现代组织化学技术问答题详解(同济)
化学专业技术竞赛试题库及答案
化学专业技术竞赛试题库及答案一、问答题1、什么是水的化学除盐处理？答：用H型阳离子交换剂与水中的各种阳离子进行交换而放出H-；而用OH型阴离子交换剂与水中的各种阴离子进行交换而放出OH-。
这样，当水经过这些阴、阳离子交换剂的交换处理后，就会把水中的各种盐类基本除尽。
这种方法，就称为水的化学除盐处理。
2、保证锅炉给水水质的方法有哪些？答：（1）减少热力系统的水、汽损失，降低补给水量。
（2）采用合理的和先进的水处理工艺，制备优良的锅炉补给水。
（3）防止凝汽器泄漏，避免凝结水污染。
（4）对给水和凝结水系统采取有效的防腐措施，减少热力系统的腐蚀。
（5）作好停备用保护工作，减轻热力系统的腐蚀。
3、溶解氧不合格的原因有哪些？答：给水溶氧不合格的原因主要有：（1）除氧器运行参数（温度、压力）不正常。
（2）除氧器入口溶解氧过高。
（3）除氧器装置内部有缺陷。
（4）负荷变动较大，补水量增加。
（5）排汽门开度不合适。
4、离子交换器再生过程时，反洗有哪些作用？（了解）答：1）除去运行时聚集的污物和悬浮物2）排除空气3）使向下逆流时压紧的离子交换剂松动4）用来将树脂分层5、什么情况下应加强锅炉的排污？答：1）锅炉刚启动，未投入正常运行前2）炉水浑浊或质量超标3）蒸汽质量恶化4）给水水质超标6、锅炉启动前，化学人员应做哪些准备工作？答：1）锅炉点火前应化验给水、炉水是否合格，均合格方可通知锅炉点火2）加药设备及其系统应处于良好的备用状态，药箱应有足够药量3）所有取样器应处于备用状态，所有阀门开关灵活4）排污门应灵活好使5）化验药品应齐全，仪器应完整7、氢站槽总电压过高的原因答：1）槽内电解液脏致使电解小室进气孔和出气孔堵塞，小室电阻增加2）槽温控制较低3）碱液浓度过高或过低4）碱液循环量过低5）添加剂量不足8、降低酸碱耗的主要措施有哪些？答：1）保证进水水质2）保证再生质量，延长周期制水量3）保证再生液质量、纯度、严格控制再生方式操作4）保证设备运行安全、可靠、正常9、离子交换器进行大反洗应注意哪些事项？（了解）答：1）大反洗时，人必须在现场监护2）大反洗时，流量由小到大，要除去空气3）大反洗前进行小反洗4）大反洗尽量达到最高高度，反洗彻底10、锅炉给水水质调节的方法都有哪些？请分别加以说明答：锅炉给水水质调节的方法有：1）全挥发性处理。
现代分析测试技术最终答案
一、问答题：1、试述塔板理论的基本关系式及理论要点。
答：塔板理论的基本关系式为：在tR一定时，W或W1/2越小(即峰越窄)，理论板数n 越大，理论板高越小，柱的分离效率越高。
因此，理论塔板数是评价柱效能的指标。
1）色谱柱内存在许多塔板，组分在塔板间隔（即塔板高度）内可以很快达到分配平衡。
2）流动相进入色谱柱，不是连续的而是脉动式的，即每次通过为一个塔板体积。
3）样品加在每个塔板上，样品沿色谱柱轴方向的扩散可以忽略。
4）在所有塔板上分配系数相等，与组分的量无关。
即分配系数在各塔坂上是常数。
2、利用范氏方程说明HPLC中如何选择实验条件？① 采用粒径小而均匀的球形固定相,首选化学键合相,用匀浆法装柱.② 采用低黏度流动相,低流量(1mL/min),首选甲醇.③ 采用柱温箱,避免室温波动,增加实验重复性,柱温以25～30℃为宜.3、高效液相色谱仪包括哪些主要部件？各部件的作用是什么？ 高效液相色谱仪由五大部分组成：高压输液系统，进样系统、分离系统、检测系统和色谱工作站。
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。
高压输液系统由储液罐、过滤器、高压输液泵、梯度洗脱装置等组成。
流动相在进入高压泵之前，应先进行过滤和脱气处理。
高压输液泵是核心部件，其密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等。
进样系统是将被分离的样品导入色谱柱的装置。
要求密封性、重复性好，死体积小，便于实现自动化。
