响应面法优化植物乳杆菌代谢产细菌素的发酵条件
大豆酸奶的益生菌应用响应面法优化发酵条件
大豆酸奶的益生菌应用响应面法优化发酵条件摘要：采用响应面法优化大豆酸奶的益生菌益生菌文化即单一，发展利用粪链球菌发酵工艺条件下，不使用任何添加剂。
本实验设计如下的中心旋转组合设计三个独立的变量，即，接种浓度（1–3% V / V），培养温度（37–43 C）和培养时间（12–15 h）。
缺乏合适的测试是微不足道的决定系数均高，范围从79.59到95.11%，除了在合音的情况（53.54%）。
结果表明，接种量，培养温度和培养时间对大豆酸奶的理化性质的影响。
优化的条件如下：接种量1.78%，培养温度，40.53c；（41）；和孵育时间，16小时，与80.7%宜益生菌大豆酸奶的研制。
实际应用：本文介绍了大豆酸奶的研制过程的优化。
单一的益生菌文化是用来开发益生菌大豆酸奶。
单文化是用，质量稳定的产品可以得到。
响应表面的方法已被用于过程优化；得到模型可用于任何因素的最佳参数组合。
所提供的信息能为益生菌大豆酸奶的大规模发展是有用的。
介绍：各种食品基质利用全球生产发酵具有潜在的益生菌的食物（Bansal等人。
2013，2014）。
发酵豆制品是日常饮食的重要部分，因为他们通常被视为健康食品。
亚洲益生菌食品的消费热潮，欧洲和美国已由于益生菌微生物包含作为饮食辅助治疗发生。
附加属性的豆类食品由于其降血脂，抗动脉粥样硬化，anticholesterolemic性能，减少过敏（vij等人。
2011）。
此外，发酵豆乳导致如血管紧张素转换酶活性肽的生产（ACE）抑制肽（Korhonen和pihlanto 2003）和提高生物利用度的异黄酮糖苷型异黄酮转化导致各自的苷元（羊栖菜等。
2005）。
因此，基于一个新兴的豆浆酸奶具有一定的饮食和健康忧虑的消费者细分提供了一个广泛的吸引力。
益生菌通常销售作为在胶囊和粉末形式的保健食品或添加到酸奶的益生菌，这是公司最受欢迎的汽车。
“功能”食品目前市场上反映了使用食物作为益生菌微生物系统方便的多元化。
响应面法在生物过程优化中的应用
响应面法 （RSM） 是 1951 年 Box- Wilson 开发 3.1 Plackett- Burman 设计法的应用
的用于化学过程因子优化的一种综合性方法。响应
Plackett- Burman 设计法是一种两水平的实验设
面法采用多元二次回归方程来拟合因素与响应值之 计方法。他试图用最少的实验次数使因子的主效果
1 几种常见生物过程优化技术的比较
1.1 单次单因子法 单次单因子法是传统的优化方法，即每次实验
只改变一个因子而保持其他因子不变的优化方法。 当考察的因子较多时，这种优化方法需要的实验次 数较多、实验周期较长，还可能因实验批次的不同 和实验条件的不一致导致不可靠甚至错误的结论， 而且这种方法还不能够分析因素之间的交互作用。 但由于不需要数学统计方面的知识，而且操作简 单、结果也能直观地用图表显示，单次单因子法仍 然是常见的生物过程优化方法之一。 1.2 正交试验设计
2010 年第 2 期 田泱源，等：响应面法在生物过程优化中的应用
9
6 月出版
取最佳实验方案时，对于不显著因素的选取一般是 凭经验。因此，正交试验对于创新实验是不宜选择 的。
为了弥补传统的单次单因子法和正交试验设计 法的缺陷，近年来许多生物过程优化技术已采用了 统计学方法。常见的优化技术包括响应面法 （response surface methodology）、调优运算 （evolutionary operation）、典型分析法 （canonicalanalysis）、单纯 形法等，其中响应面法是近年来应用最多的一种优 化技术。 1.3 调优运算
典型分析法是利用综合变量对之间的相关关系 来反映两组指标之间的整体相关性的多元统计分析 方法。他的基本原理是：为了从总体上把握两组指 标之间的相关关系，分别在两组变量中提取有代表 性的两个综合变量 U1 和 V1 （分别为两个变量组中 各变量的线性组合），利用这两个综合变量之间的 相关关系来反映两组指标之间的整体相关性。其基 本思想是：
功能性酸奶复合益生菌菌株筛选及发酵工艺优化
功能性酸奶复合益生菌菌株筛选及发酵工艺优化
袁秀丽;刘晨丽
【期刊名称】《中国食品添加剂》
【年(卷),期】2024(35)5
【摘要】以黏度、酸度、质构、感官评价为指标,筛选功能性酸奶发酵的复合益生菌,利用响应面法优化发酵工艺,并分析最佳工艺下产品品质。
结果表明,功能性酸奶发酵的复合益生菌为植物乳杆菌Lp 20265(Z02)、保加利亚乳杆菌(Z05)、嗜热链球菌HST-9 (Z07);最佳发酵工艺是菌种配比Z02∶Z05∶Z07为2∶1∶2、核桃粕含量218 mL、发酵温度43.3℃、发酵时间8.5 h,此条件下其品质为脂肪酸含量(42.31±1.01) mg/g、主要成分6种,蛋白质含量(324.9±1.01) mg/g,含18种氨基酸,有机酸6种,香气主要成分7种,大肠菌群≤0.03 MPN/mL,致病菌与重金属铅含量均未检出,符合国家食品安全标准。
