唾液酸含量测定法
抗体药物唾液酸含量分析
抗体药物唾液酸含量分析
抗体药物是一类通过人工合成的抗体来治疗疾病的药物，通过与目标分子特异性结合从而达到治疗的目的。
常见的抗体类药物类型包括单克隆抗体、人工合成的抗体片段、免疫毒素、抗体药物共轭物等。
糖基化是抗体药物一种重要的蛋白翻译后修饰。
唾液酸（SA）是一类神经氨酸的衍生物，含有9个碳原子并具有吡喃糖结构的酸性氨基糖，它通常位于糖蛋白糖基的非还原末端，其中N-乙酰神经氨酸（NANA）是唾液酸最主要的形式。
唾液酸含量影响抗体药物的半衰期、生物活性等。
因而，唾液酸含量分析也成为生物药物研发的重要步骤。
目前，唾液酸含量的测定主要有间苯二酚法、酶法和高效液相色谱法（HPLC）3种。
间苯二酚法是比较传统的唾液酸含量测定方法，该方法快速、准确且重现性好，但灵敏度差，线性范围比较窄。
酶法虽然准确，灵敏度高，但成本也高，实验操作更复杂，线性范围窄。
相比之下，高效液相色谱法在测定唾液酸含量时具有快速、准确、灵敏度高、重现性好、线性范围宽等诸多优点，大大弥补了前两种方法的不足，因而高效液相色谱法被广泛应用于抗体药物等生物制药中唾液酸含量的测定。
生物制品表征唾液酸含量分析示意图。
百泰派克生物科技（BTP）采用ISO9001认证质量控制体系管理实验室，获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务。
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百泰派克生物科技抗体药物表征内容。
细菌唾液酸检测操作方法
细菌唾液酸检测操作方法
细菌唾液酸检测操作方法可以按照以下步骤进行：
1. 准备工作：
- 清洁实验台面和仪器，确保无细菌污染。
- 准备所需试剂和材料，包括细菌样品、培养基、指示剂等。
2. 细菌培养：
- 取一小部分细菌样品，加入培养基中。
- 静置培养一段时间，通常为几小时或过夜，以让细菌充分生长。
3. 唾液酸反应：
- 取一定体积的培养液（通常为1 mL）加入试管中。
- 加入适量的唾液酸检测试剂，根据说明书中的要求加入相应的试剂比例。
- 轻轻摇匀试管，使试剂和培养液充分混合。
4. 观察结果：
- 根据试剂的指示，观察试管中的颜色变化。
- 不同菌种的唾液酸反应有所不同，可能会出现颜色变化或沉淀的现象。
5. 结果分析：
- 参考试剂说明书或相关文献，根据颜色变化或沉淀形态来识别细菌类型。
- 如果需要进一步确认结果，可以进行其他细菌鉴定试验，如形态学观察、生化测试等。
注意事项：
- 遵循实验室安全规范，佩戴手套和口罩，避免接触细菌和有害试剂。
- 严格控制实验条件，避免外界细菌污染对结果的干扰。
- 操作时要细致、耐心，确保结果的准确性和可靠性。
进出口燕窝及其制品中唾液酸含量的检测方法
进出口燕窝及其制品中唾液酸的测定方法编制说明1任务来源本检验方法标准的制定工作是按照国家认证认可监督管理委员会《关于下达2009年度出入境检验检疫行业标准制（修）订计划的通知》下达的任务而进行的，广东局承担研究制订检验检疫行业标准《出口燕窝及其制品中唾液酸的测定方法》任务，计划编号为2009B488k。
考虑到大部分燕窝及其制品来源于进口，本标准改为为《进出口燕窝及其制品中唾液酸的测定方法》。
2标准制定的意义传统意义的燕窝是指金丝燕在人烟罕见的海岛悬崖峭壁上喂养育雏鸟而筑造的巢窝，燕窝是传统名贵滋补食品，主要产于东南亚国家和我国南海诸岛。