进样系统包括取样、进样两个功能。
分离系统主要是指色谱柱，色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件，要求分离度要高、柱容量大、分析速度快。
检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。
用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。
其作用是把洗脱液中组分的量转变为电信号。
并由工作站（或记录仪）绘出谱图来进行定性、定量分析。
色谱工作站是色谱仪的自动化控制包括自动进样系统的进样方式、输液泵系统中的溶剂流速、梯度洗脱程序、检测系统的各项参数、数据记录和处理等。
组织化学技术
组织化学技术组织化学技术篇一：组织化学组织与细胞化学一、填空题：体视学里是主要的填空题。
二、名词解释1、异染现象染料离子以某种方式使它对所吸收的波长有所改变，因而观察到被染的组织显示与该染料本身颜色不一样，此现象为异染现象。
2、诱发荧光和自发荧光诱发荧光：自发荧光：由于紫外线的照射，标本中的荧光物质吸收光能后，呈现出不同颜色的荧光，这是自发荧光。
3、原位杂交组织化学和免疫组织化学原位杂交组织化学（In situ hybridization histochemistry，ISHH）是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，然后再应用与标记物相应的检测系统通过组织化学或免疫组织化学在核酸原有的位置进行细胞内定位。
免疫组织化学（immunohistochemistry）: 将化学反应中呈色反应与免疫学抗原抗体反应结合起来，用标记的特异性抗体（或抗原）对细胞及组织内抗原（或抗体）的分布进行组织或细胞内原位检测的一门技术。
4、点计数（P116）估计面积和面积分数的方法，称为点计数。
5、形态计量术形态计量术(morphometry)是运用数学和统计学原理对组织和细胞内各种成分的数量、体积、表面积等的相对值与绝对值的测量,其中以研究组织和细胞内某种结构的三维立体结构的研究称体视学(sterology)。
6、DAB系统7、各向同性和各向异性指物体的物理、化学等方面的性质不会因方向的不同而有所变化的特性，即某一物体在不同的方向所测得的性能数值完全相同。
材料在各方向的力学和物理性能呈现差异的特性。
8、饲养细胞在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。
9、完全抗原、半抗原和不完全抗原完全抗原:兼有免疫原性和反应原性的物质称完全抗原。
大多数蛋白质是良好的完全抗原。
半抗原:只有反应原性而无免疫原性的物质称半抗原或不完全抗原，绝大多数低分子量的多糖和所有的类脂均属半抗原。
化学反应技术试题及答案
化学反应技术试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 化学反应速率受哪些因素影响？A. 反应物浓度B. 温度C. 催化剂D. 所有选项答案：D2. 以下哪个不是催化剂的特点？A. 改变反应速率B. 反应前后质量不变C. 反应前后化学性质不变D. 参与反应答案：D3. 反应物浓度增加，反应速率如何变化？A. 增加B. 减少C. 不变D. 无法确定答案：A4. 温度升高，反应速率通常如何变化？A. 增加B. 减少C. 不变D. 无法确定答案：A5. 以下哪种方法可以加快反应速率？A. 增加反应物浓度B. 提高温度C. 使用催化剂D. 所有选项答案：D6. 反应物的活化能如何影响反应速率？A. 活化能越高，反应速率越快B. 活化能越高，反应速率越慢C. 活化能与反应速率无关D. 无法确定答案：B7. 在一个封闭系统中，如果反应物的浓度减少，那么生成物的浓度会如何变化？A. 增加B. 减少C. 不变D. 无法确定答案：A8. 以下哪种情况下，反应速率不会改变？A. 反应物浓度不变B. 温度不变C. 催化剂不变D. 所有选项答案：D9. 反应的平衡常数K随温度变化如何变化？A. 温度升高，K增加B. 温度升高，K减少C. 温度升高，K不变D. 无法确定答案：D10. 以下哪种物质不是强酸？A. 硫酸B. 盐酸C. 醋酸D. 氢氧化钠答案：C二、填空题（每题2分，共20分）1. 当一个反应的活化能为零时，该反应的速率常数______。
