HIV抗体检测实验操作规程
HIV抗体检测的标准操作程序
HIV抗体检测的标准操作程序【目的】保证检测结果准确可靠，为临床诊断提供可靠的参考依据【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【标本的采取和保存】随机静脉血2ml，分离血清备用。
也可使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
【操作程序】1.实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1:20稀释。
2.加待测标本：加入待测标本每孔50微升，并设HIV阳性对照2孔，HIV阴性对照3孔，空白对照1孔，充分混匀，置37C孵育30分钟。
3.洗板：1）手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5-10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。
2）洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。
4.加酶结合物：每孔50微升，空白对照孔不加，充分混匀，置37C孵育20分钟。
5.洗板：1）手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5-10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。
2）洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。
6.加显色剂：先加显色剂A,每孔0.05毫升；再加显色剂B,每孔0.05毫升;充分混匀，放置37C避光孵育15分钟。
7.终止反应：每孔加入终止液0.05毫升，混匀。
8.测定：用酶标仪读数，可选择唯波长450nm（以空白孔校零）或双波长450/630nm,读取各孔OD值。
【结果判断】1、阴性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照孔OD值＜0.102、阳性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照孔OD值》0.803、临界值（Cutoff值）计算：COV=阴性对照平均OD值+0.124、阳性判定：样品即标本OD值》COV为阳性，标本OD值＜COV为阴性5、注意：初试阳性标本应重新用不同的试剂和方法进行重测，复试阳性者应按“全国HIV检测管理规范”送HIV确证实验室进行确证实验。
HIV抗体检测操作规范
HIV抗体检测操作规范1、目的可用于监测、诊断、血液筛查。
本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。
可作为对HIV感染者/AIDS病人的诊断、报告和处理的实验室依据2、适用范围可作为对HIV感染者或AIDS病人的诊断、报告和处理的实验室依据。
3、职责3.1实验室工作人员应熟知并遵守本SOP,掌握艾滋病病毒（H1V）检测的方法、检测程序、及检测报告及检测策略。
3.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
4、操作程序4.1常规HIV抗体检测的方法和程序。
4.2H1V抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验。
4.3HIV抗体检测筛查试验。
4.3.1筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。
推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
4.3.2筛查方法4.3.2.1常用的筛查方法是酶联免疫试验（E1ISA）目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法）试剂，少数使用第二代试剂。
血源筛查仍以第三代E11SA为主，国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定（第四代E1ISA试剂）用于血源筛查。
第四代E1ISA试剂是最近发展起来的H1V抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24抗原和抗HIVT/2抗体。
与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了4~9.Id。
其优点在于能同时检测抗原抗体，降低血源筛查的残余危险度。
4.3.2.2快速检测（RT）及其它检测随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展，及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测(VCT)的迫切需求，简便、快速的H1V检测方法被广泛应用。
常用的主要有以下几种：a.明胶颗粒凝集试验(PA)：PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将H1V抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温(一般为室温)。
HIV抗体检测标准操作程序(SOP)
HIV抗体检测标准操作程序（SOP）——微生物科一、样本的采集和处理二、检测方法和步骤三、质控品的应用方法四、仪器的使用和维护五、结果的记录、解释与报告六、保密程序七、实验室的清理、消毒八、艾滋病检测实验室安全防护九、附表样品的采集和处理1.1血清样品采集：用注射器抽出一定量静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血清凝固和血块收缩后在用3000rmp离心15min，吸出血清备用。
1.2抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。
1.3采样注意事项：1.3.1采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。
1.3.2采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。
2、样品的保存：2.1用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20摄食度以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8摄食度。
