EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估PPt
按照公式计算不精密度，重复 性 SR 和实验室内不精密度SWL
（2.3.5）
分别与制造商声明的σR和σWL 重复性 SR 和实验室内不精密度 SWL 进行比较
Yes SR ≤ σR
No
Yes SWL ≤ σWL No
验证制
造商声明 的精密度
分别 计算验证区间上限， 与SR 和SWL 进行比较（2.3.6.2
）
SR ≤UVLR No SWL ≤ UVLWL
Yes
Yes
通过验证
未通过验证， 联系供应商
12
EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估
仪器熟悉
仪器熟悉的过程是给操作者一个熟悉仪器基本操作并熟练掌握 测定方法的一个时间段。
方法熟悉的过程对于后续验证实验是至关重要的。
熟悉阶段的同时也可以同时进行质量控制。
）
SR ≤UVL Yes
通过验证
No SWL ≤ UVL
Yes
未通过验证， 联系供应商
12 EP15-A3精密度验证的实验
精密度验证结果解释
三种情况 1A 所有的评估都通过验证，都是低于制造商声明和低于最低限值的 （两个水平浓度的样本的重复性和实验室内精密度） 1B 所有的评估都通过，只是略微比最低限值稍微低一点。谨慎做好 每日QC，那么这个结果也算为通过。 2 大部分的评估都通过验证， 但有一些没有通过验证。实验室负责人 应该了解全部的验证程序，以便决定精密度是否接受。（超出的不是 很多，并且每天的QC都在监控内） 3 大部分的验证没有通过。那么临床实验室有几种选择，通过制造商 的协助进行原因的排查，重新进行精密度评价；另外，实验室可以选 择按照EP5文件来进行更为严格的精密度验证试验。
12 EP15-A3精密度验证的实验
计算SR 和S WL
12 EP15-A3精密度验证的实验
计算SR 和S WL
12 EP15-A3精密度验证的实验
计算SR 和S WL
12 EP15-A3精密度验证的实验
1.1计算SR 和S WL
12 EP15-A3精密度验证的实验
计算SR 和S WL
12 EP15-A3精密度验证的实验
12 EP15-A3精密度验证的实验
造成实验结果不理想的可能原因
➢试剂贮存方法不恰当 ➢试剂处理的不恰当 ➢样本处理和稳定性存在问题 ➢用户和制造商在样本混合的处理方式上不一致导致精密度验证 结果不理想 ➢如果实验过程要求很严格移液操作，不熟练的移液技术可能会 引起实验结果的不理想 ➢仪器维护方式不恰当 ➢检测环境造成结果不理想，如温度，湿度，电压或是无线电频 率干扰
通过已知浓度分析物与测定方法到的分析物浓度的相对 偏倚和实验室设定允许偏倚进行比较，来评价正确度。
需要12 进行精密度验证和偏倚评
估的定量检测方法
流经程过图熟练训练的操
作人员
选择用于验证实 验的分析物
已建立质量控制 （QC）程序
首先进行 精密度评 价实验
再进行偏 倚评估实 验
12 EP15-A3精密度评价的实验
计算SR 和S WL
12 EP15-A3精密度验证的实验
计算SR 和S WL
定义 VW ＝ MS2 ……………………….…….….(1)
如果 MS1 ＜ MS2，则VB ＝ 0；SR ≤ σR
否则 VB ＝（MS1 － MS2）/n0 ………………...(2) SR ＝√ VW………………………………….…(3) SB ＝√ VB ………………………….………. (4) SWL＝√ VW＋VB……………………………….(5) %CVR ＝ SR *100/平均值 %CVWL ＝ SWL *100/平均值
选择有值样本（TV）， 和精密度验证相同
计算TV的验证区间
计算TV和测定平均 值之间的偏差
按照制造商的说明 准备样本
进行精密度实验的 同时检测分析物
计算平均值和SD
确定TV标准误差 和测定分析物平均值
计算TV的自由度（DF）
确定测定分 析物的平均 值是都在验 证区间内
No 如果偏差小 于实验室允 许偏差
Yes No
通过正确度的验证
则需要联系制造商
2 EP15-A3偏倚评估的实验
确定实验室允许偏倚
在进行正确度的评价试验之前，首先是确定实验室允许偏倚。 实验过程是重复测定有值样本，计算测量的偏倚是否在允许 偏倚范围内。
2 EP15-A3偏倚评估的实验
有值参考物的选择
（1）如果想要达到一个比较理想的评估结果，那么最好选择的 经过能力验证程序和质量控制程序的定值分析物，或者是商业质 控品。 （2）至少两个水平浓度（与临床测定相关的浓度水平） （3）分析物的性质是稳定的 （4）分析物是有确定值（TV），这一项必备条件排除了一些新 鲜人患者样本 （5）需要确定有值参考物的不确定度（seRM，标准差） （6）根据实际用量考虑，需要有足够充足的用量。
按照公式计算不精密度，重复 性 SR 和实验室内不精密度SWL
（2.3.5）