本研究结果为功能性酸奶研发提供技术参考。
【总页数】12页(P1-12)
【作者】袁秀丽;刘晨丽
【作者单位】北京同仁堂兴安保健科技有限责任公司保健食品分公司
【正文语种】中文
【中图分类】TS252.54;TS201.3
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产细菌素双歧杆菌的筛选及其分泌条件研究_尚楠
产细菌素双歧杆菌的筛选及其分泌条件研究尚 楠，王 洋，任发政，李平兰*(中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083)摘 要：以32株我国广西巴马长寿老人源双歧杆菌为材料，以植物乳杆菌PL-2为指示菌，经筛选获得1株具有明显抗菌效果的双歧杆菌L-SN 。
排除有机酸、H 2O 2等干扰因素，经硫酸铵沉淀粗提，蛋白酶敏感性实验后确定其产生的抗菌物质为细菌素。
通过形态学、生理生化以及16S rRNA 序列分析鉴定菌株L-SN 为动物双歧杆菌乳亚种(Bi fi dobacterium animalis subsp . lactis L-SN)。
进一步研究菌株L-SN 产细菌素的生物学特性，确定其最佳分泌细菌素条件为起始pH6.5、培养温度30℃、培养时间28h 。
在此基础上，考察菌株L-SN 所产细菌素的抗菌谱，发现其具有广谱的抗菌效果，尤其对金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌等致病菌有显著的作用，显示出该双歧杆菌的潜在开发应用前景。
关键词：双歧杆菌；筛选；细菌素；分泌特性Screening of Bacteriocin-producing Bi fidobacterium Strain and Culture Coditions for Bacteriocin Secretion SHANG Nan，WANG Yang，REN Fa-zheng，LI Ping-lan *(College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing100083, China)Abstract ：Bi fi dobacterium L-SN capable of producing an antimicrobial substance that was effective against Lactobacillus plantarum PL-2 was screened from 32 strains of Bi fi dobacterium isolated from the feces of centenarians in Bama county of Guangxi region. By eliminating the effects of organic acid and H 2O 2, we con fi rmed the antimicrobial role because of bacteriocin. Based on morphological, physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA sequence analysis, the strain L-SN was identi fi ed as Bi fi dobacterium animalis subsp. lactis . We investigated the secretion characteristics of Bi fi dobacterium animalis L-SN and established the optimum incubation conditions for producing bacteriocin: 28 h of culture at 30 ℃ and initial medium pH 6.5. The bacteriocin had a wide spectrum of antibacterial activities against Gram-positive and Gram-negative bacteria, especially against Staphylococcus aureus , Escherichia coli and Listeria monocytogenes showing a potential application prospect.Key words ：Bi fi dobacterium ；screening ；bacteriocin ；secretion characteristics 中图分类号：Q 936 文献标志码：A 文章编号：1002-6630(2013)23-0170-06doi:10.7506/spkx1002-6630-201323036收稿日期：2013-09-21基金项目：国家自然科学基金项目(31071591)作者简介：尚楠(1990—)，女，硕士研究生，主要从事益生菌的研究。