3.样品的运送：3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。
样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、、采样时间。
3.2将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。
在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。
3.3特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须将盛有样品的试管包扎好，保证不会破碎和遗漏。
4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。
4.2核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。
如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。
检验方法和步骤1.检验方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）2.检验步骤：严格按照试剂说明书操作。
3.注意事项：3.1禁止肉眼判读！3.2保证酶标仪，洗板机正常运转，保证加样器准确，选择高质量的与加样器配套的TIP头3.3使用有效期内的试剂3.4保证样品质量质控品的应用方法1.质控品按临床样本对待，操作应依照实验室安全管理条例执行。
HIV初筛实验室标准操作规程
HIV初筛实验室标准操作规程人类免疫缺陷病毒（HIV）1+2型抗体酶联免疫原理和方法（上海科华生物）原理：用HIV-1+2型抗原包被酶联板。
待检血清或血浆中的抗-HIV抗体与包被抗原反应，再与酶标HIV-1+2型抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物。
加底物（TMB显色，在酶标仪上测定后根据0D值判定有无HIV抗体的存在。
操作步骤：1、取出HIV抗原包被板。
每次试验设空白对照1孑L,阴性对照各1孑L,阳性对照各3孔（其中阳性对照1两孔，阳性对照2 一孔），质控一孔。
分别加入HIV阴、阳性对照质控血清各100微升，其余孔加入待检样本各100微升。
贴上封口胶，置37C温育60分钟。
2、将浓缩洗液用纯化水25倍稀释后洗涤用。
3、弃去各孔中样品、拍干。
每孔加满洗液，静置数秒后弃去，如此重复洗5次，拍干。
4、每孔加入酶标抗原工作液100微升，贴上封口胶。
37E温育30分钟。
5、弃去各孔中酶液，用洗液反复洗涤5次（操作同步骤3）。
&每孔加入底物液A50微升，再加入底物液B50微升，轻拍混匀，置37E 避光显色30分钟。
7、显色完毕后，每孔加入终止液50微升，轻拍混匀，置酶标仪450nm波长处测定OD fi （参考波长为630nm。
结果判定：阴、阳性对照和被检样本的0D值减去空白对照0D值即为计算值。
2、若阴性对照0D均值小于按计算。
3、临界值（cut off 值）的设定：cutoff 值=PCx X 10% （若PCx＞按算）4 、被检样本的OD®》临界值应判为HIV抗体阳性反应，＜临界值为阴性反应。
检测样本的OD值》临界值判为HIV抗体阳性，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照“全国HIV检测管理规范”送“ HIV确认实验室”进行确认实验。
注意事项：1、本试剂的使用单位必须是当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。
2、整个HIV检测必须符合《全国艾滋病检测工作规范》严格防止交叉感染。
操作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。
HIV测定（胶体金法）操作规程
HIV测定操作规程（胶体金法）1、检验目的用于快速定性检测人全血、血清或血浆样品中的HI V 1/2型抗体。
2、原理采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定全血、血清或血浆样本中的HI V 1/2型抗体。
检测陽性样本时，样本中的HI V抗体与胶体金标记抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的重组抗原结合形成夹心物而凝聚显色，游离的胶体金标记重组抗原则在对照线处与抗H I V单克隆抗体结合而富集显色。
阴性标本则仅在对照线处显色，30分钟内观察结果即可。
3、性能参数●用国家参考品测定，阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、精密性、最低检出量、稳定性能均符合要求，测定类风湿因子阳性血清、乙型肝炎、甲型肝炎、梅毒及非肝炎传染病患者等各种类型的血清不得引起干扰。
●本测试条/卡仅用于体外诊断试验，仅用于人全血、血清或血浆，其他体液和样本可能得不到准确的结果。
●对于下列物质在所给出的浓度下对测试结果不造成影响：测定物质名称测定的浓度测定物质名称测定的浓度胆固醇≤200 mg/ml 血红蛋白≤178 g/L甘油三酯≤200 mg/ml 胆红素≤16 mg/L4、标本要求●标本类型：血清或血浆，血浆样本对临床常用抗凝剂（EDTA、肝素、枸橼酸钠）无要求。
●标本采集：见标本采集手册。
●标本储存和运输：如果血清或血浆样品收集后7天内检测，样品须放在2～8℃保存，如果大于7天则须冷冻保存；全血标本建议在3天内检测，样品放在2～8℃保存，不得冻存。
●标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或严重脂血标本不能作测定。
5、容器和添加剂类型使用一般干燥管（不添加任何东西），或EDTA、柠檬酸钠、肝素抗凝管盛放血液。
6、贮存条件及有效期储存条件：4--30℃密封干燥处保存，有效期为16个月。
2、HIV抗体检测(胶体金法)
sop 版本号：第五版标准操作规程（SOP）编号：DZJY/ZY450-02题目：HIV抗体检测（胶体金法）版本：第五版作者：曲文才、张庆玲日期：2010/05/21页数：3修订历史：联系人：曲文才SOP： 1 版本号：第五版sop 版本号：第五版一、目的本SOP规定了艾滋病实验室，HIV抗体胶体金法检测方法、检测程序、检测报告。
二、适用范围艾滋病病毒1+2抗体检测。
三、责任实验室操作人员严格按要求执行。
四、原理：检测板采用基因工程制备的gp41、gp120、gp36抗原为包被抗原和金标抗原，双抗原夹心法检测HIV抗体。
当被检测标本中含有HIV抗体时，先于金标抗原反应，形成抗体-金标抗原复合物，在虹吸作用下向前移动，遇到包被抗原形成抗原-抗体-金标抗原复合物，并出现红色沉淀线。