分别与制造商声明的σR和σWL 重复性 SR 和实验室内不精密度 SWL 进行比较
Yes SR ≤ σR
No
Yes SWL ≤ σWL No
验证制
造商声明 的精密度
分别 计算验证区间上限， 与SR 和SWL 进行比较（2.3.6.2
2 EP15-A3偏倚评估的实验
偏倚实验概况
评价偏倚采用的方法是有值测试样本来进行评价的，比对定值 （TV）和测定结果。
比对选择的样本：能力验证的检测物或其他的标准参考物。
其所选用的有值参考物同样适用于精密度的验证。
正确度为无限多次测量的均值与真值的接近程度，反应的是系统 误差，通常用偏倚来表示。
如果实验室验证的性能与预期的不一致，那么需要联系联系制造 商来解决此问题
12
EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估
主要内容
概况 适用范围 判别标准 验证方法 结果解释
12
概述
EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估
在5个工作日内，同时进行正确度和精密度的性能验证。 通过标准指南推荐的实验方案，实验室验证实检测方法 的精密度是否与制造商声明的一致；来验证不精密度
仪器校准
用QC验证校准程序
QC在控
No
再次进行 校正程序
Yes
每批分析至少两个浓度水平的 分析物，重复测定5次，持续5 天，每个浓度水平获得25数据
每天检查数据有效性，是否有离 群值，是否在控，是否出现实验 失误，（抄写失误，样本混合操 作失误，分析样本体积不足）等 失误 （2.3.3）
收集整理数据 （2.3.4）
计算上限值（UVL）三步曲
（
计算UVL
σ 表示σR或σWL %CV表示%CVWL/或%CVR
SR ≤ UVLR
SWL ≤ UVLWL
仪器校准
用QC验证校准程序
QC在控
No
再次进行 校正程序
Yes
每批分析至少两个浓度水平的 分析物，重复测定5次，持续5 天，每个浓度水平获得25数据
每天检查数据有效性，是否有离 群值，是否在控，是否出现实验 失误，（抄写失误，样本混合操 作失误，分析样本体积不足）等 失误 （2.3.3）
12 EP15-A3精密度验证的实验
样本选择与方法
（1）每天一个批次实验，至少两个浓度水平的样本，每个浓度分析 样本重复测定5次，持续5天。
样本选择：偏好选择 患者样本、患者混和样本、与制造商建立精密 度性能使用一致的商业质控物质。（2.3.1）
浓度选择：偏好于临床意义的决定值（cutoffs）、参考限值、正常 范围和异常范围内选择样本浓度。
正确度：无数次重复测定值和参考值之间的接近程度;正确度的评价通常是偏倚来表 示。
偏倚：系统测量误差的的估计。
12
EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估
术语
重复性（SR）：在一系列相同的测定条件下获得的精密度。在之前版本的EP15-A2 中成为批内精密度。
重复性测定的条件：相同的测定方法，相同的操作者，相同的测量系统，相同的操 作条件，相同的地点，在一段较短的时期中重复测定相同或相似的分析物。1
12 EP15-A3精密度验证的实验
精密度验证实验方法
12 EP15-A3精密度验证的实验
精密度验证实验方法
132.9 ~ 147.3
12 EP15-A3精密度验证的实验
精密度验证实验方法
分别按照CLSI EP15-A3公式，计算 a）重复性（批内精密度）—SR b）实验室内精密度（仪器精密度）——SwL
）
SR ≤UVL Yes
通过验证
No SWL ≤ UVL
Yes
未通过验证，Байду номын сангаас联系供应商
12 EP15-A3精密度验证的实验
分别与制造商声明进行比较
分别与制造商声明的σR和σWL进行比较。 （1）如果SR ≤ σR， 那么重复性验证通过 （2）如果SR ＞ σR； 需要计算验证区间上限值UVLR ，进行比 较
收集整理数据 （2.3.4）
按照公式计算不精密度，重复 性 SR 和实验室内不精密度SWL
（2.3.5）
分别与制造商声明的σR和σWL 重复性 SR 和实验室内不精密度 SWL 进行比较
Yes SR ≤ σR
No
Yes SWL ≤ σWL No
验证制
造商声明 的精密度
分别 计算验证区间上限， 与SR 和SWL 进行比较（2.3.6.2
实验室内不精密度(SWL)：在规定的时间内和相同的操作者使用相同的仪器设备，校 准和试剂可以是变化的，得到的不精密度。
仪器校准
用QC验证校准程序
QC在控
No
检测系统分析性能验证及确认ppt课件
•准确度(accuracy)：单次检测结果与参考值间的一致程度，以总误差（TE）表示。
•
EP10 A2. Preliminary Evaluation of Quantitive Clinical of Laboratory Methods; Approved Guideline—Second Edition.
