实验-石蜡组织切片的制作
石蜡切片制作实验报告(二)
石蜡切片制作实验报告(二)石蜡切片制作实验报告实验目的掌握石蜡切片的制作方法，了解其在生物学研究中的应用。
实验原理通过将样品置于石蜡中，使其固定后切割成薄片，然后染色观察样品中的细胞和组织结构。
实验材料•组织样品•石蜡•石蜡切片机•切片染色盒•水、乙醇、甲醇等试剂实验步骤1.取适量的组织样品，放入石蜡中固定。
2.用石蜡切片机将固化后的石蜡和组织样品切割成薄片。
3.用甲醇或乙醇脱除石蜡。
4.进行染色处理，如使用伊红染色。
5.将染好色的切片放入切片染色盒中，加入水并覆盖。
实验结果通过显微镜观察切片中的细胞和组织结构，可窥见其微观世界。
依据样品的不同，可看到各种细胞器、细胞分裂、组织的形态、结构和功能等信息。
实验注意事项1.操作时应戴手套和护目镜以保护手部和眼睛。
2.切片机的切割速度应适中，避免快过头造成样品损伤。
3.染色剂应均匀覆盖于切片表面，以免造成不必要的误差。
实验结论石蜡切片技术是生物学科研中必不可少的一种技术手段，能够突显样品中的微观结构，帮助科研工作者更好地了解和研究生物体的各种组织和器官。
实验应用石蜡切片技术在生命科学与医学领域得到了广泛的应用，如： - 组织学研究：观测组织中各种细胞器、细胞分裂、细胞凋亡等现象。
- 免疫学研究：确定免疫组织化学定位，如免疫组织化学染色等。
- 病理学研究：观测肿瘤等病理组织的构造特征。
- 分子生物学研究：观测基因的表达、蛋白质的结构等。
- 药理学研究：观察药物对细胞和组织的影响。
实验可能出现的问题及解决方法1.样品切面出现粗糙、污染现象：可能是切割速度太快，应适当降低切割速度。
2.切片中出现气泡或破损：可能是样品固定不够完整或者太多切片被叠加在一起，应减少切割深度或重新采集样品。
3.切片上未能完全染色：可能是涂抹染色剂时没有均匀涂抹，应均匀涂抹液体染色剂或更换染色试剂。
4.显微镜观察时出现模糊影响：可能是显微镜镜头或平台不够清洁，应及时清理。
结语石蜡切片技术是生物学研究中不可或缺的重要手段，在多个领域都得到了广泛应用。
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，它有很多优点，例如，比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片，能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存等。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆，制片时间太长。
一、石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要是：取材→水洗→固定→水洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色。
（一）取材及水洗根据实验要求选取材料来源及部位，取要求部位的小块组织成为组织块，组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时，因此一般情况下，将动物处死后立即取需要的材料。
组织块取下后，先用相应的生理盐水漂洗以洗去血液、污渍以及粘液等。
如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
（二）固定材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，不应使组织块贴于容器壁上。
材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
固定的时间长短依据材料大小而定。
固定液有许多种，在固定的过程中应该根据需要选取合适的固定液，一般固定液都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化而失去固定作用。
有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早固定时就没有作用了。
（三）水洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
，主要目的是洗去固定液的颜色以便后续的染色。
石蜡切片制备基本步骤(附HE染色步骤)
石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。
（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml）1000 200 100重铬酸钾（mg）63 120 100蒸馏水（ml）200 200 1000重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3. 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。
二、常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林100ml蒸馏水900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。
2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。
3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。
滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告实验目的：
本实验旨在掌握石蜡切片制作和HE染色的方法，以便观察组织结构和细胞形态。
实验步骤：
1. 用福尔马林固定组织标本。
2. 将组织标本脱水处理，然后浸泡于熔化的石蜡中。
3. 将石蜡浸渍的组织标本置于模具中，待石蜡凝固后，用切片机切割成薄片。
4. 将切片置于载玻片上，进行HE染色。
5. 用显微镜观察切片的组织结构和细胞形态。
实验结果：
通过石蜡切片制作和HE染色，成功获得了组织切片，并且染色
效果良好。
在显微镜下观察，可以清晰地看到组织细胞的形态和结构，染色也使细胞核和细胞质染色成不同的颜色，便于观察和分析。
实验分析：
