药物中特殊杂质的检查
药物的检查—特殊杂质的检查(药物分析课件)
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（4）面积归一化法
适合于所有杂质都能出峰，粗 略测定杂质峰面积 可求出各峰（各组分）占总量 的百分数。
杂质检查法：气相色谱法(GC)
用于药物中挥发性杂质的检查,如药物中 残留溶剂、农药残留量等。 检查方法同高效液相色谱法.
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菪碱的检查）
二、化学性质上的差异
1.酸碱性的差异
举例：硫酸阿托品中其他生物碱的检查
阿托品的碱性大于其他碱：阿托品＞山莨菪碱＞东莨菪碱、
樟柳碱
硫酸阿托（杂质：东、山、樟）
HCl [BH]+（溶解）
氨水 碱化
要求：不得出现浑浊
溶液中 浑浊 （盐酸阿托品） (其他碱游离)
[BH]+
化学性质上的差异
2.氧化还原性的差异
举例：葡萄糖亚铁中高铁盐的检查
10mlHCl 本品5g (100ml水) 3g KI
I2
Na2S2O3滴定 淀粉指示剂
蓝色消失
含Fe3+≤0.1%
特殊杂质检查方法---分光光度法
分光光度 法
1.紫外-可见分光光度法 （肾上腺素中肾上腺酮检查）
2.原子吸收分光光度法 （维生素C中铁、铜检查）
内标加校正因子法
校正因子 ( f ) AS / CS AR / CR
含量(CX )
f
AX AS / CS
S：内标 R：对照品 X：样品
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（2）外标法
含量(C X
)
CR
AX AR
R：对照品 X：样品
常用的检查方法---色谱法---高效液相色谱法
（3）主成分自身对照法（不加校正因子）
特殊杂质检查法
2.阿司匹林中检查游离水杨酸 游离水杨酸来源：a.生产中未 反应完全；b、贮存中水解 影响：游离水杨酸酸性较强， 对胃粘膜43;Fe3+一不反应 SA+Fe3+一紫堇色
检查方法：样品管：取样品0.1g，加乙醇 1ml溶解 1ml 加水至50m1 标准管：水杨酸0.1g加水溶解，加醋酸 加水至1000m1,取出1.0m1加 乙醇1ml，水48ml。 样品管、标准管均加新制成稀硫酸铁铵 lml，摇匀30"内如显色，比较不得更深。
③加校正因子的主成分自身对照法 将供试溶液稀释成与杂质限度相 当浓度作为对照溶液，分别取供试溶 液和对照溶液进样分析，供试液中各 杂质峰面积总和与校正因子相乘后与 对照溶液主成分峰面积比较，计算供 试品中杂质的含量。
校正因子（f） =
AS / CS AR / CR
（C x） f × =
Ax ′ AS / C'S
例如ChP2000枸橼酸乙胺嗪中检查N-甲 基哌嗪。 板：硅胶G薄层板 点样：供试品（50mg/ml甲醇液， 对照品(N-甲基哌嗪50μg/ml甲醇液）， 各10μl 展开剂：氯仿：甲醇：氨水(13： 5：1） 显色剂：置碘蒸气中显色。 规定：供试品液所显与对照品液 相应的杂质斑点，颜色不得深于对照 品液主斑点。
L = 杂质量/ 供试品量×100% = 2×10 ×100% = 0.06%
0.05 453× 100 −3
3）吸附或分配性质的差异（色谱差异） （1）TLC:根据药物与杂质对吸附剂 的吸附或展开剂的解析能力不同，加以 分离和检查。 ①利用待检杂质的纯品作对照：用待 检杂质纯品（或可能存在的杂质纯品） 作为对照液，与供试液点于同一薄层板 上，展开和定位后进行检查。
②不加校正因子的主成分自身对照法
实验一 TLC法进行药物中特殊杂质的检查
实验一 TLC法进行药物中特殊杂质的检查实验二 TLC法进行药物中特殊杂质的检查一、目的要求1、掌握阿司匹林片、盐酸哌唑嗪中特殊杂质检查的基本原理和方法。
2、掌握薄层色谱在药物杂质检查中的应用。
3、掌握薄层色谱法的基本操作。
二、乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查取本品0.1克，加乙醇1mL溶解后，加冷水适量使成50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取盐酸溶液（9→100mL）1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后，再加水适量使成100mL）1mL，摇匀，30秒钟内，如显色。
与对照液（精密称取水杨酸0.1克，加水溶解后，加冰醋酸1mL，摇匀，再加水使成1000mL，摇匀。
精密量取1mL，加乙醇1mL，水48mL，与上述新制的稀硫酸铁铵溶液1mL，摇匀）比较。
不得更深（0.1%）。
三、盐酸哌唑嗪中有关物质检查 1.薄层板的制备取硅胶GF254硅胶4g，加水约12mL，（1份固定相和3份水）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为 0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化 30 分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