答案：非常大2. 一个反应的熵变是指反应前后系统的______变化。
答案：混乱度3. 在酸碱中和反应中，当酸和碱完全中和时，溶液的pH值______。
答案：等于74. 一个反应的平衡常数K值越大，说明该反应的______越强。
答案：倾向性5. 温度升高，大多数化学反应的活化能______。
答案：降低6. 催化剂的作用是降低反应的______。
答案：活化能7. 反应物的浓度增加，反应速率______。
同济的普通化学习题---珍藏版
专题一化学，就是研究物质化学运动和变化规律的科学，亦即研究那些具有一定质量、占有一定空间的实物的组成、结构、性质和变化规律，以及伴随这些变化过程的能量关系的科学。
物质有4种不同的物理聚集状态，即气态、液态、固态和等离子态。
气体的基本特征是其具有无限的可膨胀性、无限的掺合性和外界条件（温度、压力）对其体积影响的敏感性。
理想气体状态方程对含有物质的量为ｎ的理想气体，在密闭的容器中其体积（V ）、压力（p ）和热力学温度（T ）之间服从以下关系式： PV = nRT此式称为理想气体状态方程。
式中R 叫做摩尔气体常数，其值等于1 mol 任何理想气体的pV/T 值，其数值可根据阿伏加德罗定律来求得。
R ＝•mol -1·K -1 。
在使用理想气体状态方程时，要注意各物理量的量纲与R 数值及其单位的一致，即R ＝•mol -1·K -1时，式中n 、p 、V 、T 等物理量只能用它们的基本单位mol 、Pa 、m 3和K 。
理想气体状态方程可表示为另外一些形式，如：RT M m pV = 或RTM p =ρ 二、混合气体分压定律（道尔顿分压定律、阿马格分容定律）在恒温下，把混合气体分离成各个单独组分，并使其与混合气体具有相同的压力，此时该组分气体所占有的体积称为该组分的分体积。
ni n V i V i x )()()(== ∑=)()(i V i V 气—液平衡在临界温度以下，气体转化为液体，但分子的热运动并未停止，处于液体表面的少数分子能克服分子间力，重新飞逸出液面变成气体，此过程称为液体的蒸发（或气化）。
如果把液体放置于密闭的容器中，蒸气分子则不致逃走，已形成的蒸气分子又可能重新撞到液面上而凝聚为液态。
蒸发与凝聚两个过程同时进行，但开始时前者居优势，所以气相中分子逐渐增多，随后分子返回液相的机会增大，到了一定程度，单位时间内分子的出入数目相等，此时两个过程达到平衡： 气体凝聚蒸发液体，此时，液体的蒸发和气体的凝聚似乎已经停止，但实际上这两个过程仍在不断进行，只是它们的速度相等而已，因此，这是一种动态平衡。
现代化学基础试题及答案
现代化学基础试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 以下哪种元素的原子序数是11？A. 钠B. 镁C. 铝D. 钾答案：A2. 化学方程式中，表示反应物和生成物的系数表示什么？A. 质量B. 物质的量C. 体积D. 能量答案：B3. 以下哪种物质是电解质？A. 酒精B. 蔗糖C. 氯化钠D. 二氧化碳答案：C4. 根据元素周期表，最外层电子数为8的元素属于哪一族？A. ⅠA族B. ⅡA族C. ⅢA族D. ⅣA族5. 以下哪种反应是氧化还原反应？A. 酸碱中和反应B. 置换反应C. 复分解反应D. 合成反应答案：B6. 以下哪种物质是强酸？A. 醋酸B. 碳酸C. 硫酸D. 磷酸答案：C7. 原子核外电子排布遵循什么原则？A. 泡利不相容原理B. 洪特规则C. 能量最低原理D. 所有上述原则答案：D8. 以下哪种化合物是共价化合物？A. 氯化钠B. 氧化钠C. 氢氧化钠D. 二氧化碳答案：D9. 以下哪种元素是过渡金属？B. 钠C. 铁D. 氦答案：C10. 以下哪种物质是弱碱？A. 氢氧化钠B. 氢氧化钾C. 氢氧化铵D. 氢氧化镁答案：D二、填空题（每题2分，共20分）1. 元素周期表中，第______周期包含镧系和锕系元素。
