实验室灭菌指南
实验室的灭菌方法
实验室的灭菌方法在实验室中，灭菌是非常重要的一个步骤，可以有效地消除实验过程中可能存在的各类微生物，确保实验结果的准确性和可靠性。
常用的灭菌方法包括物理灭菌和化学灭菌两种。
一、物理灭菌方法：1. 高温灭菌（烘箱法）：将待灭菌的器具（如培养皿、试管等）放入预热至适当温度的烘箱中，通过高温作用杀灭其中的微生物。
常用的温度为160-180摄氏度，时间约为1-2小时。
此方法适用于不耐热的固体物品。
2. 压力蒸汽灭菌（高压灭菌法）：将待灭菌的物品放入装有适量清水的高压灭菌锅中，加热至适当的温度（121-134摄氏度），经过一定时间的高压和高温作用，实现微生物的灭活。
常规操作时间为15-30分钟。
这种方法适用于实验器械、培养基、培养瓶等耐热器具。
3. 过滤法：通过微生物滤膜过滤器将待检测的液体或气体经过过滤，将其中的微生物截留下来，达到灭菌的效果。
该方法适用于不耐高温或无法承受高压的液体、气体样品。
4. 紫外线灭菌法：将待灭菌的物品放置在紫外线照射区域，经过一定时间的紫外线照射，使微生物的核酸发生损伤，从而达到杀灭微生物的目的。
该方法适用于表面较为平坦的培养皿、试管等小型器具。
5. 干热灭菌法：将待灭菌的物品置于常温下的烘箱中，在较高的温度（170-180摄氏度）下进行一定时间的干热处理。
该方法适用于不耐水或无法耐受湿热的物品。
二、化学灭菌方法：1. 乙醛灭菌法：将待灭菌的物品放入密闭的容器中，加入一定浓度的乙醛液并封闭容器，在一定时间内使乙醛蒸气作用于物品表面，达到杀菌的目的。
该方法易于操作，适用于对物品表面较干净的物品。
2. 酒精灭菌法：将待灭菌的物品浸泡在一定浓度的乙醇或异丙醇溶液中一段时间，使其达到杀菌的效果。
该方法适用于小型的器具或实验室台面的表面。
值得注意的是，不同的灭菌方法适用于不同类型的物品，我们在选择灭菌方法时要根据物品的性质、尺寸和特点来进行判断。
同时，灭菌操作过程要遵循一定的操作规范，确保操作的安全性和有效性。
实验室常见的灭菌消毒方法总结
实验室常见的灭菌消毒方法总结
一、消毒和灭菌的区别
1、消毒（disinfectioninhospital）：杀灭或消除医院环境中媒介物上污染的病原微生物的过程.
2、灭菌(sterilization)：杀灭或去除外环境中媒介物携带的一切微生物的过程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括细菌芽胞和真菌孢子.灭菌是个绝对的概念,灭菌后物品必须是完全无菌的.即灭菌保证水平为106.
