猪Caspase_3基因的克隆及序列分析
caspase-3
(一)caspase家族Caspases是近年来发现的一组存在于胞质溶胶中的结构上相关的半胱氨酸蛋白酶，它们的一个重要共同点是特异地断开天冬氨酸残基后的肽键。
Caspase一词是从Cysteine aspartic acid specific protease 的字头缩写衍生而来，就反映了这个特征，而这种高度的特异性，在蛋白酶中是很少见的。
由于这种特异性，使caspase能够高度选择性地切割某些蛋白质，这种切割只发生在少数（通常只有1个）位点上，主要是在结构域间的位点上，切割的结果或是活化某种蛋白，或使某种蛋白失活，但从不完全降解一种蛋白质。
Caspase的研究源于线虫（C. elegans）细胞程序化死亡的研究。
线虫在发育过程中，有131个细胞将进入程序化死亡；研究发现有11个基因与PCD 有关，其中ced3和ced4基因是决定细胞凋亡所必需的，ced9基因抑制PCD。
线虫细胞程序化死亡的研究促进了其他动物特别是哺乳类动物中细胞凋亡的研究。
人们发现哺乳类细胞中存在着Ced3的同源物ICE（interleukin-1b converting enzyme），它催化白介素-1b的活化，即从其前体上将IL-1b 切割下来。
在大鼠成纤维细胞中过量表达ICE和Ced3都会引起细胞凋亡，表明了ICE和Ced3在结构和功能上的相似性；然而敲除ICE基因的小鼠其表现型正常，并未发现细胞凋亡发生明显改变。
进一步的研究发现，另一个ICE成员，后来被称为apopain，CPP32或Yama的半胱氨酸蛋白酶，催化poly（ADP-ribose）Polymerase（PARP），即聚（ADP-核糖）聚合酶的裂解，结果导致细胞的凋亡，因而认为apopain执行着与线虫中的ced3相同的功能。
Apopain被称为是“死亡酶”，而PARP被认为是“死亡底物”。
Apopain/CPP32/Yama是在1995年由两个实验室分别同时报导，时间上只有两周之差。
五指山小型猪生长激素及其受体基因的克隆与序列分析
摘要 ： 动物 生长发 育调 控是一 个 高度 复杂 而精 细 的生理 过程 ， 多种 因素如 神经 、体 液 、遗传 、营 受 养及 环境等 的影响 。其 中 ，动 物神 经 内分 泌生 长轴各 因子 （ 激素 、受 体 、结 合蛋 白等 ）及 其基 因对 动
物的 生长发 育起着 关键 的作用 。正 常情 况 下 ，下丘脑 接受 体 内外 的 信息 ，生 长激 素 释放 激 素 （ｒ ｗｔ ｇｏ ｈ ｈ ｒ ｎ ｅｅ ｓ ｇｈ ｒ ｎ ，ＧＨＲＨ）和 生长抑 素 （ｏ ｔｓａｉ ｏｍｏ ｅｒｌａｉ ｏｍｏ ｅ ｎ ｓ ｍａｏｔｔ ｎ，Ｓ ） Ｓ ，调 节垂 体生 长 激素 （ ｒｗｔ ｇｏ ｈ
普 通猪 生长激 素受 体基 因 比对 发现 ，１ ＿ １ ３号位置 的 Ｇ Ｔ 突变 引起 天冬 氨酸 替换 谷氨 酸 ；１ ２ 号 位 置 ４ — ２５ 的 Ｇ— Ｔ突 变 导 致 丝 氨 酸 替 换 丙 氨 酸 ； ６ 号 位 置 Ｃ Ｇ突 变 导致 缬 氨 酸 替 换 亮 氨 酸 ； ３ 号 位 置 １ ６６ — １ ９ ７ （ 变导致 丙氨 酸被 甘氨酸所 代替 ；１ ０ 、 一（ 突 ８ １号位 置 Ｇ— Ａ 突变 导致 缬 氨酸 被异亮 氨 酸代 替 ；１ ４ ２ ８号
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caspase资料
caspase家族蛋白酶的组成已命名的caspase家族成员均已克隆成功，它们不但在氨基酸序列上具有同源性，而且在空间结构上也很相似。
目前已经获得了caspase-1(ICE)和caspase-3(CPP32)的X线结晶图像，结果显示它们具有相似的空间结构，在P20的C端和P10的N端有200多个氨基酸残基的序列尤为保守，在空间结构上组成相似的β折叠中心和相邻的α螺旋，保守的、对蛋白酶活性有特殊意义的氨基酸残基均位于这一段，并形成特定的结构。
不同源的序列主要存在于P20的N端和P20与P10交界处，这两个部位的氨基酸残基在蛋白酶活化过程中一般被全部或部分切除。
