氨基酸分析原理和色谱条件
氨基酸的纸色谱实验报告
一、实验目的1. 了解纸色谱法的基本原理和操作技术。
2. 掌握氨基酸纸层析法的实验步骤和注意事项。
3. 通过纸色谱法分离和鉴定氨基酸混合物中各个氨基酸的化学成分。
二、实验原理纸色谱法是一种以纸为载体的色谱分离技术，主要用于分离和鉴定混合物中的各种化合物。
在纸色谱法中，固定相为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂。
将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。
由于各组分在两相中分配系数不同，最终形成互相分离的斑点。
通过比移值（Rf值）与已知样品比较，进行定性分析。
氨基酸是一类含有氨基和羧基的有机化合物，是构成蛋白质的基本单元。
在纸色谱法中，氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数不同，导致其在滤纸上移动的距离不同，从而实现分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）氨基酸混合物：甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸等。
（2）层析滤纸（3）正丁醇、乙酸、水（混合液作为展开剂）（4）显色剂：三酮溶液2. 实验仪器：（1）层析缸（2）点样毛细管（3）小烧杯（4）培养皿（5）量筒（6）喷雾器（7）吹风机（8）直尺及铅笔四、实验步骤1. 准备层析滤纸：将层析滤纸裁剪成适当大小，用铅笔在滤纸的一端标记原点位置。
2. 点样：用点样毛细管将氨基酸混合物点在距滤纸一端约2～3cm的原点位置。
3. 展开剂准备：将正丁醇、乙酸、水按一定比例混合，作为展开剂。
4. 展开操作：将点好样的滤纸放入层析缸中，加入适量展开剂，确保展开剂液面高出滤纸上的样点。
5. 展开过程：密闭层析缸，待溶剂前沿线到达预定位置时取出滤纸。
6. 显色：将滤纸晾干，用喷雾器喷洒三酮溶液，在室温下晾干，观察显色结果。
7. 结果分析：根据各氨基酸斑点在滤纸上的位置，计算Rf值，与已知氨基酸的Rf值比较，进行定性分析。
五、实验结果与分析1. 氨基酸斑点在滤纸上分离，且各氨基酸斑点位置明显。
2. 通过计算Rf值，与已知氨基酸的Rf值比较，鉴定出各氨基酸。
高效液相色谱法氨基酸标样的分析实验
一、目的要求1、熟悉高效液相色谱仪的结构、分离原理和操作程序。
2、掌握氨基酸标样的分析方法、原理。
二、实验原理氨基酸与PITC发生反应生成的衍生物，在254nm处有最大吸光值。
氨基酸衍生物进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积可进行定性和定量。
该方法是柱前衍生法中的一种。
PITC方法的反应方程式如下图所示：三、实验仪器和试剂1、仪器：高效液相色谱仪（带紫外检测系统和记录系统）。
2、材料：氨基酸标样3、试剂：衍生液：异硫氰酸苯酯：甲醇：三乙胺：水（V/V）=1：7：1：1正己烷、乙腈、乙酸、乙酸钠以上试剂中乙腈为色谱醇，水为二次蒸馏水，其它为分析醇。
四、实验步骤1、柱前衍生步骤：（1）将100ul衍生液加入100ul氨基酸标样或样品中，震荡使混合均匀，室温放置1小时。
（2）反应液中加入200ul正己烷，充分震荡后放置使分层。
（3）取下层溶液用一次性滤膜过滤器（0.45ul）过滤。
（4）取滤液5ul注入HPLC。
2、分离条件的设定（1）色谱柱：Shim-pack VP-ODS 4.6mm x 15cm保护柱：Shim-pack GVP-ODS4.6 mm x 1cm（2）流动相：A液：0.1M乙酸钠pH6.50（用乙酸调整，500ml乙酸钠中约加2滴乙酸）。