据有关统计资料表明，我国目前是世界第一的燕窝销售大国，2008年我国的燕窝销售额达到100多亿元。
因为物稀价贵，特别是监督执法中缺乏有效的检验鉴别手段，导致市场上出现大量假冒伪劣产品，极大的损害了消费者的利益，扰乱了市场经济秩序。
为了从根本上解决燕窝及其制品的真假鉴定难题，确定燕窝及其制品中唾液酸的含量等一系列问题，建立燕窝的定性、定量检测方法是当前工作中的迫切需要。
3编制规则本标准遵循GB/T 1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T 20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的编写规则。
4 标准编制依据和主要内容本标准主要参考广东出入境检验检疫局的非标《燕窝及其制品中唾液酸含量的测定方法》。
本行标主要制定了燕窝及其制品的样品前处理方法，试样中唾液酸的测定方法，包括二种测定方法：分光光度法与液相色谱-质谱/质谱法，后者还可以对燕窝真假进行确证工作。
5 燕窝基本信息5.1 燕窝的常见品种简介a.以燕窝的形状区分为：燕盏，燕块（饼），燕条，燕丝，燕碎和燕球等；b.以燕窝的颜色分为：白燕（又称官燕），黄燕，血燕三类；c.以筑巢的习性分为：屋燕、洞燕、毛燕、草燕四类。
金丝燕筑巢在山洞里形成的燕窝，俗称“洞燕”，金丝燕筑巢在人工搭建的屋子里形成的燕窝，俗称“屋燕”。
婴幼儿配方乳粉中唾液酸含量的测定
婴幼儿配方乳粉中唾液酸含量的测定钱振杰;张恒;陈敬【摘要】建立婴幼儿配方乳粉中唾液酸含量测定的液相色谱方法.用酸水解法释放婴幼儿配方乳粉中存在的唾液酸,在80℃下与邻苯二胺衍生50 min;采用SB-AQ C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)对衍生产物进行分离,流动相为乙腈-1％四氢呋喃水溶液(含0.2％的磷酸)进行梯度洗脱,荧光检测器检测(激发波长231 nm,发射波长465 nm).结果表明,唾液酸在1.0～60.0μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为R2=0.999 8,回收率在95.0％～105.2％之间,变异系数在0.6％～1.9％之间,检测限为10.0 mg/100g.该方法简便、快速、可靠,可用于市售婴幼儿配方乳粉中唾液酸含量的测定.【期刊名称】《西北大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(044)004【总页数】5页(P583-587)【关键词】唾液酸;液相色谱;婴幼儿配方乳粉;柱前衍生【作者】钱振杰;张恒;陈敬【作者单位】珠海出入境检验检疫局技术中心,广东珠海519015;珠海出入境检验检疫局技术中心,广东珠海519015;珠海出入境检验检疫局技术中心,广东珠海519015【正文语种】中文【中图分类】TS252.7唾液酸(Sialic Acid，SA)是一类神经氨酸的衍生物，广泛存在于多种生物组织中，主要包括N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)、N-羟乙酰神经氨酸(NeuGc)和3-脱氧-D-甘油-D-半乳壬酮糖(KDN)等。
唾液酸主要的食物来源是母乳，也存在于牛奶、燕窝和鸡蛋中［1］。