二、高温灭菌法
高温灭菌法是利用高温使微生物的蛋白质及酶发生凝固或变性而死亡，是应用最广泛且有效的灭菌方法。
主要用于器械、容器、试剂等灭菌。
（一）高压蒸气灭菌法
用高温加高压灭菌，不仅可杀死一般的细菌，对细菌芽胞也有杀灭效果，是最可靠、应用最普遍的物理灭菌法。
主要用于能耐高温的物品，如金属器械、玻璃、橡胶、耐高温塑料制品及试剂的灭菌。
高压蒸气灭菌器的类型和样式较多，如：①下排气式压力蒸气灭菌器是普遍应用的灭菌设备，压力升至102.9kPa，温度达121～126℃，维持20～30分钟，可达到灭菌目的。
②脉动真空压力蒸气灭菌器已成为目前最先进的灭菌设备。
灭菌条件要求：蒸气压力205.8kPa，温度达132℃以上并维持10分钟，即可杀死包括具有顽强抵抗力的细菌芽胞在内的一切微生物。
湿热灭菌是目前实验室使用最为广泛，灭菌效果最佳的方法。
目前湿热灭菌的仪器技术上也非常成熟，安全系数较高。
高压蒸气灭菌的注意事项：
包裹的物品不宜太大，一般应小于30cm×30cm×50cm，大于该尺寸需要酌情延长灭菌时间；
1.高压锅内的包裹不要排得太密，以免妨碍蒸气透入，影响灭菌效果；
2.对塑料制品不宜放置过于拥挤，以免发生形变；。
微生物实验室消毒灭菌管理程序
微生物实验室消毒灭菌管理程序
1.目的
规范消毒灭菌程序，保证实验室内的环境安全。
2.范围
适用于微生物实验室内环境日常消毒的操作。
3.职责
实验室负责人及检验人员、消毒人员执行本程序。
4.程序
4.1.每天工作前用消毒液消毒工作台，上班前、下班后开紫外灯（40分钟）进行空气消毒。
4.2.非必要品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。
4. 3使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用10g/L含氯消毒剂浸泡消毒液浸泡经煮沸后清洗或丢弃。
4.4试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒，所有用于试验的反应板、吸头等用10g/L含氯消毒剂浸泡消毒液浸泡（至少24小时以上）后清洗或丢弃。
4.5.所有微生物培养物（细菌、支原体、真菌等培养物），不管标本阳性或阴性均用10g/L含氯消毒剂浸泡消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。
4.6.取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均应彻底消毒。
4.7.用于浸泡各种器械如刮菌刀、持物钳、镊子等的消毒液要定期更换。
4.8.不慎发生临床标本或培养物污染工作台，不要立即用水冲洗，应先用纸巾、布等敷料加上消毒液5g/L含氯消毒剂浸泡消毒30分钟以上，然后再清洗。
如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。
4.9.实验时手部污染，应立即用肥皂洗手并冲洗干净，再外用消毒药水，如误入内，应立即吐出，并用1:10高锰酸钾溶液或3%双氧水漱，必要时根据实际情况服用有关药物。
生物安全实验室常规消毒灭菌
生物安全实验室常规消毒灭菌一、室内空气消毒具备排风净化功能的负压实验室，根据所操作的微生物因子不同，空气可以经高效过滤器过滤后排放，但应采取通风控制系统来防止实验室出现正压。
室内空气经高效过滤器过滤后排到建筑物以外并远离该建筑的进气口。
无排风净化功能的常压实验室，使用可汽化过氧化氢、气体二氧化氯对空间进行气体熏蒸或气溶胶喷雾等方法消毒，同时需做好个人防护与消毒后消毒剂残留的去除处理。
二、室内环境表面消毒若地面、实验台面等被明显污染，应立即用吸液布覆盖，喷洒消毒剂（从外向内）于吸液布上，使吸液布湿透，作用60min 后用清水擦拭干净。
实验台面、桌椅、门把手、生物安全柜和解剖柜台面、侧壁等可用消毒剂喷洒、擦拭。
表面消毒可使用含氯消毒剂，含有500～1 000mg/L有效氯溶液适于普通的环境表面消毒。