B液：乙腈/水=4/1（3）流量：1ml/min柱温：36℃检测波长：254nm（4）梯度洗脱程序：TIME(min) FUNC VALUE0．01 BCONC 103 BCONC 1021 BCONC 3921.01 BCONC 8025 BCONC 8025.01 BCONC 1035 STOP STOP3、数据采集打开real-time CS analysis软件采集数据并对数据进行分五、实验数据及处理结果六、实验讨论：1、本次实验的注意事项有哪些？结果：①、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。
氨基酸分析仪的基本分析原理
氨基酸分析仪的基本分析原理
氨基酸分析仪是一种用于定量分析样品中各种氨基酸的仪器。
其基本分析原理是通过将样品中的氨基酸分离、检测和定量，从而确定样品中各种氨基酸的含量。
首先，样品中的氨基酸需要被分离出来。
一种常用的方法是利用离子交换色谱技术。
离子交换色谱是通过样品中氨基酸的酸性基团和碱性基团与固定在色谱柱上的阴、阳离子交换剂之间的离子交换作用进行分离的。
通过调整溶剂和柱温等条件，可以实现对氨基酸的选择性分离。
其次，分离出的氨基酸需要被检测。
最常用的检测方法是紫外吸收检测。
氨基酸在紫外区域有特定的吸收峰，对应着特定的波长。
通过测量样品在不同波长下的吸光度，可以得到吸收峰的强度。
根据吸光度和吸光度与浓度之间的关系，可以计算出样品中各种氨基酸的浓度。
最后，根据样品中氨基酸的浓度，通过一定的计算公式，可以定量地确定样品中各种氨基酸的含量。
通常，会利用标准曲线法，即利用已知浓度的氨基酸标准溶液制备一系列浓度不同的标准曲线。
将样品中各种氨基酸的吸光度值与标准曲线进行比较，就可以得到各种氨基酸的浓度。
综上所述，氨基酸分析仪通过分离、检测和定量的步骤，可以对样品中的氨基酸进行分析，从而确定样品中各种氨基酸的含量。
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸1氨基酸氨基酸是类似于蛋白质的有机化合物，也是人体代谢过程中不可或缺的物质，具有重要的生理功能，人们发现它对人体健康有重要作用。
氨基酸分为线粒体氨基酸和细胞质氨基酸，它们可以通过液相色谱（HPLC）和其他技术进行测定。
2高效液相色谱化学发光检测法高效液相色谱化学发光检测法(HPLC-FLD)是一种非常常用的检测方法，是在液相色谱的基础上添加了化学发光探测器。
它具有高灵敏度、高分离度和快速分析等优势，得到了广泛应用。
在研究氨基酸中，HPLC-FLD可以较为准确地检测和分离氨基酸，从而实现对氨基酸浓度的准确测定及调整。
3工作原理HPLC-FLD工作过程是：在分析柱内，将水，乙腈，乙醇等溶剂混合，氨基酸将在柱中混有不同的动力学行为。
当氨基酸离开柱时，经测量氨基酸在化学发光探测器上发出的发光信号，可以计算出它们的相对浓度，从而判断氨基酸含量。
4检测步骤（1）样品准备：样品中含有氨基酸的各种溶液，需经过提取，稀释或洗脱处理等，以便于之后的检测。
（2）色谱层析：把样品按照一定的色谱层析方式，分离不同的成分，从而使不同的成分分离出来。
（3）发光测定：在这一步，人们可以利用HPLC-FLD测定氨基酸。
首先，样品将通过有机溶剂组合作用，激活发光反应，然后将样品通过化学发光探头的发光状态记录下来，并计算概率密度，最终得出样品中氨基酸的含量和比例。
5优势HPLC-FLD在检测氨基酸中有很多优势：（1）可以快速准确地检测氨基酸；（2）可实现高灵敏度和高分离度；（3）化学发光探头具有长寿命、可靠以及易于操作等优势；（4）可克服外界因素对分析结果的影响；（5）可以长时间连续检测，勤奋节约成本。
6结论HPLC-FLD是一种高效的技术，在检测氨基酸方面具有较高的准确性和效率，它不但能够用于氨基酸的检测，还可用于其他有机物分离和测定，在生物和药物领域都有广泛应用。