所有的成员都保守性地包含有与底物P1Asp作用的氨基酸残基，如在ICE中，它们是催化中心的Cys285，与酶/抑制剂复合物的巯基半缩醛以氢键结合的His237，以及可以稳定反应中间物氧阴离子的Gly238。
另外，Arg179、Arg341、Gln383和Ser347形成容纳P1Asp的“口袋”，Ser339靠近Cys285的巯基，以氢键结合P1位的酰胺。
与P2~P4作用的氨基酸残基则变异比较大，这可能是各个成员识别不同底物的特异性之所在。
在活性Cys周围的氨基酸序列也很保守，一般都有Gln-Ala-Cys-Arg-Gly(QACRG)五肽序列，在caspase-8、caspase-10中为QACQG，在caspase-9中是QACGG，这三个成员都有一个氨基酸残基的变异，但这种变异不影响蛋白酶的剪切活性和特异性。
未活化的caspase家族蛋白酶是以酶原形式存在的，酶原的氨基端有一段被称为“原结构域”(pro-domain)的序列。
酶原活化时不但要将原结构域切除，并且要将剩余部分剪切成一大一小两个亚基，分别称为P20和P10，活性酶就是由这两种亚基以(P20/P10)2的形式组成的。
这种活化反应也是Asp特异的，剪切发生在酶原中保守序列的Asp与其后的氨基酸残基之间，一般是先切下羧基端的小亚基，然后再从大亚基的氨基端切去原结构域。
APOBEC3概述
1.1.1APOBEC3概述1.1.1.1APOBEC3基因的发现及在不同物种间的分布HIV-1 Vif蛋白能调节病毒的感染和复制，它对于病原感染宿主有重要作用。
HIV-1 ΔVif感染非允许细胞之后产生的病毒粒子没有感染力，感染允许细胞产生的HIV-1有感染能力，Madani, N将允许细胞和非允许细胞进行融合后，发现HIV-1Δvif感染这种异核体产生的病毒粒子也没有感染性，证明非允许细胞有一项抗病毒功能。
之后Ann M. Sheehy从非允许细胞里面筛选出了CEM51（后来的APOBEC3G），他发现这种蛋白有抗病毒功能，这种功能能被HIV-1的Vif所克服[66]。
Vif是通过与cullin5，elonginB，elonginC形成一种复合体将APOBEC3G（A3G）泛素化进而被蛋白酶体降解，宿主细胞核结合因子（CBF-β）能与Vif结合稳定上述复合体结构进而调节Vif对抗A3G的作用[77,78]。
在这之后A3F，A3B，A3DE和A3H也逐渐被发现具有限制HIV-1复制活性。
A3蛋白表达高度受到IFNs诱导特别是在髓系分离细胞，并且A3蛋白具有广谱抗病毒活性，例如A3G对HIV-1、HBV、SIV、HTLV-1、Foamy virus、EIAV、MLV都有一定限制作用。
因此，对于A3蛋白的深入研究有助于我们更好了解病毒和机体的相互作用，为以后研制抗病毒药物打下基础。
研究证实A3蛋白除了能够限制外源性逆转录病毒，还对内源性逆转录病毒有一定的限制作用。
过去几年以来，人们认为宿主寄生因子能够利用多种不同机制与宿主A3蛋白共存。
这些结果表明，A3基因在宿主体内进化动力来源于外源性和内源性逆转录病毒在不同宿主之间传播的威胁。
A3基因的进化造成了不同哺乳动物A3数量和类型不同。
A3基因串联排列在脊椎动物保守的侧翼基因CBX6和CBX7之间，不同哺乳动物A3基因数不同。
例如：鼠只有一个A3基因，猪有2个，牛和羊有3个，猫有4个，马有6个，人和大星星有7个。
Caspase_3与细胞凋亡的研究_cropped
分子生物医学C aspase23 与细胞凋亡的研究张晓田(综述) ,宋天保(审校)( 西安交通大学医学院组织学与胚胎学教研室,陕西西安710061)关键词: 半胱天冬酶23 ; 细胞凋亡; Bcl22 中图分类号: Q255文献标识码: A文章编号:100622084 (2002) 1120621203His 的咪唑基团在C ys 侧链的极化激活中有重要作用。
精氨酸残基(Arg341 和Arg179) 位于大、小亚基之间的界面上,它们形成S1 亚位点,与P1 位点的天冬氨酸结合。
casp se23 的三维结构揭示大、小亚基共同参与构成其特异性的结合腔( b in d ing cleft ,S42S1) ,其中S4 亚位点是最主要的特异性决定簇, 只由小亚基构成4 ,5 。