当处理高危环境时建议使用5 000mg/L有效氯溶液。
用于金属表面消毒处理时，消毒结束后应尽快使用清水清除表面残余消毒剂。
三、生物安全防护设备的消毒（一）生物安全柜消毒在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工作台面和内壁要用中高效消毒剂进行擦拭，不触及送风滤器的扩散板。
75%乙醇消毒后需及时擦净水痕。
采用含氯消毒剂处理后，须用水擦拭干净，防止对生物安全柜的腐蚀。
试剂溢漏或泼洒后，立即消毒污染物及污染的表面。
生物安全柜在移动或更换过滤器之前，要使用汽化过氧化氢、二氧化氯气体或甲醛蒸汽对生物安全柜进行终末消毒。
（二）高效过滤器的消毒采用汽化过氧化氢消毒法或甲醛熏蒸法进行消毒。
消毒器应与排风过滤器排风箱体的消毒接口连接，利用循环气流带动蒸汽循环实现原位消毒。
消毒后可将滤器卸载，装入医用废物塑料袋中，进行压力蒸汽灭菌。
操作时做好个人防护。
（三）个体防护装备的消毒一次性帽子、口罩、手套，使用后应放入废物袋内高压灭菌。
防护鞋、防护眼罩、防护面具（半面具）、防护面罩（含正压面罩）表面用消毒剂喷雾或擦拭消毒，作用到预定时间后清洗晾干备用。
消毒灭菌管理程序
消毒灭菌管理程序1、目的加强生物安全实验室管理，规范消毒灭菌流程，严格控制感染源，防止院内感染。
2、适用范围适用于各生物安全实验室的内环境、实验器材、废弃物品及相关人员的消毒。
3、职责3.1所有实验室工作人员应熟知并遵守本程序，清洁及其他辅助人员在实验室工作人员指导下执行本程序。
3.2 实验室生物安全监督员负责实验室日常消毒灭菌的监督工作。
3.3实验室负责人负责消毒灭菌工作的监督检查及对相关责任人员的奖惩。
4、消毒程序4.1实验室各区域消毒：根据可能被污染程度的不同分为清洁区、缓冲区和污染区。
4.1.1清洁区消毒：清洁区若无明显污染，应每天开窗通风数次，湿式清洁台面、地面1次。
必要时用含500mg/L有效氯溶液湿布巾擦拭一次，作用30min后，再用清水湿布巾擦拭干净。
4.1.2缓冲区消毒：用含500mg/L有效氯溶液湿布巾擦拭一次，作用30min后，再用清水湿布巾擦拭干净。
每日上午上班半小时前、下午下班半小时后各1次。
4.1.3污染区消毒：地面和台面用含500mg/L有效氯溶液湿布巾擦拭一次，作用30min 后，再用清水湿布巾擦拭干净。
每日上午上班半小时前、下午下班半小时后各1次。
实验中若存在被污染的情况要及时消毒。
4.1.4 空气消毒：检验实验室和微生物实验室每日晚上空闲时，开启室内所有紫外灯管消毒30分钟。
PCR实验室在工作结束后开启紫外灯消毒2小时，必要时选用空气消毒机消毒处理60分钟，每日下午下班后进行。
4.1.5清洁及消毒器材：拖把、抹布等要分区专用，不得混用。
使用后的拖把、抹布，用含500mg/L有效氯溶液浸泡30 分钟，再用清水洗净，悬挂晾干，最好在阳光下晒干后备用。
4.1.6当地面受到病原菌或致病性芽孢菌污染时，应立即用消毒液消毒，采用2000mg/L～5000mg/L有效氯的消毒液拖地或喷洒地面，并使消毒液浸过污染物表面，作用30min。
拖把用后浸于上述消毒液1h。
4.2 衣物的清毒、清洁：工作服、帽子、鞋套等放入专用的污物袋中，用70℃以上热水加洗涤剂洗涤；有明显病原微生物污染时，随时喷洒消毒液消毒或放入专用污物袋中，进行高压蒸汽灭菌处理。
灭菌的操作规程
灭菌的操作规程《灭菌操作规程》一、目的为避免微生物的污染，保证产品的质量，同时保护操作人员和环境的安全，制定此规程。
二、范围本规程适用于所有需要进行灭菌操作的场合，包括但不限于医疗器械、药品、实验室用品等。
三、灭菌方法1. 热气灭菌：将物品置于高温下进行灭菌，常用于玻璃器皿、金属器械等。
2. 蒸汽灭菌：将物品置于高压蒸汽中进行灭菌，常用于医疗器械和实验室用品。
3. 过滤灭菌：将液体物品通过过滤器进行灭菌，常用于药品和生物制品。
4. 化学灭菌：使用化学物质进行灭菌，常用于一次性医疗器械和实验室耗材。