包被膜上同时带有一条质控包被线作为对照，故出现一条红色质控线和一条（或两条）红色反应线时判为阳性。
当检测样本中无HIV抗体时，只出现一条红色质控线判为阴性。
作为质控，不管结果阳性或阴性，都会出现一条红色质控线。
若无红色（或只有反应线）出现，则试验无效，样本须重检。
五、程序1、撕开一装有HIV1/2抗体检测板的包装袋，取出检测板水平放置于实验台上。
2、用塑料吸管加2滴血清/血浆样本于样本孔中。
3、15-30分钟内观察并记录实验结果。
六、结果判断阳性结果：在试验板的检测线和质控线位置上，出现一条或二条红色线，试验结果均为阳性。
阴性结果：仅在试验板的质控线位置上出现一条红色线，则试验结果为阴性。
无效结果：在试验板的检测线和质控线位置上均未出现红色线。
SOP： 2 版本号：第五版sop 版本号：第五版七、注意事项1、被检样品、试剂应在室温（20℃左右）平衡并在室温不超过30℃条件下检测。
2、铝箔复合物包装袋破损受潮后检测板不能使用。
八、保存条件4-30℃避光保存、不得冻存。
九、有效期18个月十、参考文件《全国艾滋病检测技术规范》（2009年修订版），中国疾病预防控制中心SOP： 3 版本号：第五版。
HIV实验室标准操作规程
沙洋县人民医院艾滋病筛查实验室作业指导书编制人：王笑石审核人：王笑石批准人：李克华批准日期：2016/1/1实施日期：2016/1/1G受控编号：输血科修订页CHEMCLIN 600全自动化学发光仪标准化操作规程(SOP）一．工作环境温度：10℃—30℃湿度：小于70%电源：220V，50Hz二．开机前的的准备工作1．确保废液桶已清空；2．配制洗针液,确保洗针液的量足够做完一批试验;配置方法见附录1；3．配制洗板液，并装入洗板液桶中，确保洗板液的量足够做完一批试验（每整板微孔板实验需准备洗板液500ml左右)；配置方法见附录2;4．准备好试剂和标本。
三．开机1．打开仪器电源开关（仪器正面左侧)2．打开打印机电源3．打开显示器及电脑主机电源，待电脑启动后双击桌面图标,即可启动仪器. 四．开机维护在运行实验之前，需要对仪器做一次日常维护，具体步骤如下：1.点击主界面中的“维护”按钮，就进入到维护界面，如下图所示：图1 维护界面2.准备好洗针液、洗板液及酒精等系统液体,确保洗板液管路在洗板液桶中，点击“开机维护”按钮，仪器开始执行开机维护动作；3.开机维护完成后，点击窗口右上角“关闭"按钮，即可退出维护界面；4.将酒精溶液收好并盖好瓶盖。
五．选择项目和样本在仪器进行完日常维护后，就可以编制工作列表，具体流程如下：1.点击主界面中的“项目”按钮，进入“项目选择”界面中选择此次试验需要做的项目，点击“确认”返回到主界面；2.在主界面的样本输入框中输入此次试验需要做的样本数,点击按钮，就能将所需做样本添加到项目中；3.预选择样本对应的项目。
在样本和项目对应表中可通过点击或拖住鼠标左键来选择,被选中的样本列表变为黄色;也可通过再次点击左键来取消预选的样本；可通过点击按钮选定所有的样本,同样可通过点击按钮取消所有的选择;4.确认样本和项目对应表.检查无误后点击对应表中项目的名称栏，被选中的项目列表则变为深绿色。
HIV抗体检测的标准操作程序（ELISA法和快速法）
HIV测定（ELISA法）标准操作规程1、检验目的应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。
2、原理采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体反应，加入HRP标记HIV （1+2）型抗体抗原结合，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。
通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。
3、性能参数灵敏度高（0.5ng/ml）4、标本要求（1）标本类型：血清，血浆。
（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，应避免反复冻融（4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
本文来自检验地带网5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。
（2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司（3）包装规格：96T/Kit（4）试剂盒组成：①、HIV酶标板；②、HIV酶标试剂；③、HIV（1+2）型阳性及阴性对照血清；④、显色剂A液和B液；⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、自封袋、封板膜、说明书等。
7、仪器设备：酶标仪：ZS板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准。
洗板机：DNM-9620型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准。
移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。
8、校准程序9、操作步骤①、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释至1000ml备用。
②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照3孔，空白对照2孔。
③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl，用封板膜封板后置37℃温育60min。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
HIV抗体检测实验操作规程
1.检测试剂：初筛用的HIV抗体检测试剂，必须是HIV-1/2混合型，经卫生部批
准或注册，经过批检合格，并在有效期内。
常用的检测方法有固相酶联免疫吸附实验，颗粒凝集和其他快速诊断等方法。
2.检测要点
严格按照试剂说明书操作，不得擅自更改。
注意防止交叉感染。
严格遵守实验室操作规程。
1.初筛检测程序
(1)血液标本验收合格后，用初筛检测试剂进行检测，如呈阴性反应，则做
HIV抗体阴性报告。
(2)初筛检测结果呈阳性反应的标本，需进行重复检测。
复检时用原有试剂
和不同原理的另外一种试剂或不同厂家的初筛检测试剂复检。
(3)如两种试剂复检均呈阴性反应，则作HIV抗体阴性报告；如均呈阳性反
应，或有一份阳性，该标本需送上级实验室加以进一步证实。
送检时应准确填报复检单，重新抽血连同原血专人送省疾控做HIV-Ab确证实验。
编写：审核：批准：。