植物乳杆菌素产生条件及分离方法的优化
现代食品科技Modern Food S cience and Technology2014, Vol.30, No.10植物乳杆菌素产生条件及分离方法的优化姜黎明，罗义勇，王良才，李晓然，柳陈坚 （昆明理工大学生命科学与技术学院，云南昆明 650500）摘要：目前植物乳杆菌常规发酵产生的植物乳杆菌素产量一般较低，优化植物乳杆菌素的产生条件和分离纯化方法是提高其产 量的有效途径。
本文以 3 株 Lb. plantarum 为实验材料，研究了发酵时间、温度、培养液初始 pH 值和培养基成分等因素对 Plantaricin 产量的影响。
基于优化培养条件的研究结果，再探究五种不同 Plantaricin 的分离纯化方法，使两者达到最佳组合。
研究发现： （1）发 酵时间在 28~35 h 内，温度 30~37 ℃，培养液初始 pH 在 6.5~7.0，10 g/L 葡萄糖和 10 g/L 蔗糖为碳源，10 g/L 蛋白胨、5 g/L 牛肉膏 和 5 g/L 酵母粉为氮源，2 g/L 磷酸氢二钾、0.2 g/L 硫酸镁、0.05 g/L 硫酸锰、 2 g/L 柠檬酸铵和 5 g/L 乙酸钠为无机盐，1 mL/L 吐温-80 为乳化剂，优化后 Plantaricin 产量较优化前提高了 1.5 倍以上； （2）最佳分离方法为超滤法。
发酵液通过超滤法分离后，回收率达到 了 71%。
本研究为获得尽量多的 Plantaricin 以及 Plantaricin 工业化开发利用提供理论基础和技术支撑。
关键词：植物乳杆菌素；产生条件；分离方法；优化 文章篇号： 1673-9078(2014)10-218-225 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.10.037Optimization of Production Conditions and Separation Methods for PlantaricinJIANG Li-ming, LUO Yi-yong, WANG Liang-cai, LI Xiao-ran, LIU Chen-jian （College of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650500, China ）Abstract: At present, the yield of plantaricin produced by Lactobacillus plantarum through conventional fermentation is relatively low. Therefore, optimization of plantaricin production conditions and methods of isolation and purification is an effective approach to improve its yield. In this study, three strains of L. plantarum were chosen as fermentation agents and the effects of fermentation time, temperature, initial pH of the culture, and medium composition on the production of plantaricin were investigated. Based on the results of such optimization techniques, five different methods for separation and purification of plantaricin were explored and the best combination was identified as follows: fermentation time of 28~35 h; temperature at 30 ℃~37 ℃; initial pH of the culture medium at 6.5~7.0; 10 g/L glucose and 10 g/L sucrose as carbon sources; 10 g/L peptone, 5 g/L beef cream, and 5 g/L yeast powder as nitrogen sources; 2 g/L potassium hydrogen phosphate, 0.2 g/L magnesium sulfate, 0.05 g/L manganese sulfate, 2 g/L ammonium citrate, and 