2.盐酸哌唑嗪中有关物质检查取本品，加三氯甲烷-甲醇-二乙胺（10�U10�U1）溶液制成每1mL中含5.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加同一溶液稀释成每1mL中含50μg的溶液，作为对照溶液。
照薄层色谱法（附录V B）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-二乙胺（95�U5)为展开剂；展开，晾干，置紫外灯（254nm）下检视。
供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
四、注意事项1.点样采用微量注射器进行，在距薄层板底边2.5cm处开始点样，应少量多次点于同一原点处，原点面积应尽量小。
药分中各类药物的杂质
TLC
高低浓度对比法
盐酸吗啡
1.阿扑吗啡
碘试液
阿扑吗啡水溶液在碳酸氢钠碱性条件下,经碘试液氧化,生成水溶性绿色化合物,此产物能溶于乙醚,显深宝石红色,水层仍显绿色.(规定:50mg药物检查)
2.罂粟碱
稀盐酸、三氯化铁试液
罂粟碱在微酸性溶液中遇三氯化铁试液生成红色的罂粟铁
3.其他生物碱
司可巴比妥钠
1.溶液的澄清度
新沸过的冷水10ml
溶液应澄清
2.中性或碱性物质
同苯巴比妥
异烟肼
游离肼（斑点为鲜黄色，Rf约为0.3）
TLC
显色剂：乙醇制对二甲氨基苯甲醛（15min后检视）（异烟肼斑点为棕橙色，Rf约为0.21）
样品：水制成50mg/ml；对照品：硫酸肼（水制成0.2mg/ml，相当于游离肼50μg。在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上不得显黄色斑点。
加90%乙醇30ml，水浴加热回流10min，溶液应澄清
5-羟甲基糠醛
UV
284nm处测定吸收度不得大于0.32
乳糖
蛋白质
硝酸汞试液
蛋白质遇硝酸汞试液产生白色沉淀
蔗糖
还原糖的检查
碱性枸橼酸铜试液，25%碘化钾溶液，硫酸溶液（1→5），硫代硫酸钠滴定液
钙盐的检查
钙离子能与草酸根离子生成沉淀
洋地黄毒苷
洋地黄皂苷
乙醇溶液，胆甾醇的乙醇溶液（1→200）2ml
10min内，不得发生沉淀
地高辛
洋地黄毒苷
TLC
对照品比较法
醋酸地塞米松
1.其他甾体
TLC
高低浓度对比法
显色剂：四氯唑蓝（为氧化剂）
2.硒
氧瓶燃烧法
药物中特殊杂质的检查方法
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
主要用于药物中无效或低效晶型检查，如甲 苯咪唑中A晶型检查
（五）对光吸收性质的差异
3. 红外分光光度法
A 晶型
C 晶型
在640cm-1
有强吸收
吸收很弱
盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G 薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫 酸显色，紫外灯下检视物质的分离、分析。 有时也用于检查放射性药物注射液中 的放射化学杂质。
如：苯丙醇中苯丙酮的检查，苯丙醇溶液 测定吸收度比值A247nm/A258nm不得大于0.79。
（五）对光吸收性质的差异
2. 原子吸收分光光度法
是通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收 发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待 测元素的含量。 限量检查时：对照品液 = 供试品 + 限量---a
例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查
肾上腺素的盐酸溶液 （2mg/ml）在310nm处 的吸光度不得过0.05。 已知酮体在该波长处的 吸收系数为453，计算 出酮体的限量。
（五）对光吸收性质的差异
1. 紫外分光光度法
有的杂质紫外吸收光谱与药物的紫外吸收 光谱重叠，但可以通过控制供试品溶液的吸收 度比值来控制杂质的量。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀：如氯化钠中 钡盐的检查。
（四）杂质与一定试剂反应产生颜色：阿司匹林中 游离水杨酸的测定。
（五）杂质与一定试剂反应产生气体：盐酸乙基吗 啡中铵盐检查。
二、利用药物和杂质在化学性上的差异
（六）药物经有机破坏后检查杂质
药物分析-卡因类药物特殊杂质的检查
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三、盐酸利多卡因注射液中2,6—二甲基苯胺及 其他杂质的检查
采用高效液相色谱法
不加校正因子的主成分自身稀释对照法
限量： 2,6—二甲基苯胺 0.04%
其他单个杂质
0.5%
其他杂质总限量 1.0%