性能验证相关的基本概念
•精密度（precision）:在规定的条件下，对同一或类似被测对象重复测量所得示指或测 得值间的一致程度。精密度的度量通常以不精密度（SD、方差或CV）表示。
EP9-A2：Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline - Second Edition，2002 EP15-A2：User Verification of Performance for Precision and Trueness ,2005 EP15-A3. User verification of precision and estimation of bias；approved guideline-third edition.2014
正确度初步评价
先用5个定值PT样品进行正 确度初步评价，每个样品测量1 次，计算5个样品与靶值之间的 平均偏倚，若≤允许偏差（卫生 行业标准）初步评价通过，直接 进行正确度确认；若不通过则进 行校准，初步评价通过后再进行 正确度确认。
EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估ppt课件
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EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估
仪器熟悉
仪器熟悉的过程是给操作者一个熟悉仪器基本操作并熟练掌握 测定方法的一个时间段。
方法熟悉的过程对于后续验证实验是至关重要的。
熟悉阶段的同时也可以同时进行质量控制。
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6
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EP15-A3精密度评价的实验
适用范围
1 EP15-A3适用于协助实验室来验证已经建立的检测方法精密度和偏倚。 其提供一个可行的方案来验证方法学性能是否与制造商声明的一致。 2 也适用于能力验证失败后或者是质量检测未通过，对实验方法改进或 校正后再次进行精密度的验证。 3 但是，其不适用未建立精密度声明的新方法进行精密度性能的确认。
EP文件培训二 ——EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估
科研项目组
2016.06.27 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司
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EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估 目的
为实验室定量检测提供精密度性能验证和相对偏倚评估的指导方 法（实验方案）。
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EP15-A3精密度验证的实验
精密度验证实验方法
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8
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EP15-A3用户对精密度验证和偏倚评估
术语
总误差：所有影响分析结果准确性的各种误差的总称。在本文中定义为偏倚和不精
密度的总和为总误差。
EPA用户对精密度验证和偏倚评估ppt
使用实验室方法对每个样品进行多次测量。
数据处理
结果分析
计算测量结果的平均值、标准差、变异系数 等统计指标，以评估测量结果的离散程度和 波动性。
比较测量结果的平均值与参考值或标准值的 差异，分析误差和波动性的来源，并采取改 进措施以提高实验室的测量精度。
03
方法及原理
精密度验证的方法
1 2
重复性试验
EPA用户可以加强与其他实验室的交流合作，共同解决精密度验证和偏倚评估中遇到的问 题，分享经验和技巧。
THANKS
谢谢您的观看
偏倚评估的方法
使用标准物质
通过使用标准物质进行测量，可以获得测量结果的偏倚值。
对比测量
采用不同仪器设备或不同操作人员进行测量，通过对比测量结果计算偏倚值。
对测量过程进行控制
通过对测量过程进行控制，可以减小误差和偏倚，提高测量准确性和可靠性。
05
数据及分析
数据来源及处理方法
总结词
全面、详尽
详细描述
面的不足，需要采取措施进行改进。
建议
建立精密度验证和偏倚评估的标准操作程序
EPA用户应建立精密度验证和偏倚评估的标准操作程序，确保每个实验室人员熟悉并遵循 这些程序。
对不合格结果进行深入分析
对于精措施进 行改进。
加强与其他实验室的交流合作
在同一实验室，使用相同的仪器、试剂和操作 方法，对同一样本进行多次重复检测，以评估 方法内部的精密度。
不同实验室间的精密度试验
在不同实验室使用相同的检测方法对同一样本 进行检测，以评估不同实验室之间的精密度。
3
不同仪器间的精密度试验
在相同的实验室使用不同的仪器对同一样本进 行检测，以评估不同仪器之间的精密度。
偏倚ppt课件
1000 20%
合计
400
1600
2000 20%
OR=1.00 P>0.05
;.
38
例：
A病（X+） （200人）
因A入院（50%）
100人 140人
因X入院（40%） 40人
A病（1000人） A病（X-） （800人）
因A入院（50%）
400人
B病（X+） （200人）
因B入院（20%） 40人 因X入院（40%） 64人
;.
9
减少抽样误差的方法： ➢ 扩大样本数 ➢ 改进抽样技术，增加随机性
;.
10
• 问题：当总体中S＝0时，请问还会产生抽样误差吗？
;.
11
2、过失误差
• 如：在流行病学研究中因调查员记录或编码错误等原因造成。 • 不负责任X • 改进工作管理方法、质量控制方法等加以克服。
;.
12
3、系统误差
•
以医院为基础的病例对照研究，病例的代表性？
•
人群中志愿者与非志愿者的不同？
;.
36
（二）选择性偏倚的种类
1.入院率偏倚（admission rate bias） – 亦称伯克森偏倚（Berkson’s bias） – 是指利用医院就诊或住院病人作为研究对象时，由于入院率的不同而导致的偏差。
;.
37
;.
43
• 避免入院率偏倚最好的办法是从一般人群取样，或增加人群对照。
;.