有机化学氨基酸分析
有机化学氨基酸分析1.色谱法色谱法是一种广泛使用的氨基酸分析方法，主要包括气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。
气相色谱法：气相色谱法主要适用于描绘和鉴定原料氨基酸的种类、含量和结构等信息。
在该方法中，氨基酸样品首先通过酸水解生成对应的酸，然后酸再经甲醇酯化生成甲酯化酸。
最后通过气相色谱分离并检测酸甲酯化物。
液相色谱法：液相色谱法主要适用于定量分析氨基酸含量。
液相色谱法将氨基酸样品进行衍生化反应，如酰氯化反应或酸酐酯化反应，生成稳定的色氨酸酰胺衍生物，然后分离并检测各个衍生物。
2.光谱法主要包括紫外-可见吸收光谱法、红外光谱法和核磁共振光谱法等。
这些方法可以用于研究和确定氨基酸的结构和功能。
紫外-可见吸收光谱法：氨基酸溶液在特定波长范围内对紫外或可见光的吸收程度可以用来定量分析氨基酸的含量。
红外光谱法：红外光谱法可以用来研究氨基酸分子中的官能团和结构信息。
核磁共振光谱法：核磁共振光谱法可以提供关于氨基酸分子中原子的化学位移和耦合常数等信息。
3.电化学法电化学法主要包括电位滴定法和电化学发光法。
电位滴定法：通过测定氨基酸溶液的电化学行为，如氧化还原电位的变化，可以定量分析氨基酸的含量和测定其在酸碱条件下的酸解离常数。
电化学发光法：氨基酸在特定条件下通过电化学反应发光，凭借发光的强度可以定量分析氨基酸的浓度。
4.质谱法质谱法主要包括质子化时间飞行质谱法（PIT-TOFMS）和质子化辅助激光解吸电离质谱法（PALDIMS）等。
质子化时间飞行质谱法：PIT-TOFMS可以在非常短的时间内通过氨基酸分析样品中的氨基酸类型和含量。
该方法的优势在于可以同时测定样品中的多种氨基酸。
质子化辅助激光解吸电离质谱法：PALDIMS利用激光对氨基酸样品进行解离和电离，然后通过质谱仪进行质量分析。
该方法可以提供对氨基酸的结构、组成和含量等信息。
综上所述，有机化学氨基酸分析方法包括色谱法、光谱法、电化学法和质谱法等。
这些方法可以用于氨基酸的种类、含量、结构和功能的研究和分析。
氨基酸分析仪原理
氨基酸分析仪基本原理及应用
氨基酸分析仪法与HPLC法比较
近年来常见常用的检测氨基酸的液相方法不少，主 要介绍以下几种常用的方法与氨基酸分析仪法进行比较： （一）OPA法（邻苯二甲醛）（反应机理略） 最大的不足之处是：做全分析时需配以其他技术一起使 用，方可与带有仲氨基团的氨基酸进行反应。赖氨酸及 胱氨酸衍生物荧光较弱，灵敏度低。因为OPA是快速反应 剂，有些氨基酸反应极其不稳定，特别是甘氨酸、赖氨 酸衍生物的信号衰减很快，一天变化很大。从以往我们 做的实验来看此方法的变异系数CV%一般为5％左右，个 别的氨基酸如组氨酸可达9%左右，尤其对带有盐分的饲 料氨基酸类样品特别不适合，因样品中带有的盐分直接 影响衍生（紫外法基线不好）。
L-8900 AAA的分析原理
1、样品中的氨基酸在低PH的条件下都 带有正电荷,在阳离子交换树脂上均被 吸附,但吸附的程度不同,碱性氨基酸结 合力最强其次为中性氨基酸、酸性氨基 酸结合力最弱。 2、按照氨基酸分析仪设定的洗脱程 序，用不同离子强度、PH值的缓冲液依 次将氨基酸按吸附力的不同洗脱下来， 3、分离后的氨基酸与茚三酮试剂在高 温反应器中进行衍生反应，生成可以被 分光光度计检测的有色物质，然后在检 测器中被检测出来。
+ H + H -
R
C H
N H 2
C O O
-
_
-
R
C H + N H 3
氨基酸分析原理与方法
氨基酸分析原理与方法氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，它们的结构包含一个氨基基团（NH2）、一个羧基（COOH）以及一个特定的侧链基团（R）。