5 g/L sodium acetate as inorganic salts; and 1 ml/L tween-80 as emulsifier. Under these optimized culture conditions plantaricin yield increased by at least 1.5 times. The optimal separation method identified as ultrafiltration, where the recovery rate reached 71% after fermentation broth was extracted by ultrafiltration. Results from this study thus provide theoretical and technical evidence for increasing plantaricin yield which will be useful for industrial applications. Key words: plantaricin; production conditions; separation methods; optimization细菌素（Bacteriocin）是由某些细菌通过基因编 码、 核糖体合成的具有抗菌生物活性的蛋白质或多肽。
植物乳杆菌培养基的优化
植物乳杆菌培养基的优化李达发酵剂是影响发酵产品质量的关键因素, 它的制备需要有良好的增菌培养基, 使植物乳杆菌得以大量增殖, 从而使其在经过喷雾干燥、冷冻、冻干等处理后有足够的活菌数存活。
因此优化植物乳杆菌增菌培养基是一项十分重要的基础研究工作。
植物乳杆菌是泡菜、发酵谷物、发酵肉制品等重要发酵剂的组成菌之一。
植物乳杆菌K25分离于西藏灵菇中, 在对其进行研究时发现, 用MRS培养基培养该菌时, 菌落总数仅能达到6.7×107cfu·mL- 1 左右。
菌液中活菌数的增加, 可以通过培养基的优化设计来实现, 因此需要对培养基进行优化, 提高菌液中活菌数的含量。
本文旨在通过对植物乳杆菌的培养基进行优化, 从而获得活菌数较高的菌液, 为研制高活力的冷冻干燥发酵剂及其产品的开发奠定基础。
1 材料与方法1.1 试验菌种L. plantarum K25, 分离于西藏灵菇。
1.2 材料与设备胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏为生化试剂; K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4和各种糖类均为分析纯。
722 型分光光度计、立式压力蒸汽灭菌器、超净工作台、分析天平、DNG- 9240 型恒温鼓风干燥箱。
1.3 培养基及培养条件活化和计数培养采用MRS 培养基, 蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、酵母膏5 g、KH2PO4 2 g、柠檬酸三钠2 g、乙酸钠2 g、葡萄糖20 g、Tween 80 1 mL、MgSO4·7H2O 0.58 g、MnSO4·4H2O 0.25 g, 用蒸馏水定容至1 L, 调pH 6.2~6.4, 121 ℃灭菌15min。
以MRS 培养基为基础, 按照试验设计添加不同生长因子, 接种量0.5%接入150 mL 液体培养基中, 37 ℃静置培养24 h1.4 方法1.4.1 不同碳源、氮源、磷源的选择在MRS 液体培养基的基础上, 分别添加2%(w/v) 乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖作为不同碳源; 选择胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏, 分别加入2.5%( w/v) 作为的不同氮源; 分别加入0.2%( w/v) K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4 作为不同磷源, 其他组分均相同。
响应面法优化鹿茸菇液体菌种发酵配方的研究
深度研究报告：优化鹿茸菇液体菌种发酵配方的研究1. 研究目标本研究旨在优化鹿茸菇（Hericium erinaceus）液体菌种的发酵配方，以提高发酵效率和产量。
通过系统性的实验设计和数据分析，探索最佳的发酵条件和培养基组成，为鹿茸菇液体菌种的大规模生产提供科学依据。
2. 方法2.1 实验材料准备收集新鲜的鹿茸菇菌丝体作为实验材料，并进行无菌处理。
准备不同组分的培养基，包括碳源、氮源、无机盐、维生素等。
2.2 培养条件的优化在恒温摇床上进行批次发酵实验，通过调整培养温度、pH值、初始接种量等参数来优化培养条件。
采用响应面法进行试验设计，并根据试验结果进行数据分析。
2.3 数据分析使用统计软件对实验结果进行多元回归分析，建立数学模型描述关键因素和响应变量之间的关系。
