基因工程试卷
基因工程技术考试试题
基因工程技术考试试题一、选择题（共10题，每题2分，共计20分）1. DNA是由以下哪种分子组成的？A. 蛋白质B. 脂质C. 糖类D. 细胞膜2. 下列哪种是基因工程技术的一种应用？A. 组织工程B. 基因治疗C. 生物降解D. 太阳能发电3. PCR技术用于什么目的？A. 基因克隆B. 基因敲除C. 基因突变D. 基因治疗4. 基因工程技术最早起源于哪个国家？A. 美国B. 英国C. 中国D. 日本5. 下列哪种是基因编辑的一种主要方法？A. RNA干扰B. 全基因组测序C. 基因枪D. CRISPR-Cas96. 基因工程技术在农业领域的主要应用是什么？A. 作物抗虫性改良B. 增加作物产量C. 提高作物口感D. 减少作物生长周期7. 双链RNA干扰主要用于什么目的？A. 基因敲除B. 基因突变C. 基因治疗D. 基因表达调控8. 基因工程技术在医药领域的主要应用是什么？A. 生产抗生素B. 疾病诊断C. 组织工程D. 基因改良9. 基因工程技术是否可以用于人类克隆？A. 可以B. 不可以10. 基因工程技术是否会对生态环境造成影响？A. 会B. 不会二、简答题（共5题，每题10分，共计50分）1. 请简要介绍基因工程技术的原理和主要方法。
2. 基因工程技术在农业领域的应用有哪些？请举例说明。
3. 什么是基因编辑？请详细描述CRISPR-Cas9基因编辑系统的工作原理。
4. 简要介绍基因工程技术在医药领域的应用，包括基因治疗和药物生产。
5. 基因工程技术是否存在伦理道德问题？请阐述你的观点。
三、论述题（共1题，30分）请阐述基因工程技术对人类社会和生态环境的影响，包括积极和消极两方面。
基因工程练习试题带答案
1．在基因工程中，切割载体和含有目的基因的 DNA 片段中，普通需使用A. 同种限制酶B.两种限制酶C. 同种连接酶D.两种连接酶2．基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A. ①②③④B. ①②③C. ②③④D.①②④3．有关基因工程的表达正确的选项是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的构造成份为合成目的基因提供资料4．以下哪项不是基因工程中时常使用的用来运载目的基因的载体 A.细菌质粒 B.噬菌体 C.动植物病毒 D.细菌核区的 DNA5．基因工程是在 DNA 份子水平上发展设计施工的。
在基因操作的根本步骤中，不发展碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B. 目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D. 目的基因的检测表达6．不是基因工程法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D. 乙肝疫苗7．在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8．以下哪项表达不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或者多个限制酶切点9．水母发光蛋白由 236 个氨基酸构成，其中有三种氨基酸构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。
在转基因技术中，这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达 10．应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才干到达检测疾病的目的。
这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或者荧光份子等标记的 DNA 份子C.合成β—球蛋白的 . DNA .D.合成苯丙氨酸羟化酶的 DNA 片段11．基因工程第一步的一种法是把所需的基因从供体细胞别离出来，这要利用限制性切酶。
基因工程试题及答案解析
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是：A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案：D2. 基因工程中，用于将目的基因导入植物细胞的方法是：A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案：C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案：C二、填空题1. 基因工程中，常用的运载体有____、____和____。
答案：质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中，常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案：抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案：基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中，基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物；在医学领域，基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等；在工业上，基因工程可以用于生产酶、疫苗等；在环境保护方面，基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中，如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达？答案：确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面：首先，目的基因需要有合适的启动子和终止子，以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止；其次，需要考虑目的基因的密码子偏好性，以确保其在宿主细胞中能被高效翻译；再次，需要考虑目的基因的稳定性，避免其在宿主细胞中被降解；最后，还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案：基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病；基因治疗可以用于治疗遗传性疾病；疾病诊断可以通过基因检测来实现；基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而，基因工程的应用也带来了伦理问题，如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
