抗体（gE抗体）阳性率居 高不下
（2）中大猪的呼吸道问题 （3）散发性母猪繁殖障碍 （4）净化方案的选择
伪狂犬的检测方法
（1）PRVgB：总抗体，S/N值和阻断率 （BLOCK值）
结果 + + + + + -
成立
成立
CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
B. 剔除持续感染猪或无抗体反应 猪
个猪群的感染源。
2）首次使用应对母猪群进行检测，对抗 体低下猪只进行补针后6周复检。若仍然没 有抗体产生，应进行淘汰。
（4）当S/P >2.5 – 病毒血症 （5）当S/P >3.5-高于5.0 – 急性感染
SUCCESS
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2019/7/20
蓝耳病的抗体检测结果分析
（6）6-7周龄时，多数仔猪抗体可变为阴性 （无病毒循环）
（7）引进种猪，要剔出阳性值SP>1.2的猪 只，保证种群的稳定
重点进行监测四大猪病：猪瘟、蓝耳、伪狂犬、圆环
1. 猪瘟主要问题 （1）抗体水平偏低 （2）疫苗的选择及剂量：细胞苗？脾淋苗
？，150 RID = 37 PD50 （3）持续性感染猪的存在
猪瘟抗原检测
（1）常用方法：PCR、荧光抗体和ELISA
（2）检测目的：引进种猪或后备母猪时的 检查，疑似病例的确诊，猪群带毒率的定 期评估
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
毒株
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
表1：猪血清CSFV抗体检测结果
编号 6306 5841 5805 3711 保1 后备
阴性对照
阴性平均值
阳性对照
阳性平均值
OD值 0.347 0.277 0.218 0.172 0.159 0.699 0.818 0.817
0.8175 0.073 0.057
0.065
阻断率 0.625 0.718 0.797 0.858 0.875 0.157