2 c a sp a se23 与细胞凋亡2. 1 caspase23 处于细胞凋亡的下游经典的细胞凋亡途径有两条,分别为细胞外途径( 或称细胞表面死亡受体途径) 和细胞内途径(或称线粒体引发途径) 。
在细胞外途径中,死亡信号的传导依赖于死亡配体与受体的结合(如TNFα和TNFR , Fas L 和Fas 的结合) , 接着,死亡受体的死亡结构域( d eath d o2 main ,DD) 与信号传导分子(如FADD 等) 结合,而FADD 又可与caspase28 酶原的DE D 相连接, 形成死亡诱导信号复合物( d eath indu cing sig naling complex ,DISC) ,随之caspase28 被激活, 它通过裂解BID 使线粒体释放细胞色素C , 或直接作用于caspase23 及其他下游的caspase 。
在细胞内途径中, 细胞内的死亡信号,如DNA 损伤、毒素和ATP 耗竭等均可诱发线粒体释放细胞色素C。
细胞色素C、Apaf21 、d ATP 和caspase29 酶原结合形成凋亡复合体(apoptosom e) ,caspase29 被释放并激活,接着下游的caspase23 、7 等被激活降解底物使细胞凋亡2 ,6 。
Caspase-3基因过表达抑制LN-18人神经胶质瘤细胞移植瘤生长
Caspase-3基因过表达抑制LN-18人神经胶质瘤细胞移植瘤生长葛风;蒋云召;王泳【摘要】目的观察靶向caspase-3基因过表达对LN-18人神经胶质瘤细胞移植瘤生长的影响并探讨其机制.方法化学合成caspase-3基因序列,通过同源重组,获得caspase-3基因过表达慢病毒.设置转染组、对照组和空白组,其中转染组细胞转染caspase-3基因过表达慢病毒,对照组细胞转染含阴性序列基因重组慢病毒,空白组细胞不加病毒上清液,慢病毒转染LN-18人神经胶质瘤细胞72 h后测定病毒转染效率,蛋白质印迹法评估caspase-3蛋白表达.制备裸鼠神经胶质瘤荷瘤模型,细胞接种后每3天测量肿瘤体积,21 d后处死动物,剥离肿瘤组织,比较各组瘤块大小,TUNEL法观察各组肿瘤组织内细胞凋亡情况.结果 caspase-3基因过表达慢病毒能有效感染LN-18人神经胶质瘤细胞,体外细胞转染率达到83.7％,转染72 h后,转染组caspase-3蛋白表达显著增加;转染组LN-18人神经胶质瘤细胞移植裸鼠皮下,肿瘤生长速度明显小于对照组和空白组,至移植后21 d,转染组、对照组和空白组移植瘤体积分别为(0.52±0.17)cm3、(2.61±0.22)cm3和(2.38±0.19)cm3,F=104.241,P=0.02189;移植后21 d,与对照组和空白组相比,转染组移植瘤细胞凋亡显著增加(P<0.001).结论 caspase-3基因过表达慢病毒转染LN-18人神经胶质瘤细胞可明显促进caspase-3蛋白合成,抑制LN-18神经胶质瘤细胞体内移植后生长,显著增加肿瘤细胞凋亡,可作为神经胶质瘤治疗新手段.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2019(035)009【总页数】4页(P1379-1382)【关键词】caspase-3;慢病毒;神经胶质瘤;细胞凋亡;肿瘤抑制【作者】葛风;蒋云召;王泳【作者单位】无锡市第三人民医院神经外科,江苏无锡 214000;无锡市第三人民医院神经外科,江苏无锡 214000;无锡市第三人民医院神经外科,江苏无锡 214000【正文语种】中文神经胶质瘤是目前临床上最常见脑肿瘤，约占所有颅内原发肿瘤的一半，每年新增约14 万病例，65 岁以上人群发病率明显增高［1］。
Caspase-3及Cleaved-Caspase-3在氟中毒大鼠肝脏中表达