44
2.现患-新发病例偏倚（prevalence-incidence bias）
– 也称奈曼偏倚（Neyman bias） – 研究病例一般是现患病人，不包括死亡病例和那些病程短、轻型、不典型的病例。 – 某些病人在患病后，有可能会改变其原来的某些因素的暴露状况。 – 这样用于研究的病例类型（现患病例）与队列研究或实验研究的病例不同，它们
医学实验室精密度和准确度的确认EP15A2UserVerificationofPerformanceforPrecisionandTruppt课件
420
415
431
428
426
d
140
138.3333333 143.6666667 142.6666667
142
sd
2 run
0
0.333333333 0.333333333 0.333333333
1
x
141.33
sb
2.147
Between-day standard deviation
Claimed σ l verification value
China Medical University Computer Center 2007.8
4
实验《数医据学影处像理实及用技详术解教程》
单击此处编辑母版标题样式
China Medical University Computer Center 2007.8
1、sb2 d 1 4
= (（140-141.33)2 + (138.33-141.33)2 +(143.67-141.33)2 + (142.67-141.33)2 + (142-141.33)2 ）÷4
= 4.62225
sr = 0.632 ；
China Medical University Computer Center 2007.8
• 准确度—用已定值标准物质检验
（Demonstration of Trueness With Reference Materials）
China Medical University Computer Center 2007.8
2
《医学影像实用技术教程》
单击精密此度处实编验辑（Pr母ecisi版on E标xper题imen样t） 式
9.用户对精密度的验证和对偏倚的估计
结果解释
•当扩展不确定度超过规定允许偏倚时，试验缺乏足够
偏倚不在区间内
的数据检测临床显著偏差，有必要运行更多试验 •一般情况下，组间标准差接近或大于组内标准差时，
多次运行是必要的
结果解释
可靠性
•当使用参考物质或PT等有真实值样本时，可靠性较高 •当使用QC或多家实验室获得结果的物质时，应考虑其
准备样本
确定标准误
均值与区 间比较
测量(参 照重复性)
计算DF
计算偏倚
选择参考物质
样本选择
••至少能代表两个临床相关浓度水平，与患者样本尽可能好的互换性、试 验期间的稳定性 ••应有TV（新鲜制备的混合血清除外） ••应有不确定度（通常以标准误形式）
选择参考物质
样本选择
••可调整至声称水平的物质（例如添加药物值患者血清中），没有不确定度，标准物可设
三个基本统计量
均值、SE、DF
验证区间
合并标准误、自由度
验证区间
合并标准误、自由度
验证区间
假设、计算区间
结果解释
偏倚在区间内
•区间包含测量均值，偏倚不显著： •证明试验有足够的精密度和充足的Hale Waihona Puke 复，可检测偏倚超过规定允许偏倚
•与VI进行比较
结果解释
偏倚不在区间内
•区间不包含测量均值，偏倚与零有区别：
••样本赋值（基于方法学比对）的正确度验证
对偏倚的估计
••规定偏倚的可接受值（不论统计显 著不显著，应是临床可接受的）
概述（可与精密度合并估计） •使用已知浓度的分析物质：
生化检测系统性能验证PPT课件
基本概念
误差（error）指对于真值或对于可接受 的、预期真值或参考值的偏离，分为随 机误差和系统误差。
总误差（total error）指某实验室用某方 法在多次独立检验中分析某样品所得各 个结果值与靶值之差在一定置信区间内 的最大值。包括随机误差和系统误差， 是不准确度的估计值。
文件依据
CLSI 颁布的EP15-A文件《用户对精密度 和准确度性能的核实指南》
通常是生产厂家完成。
什么是性能验证？
对他人或厂商的评价资料中的几个主 要性能进行证实。
通常由实验室自己完成。
性能验证试验
对配套系统，一般验证下列指标： ―准确度(accuracy)---EP15 -A ―精密度(precision)---EP5-A2 ―线性范围（linear range )---EP-6 ―可报告范围(reportable range)---EP-6 ―参考区间(reference interval)---C28-A2
基本概念
3. 不同测量系统可使用不同测量程序。 4. 应在实际程度上给出改变或不改变条 件的说明。
基本概念
中间精密度
在一组测量条件下的测量精密度，这些 条件包括相同的测量程序、相同地点并且对 相同或相似的被测对象在一长时间段内重复 测量，但可包含其它相关条件的改变。
1. 应在实际程度规定改变和未改变的条件， 特别是如校准物、试剂批号、设备系统、操 作者和环境条件等变量。
文件依据
CLSI 颁布的EP-17A文件进行灵敏度 性能评价。
功能灵敏度实验程序
将校准品或质控品稀释后，在仪器上分 别对不同浓度的样品连续测定20次，
计算均值、标准差和变异系数， 以不精密度（CV）≤ 20%时对应检测
精密度准确度与误差课件
2023
PART 02
准确度
REPORTING
准确度定 义
准确度是指在多次测 量中，测量值与真实 值的一致程度。