四、操作流程1. 预处理：将需要进行灭菌的物品清洗干净，去除污垢和残留物。
2. 包装：将物品包装在符合要求的灭菌包装材料中，保证灭菌效果。
3. 载入设备：将包装好的物品放入灭菌设备中，并按照设备要求设置灭菌参数。
4. 灭菌处理：启动设备进行灭菌处理，加热、压力等参数需符合规定。
5. 冷却：灭菌完成后，待设备冷却至安全温度后再取出物品。
6. 检验：对灭菌后的物品进行检验，确认灭菌效果符合要求。
五、注意事项1. 操作人员需接受专业培训，了解各种灭菌方法和设备的操作规程。
2. 对于不同种类的物品，需选择合适的灭菌方法和设备。
3. 检测设备的运行是否正常，确保灭菌参数的稳定和准确。
4. 灭菌后的物品要做好包装和标识，以免再次受到污染。
六、资料记录所有灭菌操作的相关记录应保存至少两年，包括设备运行记录、检测报告等。
七、审核与审批本规程由质控部门审核，并需经生产部门负责人审批后生效。
八、附则若有需要对本规程进行修订，需由质控部门负责人提出修订要求，经相关部门审定后方可修订。
微生物实验室培养教案：灭菌方法的选择与操作
微生物实验室培养教案：灭菌方法的选择与操作微生物培养实验是微生物学重要的实验之一，实验的成功与否与实验前，实验过程中所使用的培养基和器具的无菌程度有着极为密切的关系，因此在微生物实验室进行培养实验时需要严格的无菌操作。
灭菌方法是保障实验无菌的关键，选择合适的灭菌方法对于实验的开展有着至关重要的作用。
本文将介绍常见的灭菌方法的选择与操作。
一、灭菌方法的选择1.高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法是微生物实验室常用并且效果较好的灭菌方法，因为高温高压的作用可以破坏细菌的细胞壁和膜，从而杀死大多数的微生物。
使用高压蒸汽灭菌法前需要注意的是，需要选购符合标准的高压蒸汽灭菌器，而且样品的装载位置要均匀分布，避免在装载时出现挤压或者拥挤的情况，从而影响了样品的灭菌效果。
2.紫外线灭菌法紫外线灭菌法是一种较为简单且可以迅速灭菌的方法，主要使用在实验室对于小型仪器设备，如实验箱、平板计数仪、干燥器等的无菌操作。
但是需要注意的是，这种灭菌方式只能强行破坏微生物DNA分子链，而除菌率较低，不能保证百分之百的无菌结果。
同时还需要注意安全防护，保障操作人员不会直接被紫外线辐射所伤害。
3.X射线灭菌法X射线灭菌法是一种相对较少使用的灭菌方法，因为操作较为复杂且需要特殊的设备。
X射线利用X射线线损伤细菌细胞结构和功能，从而达到细菌杀灭的目的。
这种灭菌方法可以对于各种样本进行无菌操作，但是常规实验室的实验并不需要使用这种高级的灭菌方式。
二、灭菌操作的技巧1.手套、口罩和实验服的使用在进行微生物实验之前，实验人员必须佩戴起手套、口罩和实验服，将自身和周围环境从细菌污染中完全隔离开来。
在实验操作过程中，要经常更换手套、口罩、实验服，并注意将手套的表面避免沾上任何未灭菌的物品。
2.器皿消毒与无菌操作所有器皿在使用前都必须进行消毒，常见的消毒方法有高压蒸汽、酒精或125倍的稀释高锰酸钾溶液。
消毒后，实验室的操作桌面需要喷洒酒精或其他消毒液来确保操作区域的无菌。
消毒及灭菌技术操作指南
《消毒及灭菌技术操作指南》消毒和灭菌可是个重要的事儿，搞不好就会出大问题。
下面就给大家说说消毒及灭菌技术的操作指南。
首先，咱得搞清楚啥是消毒，啥是灭菌。
消毒呢，就是把那些致病的微生物给弄死或者弄少点，让它们不能害人。
灭菌就更厉害啦，直接把所有的微生物都给灭得干干净净，一点活路都不给。
这就好比打架，消毒是把坏人打跑，灭菌就是把坏人全给灭了，连个渣都不剩。
一、消毒技术操作1. 物理消毒法（1）高温消毒这可是个老办法了，就像咱煮饺子似的，把东西放在高温里煮一煮，那些细菌啥的就受不了啦。
像餐具啊、奶瓶啊这些，可以放在开水里煮个几分钟，保证干净。
不过可别把自己的手给煮了啊，哈哈。
（2）紫外线消毒这玩意儿就像个小太阳，能发出一种神奇的光，把细菌给杀死。
像医院啊、实验室啊这些地方经常用紫外线消毒。