在大部分哺乳动物组织中发现的唾液酸主要是N-乙酰神经氨酸，其在乳中所占质量比例可达到96%左右，因此通常把Neu5Ac称为唾液酸［2］。
唾液酸可通过提高大脑神经细胞的信息传递速度促进婴儿的记忆力和智力发育，还可以提高儿童肠道吸收能力及儿童免疫力，所以部分婴幼儿配方乳粉的生产厂家以此为商品的宣传点，将其产品的唾液酸含量标示于包装之上，一般产品中唾液酸的含量在100～200 mg/100g之间。
唾液酸含量检测原理
唾液酸含量检测原理唾液酸呢，它可是个很神奇的东西。
在我们的身体里到处都有它的身影。
那怎么知道它到底有多少呢？这就涉及到检测原理啦。
有一种常见的检测方法是基于化学反应的。
就像两个小伙伴见面要打招呼一样，唾液酸会和一些特定的化学试剂发生反应。
比如说，有一些试剂能够和唾液酸形成特殊的复合物。
这些复合物就像是给唾液酸穿上了一件独特的“衣服”，这件“衣服”有特殊的颜色或者其他可以被检测到的性质。
想象一下，唾液酸就像一个小明星，化学试剂就是那些专门为小明星定制服装的设计师。
当小明星穿上了这件特别的衣服，就变得很容易被发现了。
检测人员就可以通过观察这个颜色的深浅或者测量相关的物理量，来判断唾液酸的含量。
如果颜色特别深，那就说明唾液酸的含量比较高；要是颜色浅呢，含量就相对低一些。
这就好像是看小明星穿的衣服颜色的浓淡来判断他的人气一样，是不是很有趣呀？还有一种检测原理是利用生物酶的。
酶这个东西可神奇了，就像一把超级精准的小剪刀。
唾液酸周围的一些分子结构就像是被小剪刀盯着的丝线。
酶可以专门识别唾液酸相关的结构，然后把周围那些特定的化学键剪断。
在这个过程中呢，会产生一些可以被检测到的物质。
比如说会释放出一些小的分子片段，这些片段的数量和唾液酸的含量是有一定关系的。
就好比是你拆一个包裹，包裹里的小物件的数量和这个包裹的大小是有关系的。
检测人员通过检测这些小的分子片段的量，就能知道唾液酸有多少啦。
另外呀，现在还有一些高科技的检测方法。
像利用仪器来检测唾液酸的含量。
比如说有专门的光谱仪之类的。
唾液酸分子就像一个个独特的小珠子，它们对不同的光有不同的反应。
当光线照到唾液酸分子上的时候，它们会吸收或者散射光，而且这个吸收或者散射的程度和唾液酸的含量有关。
这就好比是不同大小的小珠子在灯光下的影子大小不一样。
通过测量这个影子的大小，也就是光的吸收或者散射情况，就能算出唾液酸的含量啦。
这些检测原理其实都是科学家们经过大量的研究才发现的呢。
唾液酸含量测定SOP
唾液酸含量测定SOP1．目的为规范唾液酸含量测定的操作，特制定本SOP。
2．范围本SOP适用于唾液酸含量测定的操作。
3．定义无4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3.质量总监负责批准本规程。
4.4.QA负责本规程执行的监督。
5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。
6．材料6.1.仪器设备：紫外-可见分光光度计：全波长；电子天平；漩涡混合器；电磁炉。
6.2.试剂与配制：0.1mol/L CuSO4溶液：称取0.25g CuSO4·5H2O ，加10ml水溶解。
4％间苯二酚溶液：称取0.4g间苯二酚，加10ml水溶解，临用现配。
HCl·CuSO4溶液：取80ml浓盐酸和0.5ml 0.1mol/L CuSO4溶液,混匀, 临用现配。