Caspase-3及Cleaved-Caspase-3在氟中毒大鼠肝脏中表达李永宁;肖晶晶;赵建勇【摘要】目的探讨氟中毒大鼠肝脏组织中Caspase-3及Cleaved-Caspase-3的表达情况.方法选用36只健康SD大鼠分为对照组、低氟组、高氟组(饮用含氟量分别为＜1 mg/L、5mg/L及50 mg/L的自来水),每组12只(雌雄各半).饲养6个月后,股动脉放血处死,氟离子电极法检测大鼠尿氟含量;自动血生化分析仪检测大鼠肝功能;免疫组织化学法和蛋白印记(Western blot)法检测Caspase3及Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平.结果低氟组、高氟组大鼠尿氟[(1.85±0.13)、(2.23±o.10) mg/L均高于对照组[(1.63±o.11) mg/L] (P＜0.05);低、高氟组大鼠血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶活性[(48.66±5.55)、(68.17±8.39)U/L及(142.57±16.21)、(165.89±28.26) U/L]均高于对照组[(38.49±2.98)、(117.98±9.88) U/L](P＜0.05);高过剂量氟组Caspase-3及Cleaved-Caspase-3蛋白表达[(98.08±13.08)、(106.33±9.14)]明显高于对照组[(53.92±6.36)、(59.78±7.54)l(P＜0.05).结论氟可促进Caspase-3及Cleaved-Caspase3蛋白的表达,其可能参与慢性氟中毒所致肝脏损伤发病过程.【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2016(040)003【总页数】3页(P239-240,封3)【关键词】氟中毒;Caspase-3;Cleaved-Caspase-3;细胞凋【作者】李永宁;肖晶晶;赵建勇【作者单位】贵州医科大学,贵州贵阳550004;贵州医科大学,贵州贵阳550004;贵州医科大学,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R392.11氟不仅可以导致骨质疏松、骨硬化、骨软化等一系列的骨相损害，还能造成中枢神经、心血管、消化、内分泌等多系统的非骨相损害[1]。
Caspase-3和Bcl-2在原发性支气管肺癌中的表达及意义
原发 性 支气管 肺癌 和 癌旁组 织 中 Ｃ ｓａｅ ３及 Ｂ ｌ２的表 达 ， 结合 临床资 料 探讨 二者 表 达异 常与 原发 性 支气 管肺 ａｐｓ一 ｃ一 并 癌 发生 、 展 的关 系。结果 ： 原发性 支 气管 肺癌 中， ｃ一 发 在 Ｂ ｌ２蛋 白高度 表达 （５２ ， Ｃ ｓａｅ ３表达 略低（５７ 。在 ４ ．％１而 ａｐ ｓ一 ３． ％１ 癌旁 组 织 中 ， ａｐｓ 一 Ｃ ｓａｅ ３高度 表 达（ 阳性率 为 １ ０ ， Ｂ ｌ２无 表达 （ ０ ％）而 ｃ一 阳性 率 为 ０ 。结 论 ： 发性 支 气 管肺 癌 中 Ｂ ｌ２ ） 原 ｃ一 蛋 白表达 上调 、 ａｐ ｓ一 Ｃ ｓａｅ ３表达下 降 同原 发性 支气 管肺 癌 的发生 、 展及 分化 有 关 。 发
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基础研究 ・
２０ 年 ｌ ０８ Ｏ月第 ５卷第 ３ 期 Ｏ
ａ ｐ ｓ 口Ｂ ＇ ２在原发性支气管肺癌 中的 ｓ ａ ｅ ３和 （－ － 布 Ｃ ３ ｌ Ｉ
表达及 意义
线 铁 军
（ 阳市 第一 人 民医 院呼 吸内科 ， 沈 辽宁 沈 阳 １ ０ ４ ） １０ １
［ 摘要】 目的： 探讨 Ｃ ｓａｅ３和 Ｂ ｌ ａ ｓ一 ｐ ｃ ２在原发性支气管肺癌中的表达及意义。方法： 一 本文应用免疫组织化学方法检测
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收稿日期:20060726基金项目:广西大学科学技术研究基金重点资助项目(2003ZD 01);广西科技攻关项目(桂科攻0480001)作者简介:李军(1971),男,广东梅州人,助理研究员,博士研究生,研究方向为动物传染病防治与分子病毒学。
*为通讯作者。
猪Caspase -3基因的克隆及序列分析李 军, 刘 兵, 曾 兰, 罗廷荣*(广西大学动物科学技术学院, 南宁 530005)摘要:天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)是与细胞凋亡有关的一类蛋白酶,其中Caspase-3是细胞凋亡的最终执行者。