根据模型对响应面进行拟合，找到最佳的发酵条件和配方组合。
3. 发现3.1 培养基组分优化通过单因素实验和正交试验，确定了最优的培养基组分。
结果表明，鹿茸菇菌丝体的生长和产量受到碳源、氮源和无机盐的影响较大。
最佳培养基配方为：葡萄糖20 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2PO4 2 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、维生素B1 0.05 g/L。
3.2 培养条件优化通过响应面法对培养条件进行优化。
结果显示，在温度为28℃、pH值为5.5、初始接种量为5%时，鹿茸菇液体菌种发酵效果最佳。
3.3 发酵效果评价在最佳培养基配方和条件下进行扩大规模发酵实验，得到了较高的产量和良好的发酵效果。
菌丝体生长周期缩短至10天，产量提高了30%以上。
4. 结论通过本研究，我们成功优化了鹿茸菇液体菌种的发酵配方，找到了最佳的培养基组分和培养条件。
最佳配方为葡萄糖 20 g/L、酵母粉 10 g/L、KH2PO4 2 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、维生素B1 0.05 g/L；最佳条件为温度28℃、pH值5.5、初始接种量5%。
植物乳杆菌LPL-1产细菌素发酵培养基优化
ｔｅｓｔｓ ａｎｄ Ｐｌａｃｋｅｔｔ～ Ｂｕｒｍａｎ ｔｅｓｔｓ． Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｅｅｐｅｓｔ ｇｒａｄｅ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍ ａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍ ｐｏｓｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ａｓ ｇｌｕｃｏｓｅ ２．０８％ ， ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ ０．５ １％ ， ｔｒ ｙ ｐｔｏｎｅ １．０２％ ， ｂｅｅｆ ｅｘｔｒａｃｔ １％ ， Ｔｗｅｅｎ 一 ８０ １．０２ ｍＬ／Ｌ， Ｋ２ ＨＰＯ４ ３ ｇ／Ｌ ， ＮａＡｃ ０．５％ ， ＭｇＳＯ４ ０．２ ｇ／Ｌ， ＭｎＳＯ４ ０．３ ｇ／Ｌ，ｔｒｉ—ａｍｍ ｏｎｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ ２ ｇ／Ｌ ，ａｎｄ ｄｄＨ ２ Ｏ １ Ｌ． Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍ ａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅａｃｈｅｄ ｕｐ ｔｏ ７５２．１ １ ＡＵ／ｍＬ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ １．６２ ｔｉｍ ｅｓ． Ｆｉｎａｌｌｙ， ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｉｎｓｉｇｈｔ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｕｓｅ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ ａｓ ａ ｆｏｏｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｏｄ ｉｎｄｕｓｔｒｙ． Ｋｅｙ ｗ ｏｒｄｓ： Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＬＰＬ 一 １； ｐｌａｎｔａｒｉｃｉｎ ＬＰＬ 一 １； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｍ ｅｄｉｕｍ ； ｒｅｓｐｏｎｓｅ
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响应面法优化植物乳杆菌代谢产细菌素的发酵条件陈 琳，孟祥晨*(东北农业大学 乳品科学教育部重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150030)摘 要：为提高一株分离自内蒙古传统发酵稀奶油“焦克”中的植物乳杆菌KLDS1.0391代谢产细菌素量，以中性蛋白酶水解脱脂乳为培养基，以枯草芽孢杆菌为指示菌，以抑菌圈直径为考察指标，在单因素试验的基础上，采用响应面法优化发酵pH 值、温度以及接种量。
结果表明：对该菌代谢产细菌素的活性影响大小依次为：发酵pH 值＞接种量＞发酵温度；最优发酵条件为：pH5.1、发酵温度33℃、接种量1%。