答案：62. 摩尔是表示______的单位。
答案：物质的量3. 化学反应中，______是反应前后不变的量。
答案：原子总数4. 元素的电子排布遵循______规则。
答案：洪特规则5. 酸和碱反应生成盐和水的反应称为______反应。
答案：中和6. 金属和非金属元素之间的化合物通常是______化合物。
答案：离子7. 元素周期表中，第______族元素具有最高价。
答案：ⅦA8. 元素的化学性质主要取决于原子的______电子。
答案：最外层9. 元素周期表中，第______周期元素的原子半径最大。
答案：610. 元素周期表中，第______族元素通常具有金属性。
答案：ⅠA三、简答题（每题10分，共30分）1. 描述什么是化学键，并举例说明离子键和共价键的区别。
生化技术复习题简答题问答题
思考题一.生物大分子物质的制备简述生化分离方法与一般化学分离法相比的特点？特点：与化学产品的分离制备相比较，生物大分子的制备有其特殊性：（1）生物材料的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至及几千种化合物。
还有很多化合物未知，有待人们研究和开发。
（2）有的生物大分子在分离过程中还在不断的代谢，所以生物大分子的分离纯化方法差别极大，想找到一种适合各种不同类生物大分子分离制备的标准方法是不可能的。
（3）许多生物大分子在生物材料中的含量甚微。
分离纯化的步骤繁多，流程又长，有的目的产物要经过十几步，几十步的操作才能达到所需纯度的要求。
（4）生化分离制备几乎都在溶液中进行，影响因素很多，经验性较强。
（5）许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很容易变形破坏，因此常选用比较温和的条件。
生物材料选择的一般原则有哪些？生物材料选择的一般原则是:制备生物大分子，首先要根据目的选择合适的生物材料。
材料选择的一般原则是，有效成分（即欲提取的物质）含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低等。
但在实际工作中，则只须考虑材料的选择符合实验预定的目标要求即可。
材料选定后要尽可能保持新鲜，尽快加工处理。
生物材料如暂不提取应冷冻保存。
常用于细胞破碎方法可分为哪些类型？简述细胞破碎的目的意义。
细胞的破碎方法可分为：机械法，包括（1）捣碎法（2）研磨法（3）匀浆法物理法，包括（1）反复冻融法（2）超声波处理法（3）压榨法化学与生物化学方法，包括（1）酶解法（2）化学法目的意义：除了某些细胞外的多肽激素和某些蛋白质与酶之外，对于细胞内或多细胞生物组织中的各种生物大分子的分离纯化，都需要事先将细胞和组织破碎，使生物大分子充分释放到溶液中，并不丢失生物活性。
不同的生物体或同一生物体不同部位的组织，其组织破碎的难易不一，使用的方法也不相同。
何谓提取？影响提取有效成分的因素有哪些？提取定义：提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂（溶液）处理原料，使欲分离物质充分溶解到溶剂（溶液）中的过程，也称为抽提。
同济基础医学院解剖学系硕士研究生课程简介的知识
同济基础医学院解剖学系硕士研究生课程简介第二章抗原和抗体1．抗原的定义，完全抗原，半抗原，抗原的特异性，抗原决定簇，抗原的异物性。
2．抗体的定义、分子结构和免疫活性。
第三章免疫组织化学技术的原理1．免疫荧光技术：抗原直接定位法、抗体直接定位法、抗原间接定位法、抗体间接定位法和免疫荧光双标记法的原理。
2．免疫酶技术：抗原间接定位法、酶桥法、PAP法和免疫酶双标记法的原理。