为了进一步研究Caspase-3的生物学功能,从P K-15细胞中提取总RN A ,用RT -PCR 方法扩增出猪Caspase-3基因,序列分析表明克隆的Caspase-3基因与GenBank 上登录的猪Caspase-3基因核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为98.9%和98.6%,与人和鼠的Ca spase -3基因核苷酸、氨基酸序列同源性分别为88.6%、83.5%和87.8%、86.7%,而且猪、人、鼠的Caspase-3上的催化和剪切位点都极为保守。
关键词:Caspase-3;克隆;序列分析中图分类号:S 813.1 文献标识码:A 文章编号:1002—8161(2006)05-0584-05Cloning and sequence analysis of Caspase -3gene of pigLI Jun ,LIU Bing ,ZENG Lan ,LU O Ting -r ong*(A nimal Science and T echnology College ,Guang x i Univers ity ,N anning 530005,China )Abstract :Caspase is a kind of pr ot eases which is r elated to apopto sis ,and Caspase -3is the ultimate ex ecute in apoptosis.In or der to st udy t he bio log ical functio n o f Caspase-3,t he Caspase-3gene of pig wa s amplified by RT -PCR w it h the ex tr actio n o f RN A fr om P K -15cells.Aft er clo ning and sequencing ,the results show ed that t he nu-cleo tide a nd the deduced amino acid sequences of clo ned Caspase -3sha red 98.9%and 98.6%homo log y w ith thoseof Caspase -3published in GenBank .A s co mpar ed with that of human a nd mouse ,the Caspase -3gene homo lo gy of the nucleotide and the deduced amino acid sequences w er e 88.6%,83.5%and 87.8%,86.7%,respect ively.T he activ e sites cor responding catalysis and cleav ag e o n Caspase-3amo ng the pig ,human and mo use w ere conser vative ver y much .Key words :Caspase -3;cloning ;sequence a nalysis 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(aspartate-specific cy steinyl pro teinase,Caspase)家族是执行细胞凋亡的一类重要蛋白酶。
Caspase 通常以单一的蛋白酶原前体形式存在,被激活后引起一系列酶级联效应,特异性地在特定的氨基酸序列中将肽链从天冬氨酸(Asp )之后切断,还可引起染色体DNA 的降解及细胞的解体[1,2]。
在细胞凋亡信号传导的Caspase 级联反应中,Caspase-3是凋亡信号传导途径下游的一个关键效应因子,它可以被Fas /FasL 途径活化,也可经颗粒酶B 途径活化。
研究表明,Caspase-3可以导致所有类型的细胞发生染色质浓缩和形成DNA 片段化[3,4]。
此外,Caspase -3可以抑制白细胞介素18的生物学活性[5],因此Caspase-3在细胞凋亡和炎症反应中起到关键的作用。
猪的许多病毒病都涉及到细胞凋亡[6～9],有的病毒既能促进细胞凋亡又能抑制细胞凋亡;有的只能诱导细胞凋亡;而有的只能抑制细胞凋亡。