准确度的评估需要通 过与其他已知准确度 高的测量标准进行对 比。
准确度通常用误差来 表示，误差越小，准 确度越高。
准确度的重要性
在科学实验、工程设计和质量 控制中，准确度是至关重要的。
系统误差是指由于某些固定的原因导致的误差，这种误差通常具有一定的规律性，可以通过校准和修正来减小。随机误差则 是由于一些不确定的随机因素导致的误差，这种误差没有明显的规律性，但可以通过增加测量次数来减小。过失误差是由于 操作者失误或测量方法不当导致的误差，这种误差可以通过加强操作规范和培训来避免。
2023
数据分析中的精密度、准确度与误差
精密度
在数据分析中，精密度是指数据的一致性和稳定性。为确保高精密度，应采用合适的统计方法和数据分析工具，并注 意数据的清洗和预处理。
准确度
准确度是指数据的真实性和可信度。为确保准确度，应建立数据质量标准和数据管理流程，加强数据源的审核和控制， 并定期进行数据质量评估和校验。
2023
PART 05
实际应用中的精密度、准 确度与误差
REPORTING
实验室检测中的精密度、准确度与误差
01
精密度
在实验室检测中，精密度是指使用相同或不同方法对同一样品进行多次
重复检测时，所得结果的一致程度。为确保高精密度，应采用合适的实
验设计和统计学方法来减小随机误差。
02
准确度
准确度是指实验室检测结果与真实值之间的接近程度。为确保准确度，
实验室应建立质量控制体系，定期进行内部和外部质量评价，并采取措
医学实验室精密度和准确度的确认ep15a2 user verification of performance for precision and trueness
n 1 2 2 sl sr sb n
= SQRT ( 2÷3×0.40004 + 4.62225 )；
= 2.21 ＞ 2 mg/dL
计算扩展σl
T ：合成自由度（Degrees Of Freedom）
C ：自由度为4置信度为97.5%卡平方分布值（
2 2 ((n 1) s r ( nsb )) 2 T = 4.47 2 2 2 n ( sb ) n 1 4 ( )sr ( ) D D 1
t sb n
= 2.0 ± 2.46
= [ -0.46、4.46 ]
∵
b
= 2.5 ＜ 4.46 ;
∴ 可以认为待验系统与标示保持一致，待验系统准确性被证实 。 （结论）
待验系统
500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 0 50 100 150 200 250
b
I i
b
i 1
I
i
n
i
= 50÷20 = 2.5 ＞ 2 mg/dL
sb
(b
I i
b) 2
= SQRT ( 357÷19 ) = 4.33
n 1
%b
I i
%b
n
i
i
= 47.22÷20 = 2.36%
s %b
(%b
%b) 2
= SQRT (346.08÷19 ) = 4.27%
检验系统精密度和准确度在用户端的证实
Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI) - User Verification of Performance for Precision and Trueness EP15-A2
EP15A3在荧光定量PCR测定HBVDNA精密度和正确度验证中的应用
[１２]P A L L A V E EP,S AMA LS,G U P T A S,e t a l．M i s d i a g n oＧs i s o f a b d o m i n a l p a i n i n p r e g n a n c y:a c u t e p a n c r e a t i t i s[J]．JC l i nD i a g nR e s,２０１５,９(１):５Ｇ６．[１３]K HA NFY,MA T A RI．C h y l o u s a s c i t e s s e c o n d a r y t oh yＧp e r l i p i d e m i c p a n c r e a t i t i sw i t hn o r m a l s e r u ma m y l a s ea n d l i p a s e[J]．W o r l d JG a s t r o e n t e r o l,２００７,１３(３):４８０Ｇ４８２．[１４]唐权．血清淀粉酶和脂肪酶测定在急性胰腺炎诊断中的价值[J]．国际检验医学杂志,２０１６,３７(１５):２１８８Ｇ２１８９．[１５]浦清,龚玲,居培红,等．血清脂肪酶对６０岁以上高脂血症性急性胰腺炎患者诊断的意义[J]．江苏医药,２０１８,４４(１):１０４Ｇ１０５．(收稿日期:２０１８Ｇ０９Ｇ２２㊀修回日期:２０１８Ｇ１２Ｇ０６)短篇论著E PＧ１５A３在荧光定量P C R测定H B VＧD N A精密度和正确度验证中的应用∗李育敏,张水兰,阚丽娟,汤花梅,熊㊀丹,许晓清,李方勇,张秀明ә(深圳市罗湖区人民医院医学检验科,广东深圳５１８００１)㊀㊀摘㊀要:目的㊀探讨美国临床和实验室标准化协会(C L S I)E P１５ＧA３在荧光定量聚合酶链式反应(P C R)法测定乙型肝炎病毒核酸(H B VＧD N A)精密度和正确度验证中的应用价值.方法㊀按照C L S IE P１５ＧA３方案,以北京康彻思坦高㊁低２个浓度水平H B VＧD N A标准物质作为精密度和正确度验证样本,采用荧光定量P C R法测定H B VＧD N A.