3．亲合素-生物素法：LAB法、 BAB法、 ABC法和 SABC法的原理。
4．免疫胶体金技术：免疫胶体金染色法，蛋白A胶体金法，胶体金双标法的原理。
第四章免疫组织化学标本的制备1．固定的目的，灌注固定的方法。
2．石蜡包埋切片法、恒冷箱切片法和振动切片法。
第五章若干免疫组织化学标记程序1．免疫单标记程序：光镜水平的免疫荧光染色（间接法）、PAP法、ABC法、SABC法、免疫胶体金法、蛋白A胶体金法和免疫金银染色法以及电镜水平的PAP法包染色和PAP法包埋后染色。
2．免疫双标记染色程序：光镜水平的PAP-PAAP双重染色、免疫荧光双重染色和PAP--Gal双重染色以及电镜水平的PAP--Gal双重染色、DAB-TMB双重染色和胶体金又重染色。
第三篇原位杂交组织化学第一章原位杂交组织化学的分子生物学基础1．核酸的分子结构：核酸的化学组成，核酸的一级结构，高级结构。
2．核酸的特性：DNA的变性与复性，RNA的功能，遗传信息的传递（DNA的复制、转录和翻译）。
第二章核酸分子杂交概述1．核酸分子杂交的定义和基本原理。
2．常用核酸探针的种类和特点：cDNA探针、cRNA探针、寡核苷酸探针。
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1.组织化学的基本原理及其与生物化学的基本区别组织化学是在保持组织或细胞基本上不改变其生活状态时的细微结构的条件下，采用显微镜技术观察某些化学成分和酶活性在组织或细胞内的定性、定位和定量及其变化规律，以便阐明它们在组织或细胞中的存在和含量及其变化的机能意义。
基本原理:在组织切片或细胞涂片上加入一定的化学试剂，该试剂与组织或细胞内的拟检成分起化学反应，形成有颜色的的终末反应产物，该产物沉淀在相应成分所在的位置上，可在显微镜下观察得到，用以研究糖类、脂类、蛋白质、酶类和核酸等物质在组织或细胞内的分布和含量。
组织化学与生物化学的区别在于：虽然两者都着眼于组织和细胞内的化学组成及其含量和酶的存在及其活性，但生物化学技术中通常是将组织和细胞打碎，制成匀浆，然后进行化学测定，故其定位性能差，而组织化学技术中是尽可能在组织或细胞内原位显示各种化学成分，故其定位性能好；生物学技术中的化学反应是在试管内进行的，而组织化学技术中的化学反应通常是在组织切片或细胞涂片中进行的。
2.试述组织化学技术的基本要求在应用组织化学技术显示组织和细胞内化学物质及其定位和定量以及代谢状态时，必须满足一下基本要求：1.保持组织和细胞形态结构的良好状态，以便反应产物的定位精确，如果形态结构破坏而失真，则定位困难。
2.具备一定的特异性，以便获取正确的实验结果。
3.具备一定的灵敏性，以便含量很少的物质也能被显示出来。
4.生成的产物必须是有色沉淀，颗粒细微不被溶解，定位于原位。
反应物沉淀的颜色深度与相反应物质含量或酶的活性具有一定的量效关系。
5.反应产物具有稳定性，以便于重复观察。
6.要有重复性。
(一) 保持组织和细胞形态结构的良好状态(二) 具备一定的特异性(三) 具备一定的灵敏性(四) 生成的反应产物必须是有色沉淀(五) 反应产物具有稳定性(六) 要有重复性。
3.试述酸性磷酸酶，乙酰胆碱酯酶和NO合酶的反应原理？以任意三种酶为例说明酶显示的基本原理？NO 合酶的分类及其组化原理?酸性磷酸酶反应原理：铅法和重氮偶联法1.铅法：在PH为5.0的条件下，酸性磷酸酶（ACP）水解其底物：β-甘油酸钠，产生PO43-,后者被捕获剂Pb(NO3)2的Pb2+直接捕获形成无色的Pb3 (PO4)2沉淀，后者又与(NH4)2S发生置换反应，最终形成棕黑色沉淀。
2.重氮偶联法：α-苯酚磷酸钠或萘酚AS-BI磷酸被酶水解放出萘酚，后者立即被重氮盐捕获偶联而生成有色偶氮色素沉淀（红色）。
乙酰胆碱酯酶反应原理：亚铁氰化铜法：乙酰胆碱酯酶（AChE）能将乙酰胆碱盐水解产生硫胆碱，使铁氰化物还原为亚铁氰化物，后者与铜离子结合成亚铁氰化铜而呈现有色沉淀(棕色)。