但是Caspase-3在其中的分子作用机制尚未完全清楚,本研究通过克隆猪的Caspase-3基因,以便进一步研究在病毒感染过程中Caspase -3对细胞凋亡的影响。
1 材料与方法1.1 主要试剂 RNA 抽提试剂Tr izol Reag ent 、T aq DNA 聚合酶,购自上海生工生物工程技术服务有限公司。
M-M uLV反转录酶、Rnasin、DNA回收试剂盒购自Prom eg a公司。
PM D18-T载体、限制性内切酶购自Takara公司。
DM EM购自GIBICO公司。
其他化学试剂为进口或国产分析纯产品。
PK-15猪肾细胞系和大肠杆菌感受态细胞E coli DH5 为本实验室保存。
1.2引物根据Genbank上Caspase-3(AB029345)的基因序列,设计1对引物,扩增大小为834bp,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
Csapase-3-1:5, AT GGAGAACA ATAAAACCT3,Csapase-3-2:5, CTAGT GAT A AAA GT AGAGT TC3。
1.3 模板的制备 取PK-15细胞进行总RNA的抽提,方法按T rizol说明书操作。
1.4 RT-PCR 取16 l总RN A置于反应管内,加1 l(25Pmol/ l)的反向引物混匀,于PCR仪内70℃5min,90℃5m in后迅速放入冰浴5min。
依次加入5×RT Buffer,dNT P,Rnasin,M-M uLV反转录酶,至总量25 l,42℃反转录1h。
PCR反应在50 l反应体系中进行,扩增的条件为95℃5m in预变性;95℃1min,50℃1m in,72℃1m in,共进行35个循环;72℃10min。
1.5 基因克隆及序列分析 PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳,用DNA回收试剂盒将扩增的目的片段纯化后连接到PM D18-载体,4℃过夜,然后转化E co li DH5 ,涂布于Amp/X-gal LB平板上,37℃培养过夜,经PCR和双酶切鉴定。
阳性克隆送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。
用DNAstar 分析软件对测得的核苷酸序列和推导的氨基酸序列与其它种类的Caspase-3进行同源性比较和分析。
2 结果2.1 Caspase-3基因的RT-PCR扩增 从PK-15细胞中抽提总RNA,经RT-PCR扩增后得到一条834bp的片段,扩增产物大小与预期结果相符(图1)。
2.2 Caspase-3基因的克隆与鉴定 RT-PCR扩增的Caspase-3产物与PM D-18T载体连接后转化E coli DH5 ,小量抽提重组质粒,重组质粒经PCR 扩增产生一个834bp的片段。
而经HincII和SacI 双酶切后增加了2个酶切位点的长度,所以产生了2660bp和866bp的2个片段,证明是阳性重组质粒(图2)。
2.3 测序结果及序列分析 测序结果表明,扩增出的834bp的猪Caspase-3基因是一个完整开放阅读框(ORF),编码277个氨基酸,其中亲水性氨基酸占30.3%,疏水性氨基酸占29.2%,碱性氨基酸占13%,酸性氨基酸占13.4%。
推断的蛋白分子量约为32KDa(图3)。
它与GenBank上登录的猪Cas-pase-3基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列同源性为98.9%和98.6%。
与人、鼠Caspase-3基因的核苷酸序列与推导的氨基酸序列同源性分别为88. 6%、83.5%和87.8%、86.7%。
克隆的猪Caspase-3基因推断的氨基酸序列上含有His121和Gln161-Ala162-Cy s163-Arg164-Gly165(QACRG)五肽这两个参与将底物切割的催化位点以及加工酶原前体成为成熟的酶亚基的两个剪切位点Asp28和Asp175(图4)。