石蜡切片制作和HE染色是常用的组织学实验方法，可以有效地
观察和研究组织结构和细胞形态。
本次实验结果表明，我们掌握了
石蜡切片制作和HE染色的技术要点，能够准确地进行实验操作并获
得良好的实验结果。
实验总结：
通过本次实验，我们深入了解了石蜡切片制作和HE染色的方法
和原理，掌握了实验操作的技巧，并且获得了明确的实验结果。
这
将为我们今后的组织学研究和临床诊断提供重要的技术支持。
同时，我们也意识到在实验操作中需要严格控制每个步骤，以确保实验结
果的准确性和可靠性。
自查结论：
本次实验取得了成功的实验结果，但在实验过程中仍需注意细节操作，确保实验的准确性和可靠性。
同时，还需要进一步加强对石蜡切片制作和HE染色的理论知识和实验技术的掌握，以提高实验操作的熟练度和实验结果的稳定性。
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告英文回答：Introduction:Paraffin sectioning and H&E staining are essential techniques in histopathology for examining tissue samples under a microscope. Paraffin sectioning involves embedding tissues in paraffin wax, cutting thin sections, and mounting them on glass slides. H&E staining is a common staining method that uses hematoxylin and eosin to differentiate cell components.Materials and Methods:Tissue samples。
Paraffin wax。
Microtome。
Glass slides。
Hematoxylin。
Eosin。
Ethanol。
Xylene。
Procedure:Paraffin Sectioning:1. Fix the tissue samples in formalin and process them through a series of graded ethanol solutions.2. Embed the tissues in paraffin wax and allow them to solidify.3. Use a microtome to cut thin sections (5-10 microns)from the paraffin block.4. Mount the sections on glass slides and allow them to dry.H&E Staining:1. Deparaffinize the sections by passing them through xylene and ethanol solutions.2. Stain the sections with hematoxylin and rinse with water.3. Differentiate the hematoxylin staining with hydrochloric acid and rinse with water.4. Counterstain the sections with eosin and rinse with water.5. Dehydrate the sections by passing them through graded ethanol solutions and clear them in xylene.6. Mount the sections with a coverslip and examine them under a microscope.Interpretation of Results:Hematoxylin stains the nuclei blue, while eosin stains the cytoplasm pink.The stained sections allow for the examination of tissue morphology, identification of cell types, and detection of pathological changes.Conclusion:Paraffin sectioning and H&E staining are fundamental techniques in histopathology that provide valuable information for the diagnosis and study of diseases.中文回答：石蜡切片制作和HE染色实验报告。
石蜡切片的实验报告
一、实验目的1. 掌握石蜡切片的制作过程，包括组织固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤。
2. 了解石蜡切片技术在生物学研究中的应用。
3. 学会使用显微镜观察石蜡切片，识别不同组织结构。
二、实验原理石蜡切片技术是一种重要的生物学制片方法，用于观察组织、细胞等微观结构。
其基本原理是将组织固定后，通过一系列的脱水、透明、浸蜡等步骤，使组织在石蜡中充分浸渍，然后用切片机切成薄片，最后进行染色和观察。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 组织：肝脏、肾脏、心肌、骨骼肌等3. 试剂：卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液、1%伊红酒精溶液、1%盐酸酒精溶液、甘油蛋白粘片剂、郝普特氏粘片剂、中性树胶、1%番红、1%固绿、1%过碘酸、Schiff 试剂、0.5%偏重亚硫酸钠溶液、醋酸酐-吡啶混合液、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液等4. 器材：切片刀、切片机、恒温箱、温台、熔蜡炉、蜡杯、酒精灯、蜡铲、展片台、解剖刀、解剖针、解剖剪、解剖盘、培养皿、吸管、镊子、单面刀片、台木、毛笔、洒精灯、包埋纸盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、树胶、树胶瓶、显微镜、温度计、脸盆、水浴锅等四、实验步骤1. 取材：取新鲜组织，固定于4%多聚甲醛24小时以上。