每个样本重复测定５次,持续５d,得到２５个数据.G r u b b sᶄ法计算离群值,单因素方差分析用户重复性(批内不精密度,S R)㊁实验室内不精密度(S W L)和验证区间(V I),分别与厂家声明的批内不精密度(σR)和实验室内不精密度(σW L)进行比较,如果S RɤσR㊁S W LɤσW L,则精密度验证通过;如果测量均值(x)在V I 内,则正确度验证通过.结果㊀荧光定量P C R法测定H B VＧD N A的结果通过G r u b b sᶄ法离群值检查,无离群值.高浓度水平的S R(０．８７％)ɤσR(５．００％)㊁S W L(１．６０％)ɤσW L(５．００％);低浓度水平的S R(３．７９％)ɤσR (５．００％)㊁S W L(４．８３％)ɤσW L(５．００％);高㊁低浓度水平x分别为６．５４㊁３．１５L o g I U/m L,均在V I(６．２８~７．０４㊁２．７４~３．５６L o g I U/m L)内.结论㊀运用C L S IE P１５ＧA３验证荧光定量P C R法测定的H B VＧD N A的精密度和正确度性能,高㊁低２个浓度水平的S R与S W L符合厂家声明要求,测量均值在V I内,精密度和正确度验证通过.关键词:精密度;㊀正确度;㊀性能验证;㊀乙型肝炎病毒核酸;㊀E P１５ＧA３D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１９．０５．０３３中图法分类号:R１９４．２;R４４６文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１９)０５Ｇ０６２９Ｇ０３文献标识码:B㊀㊀临床实验室在引进新的测量程序,检测患者标本及出具患者检测报告之前必须对检测方法的分析性能进行评估.按照I S O１５１８９:２０１２和C N A SＧC L３６:２０１２«医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明»[１],定量检测方法和程序的分析性能验证应包括精密度和正确度.２０１４年１０月发布的美国临床和实验室标准化协会(C L S I)E P１５ＧA３«用户精密度验证和偏倚评估实验 批准指南»为临床实验室提供了最新的验证厂商声明的测量程序精密度和正确度简便㊁有效的方法[２].目前国内对C L S I E P１５ＧA３用于临床分子诊断测量程序的性能验证报道较少,本研究按照E P１５ＧA３方案对荧光定量P C R 法测定乙型肝炎病毒核酸(H B VＧD N A)进行精密度验证和偏倚评估,为E P１５ＧA３在临床分子诊断定量检测方法和程序分析性能验证的应用提供参考.１㊀材料与方法１．１㊀样本测定㊀样本为北京康彻思坦生物技术有限公司提供的H B VＧD N A标准物质,高浓度水平(４．６０E＋０６I U/m L)批号为２０１６０９００３,低浓度水平(１．４１E＋０３I U/m L)批号为２０１６０７００３.按照厂家说明书进行分装保存于－１５ħ以下.１．２㊀试剂与仪器㊀试剂为湖南圣湘生物科技有限公司提供的H B VＧD N A荧光定量P C R试剂盒(批号２０１７０１２).仪器为罗氏c o b a s z４８０全自动荧光定量P C R分析仪.１．３㊀方法∗基金项目:深圳市医疗卫生三名工程(S Z S M２０１６０１０６２).ә㊀通信作者,EＧm a i l:z x m０７６０＠１６３．c o m.㊀㊀本文引用格式:李育敏,张水兰,阚丽娟,等．E PＧ１５A３在荧光定量P C R测定H B VＧD N A精密度和正确度验证中的应用[J]．国际检验医学杂志,２０１９,４０(５):６２９Ｇ６３１．１．３．１㊀测定流程样本检测前校准仪器,每天进行室内质量控制,质控在控时数据可接受.按照E P １５ＧA ３要求,选择高㊁低２个浓度水平样本,每个样本重复测定５次,持续５d ,每个样本得到２５个数据.１．３．２㊀离群值检验㊀利用G r u b b s ᶄ方法,计算所有测定值的均值(x )和标准差(S D ).根据公式(G r u b b s ᶄ限＝x ʃG ˑS D )计算G r u b b s ᶄ上㊁下限值,G 为G r u b b s ᶄ因子,当测定值数量N ＝２５时,G 为３．１３５.判断规则为所有测定结果在G r u b b s ᶄ限值内,如超出,则判断为离群值.每个样本最多允许１个离群值,所有样本不能超过２个离群值.１．３．３㊀精密度验证㊀数据分析采用单因素方差分析(A N O V A )计算每个浓度水平的S R 和S W L ,计算公式为:M S １＝n ðk i ＝１(x i －x )２(k －１),M S ２＝n ðk i ＝１ðn jj ＝１(x i －x i j )２N －k,如果M S １ɤM S ２,S R ＝S W L ＝M S ２;如果M S １ȡM S ２,S R ＝M S ２,S W L ＝M S １＋(n ０－１)M S ２)n ０(M S １为批间均方;M S ２为批内均方;x i 为每批测定结果的均值;x 为所有测定结果的均值;x i j 为每一批的每一个测定值;n 为每一批的测定值数量;n ０为平均每批的测定值数量;k 为全部批次的数量;N 全部测定值的数量).S R ɤσR ㊁S W L ɤσW L ,则精密度验证通过;否则需计算验证上限(U V L ),计算公式为:d f R ＝N －k ,ρ＝σW L /σR 或％C V W L /％C V R ,d f W L 根据ρ值查EP １５ＧA ３附表可得,U V L R ＝F R ˑσR 或F R ˑ％C V R ,U V L W L ＝F W L ˑσW L 或F W L ˑ％C V W L (d f 为自由度;ρ为厂商实验室内不精密度与重复性的比率;C V 为变异系数;F 为验证上限因子,根据d f 和样本数量查E P １５ＧA ３附表可得),S R ɤU V L R ㊁S W L ɤU V L W L ,则精密度验证通过.