AT G GAG AAC AAT AAA ACC T CA GT G GAT T CA AAA TCC AT T AAA ACT TT G GAG AC A M E N N K T S V D S K S I K T L E T AAG ATC T TA CAT GGA AGC AAA T CA GT G GAC TC T GGA AT A T CC T TG GAT GT C AGT K I L H G S K S V D S G I S L D V S T AC AAA AT G GAT T AT CCT GAA AT G GGT T TA TGT ATA AT A ATT AAT AAT AAG AAC Y K M D Y P E M G L C I I I N N K N T T T GAT AAA AAT AC C GGA ATG GCA TGT CGA TC T GGT ACA GAT GT G GAT GCT GCAF D K N TG M A C R S G T D V D A AAAT CT C AGG GAG AC C TT C ACA AAC TT G AAA T AT GAA GT C AGG AAT AAA AAT GAT N L R E T F T N L K Y E V R N K N D CTT ACA C GT GAA GAA AT T TT G GAG TT A AT G CAC AGT GT T T CT AAA GAA GAC CAT L T R E E I L E L M H S V S K E D H AGT AAA AGG AGC AGT TT T ATT TGC GT G C TT CTA AGC C AT GGT GAA GAA GGA AAA S K R S S F I C V L L S H G E E G K AT T TT T GGA AC A AAT GGA C CT GT T GAT C TG AAA AA A T T A ACA AGT T TC T T C AGAI F G T N G P V D L K K L T S F F RGGG GAC T GT TGT AGA ACT CT A AC T GGC AAA CC C AA A CT C T TC AT A ATT CAG GCCG D C C R T L T G K P K L F I I Q ATGC CGA GGC AC A GAA T T G GAC T GT GGG AT T GAG ACG GAC AGT GGG ACT GAA GATC R G T E LD C G IE T D S G T E DGAC ATG GCG TGT CAG AAA ATA CCA GT T GAG GC A GAC TT C TT G T AT GC A T AT TC TD M A C Q K I P VE A DF L Y A Y SACA GCG CCT GGT T AC T AT T CC T GG CGA AAT TCA AAG GAC GGA TC C TGG T T C ATC T A P G Y Y S W R N S K D G S W F IC AG TC A C TT TGT GCA GCG CT G AAA CAG T AC GCT CA C AAG C CT GAG CT T AT G CACQ S L C A A L K Q Y A H K P E L M H AT T CT T ACT CGG GTT AAC CGA AAG GT A GCA GT A GAA TT C GAG TC C TT T T CT ACTI L T R V N R K V A V E F E S F S TGAC T CT ACT TT T CAT GCA AAG AAA CAG AT T CCA T GT AT T GTG TC C AT G CTC AC AD S T F H A K K Q I P C I V S M L TAAA GAA CT C TAC T TT T AT CAC T AGK E L Y F Y H*图3 Caspase-3核苷酸序列及其推导的氨基酸序列3 讨 论Caspase家族蛋白酶可以经一系列的级联反应,通过不同的信号途径参与多种类型的细胞凋亡[10],其中Caspase-3切割底物直接介导凋亡是细胞凋亡的一个重要途径[11,12]。