反应液：将80.5ml HCl·CuSO4溶液与5.0ml 4％间苯二酚溶液混合，加水定容至100ml，混匀, 临用现配。
有机相：取正丁醇15ml，加乙酸丁酯定容至100ml，12小时内使用。
唾液酸储备液（1mg/ml）：精密称取神经氨酸50mg，加注射用水定容至50ml，分装至1.5mlEp管中，1.0ml/支，-20℃保存备用，有效期为一年。
唾液酸标准液（80µg/ml）：取唾液酸储备液（1mg/ml）1支，溶解后精密量取800µl 置10ml容量瓶中，加注射用水定容至10ml，临用稀释。
6.3.使用的器具：移液器、容量瓶、烧杯、量筒、试管、刻度吸管等。
7．流程图无8．程序8.1.原理：唾液酸是一类3-脱氧-2-酮糖酸，在适宜的酸浓度及反应温度下，转变为糠醛，糠醛可与芳香族化合物（间苯二酚）及碱性铜离子形成不稳定的红色络合物，在有机酸存在的情况下变成稳定的蓝色物质，其浓度与吸光值成正比。
8.2.标准曲线的测定精确量取唾液酸对照品液（80µg/ml）0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6ml分别加入中试管中，补水至2.0ml，加2ml反应液，混匀，沸水浴15分钟后，冰浴10分钟，再加有机相4ml，混匀30s，吸取上层液，于585nm波长比色测定其OD值。
高效液相色谱法测定乳中唾液酸含量
唾 液 酸 （ｉｉ ｃ ， Ｓ ） 一 族 神 经 氨 酸 Ｓａｃ ｌ Ａ ｉ Ａ 是 ｄ （ ｕａ ｎ ｉ 的衍生物 ， Ｎｅｒｍｉｉａ ｄ ｃｃ１ 广泛存在 于多种生物组织
中 ，是构成细胞膜 上糖蛋 白和糖脂 的重要成分 ，在 大 部分哺 乳动物 组织 中发 现 的唾液酸 主要 是 Ｎ一 乙酰 神
１ ． ０ｍｌ ｎ ． ｅｃ ｌｍｎｔｍｐ ｒｔ ｅ， ｓ３ ／ ｍｉ Ｔ ｏ ｕ ｈ ｅ ｅ ａｕ ｗａ ５℃ ． ｅｒ ｓ ｌ ｎ ｄｃ ｔ ｄｔ ｅｌ ｅ ｒｒｎ ｆ ｉｌ ｃｄｗａ ０ ３ ０ｐ ／ ｈ Ｔ ｕｔ ｅ ｓｉ ｉａｅ ｈ ｉ ａ ｇｏ Ｓ ａ ｉ ｉ ｎ ａ ｃａ ｓ １ ￣ ２ ｇ ｍＬ ａ ｄｔ ｅａ ｅ ａ ｅｒ ｃ ｖ ｒ ｎ ｈ ｖ ｒ ｇ ｏ ｅ ｙ ｅ
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高，重复性好等特点，可准确测定乳 中唾液酸含量 。
关键词：乳；Ｎ 乙酰神经氨酸：高效液相 色谱法 ．
中图分类号：Ｔ ２２１ Ｓ ５．；文献标识码：Ａ；文章篇号： ７ ．０ ８２ ０ ）２０ ７ －３ １ ３９ ７（０７ １．０ ５ ６ ０
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ０ ｅＳ ａ ｉ ｉ ｎ ｅ ｔ ｎ Ｍ ｉ ｙ ＨＰＬＣ ｔ ｒ ｎ ｔ０ ｆ ｈ ｉ ｌ Ａｃｄ Ｃ０ ｔ ｎ ｌ ｂ ｔ ｃ ｉ ｋ
维普资讯
鸡蛋中唾液酸含量的测定
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鸡 蛋 中唾液 酸 含 量 的测 定
张 昂 ，陆启 玉 ，王 留 留
（． 南 工 业 大 学 粮 油食 品学 院 ，河 南 郑 州 １河 ４ ０ ５ ；２ 郑 州 市 质 量 技 术 监督 检验 测 试 中心 ，河 南 郑 州 ５０２ ． ４０５） ５０ ２