(完整版)高中生物基因工程试题
阶段质量检测（一）基因工程（时间:45分钟，满分:100分）一、选择题（每小题3分，共45分）1.下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（）A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C.只要是细菌中的质粒都可以直接作为基因工程中的载体D.载体必须具备的条件之一是有多个限制酶切割位点，以便与外源基因进行连接2.（浙江高考）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。
现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是（）A.提取矮牵牛蓝色花的mRNA,经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因BB.利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因BC.利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D.将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞3.日本下村修、美国沙尔菲和钱永健因在发现绿色荧光蛋白（GFP）等研究方面做出突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。
GFP在紫外光的照射下会发出绿色荧光。
依据GFP 的特性，你认为该蛋白在生物工程中的应用价值是（）A.作为标记基因，研究基因的表达B.作为标记蛋白，研究细胞的转移C.注入肌肉细胞，繁殖发光小白鼠D.标记噬菌体外壳，示踪DNA路径4•下列有关质粒的叙述，正确的是（）A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器B.质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DNAC.质粒只有在侵入宿主细胞后，才能在宿主细胞内复制D.基因工程中常用的载体除了质粒外，还有核DNA、动植物病毒以及入噬菌体的衍生物5•下列有关基因工程的叙述正确的是（）A.用同种限制性核酸内切酶切割载体与含目的基因的DNA片段可获得相同的黏性末端B.以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同C.检测到受体细胞中含有目的基因就标志着基因工程育种已经成功D.质粒上抗生素的抗性基因有利于质粒与外源基因连接6•下列有关基因工程和蛋白质工程步骤的叙述不正确的是（）A.将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用显微注射法B.设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列C.蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新蛋白质的技术D.蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质7.利用细菌大量生产人的胰岛素，下列叙述错误的是（）A.用适当的酶对载体与人的胰岛素基因进行切割与黏合B.用适当的化学物质处理受体细菌表面，将重组DNA导入受体细菌C.通常通过检测目的基因产物来检测重组DNA是否已导入受体细菌D.重组DNA必须能在受体细菌内进行复制与转录，并合成人的胰岛素8.下列关于图中P、Q、R、S、G的描述，正确的是（）A.P代表的是质粒RNA，S代表的是外源DNAB.Q表示限制酶的作用，R表示RNA聚合酶的作用C.G是RNA与DNA形成的重组质粒D.G是转基因形成的重组质粒DNA9.下列关于目的基因的检测与鉴定的叙述，错误的是（）A.目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键是目的基因是否插入质粒DNA中B.检测受体细胞是否含有目的基因及其是否成功转录的方法都是分子杂交法C.目的基因的鉴定通常是在个体水平上进行的D.如在受体细胞内检测到目的基因表达的蛋白质，可确定目的基因首端含有启动子10.科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，在医学研究及相关疾病治疗方面都具有重要意义。
高中基因工程试题及答案
高中基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然选择B. 基因的人工选择C. 基因的人工重组D. 基因的自然重组答案：C2. 基因工程中常用的载体是：A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案：A3. 基因枪法属于哪种基因转移技术？A. 化学法B. 物理法C. 生物法D. 机械法答案：B4. 以下哪个不是基因工程的步骤？A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的自然选择答案：D5. 基因工程在医学领域的应用不包括：A. 基因治疗B. 基因检测C. 基因编辑D. 基因克隆答案：D二、填空题6. 基因工程的核心技术是________。
答案：重组DNA技术7. 基因工程中常用的受体细胞有________和________。
答案：大肠杆菌、酵母菌8. 基因工程在农业上的应用包括________和________。
答案：转基因作物、基因改良9. 基因工程在环境保护中的应用包括________和________。
答案：生物修复、污染物降解10. 基因工程在工业生产中的应用包括________和________。
答案：生物催化剂、生物制药三、简答题11. 简述基因工程的基本原理。
答案：基因工程的基本原理是利用分子生物学技术，将目的基因从一种生物体中提取出来，然后通过重组DNA技术将其插入到另一种生物体的基因组中，使其在新的宿主细胞中表达，从而获得具有特定性状的生物体或生产特定的生物产品。