在此条件下，发酵液的抑菌圈直径为15.00mm ，细菌素的效价为601.32IU/mL ，较优化前提高了43.08%。
在最优发酵条件下获得的实验结果与模型预测值吻合，说明所建立的模型是切实可行的。
关键词：响应面；细菌素；植物乳杆菌；焦克Optimization of Fermentation Conditions of Lactobacillus plantarum for Bacteriocin Production by ResponseSurface MethodologyCHEN Lin ，MENG Xiang-chen*(Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China)Abstract ：The fermentation condition of Lactobacillus plantarum KLDS1.0391 isolated from Jiaoke , a traditional fermented cream from Inner Mongolia in China, were optimized for bacteriocin production. Skim milk hydrolyzed by neutral protease was used as the medium; Baicillus subtilis was used as indicator bacteria and diameter of inhibition zone was used as evaluation index of antibacterial activity. Based on the single factor tests, the optimal fermentation conditions for producing antibacterial components with high yield in this strain was explored by response surface methodology with three variables of fermentation pH, fermentation temperature and inoculation amount. Results indicated that the order for affecting the yield of antibacterial components from strong to weak was fermentation pH, inoculation amount and fermentation temperature. The optimal fermen-tation conditions were pH 5.1, inoculation amount of 1% and fermentation temperature of 33 ℃. Under these optimal conditions,the diameter of inhibition zone reached up to 15.00 mm. The antibacterial activity was increased by 43.08% and reached up to 601.32 IU/mL. Therefore, it is feasible for the established model due to the consistent results between the prediction and experiments.Key words ：response surface ；bacteriocin ；Lactobacillus plantarum ；Jiaoke中图分类号：TQ920.6 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)03-0176-05收稿日期：2010-04-16基金项目：黑龙江省留学归国科学基金项目(LC2009C30)；国家“863”计划项目(2008AA10Z335)作者简介：陈琳(1985—)，女，硕士研究生，主要从事食品微生物研究。
E-mail ：chenlinlucky@*通信作者：孟祥晨(1970—)，女，教授，博士，主要从事乳品科学及食品发酵研究。
E-mail ：xchmeng@“焦克”是内蒙古的一种传统发酵稀奶油产品，属于自然发酵乳制品，保质期较长，其中蕴含丰富的乳酸菌资源。
乳酸菌发酵乳糖产酸形成低pH 值是其能够较长时间保藏的主要原因，其次，乳酸菌代谢产生的具有抑菌活性的物质，如细菌素，也有利于这种产品的保藏[1]。
在前期研究中笔者分析了从“焦克”中分离的67株乳酸菌产抑菌物质的能力，发现4株乳杆菌具有较强的产抑菌物质的能力，经排除干扰因素后确定主要的抑菌物质为细菌素。