NO合酶反应原理：NADPH-d法：一氧化氮合酶可催化前体物质L-精氨酸转变成为L-瓜氨酸和NO，由于NOS和NADPH-d可能为同一种酶，并且都可以还原辅酶Ⅱ（NADPH）为辅助因子，介导NOS催化L-精氨酸转变成为L-瓜氨酸和NO，并释放电子，后者又被NADPH传递给硝基四唑兰（N-BT）, N-BT可被还原为有色沉淀（蓝色）。
4.原位杂交间接法的基本原理，并简述杂交后处理的原理？原位杂交间接法的基本原理：一般使用半抗原标记探针，最后通过免疫组织化学反应对半抗原定位，间接地显示探针与组织细胞内靶核酸所形成的杂交体。
杂交后处理的目的：除去未参加杂交体形成的过剩探针，除去探针与组织标本之间的非特异性结合，包括那些与靶核酸相似的序列与探针之间形成的含非互补碱基对的杂交体从而减低背景。
杂交后处理：系列不同浓度、不同温度盐溶液的漂洗洗涤的条件：盐浓度、温度、洗涤次数和时间。
盐浓度由高到低而温度由低到高。
洗涤过程中至少有一次高严格度条件(低盐、高温、高甲酰胺)下的漂洗注意防止切片干燥：因干燥的切片即使使用大量的溶液漂洗也很难减少非特异性结合。
当用RNA探针时，杂交后可用RNA酶处理(所用的试剂不能含有对RNA酶有抑制作用的物质,如还原剂DTT和甲酰胺等)放射性同位素标记探针的杂交后漂洗要比非放射性标记探针的更充分些5.杂交严格度的含义及主要影响因素和作用？杂交严格度(hybridization stringency)通过杂交及冲洗条件的选择对完全配对及不完全配对杂交体的鉴别程度，即决定探针是否能与含不互补碱基的核酸序列结合而形成杂交体的条件。
影响严格度的因素：甲酰胺的浓度、杂交温度、离子强度高严格度：碱基对完全互补。
特异性强，敏感性低（高甲酰胺浓度、低离子强度和高杂交温度）低严格度：碱基并不完全配对。
特异性差，而敏感性高（低甲酰胺浓度、高离子强度和低杂交温度）6.试述用半抗原标记的探针原位杂交组织化学的原理及注意事项原位杂交基本原理：在低于核酸变性温度（Tm值）20-30。
C时，根据碱基互补配对原则，在适宜条件下用带有半抗原标记物的已知序列的核酸探针与组织切片上具有相应序列的单链核酸（靶核酸）发生杂交反应，形成双链结构，即杂交体。
然后通过相应的显示方法将这些杂交体显示出来而对相应的靶核酸进行定位，并可利用显微分光光度计或图像分析仪等进行半定量研究。
注意事项：1.以半抗原标记的探针的原位杂交信号可通过免疫细胞化学或亲和组织化学技术进行间接显示。
2.用生物素标记的探针进行原位杂交，带有标记探针的杂交体可以根据亲和素-生物素亲和组织化学原理，或生物素-抗生物素抗体的免疫细胞化学原理进行显示。
3.以地高辛标记的探针在进行原位杂交反应后，可根据免疫细胞化学原理，用结和有酶（如HRP或AKP）或荧光素的羊地高辛抗体与标记在探针上的地高辛进行免疫反应，再用相应底物显示酶促反应或以荧光显微镜产生荧光间接显示杂交体。
与放射性标记探针相比，生物素、地高辛等探针具有对人体无害、不受半衰期限制、可长期保存等优点。
与生物素探针相比，地高辛标记探针不受组织、细胞中内源性生物素的干扰，敏感性与分辨率高，背景染色低，故标记广泛。
7.试述影响杂交体熔解温度（Tm值）的主要因素及根据？影响杂交体熔解温度的因素主要包括以下几个方面：1.杂交双链的碱基组成：杂交双链解离成单链时主要涉及配对碱基间氢键的断裂。
G-C之间有三个氢键，A-T之间或A-U之间有两个氢键，故（G+C）含量越高的杂交双链的Tm值越高。
2.杂交双链的长度：杂交双链越长，结合的位点越多，Tm值越高。
3.杂交双链的碱基错配程度：错配的碱基越多，及错配的程度越高，Tm值越低。
4.溶液中的离子强度：离子强度越高。
Tm值越高。
5.变性剂（如甲酰胺）的浓度：有些杂交液常含有较大比例的甲酰胺，以降低杂交反应的温度。
8.什么叫核酸探针？理想的探针标记物应具备哪些条件？核酸探针是指已知碱基序列的核酸片段，它仅与其靶分子-已知碱基序列的核酸互补的待测核酸反应。
理想的探针标记物应具备：1.标记后的探针分子结构要尽可能与原来的分子结构相同。