2. 脱水：将固定后的组织依次放入75%、85%、90%、95%酒精中浸泡1小时，然后放入无水乙醇I、无水乙醇II中浸泡30分钟，最后放入醇苯中浸泡5-10分钟。
3. 透明：将组织放入二甲苯I、二甲苯II中浸泡5-10分钟。
4. 浸蜡：将组织放入熔化的石蜡中浸泡1小时。
5. 包埋：将浸好蜡的组织放入包埋机内进行包埋，待石蜡凝固后取出并修整蜡块。
6. 切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚约4微米。
7. 展片：将切片漂浮于摊片机40℃温水上，将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃烤箱内烤片。
8. 染色：将烤干的切片进行染色，如苏木精-伊红染色。
石蜡切片(苏木精-伊红对染法)
石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
一、器材及试剂：1. 器材：切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。
切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。
2．试剂：中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
3. 材料：鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。
二、实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
三、试剂配法：1．中性甲醛固定液：甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度） 100mL磷酸氢二钠 6.5磷酸二氢钾（钠） 4g双蒸水 900mL 2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品3．1%盐酸乙醇液盐酸 1份70%酒精 100份4．甘油蛋白贴片剂：蛋白 50 ml甘油 50 ml水杨酸钠（防腐剂） 1g配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。
石蜡包埋组织切片制作过程
石蜡包埋组织切片制作过程石蜡包埋组织切片制作是组织学研究中常用的一种技术，它可以将组织样本固定、包埋、切片、染色等一系列步骤完成，以便于观察和分析组织结构和功能。
下面将详细介绍石蜡包埋组织切片制作的过程。
1. 组织固定需要将待研究的组织样本进行固定，以保持其形态和结构。
常用的固定剂有福尔马林、乙醛、甲醛等。
固定时间和温度根据不同的组织类型和固定剂而异，一般需要固定4-24小时。
2. 组织脱水固定后的组织需要进行脱水处理，以去除其中的水分，使其能够与石蜡相容。
脱水一般采用乙醇逐渐升级浓度的方法，如70%、80%、95%、100%乙醇，每个浓度的时间一般为1-2小时。
3. 组织清洁脱水后的组织需要进行清洁处理，以去除其中的脂肪和其他杂质。
清洁一般采用苯、甲苯、氯仿等有机溶剂，每个溶剂的时间一般为1-2小时。
4. 组织浸渍清洁后的组织需要进行浸渍处理，以使其与石蜡相容。
浸渍一般采用苯、甲苯、氯仿等有机溶剂，每个溶剂的时间一般为1-2小时。
5. 组织包埋浸渍后的组织需要进行包埋处理，以使其能够被切片机切割。
包埋一般采用石蜡，将组织样本浸泡在石蜡中，然后在石蜡中进行固化。
固化时间和温度根据不同的组织类型和石蜡而异，一般需要固化4-24小时。
6. 组织切片包埋后的组织需要进行切片处理，以便于观察和分析组织结构和功能。
切片一般采用微型切片机，将石蜡包埋的组织样本切成薄片，厚度一般为4-6微米。
7. 组织染色切片后的组织需要进行染色处理，以便于观察和分析组织结构和功能。
常用的染色剂有血液学染色剂、组织学染色剂等。
染色时间和方法根据不同的染色剂而异，一般需要染色5-30分钟。
石蜡包埋组织切片制作过程是一个复杂的过程，需要进行多个步骤的处理，以保证组织样本的完整性和可观察性。
这种技术在组织学研究中具有重要的应用价值，可以为疾病的诊断和治疗提供重要的参考依据。
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组织石蜡切片制作
实验准备
实验仪器
口罩，手套，记号笔，移液枪，取样瓶，取样工具盒（镊子，剪刀，手术刀，手术刀片，酒精棉球），脱脂棉球或纱布，黑色遮挡物
实验药品
蒸馏水，无水乙醇，福尔马林固定液
溶液剂配置方法
福尔马林溶液（1000m L）：
将4g 磷酸二氢钠与13g 无水磷酸氢二钠溶于900m L 蒸馏水中，充分溶解，加入37%甲醛（100m L），充分混匀，用HCL 调节溶液的PH至7。
苏木精染液（1000m L）：
将苏木精(2g)溶于无水乙醇(250m L)，硫酸铝钾(17g)溶于蒸馏水(750m L)中，随后将两个溶液混合，充分搅拌均匀后，加入碘酸钠(0.3g)，苏木精氧化成紫红色（过夜）。
乙酸性伊红液配制（100m L）：
将伊红Y(2g)溶于90%酒精（100m L）中，用玻璃棒搅拌使其溶解后，每100m L 加冰醋酸一滴。
盐酸酒精分化液配制（100m L）：
将1m L浓盐酸溶于99m L 的75%酒精中，充分混合。
30%硝酸（200m L）：
将92.3mL 的65%硝酸缓缓加入到107.7mL 蒸馏水中，充分混匀。
1、石蜡切片的制作
（1）、取材及固定
取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小为1.5cm×1.5cm×0.2cm，材料取下后迅速用福尔马林固定；部分柔软的组织可采用重新固定法(取大块组织于固定液内，2~3h后取出分割小块放入新的固定液中重新固定) ，以保持其原有的结构。
福尔马林的用量与组织块体积之比最小为20：1。
注意不能使组织块贴于容器壁上（可在容器底部垫几层纱布或脱脂棉）。