其中，植物乳杆菌KLDS1.0391代谢产生的植物乳杆菌素MG 不仅可以抑制单细胞增生利斯特氏菌等革兰氏阳性细菌，还可抑制沙门氏菌等革兰氏阴性细菌，该细菌素是具有良好热、酸稳定性的,,,,蛋白质性物质[2]，在食品中有良好的应用前景。
乳酸菌代谢产生细菌素的能力和产量，除了受菌株自身特性的影响，还受发酵条件的影响，如培养基、发酵pH值[3]、发酵温度[4]以及接种量[5]等。
本研究以分离自“焦克”的植物乳杆菌KLDS1.0391为研究对象，以前期优化的酶水解脱脂乳为培养基，通过单因素试验和响应面法优化发酵条件，获得该菌代谢产生细菌素的最优发酵参数，为该细菌素的开发利用提供参考。
1材料与方法1.1菌株、培养基与试剂植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)KLDS1.0391分离自内蒙古自治区传统发酵稀奶油，由乳品科学教育部重点实验室工业微生物菌种保藏中心冻干保藏。
指示菌株：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC6633购自中国药品生物制品检定所。
MRS培养基英国Oxoid公司；营养肉汤培养基北京奥博星生物技术有限责任公司。
脱脂乳(蛋白质含量为35%) 新西兰Karicare公司；中性蛋白酶(酶活力为0.8AU/g) 北京诺维信公司；乳链球菌素Nisin(含Nisin 2.5%) 美国Sigma公司；其他试剂均为分析纯。
1.2仪器与设备KLF2000 3.7L发酵罐瑞士比欧生物工程公司；SPX-150B生化培养箱上海智城分析仪器制造有限公司；ES-2030冷冻干燥机日本日立公司；HVE-50型高压灭菌器日本Hirayama公司；BCN1360型生物洁净工作台上海佳胜实验设备有限公司。
1.3方法1.3.1菌种的活化与培养植物乳杆菌KLDS1.0391经活化传代恢复活力后，以1%接种量接入MRS培养基中，37℃静置培养24h。
枯草芽孢杆菌ATCC6633经活化传代恢复活力后，以0.3%接种量接种到营养肉汤培养基中，37℃摇床培养18h。
1.3.2发酵液抑菌活性的测定无细胞发酵上清液的制备：取发酵液于4℃、12000×g 离心15min，收集上清液，用6mol/L NaOH调pH6.5，以中和有机酸的干扰，经0.22μm滤膜过滤，除去菌体及其他杂质，然后冷冻干燥，冻干后取1g冻干样品加入1mL灭菌双蒸水，溶解后放入－20℃冰箱中备用。
采用双层平板打孔法测定抑菌活性[6]。
配制质量浓度1.2g/100mL琼脂，灭菌后按每平皿10mL倾倒平板，备用。
制备含质量浓度0.7g/100mL琼脂的100mL肉汤培养基，灭菌后冷却至50℃左右，接入0.6mL枯草芽孢杆菌培养液，混匀后立即取6m L倒入含有琼脂的平皿上，冷却后，用打孔器打孔，孔直径为6m m。
在孔中加入50μL无细胞发酵上清液，在超净工作台上放置3h后，于30℃静置培养24h，取出平皿后用游标卡尺测量抑菌圈直径(不含孔径)。
细菌素效价的测定：根据Cabo等[7]的方法绘制标准效价曲线，以枯草芽孢杆菌ATCC6633为指示菌，以Nisin为阳性对照。
将上述获得的抑菌圈直径代入效价回归方程，计算发酵液中细菌素的效价。
本实验测得回归方程为y=0.2425x+0.6111，y表示效价的对数值；x 表示抑菌圈直径(不含孔径，单位为mm)，R2=0.9868。
1.3.3酶水解脱脂乳培养基的制备配制质量浓度4g/100mL的脱脂乳溶液2L，调pH7.0，水浴中升温至50℃，添加0.05g/100mL的中性蛋白酶，恒温水解，水解过程中加入2mol/L的氢氧化钠维持pH 7.0。
根据pH-stat方法[8]制备成水解度为15%的脱脂乳溶液，然后添加质量浓度2g/100mL葡萄糖和0.1g/100mL 吐温-80制成用于发酵的酶水解脱脂乳培养基。
1.3.4单因素试验按照1.3.3节方法制备酶水解脱脂乳培养基，装入3.7L发酵罐中，装罐量为2L，115℃灭菌15min。
选择发酵p H值、发酵温度、接种量作为影响抑菌活性的主要因素，通过单因素试验选取响应面试验的因素和水平。
1.3.4.1发酵pH值对植物乳杆菌代谢产细菌素的影响以1%接种量接种植物乳杆菌KLDS1.0391培养液，发酵pH值分别设为4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，发酵温度30℃，发酵时间24h。
发酵结束后，放罐、取样，按照1.3.2节所述方法测定发酵液的抑菌圈直径。
1.3.4.2接种量对植物乳杆菌代谢产细菌素的影响分别以1%、2%、3%、4%的接种量接种植物乳杆菌KLDS1.0391培养液，发酵pH值为5.0，发酵温度30℃，发酵时间24h。
发酵结束后，放罐、取样，按照1.3.2节所述方法测定发酵液的抑菌圈直径。
1.3.4.3发酵温度对植物乳杆菌代谢产细菌素的影响以1%接种量接种植物乳杆菌KLDS1.0391培养液，发酵pH值为5.0，发酵温度分别设为30、35、40℃，发酵时间24h。