不过用的时候可得注意，别盯着紫外线看，不然眼睛会受伤的。
到时候变成了“熊猫眼”可别怪我没提醒你。
2. 化学消毒法（1）酒精消毒酒精这东西大家都熟悉吧，消毒效果那是杠杠的。
可以用酒精棉球擦一擦手啊、手机啊这些经常接触的东西。
但是可别用太多了，不然会变成“酒鬼”哦。
而且酒精易燃，可别在旁边玩火，不然一把火下去，你就变成“烤乳猪”了。
（2）含氯消毒剂消毒像 84 消毒液就是含氯消毒剂，能杀死很多细菌和病毒。
用的时候要按照说明书上的比例来稀释，不然浓度太高会把东西给烧坏的。
而且这玩意儿味道有点大，用的时候最好戴个口罩，不然会被熏得晕头转向。
二、灭菌技术操作1. 高压蒸汽灭菌这可是个厉害的家伙，把东西放在高压锅里，用高温高压的蒸汽来灭菌。
像医院的手术器械啊、培养基啊这些都要用高压蒸汽灭菌。
不过这玩意儿操作起来有点麻烦，得注意安全，别被蒸汽给烫伤了。
要是不小心被烫了，那可就成了“红烧猪蹄”啦。
2. 环氧乙烷灭菌这个方法一般用在一些不能用高温高压灭菌的东西上，比如塑料制品啊、电子设备啊这些。
但是环氧乙烷是有毒的，用的时候要特别小心，别让自己中毒了。
实验室的灭菌方法
实验室的灭菌方法
实验室常用的灭菌方法主要有以下几种：
1. 热灭菌：使用高温蒸汽或高温烘箱进行灭菌，可有效消除常见的细菌、病毒和真菌。
热灭菌常用于灭菌培养皿、培养基、试剂和玻璃器皿等。
2. 化学灭菌：使用化学消毒剂进行灭菌，常见的消毒剂包括酒精、漂白粉、过氧化氢等。
化学灭菌适用于一些敏感材料，如塑料器皿、塑料管道、橡胶塞和一次性注射器等。
3. 紫外线灭菌：利用紫外线的辐射杀死细菌和病毒，常用于空气和表面的灭菌。
然而紫外线灭菌对于有障碍物遮挡或遮蔽的区域效果有限，且需要较长时间的照射。
4. 过滤灭菌：通过微孔滤膜将细菌和病毒过滤掉。
常用的滤膜材料有聚酯、聚碳酸酯、聚醚砜等。
过滤灭菌适用于渗透性好的溶液、生物液和气体。
5. 辐射灭菌：使用离子化辐射、γ射线或X射线进行灭菌。
辐射灭菌适用于灭菌一次性物品、一次性注射器和药品等。
需要根据实验需要和具体材料的特性选择合适的灭菌方法。
同时在进行灭菌操作时，要遵守操作规范和消毒程序，确保灭菌效果和安全性。
实验室消毒灭菌 (2)
蒸汽灭菌
气体灭菌 消毒剂水平
灭菌 （高，延时）
高效
中效 低效
7
消毒和灭菌是保护人员和环境 不被病原微生物感染和污染的重要环节
含有病原微生物的废物必须经过消毒或灭菌才 能作为普通废物处理；
对操作中可能产生的迸溅或泄漏，必须通过消 毒达到对病原微生物的杀灭，对操作人员进行 保护,对环境保护。
防护用品：工作服、口罩明显污染或手套破损--随时更换并消毒；呼吸道传染病实验室工作 人员，每次连续戴口罩时间不得超过4小时。
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三、实验室消毒和灭菌制度
手的清洗消毒：接触微生物或含有微生物的物 品后、脱掉手套后、离开实验室前。
污染物品消毒：出实验室前必须进行。 -首选压力蒸汽法,不行者密封包装后外送有资质
2%，灭菌须10h，消毒30-45min。 注意事项：碳钢消毒加0.5%亚硝酸钠防锈；
温度20℃以下杀菌作用显著降低； 使用中戊二醛浓度检测以及时更换； 对皮肤粘膜有刺激性，个人防护，充分去残留。
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10、甲醛
具有强烈的刺激性，常见消毒剂为福尔马林 （即含36-40%甲醛的水溶液）与白色粉末状的 多聚甲醛。 杀菌能力：高水平消毒 适用范围：室内空气以及对湿热敏感、易腐蚀 物体表面与物品等的消毒。 使用方法：温度18℃以上，相对湿度70-90%。
消毒剂量 * 受结核分支杆菌、亲水性病毒与芽孢污染的 环境与表面以及操作不同的病原微生物前的消 毒，选用消毒剂量范围中的高浓度与长时间。 * 受细胞、培养液、体液或血液等有机物污染， 有效氯含量加大至5000mg/L。