１．３．４㊀偏倚评估㊀数据分析计算每个浓度水平的测定均值(x )㊁标准误差(s e x )㊁不确定度(s e R M )和验证区间(V I ).计算公式:s e x ＝１n R u n [S ２W L －n R e p Ｇ１n R e p]S ２R ,s e R M ＝U p p e r ＧL o w e r ２ˑ１．９６,s e c ＝s e x ＋s e R M .如果s e R M ＝０,d fc ＝n R u n －１;如果s e R M ＞０,d f c ＝(n R u n －１)ˑ(se c /s e x )４.V I ＝T V ʃ(t (１－α２ˑn S a m ,d f c)s e c ).n R u n 为批次数;n R e p 为每批中重复测定次数;U p pe r 和L o w e r 为标准物质９５％C I 的上下限;s e c 为s e x 和s e R M 的组合标准误差;T V 为标准物质定值;d f c 为d f x 和d f R M 的组合自由度;α＝０．０５;n S a m 为标准物质的个数.测定均值在V I 内,则正确度验证通过.２㊀结㊀㊀果２．１㊀离群值检验㊀将H B V ＧD N A 检测原始结果转换成对数值后进行数据分析,以便使数据更符合正态分布,消除指标度量单位不同造成的不良影响.用G r u b b s ᶄ法计算高㊁低２个浓度水平样本所有测定结果对数值均在G r u b b s ᶄ限值内,无离群值.２个水平测定结果对数值的最大值和最小值见表１.２．２㊀精密度验证㊀高浓度水平的S R (C V ,０．８７％)ɤσR (C V ,５．００％)㊁S W L (C V ,１．６０％)ɤσW L (C V ,５．００％);低浓度水平的S R (C V ,３．７９％)ɤσR (C V ,５．００％)㊁S W L (C V ,４．８３％)ɤσW L (C V ,５．００％),精密度验证通过,见表２.表１㊀㊀G r u b b s ᶄ法计算荧光定量P C R 法测定H B V ＧD N A 的㊀㊀㊀离群值结果(L o g IU /m L )浓度水平xS D最小值最大值G r u b b s ᶄ下限G r u b b s ᶄ上限离群值判断高浓度６．５４０．１０６．４０６．７３６．２３６．８７无低浓度３．０４０．１４２．９０３．２８２．６０３．５１无表２㊀㊀荧光定量P C R 法测定H B V ＧD N A 的精密度验证结果(L o g IU /m L )浓度水平重复性(批内不精密度)S RS R [C V (％)]σR [C V (％)]验证判断实验室内不精密度S W LS W L [C V (％)]σW L [C V (％)]U V L W L [C V (％)]验证判断高浓度０．０６０．８７５．００通过０．１０３．７９５．００６．４０通过低浓度０．１２１．６０５．００通过０．１５４．８３５．００６．４０通过表３㊀㊀荧光定量P C R 法测定H B V ＧD N A 的偏倚㊀㊀㊀评估结果(L o g IU /m L )浓度水平均值s e x s e R MT V V I偏倚验证判断高浓度６．５４０．０４０．１６６．６６６．２８~７．０４－０．１２通过低浓度３．０４０．０５０．１８３．１５２．７４~３．５６－０．１１通过２．３㊀偏倚评估㊀高浓度水平均值为６．５４L o gI U /m L ,在V I (６．２８~７．０４L o g I U /m L )内;低浓度水平均值为３．０４L o g I U /m L ,在V I (２．７４~３．５６L o gI U /m L )内,正确度验证通过,见表３.３㊀讨㊀㊀论㊀㊀精密度是指在规定条件下,对同一或类似被测对象重复测量所得值或测得值间的一致程度,反映测量结果随机误差的大小,通常用不精密度表示[３].精密度是检测系统的基本分析性能之一和其他方法学性能评价的基础,如果精密度差,则无法进行其他方法学性能评价.在C L S I的精密度评价指南中,E P１０ＧA３是用于同时进行线性㊁偏倚㊁精密度和样本携带污染的初步评价[４],E P５ＧA３用于测量程序的精密度性能确认及验证[５].E P１５ＧA３仅用于验证已经建立的检测方法精密度性能,而不适用于未建立精密度声明的新方法分析性能的确认,主要为临床实验室提供一个简便㊁有效㊁可行的方法来验证实验室的不精密度是否与厂家声明的一致,也适用于能力验证失败后或者质量检测未通过,对实验方法改进或校正后再次进行精密度验证.性能指标为S R和S W L.S R是指在一系列相同的测定条件下获得的不精密度.测定条件包括相同的测定方法,相同的操作者,相同的测量系统,相同的操作条件,相同的地点,在一段较短的时期中重复测定相同或相似的分析物.S W L是指在规定的时间内和相同的操作者使用相同的仪器设备,校准和试剂可以是变化的,得到的不精密度.正确度是指无限多次重复测量的平均值与真值的一致程度,反映测量结果系统误差的大小,通常用偏倚来度量[６].用于正确度评价的C L S I指南有E P９ＧA３和E P１５ＧA３.E P９ＧA３采用至少４０份患者样本进行测量程序比对和偏倚评估,适用于实验室引进新的检测系统或方法,更换新试剂或新仪器,与原有检测系统或参考方法进行比对,评价两个检测系统或方法测定结果的偏倚是否在可接受范围内[７].