氨基酸分析的原理是通过特定的化学反应将氨基酸转化为可检测的化合物，然后利用不同的方法进行测定。
样品的预处理是为了去除样品中可能存在的干扰物质，例如油脂、无机盐以及非氨基酸的有机物。
常用的方法包括浸提、溶解、离心沉淀等。
蛋白质的水解是将蛋白质分解为氨基酸的过程。
水解反应一般使用强酸、强碱或酶类催化剂来进行。
其中，酶法水解是一种常用的方法，特点是反应条件温和，水解效率高。
氨基酸的衍生反应是将氨基酸中的羧基或氨基基团转化为可以检测的化合物。
常用的方法有酸衍生、碱衍生、甲酰化、丙酰化等。
例如，酰化反应可以将氨基酸中的氨基基团转化为酰基氨基酸，它在紫外光下有特征的吸收峰，便于测定。
衍生物的分离和定量测定是通过分析仪器进行的。
常用的方法包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）、毛细管电泳（CE）等。
其中，HPLC是最常用的方法，它可以根据不同的分离柱和检测器选择，实现对氨基酸的定量测定。
1.离子交换色谱法：利用离子交换树脂将氨基酸与其他离子区分开，然后通过温度梯度或者梯度洗脱的方法进行分离和定量。
2.薄层色谱法：将衍生后的氨基酸样品沿着特定的固定相（通常是硅胶或者聚脱氢乙烯等）的薄层上进行分离。
然后通过显色剂的染色或者紫外检测器检测颜色变化或吸收峰进行定量。
3.毛细管电泳法：利用毛细管内的电泳作用将氨基酸分离。
根据不同氨基酸的电荷、大小、疏水性等理化性质的差异，通过改变电流、电压、电泳缓冲液的pH值和离子强度等条件，实现氨基酸的分离和定量。
4.气相色谱法：首先将氨基酸进行酯化反应，然后通过气相色谱进行分离和定量。
气相色谱法具有高分辨率、灵敏度高等特点，适用于分析含有少量氨基酸的样品。
综上所述，氨基酸分析是通过将氨基酸转化为可检测的化合物，然后利用不同的方法进行分离和定量的过程。
测定氨基酸的方法以及试剂
一采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸1.氨基酸测定原理：食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
2.测定氨基酸所用仪器:真空泵;恒温干燥箱;水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30mL。
用去离子水冲洗干净并烘干;真空干燥器(温度可调节);氨基酸自动分析仪。
3.测定氨基酸所用试剂及其配制方法:3.1试剂：全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
浓盐酸(优级纯);苯酚(须重蒸馏); 混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售)：0.00250mol/L; 不同pH值柠檬酸钠缓冲液；氢氧化锂(LiOH·H2O)；冰乙酸(优级纯)；二甲基亚砜(C2H6OS)；水合茚三酮(C9H4O3·H2O)；还原茚三酮(C18H10O6·2H2O);NaOH；高纯氮气（纯度99.99%）；冷冻剂：市售食盐与冰按1∶3混合。
3.2试剂配制方法：3.2.1. 6mol/L盐酸∶浓盐酸(3.1)与水1∶1混合而成。
3.2.2. pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)和16.5mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2。
pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至3.3。
pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠(优级纯)加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
3.2.3. 茚三酮溶液pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂(LiOH·H2O)168g，加入冰乙酸(优级纯)279mL，加水稀释到1000mL，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至5.2。
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分析原理和色谱条件
一、氨基酸分析的须知：
（一）样品要求：样品应有代表性，固体样品必须过60目筛；液体样品需有一定的流动性；
办固体状的样品要保证能在称量纸上不流动。
对不难采集并需要我们处理的样品，常规样品一般固体样品5克左右，液体样品15ml左右；对难以收集的样品（如：酶、肽等）液体样蛋白含量应大于300μg/ml，体积不少于4ml；固体重量应不少于500μg。
（二）自己处理样品的同学和老师，应根据自己的样品状态，严格按照本室要求样品的处理方法处理样品。
并讲处理好的样品在星期二下午3点前送到测试中心氨基酸分析室，处理好的样品要同时送两份（两个盛有蒸干样品的25ml小烧杯），并提供样品的蛋白质含量、称样量、定容体积、加0.02NHCl体积等有关数据。
（样品处理方法见本附件）。
（三）因氨基酸分析需要柱后（或柱前）衍生，分析时间长，所以对氨基酸分析的上机浓度要求严格。
请各位老师和同学无论是自己处理样品还是需要氨基酸分析室处理样品都应准确知道自己所测样品的蛋白含量（或氨基态氮含量）。
如果需要本实验室处理样品时，提供的蛋白质含量的误差应控制±5%。
如20%的蛋白含量，提供的数据应为（18-22）%。
（四）氨基酸分析室仪为学校所有需要氨基酸分析的同学和老师服务，为了保证仪器能长期处于良好的运行状态除了我们机台的工作人员的努力外，还需要各位同学和老师的大力合作。
样品的浓度过高极易造成分离柱的污染和反应盘管爆裂（每个反应盘管3000元左右）并且测定的数据也不准确；样品的浓度过低直接影响分析结果的准确性。
对提供的原始数据不准确的样品，在上机分析时造成仪器损坏或氨基酸峰过低由送样人员负责。
因提供原始数据不准确的样品需要重新上机的样品，则需另收上机费。
（五）氨基酸的分析需要柱前或柱后衍生，衍生化试剂对分析结果会有一定的影响，对需要做影响因素分析的样品，应妥善保管好不同时间采集样品，待样品收集全后，一起处理、一起做。
这样更有利于对实验结果的分析。
（六）每做一个样品的氨基酸全分析（17种氨基酸），对仪器都是一次的严重的磨损。
为了使仪器能更好地为大家服务，请各位老师和同学根据自己的科研、论文的实际需
要和经费的情况合理安排样品的测定数量。
本科生、研究生的样品需要征得导师的同意后再送样（最好有导师的电话或书面通知）。
（七）氨基酸分析室对样品的测定结果负责，对数据有疑问的分析结果，我们共同探讨。
对有必要重做的样品我们可以重做，如果是分析测试的问题，我们不收任何费用。
如果是样品本身的问题则按实际费用收取测试费。
（八）氨基酸分析室的工作人员在样品分析好后，及时通知各位老师和同学。
在接到样品分析好后，请各位老师带好经费卡（或已到财务处划好帐的单子—第二联）。
我们在收到转账单后给出分析图谱。
对经常需要分析氨基酸样品的老师和同学，可以先记账，一个季度结一次。
（九）有关氨基酸分析的其他问题，我们将与有关老师和同学共同探讨。
二、游离氨基酸分析样品前处理方法（除蛋白）
固体样品：精确称取样品__mg加入10ml5%的磺基水杨酸沉淀2小时。
吸取一定的量于10000rpm/min离心15分钟。