摘 要 ：采用 高效 液相 色谱 法检 测鸡蛋 中唾液 酸的 含量 。鸡蛋 中 的唾液 酸在 浓度 ０５ｍ ｌ ． ｏ Ｌ的 Ｎ Ｈ Ｏ 溶液 中水 解 ／ ａＳ４
（ｏ ｔｉｉ ．％ ｐ ｏｐ ｏ ｃａ ｉ） 一 ｃ ｔ ｉｉ （ ２： ） ． ｈ ｏ ｔ ： １ Ｌｍｉ． ｅ ｃｌｍｎ ｔ ｐ ｒｔｅｗ ｓ ３ ℃ ． ｃ ｎａ ｎ ０２ ｎ ｇ ｈ ｓ ｈ ｒ ｃｄ ａ ｅ ｎｔｌ ９ ８ Ｔ ｅｆ ｗ ｒ ｅ ． ｍ ／ ｎ Ｔ ｏ ｉ ｏ ｒｅ ｌ ａ ０ ｈ ｕ ｍ ｅ ｕ ａ ５ ｅ ａ
０ 引言
鸡 蛋 中含 有 大 量 的 唾液 酸 ，但 是 鸡 蛋 中 唾 液 酸 的含 量 因 品种 、地 域 和 饲 料 的 不 同而 有所 差 异 。 目
唾液 酸 （Ａ ，学名 为 “ 一乙酰 基 神 经 氨 酸 ” Ｓ） Ｎ ， 是 一种 天然存 在 的碳 水 化合物 。它 最初 是 由颌 下腺 黏 蛋 白中分离 出来 的 ，因此 而得 名 。人 体 中 ，脑 组织 的 唾液 酸含量 最 高 ，其 中脑 灰 质 中 的唾 液酸 含 量 是肝 、 肺 等 内脏 器官 的 １ ５倍 。唾液 酸 通 常 以低 聚糖 、糖 脂 或 者糖 蛋 白的形式 存在 【 ｌ 】 液 酸广 泛 存在 于多 种 生 。唾 物 组 织 中 ，是 构 成 细 胞 膜 上糖 蛋 白和糖 脂 的 重要 成 分 。在大 部分 哺乳动 物组 织 中 ，发现 的 唾液酸 主要是
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附录唾液酸测定法
(间苯二酚显色法)
本法系用酸水解方法将结合状态的唾液酸变成游离状态，游离状态的唾液酸与间苯二酚反应生成有色化合物，再用有机酸萃取后，测定唾液酸含量。
唾液酸对照品溶液（200μg/ml）的制备精密称取唾液酸对照品10.52mg（1μg唾液酸相当于3.24nmol），置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，混匀，即为唾液酸贮备液（1mg/ml），按一次使用量分装，-70℃贮存，有效期1年。
仅可冻融1次。
4℃保存使用期为2周。
精密量取唾液酸贮备液1ml，置5ml量瓶中，加水至刻度，即为每1ml含200 μg的唾液酸对照品溶液，用前配制。
测定法取供试品适量，加水稀释至蛋白质浓度约为每1ml含0.2～0.4mg，作为供试品溶液。
按下表取唾液酸对照品溶液、水及供试品溶液于10ml玻璃试管中，混匀，每管再加入间苯二酚-盐酸溶液（分别量取2% 间苯二酚溶液2.5ml、0.1mol/L硫酸铜溶液62.5μl、25% 盐酸溶液20ml，加水稀释至25ml，混匀。
试验前4小时内配制）1ml，加盖，沸水煮沸30分钟(水浴面高于液面约2cm)，取出置冰浴中3分钟(同时振摇)后，每管加乙酸丁酯-丁醇液（取乙酸丁酯4份与丁醇1份混匀,室温下保存,12小时内使用）2ml，充分混匀，
用唾液酸对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归（相关系数应不低于0.99），由直线回归方程求出5μg唾液酸的吸光度，再按下式计算
供试品唾液酸含量
(mol/mol 蛋白质) ＝A2×5×3.24×W×D
A1×P×100
式中A1为5μg唾液酸的吸光度；
A2为供试品的吸光度；
D为供试品稀释倍数；
P为供试品蛋白质含量，μg/μl；
W为1nmol促红素的量，相当于
1。