厂商或实验室开发新的测量程序,最好使用E P９ＧA３进行比对及偏倚评估.E P１５ＧA３采用有值参考物质进行偏倚评价,比对定值和测定结果,其样本数量㊁重复次数及统计学处理较E P９ＧA３简单,适用于临床实验室进行测量程序的正确度确认和验证.有值参考物质包括有证参考物质㊁参考方法定值分析物㊁P T和E Q A定值分析物,这些物质也适用于精密度验证.性能指标为相对偏倚,即实验室确定允许偏倚,评价测量偏倚是否在允许偏倚范围内.与E P１５ＧA２相比,E P１５ＧA３首先在重复测定次数上增加到５次,使重复性更可靠,其次,采用G r u b b sᶄ法进行离群值检验,使离群值判断更简单客观.第三,偏倚评估不再采用患者样本进行两种方法的比较,仅利用有值参考物质进行比对,使验证方法更简便.第四,在偏倚评估数据分析中,E P１５ＧA２判断参考物质靶值是否在测量均值验证区间内,E P１５ＧA３则判断参考物质测量均值是否在靶值验证区间内,提高统计学效能[２,８].㊀㊀本研究按C L S IE P１５ＧA３指南,对荧光定量P C R 法测定H B VＧD N A进行精密度验证和偏倚评估.G r u b b sᶄ法检验无离群值.高㊁低浓度水平样本检测均S RɤσR,S W LɤσW L,表明不精密度符合厂家声明要求,精密度验证通过;高㊁低浓度水平测量均值均在V I内,表明测量偏倚与允许偏倚不具有统计学差异,测量偏倚在允许偏倚范围内,正确度验证通过,说明该测量程序能够满足临床需求.目前,国内报道E P１５ＧA３多用于临床化学和免疫测量程序的性能验证[９Ｇ１０].本研究以H B VＧD N A检测为例,将E P１５ＧA３应用于临床分子诊断定量检测方法和程序的精密度和正确度验证,供同行参考.参考文献[１]中国合格评定国家认可委员会．医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明:C N A SＧC L３６:２０１２[S]．北京:中国标准出版社,２０１２．[２]C l i n i c a l a n dL a b o r a t o r y S t a n d a r d s I n s t i t u t e．U s e r v e r i f i c aＧt i o no f p r e c i s i o na n de s t i m a t i o no fb i a s:E P１５ＧA３[S]．W a y n e,P A,U S A:C L S I,２０１４．[３]国家质量监督检验检疫总局．通用计量术语及定义:J J F １００１Ｇ２０１１[S]．北京:中国标准出版社,２０１１．[４]C l i n i c a la n dL a b o r a t o r y S t a n d a r d sI n s t i t u t e．P r e l i m i n a r ye v a l u a t i o nof q u a n t i t a t i v e c l i n i c a l l a b o r a t o r y m e a s u r e m e n tp r o c e d u r e s:E P１０ＧA３[S]．W a y n e,P A,U S A:C L S I,２００６．[５]C l i n i c a l a n dL a b o r a t o r y S t a n d a r d s I n s t i t u t e．E v a l u a t i o no f p r e c i s i o no f q u a n t i t a t i v e m e a s u r e m e n t p r o c e d u r e s:E P５ＧA３[S]．W a y n e,P A,U S A:C L S I,２０１４．[６]王治国．临床检验质量控制技术[M]．４版．北京:人民卫生出版社,２０１４:４７Ｇ５２．[７]C l i n i c a la n d L a b o r a t o r y S t a n d a r d sI n s t i t u t e．M e a s u r e m e n t p r o c e d u r e c o m p a r i s o n a n db i a s e s t i m a t i o n u s i n gp a t i e n t s a mＧp l e s:E P０９ＧA３[S]．W a y n e,P A,U S A:C L S I,２０１４．[８]C l i n i c a l a n dL a b o r a t o r y S t a n d a r d s I n s t i t u t e．U s e r v e r i f i c aＧt i o no f p e r f o r m a n c e f o r p r e c i s i o na n dt r u e n e s s:E P１５ＧA２[S]．W a y n e,P A,U S A:C L S I,２００５．[９]徐建华,刘冬冬,徐宁,等．C L S IE P１５ＧA３在临床生化精密度验证中的应用[J]．临床检验杂志,２０１６,３４(３):２１５Ｇ２１８．[１０]刘海,张伟,王红艳,等．A x c e e 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