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四、实验室消毒和灭菌原则
消毒灭菌方法---符合《消毒技术规范》 * 所有培养物、废弃物、防护用品等在出实验 室之前必须经压力蒸汽处理。 * 实验设备在运出修理或维护前需消毒。
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实验室灭菌指南
消毒灭菌方法
目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。
1干热灭菌法
是利用恒温干燥箱内120ºC～150ºC的高热，并保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。
主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。
用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。
酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一，在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
2湿热灭菌法
压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。
它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。
适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。
高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0～1.1kg/cm2，维持20～30min即可达到灭菌效果。
3射线灭菌法
利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。
紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多种微生物。
紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。
适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。
灭菌时间为30min。
用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有伤害，而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。
4过滤除菌法
是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌的方法。
过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。
目前，常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌，或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。
滤膜孔径应在0.22～0.45μm范围内或用更小的细菌滤膜，溶液通过滤膜后，细菌和孢子等因大于滤膜孔径而被阻，并利用滤膜的吸附作用，阻制小于滤膜孔径的细菌透过。
5化学消毒剂消毒法
用于那些不能利用物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿等。
常用的化学消毒剂包括甲醛、高锰酸钾、70%～75%乙醇、过氧乙酸、来苏尔水、0.1%新洁尔灭、环氧乙烷、碘伏或碘酊等。
其中利用70%～75%乙醇、0.1%～0.2%氯化汞、10%次氯酸钠、饱和漂白粉等进行实验材料的灭菌;利用甲醛加高锰酸钾[(2mL甲醛+1g高锰酸钾)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加热熏蒸法进行无菌室和培养室的消毒。