（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查
CH3 O
NHC
C3H7 N
HCl
CH3
长效酰胺类局麻药， R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大 临床使用S－盐酸罗哌卡因
高效毛细管电泳
HO HO
HO HO
HO H
H N
CH3 CH3
çµ ¹Ñ (mv)
300 280 260 240 220 200 180 160 140 120 100
80 60 40 20
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 58 60 Ê±ä¼ (min)
Agillent 安捷伦 Waters 沃特斯 Bruker 布鲁克 Varian 瓦里安 AB 美国应用生物系统 Shimadzu 岛津 Finnigan 菲尼根
LC-MS分析： 1、色谱条件 Zobax SB-C18 (150 mm×4.6 mm, i.d., 5 μm) Column temperature: 25 ℃
Mobile phase:0.5%HAc-CH3CN (0.5%HAc)=87: 13 flow rate: 1.0 ml/min
Detection wavelength: 254 nm
2、质谱条件
Positive Scan mode 80~600 mau 喷雾电压：4000V 裂解电压：70V 干燥气（N2）：9.5 L/min 干燥气压力：40psi 干燥气温度：350℃
药物中特殊杂质的检查
药物中特殊杂质的检查<i>杂质检查</i>药物中特殊杂质的检查一、目的要求1．掌握阿司匹林片、盐酸普鲁卡因注射液、盐酸四环素片中特殊杂质检查的基本原理和方法；2．掌握薄层色谱法在药物杂质检查中的应用；3．掌握薄层色谱法的基本操作；4. 掌握检验结果的处理与判断，能够规范书写检验原始记录及检验报告书；5. 正确并更科学合理地解释检验中的现象，处理检验中的异常情况。
二、试剂与仪器1．试剂（查阅《中国药典》，进行所用试剂的配制）2. 仪器纳氏比色管、玻璃板（5×15cm）、全自动点样器、层析缸、可见分光光度计三、实验步骤（一）阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查取本品5片，研细，用乙醇30mL分次研磨，并移入100mL量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即过滤，精密量取滤液2mL，置50mL纳氏比色管中，用水稀释至50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取1mol/L盐酸溶液1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后再加水使成100mL）3mL，摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5mL，加乙醇3mL，0.05%酒石酸溶液1mL，用水稀释至50mL，再加上述新配制的稀硫酸铁铵溶液3mL，摇匀）比较，不得更深。
（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查薄层板的制备：取硅胶H2.5g，加0.5%羧甲基纤维素钠水溶液5.5～6mL调成糊状，均匀涂布于光滑、平整、洁净的玻璃板（5×15cm）上，置水平台上晾干，在110℃烘0.5小时，置干燥器备用。
操作：精密量取本品，加乙醇稀释使成每1mL中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。
另取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1mL中含30μg 的溶液，作为对照品溶液。
吸取上述两种溶液各10微升，分别点样于同一羧甲<i>杂质检查</i>基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：14）为展开剂，展开后，取出，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100mL，加入冰醋酸5mL制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。
药物杂质检查 特殊杂质检查
2、利用药物和杂质在化学性质上的差异 酸碱性的差异 ✓ 利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴定 液的体积、规定pH值范围、指示剂法 氧化还原性的差异 ✓ 利用药物与杂质之间的氧化还原电位 的差异进行检查 杂质与一定试剂反应产生气体 ✓ 砷、硫、碳酸盐、氨或胺盐、氰化物 杂质与一定试剂反应产生沉淀
目录页
Contents
1.药物中杂质的来 源及其种类
3.特殊杂质检查
2.一般杂质检查