取一定体积的上清液调pH至2左右定容（参考方法一份上清液加3份水），用0.45μm微膜过滤至样品杯中上机测定。
液体样品：精确精确吸取样品__ml加入等体积的10%的磺基水杨酸沉淀2小时。
吸取一定的量于10000rpm/min离心15分钟。
取一定体积的上清液调pH至2左右定容（参考方法一份上清液加3份水），用0.45μm微膜过滤至样品杯中上机测定。
附：游离氨基酸分析送样要求
1、样品应澄清，无可见渣子，放置或离心后不产生沉淀。
2、样品液应无色或仅为淡黄色。
色深样品必须经过脱色处理。
3、含盐量低。
样品液中的总离子强度不应大于0.5N。
含盐量过高必须经过脱盐处理。
4、含蛋白或多肽类物质必须除去。
样品需经0.45微米的滤膜过滤。
pH应控制在2左右。
三、水解氨基酸样品预处理
（一）蛋白质样品的前处理
（1）准确称取一定量的样品于特制的水解管底部，缓慢加入8ml6NHCl轻轻转动水解管，保证样品全部在试管底部并保证样品得到全部润湿，抽真空，维持10分钟后，在酒精喷灯上封口。
（2）110℃±1℃水解24小时。
（3）切开水解管用去离子水全部转移到__容量瓶中、定容，双层滤纸过滤，取滤液1ml 置于25ml小烧杯中，在加NaOH的真空干燥器中蒸干（水浴加热不超过45℃），加入__mlpH2.2的盐酸溶解后，溶液转移到样品瓶中备用。
（二）碱水解测定色氨酸样品前处理
精确称取一定量的样品放入已编号的特制水解管中，加入含5%SnCl2的5NNaOH__ml,抽真空封口110℃水解20小时，冷却、全部转移至__ml容量瓶中用6NHCl中和至中性，定容至刻度、摇匀、用双层滤纸过滤，上机测定水解样品中的色氨酸含量。
附：
5、单体氨基酸标样的配制：
氨基酸的分子量/20,即为称样量（mg）,溶解后定容到500ml。
酸的纯度测定
用紫外做单一氨基酸的纯度测定时，用目的氨基酸的分子量/2，即为称样量（mg），溶解后定容到250或500ml.
碱水解测定色氨酸的样品称样量是酸水解的2倍，其余相同
四、酶蛋白、糖蛋白、肽等微量样品的氨基酸分析样品要
求：
1、样品中不含有盐或经酸水解后会形成结晶的组分。
2、酶蛋白、糖蛋白等样品的17种氨基酸定量分析，样品中的蛋白绝对含量应不低于200
μg；需另外测定色氨酸时样品的需求量要增加一倍。
若只做氨基酸的定性分析样品的需求量可减至定量分析样品需求量的三分之一左右。
样品若为液体时，在保证蛋白绝对含量的同时，其体积不得超过4ml。
3、肽类样品的氨基酸分析的样品要求参照酶蛋白的氨基酸分析的样品要求，肽样品中的氨
基酸残基数低于8个，则对样品的需求量可相应降低一倍。
4、液相色谱做氨基酸分析，用紫外检测器时，标样的浓度是100ppm左右（视氨基酸分子
量而定），定量分析的最低浓度应控制在10ppm左右；用荧光检测器时其浓度均降低10倍。
定性分析样品浓度可在各自相应浓度的基础上再降低5倍左右。
5、无论是定量分析还是定性分析，样品量越多，测定的数据越准确。
所以在对微量样品的
氨基酸分析时，在不影响其他测定项目和实验的前提下，尽量提供多一些样品。
五、分析原理和色谱条件
（一）安捷伦1100液相色谱分析氨基酸的工作原理（柱前衍生）：具有不同R基团的氨基酸与邻苯二甲醛（OPA）自动衍生化反应后，不同的氨基酸都能生成唯一的衍生
物（产物具有紫外和荧光吸收）。
衍生物经C18柱分离、检测，外标法定量。
*脯氨酸是与氯甲基茐甲酯（FMOC）反应。
（二）H835-50氨基酸分析仪工作原理（柱后衍生）：利用氨基酸在不同pH溶液中所带的正负电荷不同这一两性特点，只要在不同时间内流经离子交换柱的缓冲液的pH不同，氨基酸的带电情况就会发生变化，因而与离子交换树脂的结合能力也就不断地在变化，而达到分离的目的。
经柱分离的单一氨基酸与茚三酮在100水浴反应后、比色，外标法测定样品中氨基酸的含量。
（三）色谱条件。