在使用时应注意安全，特别是用在皮肤或实验材料上的消毒剂，须选用合适的药剂种类、浓度和处理时间，才能达到安全和灭菌的目的。
6抗生素抑菌法
主要用于培养液，是培养过程中预防微生物污染的重要手段以及作为微生物污染不严重时的“急救”措施。
常用的抗生素有青霉素、链霉素和新霉素等。
不同种类物品及培养物的消毒灭菌方法1
无菌操作室灭菌
培养材料进行培养、观察或更换培养液时，必须从各方面防止任何污染物进入培养液或容器，所以无菌操作室的灭菌是至关重要的。
由于无菌操作室的污染来源主要是空气中的细菌和真菌孢子，因此长期停用后的无菌操作室应进行熏蒸灭菌，熏蒸是用高锰酸钾+甲醛[(2ml甲醛+1g高锰酸钾)/m3]进行无菌室的灭菌。
经常使用的无菌操作室，在每次使用前都应进行地面卫生清洁，并用紫外线灯照射30 min，进行空气灭菌。
对超净工作台，每次操作前用紫外灯照射30min，然后用70%～75%酒精擦拭。
2培养液灭菌
培养液在制备过程中带有各种杂菌，分装后应立即灭菌，或在24小时内完成灭菌工序。
目前常用过滤除菌法除去培养物操作液和培养液中的细菌。
或对培养液中耐热组分先进行高压蒸汽灭菌，然后在无菌室加入经过过滤除菌的不耐热溶液，混匀后分装备用。
使用高压蒸汽灭菌器灭菌时，将分装好的培养液放入底部有一定量(淹没加热管)凉水的高压蒸汽灭菌器内，增压至0.35~0.4kg/cm2时排净灭菌器内冷空气，以便使蒸汽能到达各个消毒部位，保证消毒灭菌彻底。
然后继续加压加热，当压力表读数达到1.0~1.1kg/cm2为121
ºC，保持15~20 min即可。
由于消毒灭菌效果取决于温度而不是压力，所以在一定压力下保持较长的消毒灭菌时间是必须的。
在121ºC的蒸汽温度下可以很快杀死各种细菌及高度耐热的芽孢杆菌，因此许多培养液的消毒灭菌压力、温度一般保持在1.0~1.1 kg/cm2、121ºC。
消毒灭菌时间与需要消毒灭菌的培养液量密切相关(表2-3)，时间不足达不到灭菌效果，时间过长培养液内的一些化学物质遭到破坏，影响培养液成分。
消毒灭菌结束后，关闭热源，只有当灭菌器内压力降为零时才能打开放气阀，排除剩余蒸汽，取出培养液。
不可在压力较高时打开放气阀，引起减压沸腾，使容器中液体溢出。
培养液组成中如含有遇热易分解的物质，则需用过滤方法消毒灭菌。
首先对培养液中耐热组分进行高压蒸汽灭菌后放置在无菌场所，固体培养液在40ºC左右琼脂即将凝结前，加入经过过滤除菌的不耐热溶液，混匀后冷却备用。
液体培养液在冷却到室温后再加入过滤除菌溶液。
过滤除菌时，使用孔径为0.22～0.45μm 或更小的细菌滤膜。
过滤除菌可利用抽滤装置或注射过滤器进行，所用器皿均应进行高压消毒灭菌，温度不应超过121ºC。
3玻璃器皿、塑料器皿和器械灭菌
玻璃器皿可进行干热灭菌或高压蒸汽灭菌，但在蒸汽灭菌后最好及时烘干水分。
对不能进行高压蒸汽灭菌的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前在无菌操作台面上晾干的同时，用紫外线重复杀菌。
实验室还可以用环氧乙烷灭菌袋对塑料器皿进行消毒，消毒后的器皿要充分散气2～4小时后才可使用。
无菌操作所用的各种器械，一般采用干热或高压蒸汽灭菌，或用75%酒精浸泡，然后在无菌操作台面上晾干的同时再用紫外线重复杀菌;在使用期间可多次对其进行酒精灯火焰灼烧灭菌。
4培养材料的消毒灭菌
采自动物机体的实验材料，携带着微生物及杂质，接种前须进行表面消毒灭菌，对内部已受微生物侵染的材料应予以淘汰。
从动物机体采集的某些组织块，须用消毒剂进行浸泡处理，进行表面消毒。
常用消毒剂有过氧化氢(10~12%，浸泡5~15min)、过氧乙酸(0.05%，浸泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2min)。
灭菌程序验证内容
1.撰写验证方案及制定评估标准。