3.特殊杂质检查
Part3 特殊杂质检查
一、特殊杂质的概念
1、特殊杂质 在生产和贮藏过程中可能引入特有的杂质
二、特殊杂质检查方法
1、利用药物和杂质在物理性质上的差异 臭味及挥发性的差异 ✓ 药物（特别是挥发性药物）中如存在具有特殊气味的杂质，可以由气味判 断该杂质的存在
✓如麻醉乙醚异臭检查，控制原料乙醇中引入的杂醇油以及乙醛和过氧化物等杂质。方 法为：取供试品10ml，置于瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭
Part3 特殊杂质检查
二、特殊杂质检查方法
1、利用药物和杂质在物理性质上的差异 颜色的差异
✓ 某些药物自身无色，但从生产中引入了有色的有关物质，或其分解产物有颜色 ✓维生素C溶液颜色检查：加水溶解应澄清无色
溶解行为的差异
✓ 有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、碱中，而其杂质不溶；反之，杂质可溶而药物不溶
旋光性质的差异
✓ 比旋度（旋光度）的数值可以用来反映药物的纯度，限定杂质的含量 ✓ 中国药典规定使用钠光谱的D线（589.3nm）测定药物在特定溶液中的旋光度
✓黄体酮在乙醇中的比旋度范围限定。硫酸阿托品（无旋光性）50 mg/ml水溶液的旋光 度不得过-0.4°（特殊杂质莨菪碱为左旋体）
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药物中特殊杂质的检查
一、目的要求
1．掌握阿司匹林片、盐酸普鲁卡因注射液、盐酸四环素片中特殊杂质检查的基本原理和方法；
2．掌握薄层色谱法在药物杂质检查中的应用；
3．掌握薄层色谱法的基本操作；
4. 掌握检验结果的处理与判断，能够规范书写检验原始记录及检验报告书；
5. 正确并更科学合理地解释检验中的现象，处理检验中的异常情况。
二、试剂与仪器
1．试剂（查阅《中国药典》，进行所用试剂的配制）
2. 仪器
纳氏比色管、玻璃板（5×15cm）、全自动点样器、层析缸、可见分光光度计
三、实验步骤
（一）阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查
取本品5片，研细，用乙醇30mL分次研磨，并移入100mL量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即过滤，精密量取滤液2mL，置50mL纳氏比色管中，用水稀释至50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取1mol/L盐酸溶液1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后再加水使成100mL）3mL，摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5mL，加乙醇3mL，0.05%酒石酸溶液1mL，用水稀释至50mL，再加上述新配制的稀硫酸铁铵溶液3mL，摇匀）比较，不得更深。
（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查
薄层板的制备：取硅胶H2.5g，加0.5%羧甲基纤维素钠水溶液5.5～6mL调成糊状，均匀涂布于光滑、平整、洁净的玻璃板（5×15cm）上，置水平台上晾干，在110℃烘0.5小时，置干燥器备用。
操作：精密量取本品，加乙醇稀释使成每1mL中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。
另取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1mL中含30μg 的溶液，作为对照品溶液。
吸取上述两种溶液各10微升，分别点样于同一羧甲
基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：14）为展开剂，展开后，取出，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100mL，加入冰醋酸5mL制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。
（三）盐酸四环素片中光吸收杂质的检查（可见分光光度法）
取本品5片，研细，加0.01mol/LHCl制成1mL含1.25mg（按标示量计算）的溶液，滤过，弃去初滤液，取续滤液，在1h内，照分光光度法，在430nm波长处测定，其吸收度不得过0.62。
四、说明
1.水杨酸与三氯化铁试液作用显紫堇色，其反应方程式为：
2．盐酸普鲁卡因、对氨基苯甲酸在酸性条件下可与对氨基醛缩合而呈色，其反应为：
五、思考题
1．简要说明以上杂质检查项目的原理和方法。
2．简要说明薄层色谱法在药物杂质检查中的应用。
3．试计算阿司匹林游离水杨酸的限量、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的限量。