2.标记探针显示或检测要简便、节时、准确可靠、重复性好。
3.应安全无害。
9.杂交前处理的目的是什么？具体措施有哪些？目的：提高组织的通透性，增加靶核酸的可及性，增强信号。
防止RNA或DNA探针与组织细胞或载片之间的非特异性结合，减低背景。
具体措施：1.增强组织的通透性和核酸探针的穿透性：去污剂、蛋白酶K，消化、去除核酸周围蛋白质，蛋白酶K 消化反应的终止，在冰冷的PBS中清洗及在含甘氨酸(蛋白酶K的抑制剂)的PBS中清洗2. 减低背景染色(一)酸酐和稀酸处理酸酐防止探针与组织中碱性蛋白之间的静电结合；稀酸使碱性蛋白变性，增强靶核酸探针的可及性，避免碱性蛋白与核酸之间的非特异性结合(二）预杂交：杂交前用不含探针的杂交缓冲液在杂交温度下孵育1~2h，以阻断标本中可能与探针产生非特异性结合的位点(三)内源性生物素和酶的抑制：适宜的杂交前蛋白酶消化有利于消除内源性生物素的干扰。
内源性AKP-乙酸(4℃) 或过碘酸淋洗；过氧化物酶-用含H2O2的蒸馏水或甲醇溶液室温孵育10.什么是寡核苷酸探针？其设计原则是什么？有何优缺点？寡核苷酸探针：在体外人工化学合成的含10-50个核苷酸的探针。
设计原则：1.长度一般为10-50个核苷酸，过长者杂交时间较长，合成量低，过短者，特异性较差。
2.碱基中（G+C）含量应在40%-60%范围以内，超出此范围则会增加非特异性杂交。
3.探针分子内不应存在互补区，否则会出现抑制探针杂交的发夹状结构。
优点：1.制备简易：合成时间短，方法和实验条件简便。
2.序列任定：任何序列3.穿透性好：寡核苷酸链—单链、短4.杂交时间短：寡核苷酸链短，序列简单，分子量小，与靶核苷酸完全杂交的时间比克隆探针短5.特异性强：可识别一个碱基的变化6.使用简便：对RNA酶不敏感，不需变性缺点：不如RNA-RNA杂交稳定，敏感性低11.原位杂交实验的对照实验有哪些？1.组织对照：（1）Southern或Northern印迹反应（2）免疫组织化学2.探针对照：（1）已知阳性组织和已知阴性组织对照（2）用有意义RNA探针做原位杂交（3）吸收实验3.杂交反应对照：（1）空白对照（2）杂交前用核酸酶预处理标本12.试述免疫胶体金双标记（间接法）的原理？金属或金属蛋白在电子流穿过时能产生电子散射，能在电镜荧光屏上看见其影像。
根据该性质，它们常在免疫组化中被用来作为抗原和抗体的标记物，以胶体金为主，由于金粒子有很高的密度，所以在电镜下可清楚的看到金粒子定位和数目，也就是组织或细胞内拟检抗原的定位和定量。
在电镜水平上胶体金双标记要分四步进行：第一步：未标记一抗甲第二步：最小直径（5mm）胶体金标记的二抗甲IgG第三步：未标记一抗乙第四步：最大直径（20mm）胶体金标记的二抗乙IgG先用较小的金粒，再用较大的金粒，这样就不易造成不同大小金粒之间显著的干扰和较大金粒对较小金粒的空间阻碍。
为了防止双标记是两种胶体金粒的相互干扰和空间阻碍，还可以采用双面染色法，一张超薄切片上的两个面，其中一面染一抗甲及其较小直径胶体金标记的二抗甲IgG，另一面染一抗乙及其较大直径胶体金标记的二抗乙IgG，当两种抗原被定为在同一细胞器是时候，这种双面染色法既可防止蛋白A-金复合物（PAG）之间的相互干扰，又可避免空间阻碍现象。
13.试述过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物（PAP）法的主要原理及步骤，简述反应时应注意的问题？主要原理：PAP法中需要三种抗体，即第一抗体、第二抗体和抗过氧化物酶抗体（亦称为三抗），其中关键的试剂是过氧化物酶抗过氧化物酶复合物（PAP复合物）。
PAP复合物的结构包括3个分子的过氧化物酶和两分子的抗过氧化物酶IgG，后者的制法是以辣根过氧化物酶作为抗原免疫动物，产生抗过氧化物酶抗体，所应用的动物种类应和制备第一抗体的动物相同，然后将抗过氧化物酶抗体与足量的过氧化物酶结合，制备成由3个过氧化物酶分子和两个抗过氧化物酶抗体分子组成的非常稳定的环形复合物，即PAP复合物。