12. 基因工程在医学领域有哪些应用？答案：基因工程在医学领域的应用包括基因治疗，通过将正常基因导入患者体内以治疗遗传性疾病；基因检测，用于疾病诊断和风险评估；基因编辑，通过修改基因序列来治疗疾病；以及生产生物药物，如胰岛素、干扰素等。
四、论述题13. 论述基因工程的伦理问题及其解决途径。
答案：基因工程的伦理问题主要包括对人类基因组的修改可能带来的未知风险、基因歧视、生物多样性的减少等。
大学基因工程试题及答案
大学基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶属于哪一类酶？A. 核酸酶B. 蛋白酶C. 脂肪酶D. 淀粉酶答案：A2. 以下哪个不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的克隆B. 目的基因的表达C. 目的基因的检测D. 目的基因的复制答案：D3. 基因工程中常用的运载体有哪些？A. 质粒B. 噬菌体C. 动植物病毒D. 所有以上答案：D二、填空题1. 基因工程中常用的_________技术可以用于目的基因的检测。
答案：PCR2. 基因工程中，_________是将目的基因导入受体细胞的关键步骤。
答案：转化3. 在基因工程中，_________是将目的基因插入到运载体中形成重组DNA分子的过程。
答案：克隆三、简答题1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案：基因工程在医学领域的应用包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断和疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的克隆过程。
答案：目的基因的克隆过程包括提取目的基因、构建基因文库、筛选含有目的基因的克隆、目的基因的扩增和纯化等步骤。
四、论述题1. 论述基因工程技术在农业中的应用及其可能带来的问题。
答案：基因工程技术在农业中的应用包括改良作物品质、提高作物产量、增强作物抗病虫害能力等。
可能带来的问题包括生态平衡的破坏、基因污染、食品安全问题等。
2. 分析基因工程中目的基因表达调控的重要性及其策略。
答案：目的基因表达调控在基因工程中至关重要，它决定了基因工程产品的功能和产量。
调控策略包括启动子的选择、增强子的应用、转录后调控等。
基因工程试题及答案
基因工程试题及答案# 基因工程试题及答案## 一、选择题1. 基因工程中常用的工具酶是：A. 限制性内切酶B. DNA聚合酶C. 逆转录酶D. DNA连接酶2. 基因工程中，用于目的基因的克隆通常使用：A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 转座子3. 下列哪项不是基因工程的应用领域？A. 农业改良B. 疾病治疗C. 能源开发D. 武器制造## 二、填空题1. 基因工程中，常用的宿主细胞包括________、________和________。
2. 基因枪法是一种________技术，可以将目的基因直接导入植物细胞。
## 三、简答题1. 简述基因工程的基本操作步骤。
2. 基因工程在医药领域的应用有哪些？## 四、论述题1. 论述基因工程对现代农业的影响及其潜在风险。
## 参考答案### 一、选择题1. 答案：A, D。
限制性内切酶和DNA连接酶是基因工程中用于切割和连接DNA片段的常用工具酶。
2. 答案：A。
质粒是基因工程中常用的载体，用于克隆和表达目的基因。
3. 答案：D。
基因工程的应用领域广泛，但武器制造不属于其应用范围。
### 二、填空题1. 答案：大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞。
这些是基因工程中常用的宿主细胞，用于表达外源基因。
2. 答案：基因转移。
基因枪法是一种基因转移技术，通过高速微粒子将DNA射入细胞内。
### 三、简答题1. 答案：基因工程的基本操作步骤包括：目的基因的获取、载体的选择与构建、目的基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有目的基因的细胞、目的基因的表达与检测。
2. 答案：基因工程在医药领域的应用包括：生产重组蛋白药物、基因治疗、疫苗开发、疾病诊断等。
### 四、论述题1. 答案：基因工程对现代农业的影响主要体现在作物改良、提高产量、增强抗病虫害能力等方面。
通过基因工程，可以培育出抗旱、抗盐碱、抗病的作物新品种，提高作物的适应性和产量。
然而，基因工程也存在潜在风险，如基因流可能导致非目标物种的基因改变，以及转基因作物对生态环境的影响等。
高考生物《基因工程》真题练习含答案
高考生物《基因工程》真题练习含答案1．[2024·山东卷]关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是()A．整个提取过程中可以不使用离心机B．研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰答案：A解析：研磨后，可以将研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液，可以不使用离心机，A正确，B错误。
鉴定过程中的沸水浴加热可使DNA双螺旋结构发生改变，C错误。
该实验中，为排除二苯胺加热后可能变蓝对实验结果造成干扰，可设置加二苯胺不加DNA的对照组，D错误。
2．[2023·新课标卷]某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。
限制酶的切割位点如图所示。
下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是()A．质粒和目的基因都用酶3切割，用E.coli DNA连接酶连接B．质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA连接酶连接C．质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA连接酶连接D．质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.coli DNA连接酶连接答案：C解析：只用一种限制酶切割质粒和目的基因，会使质粒和目的基因发生自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接，A错误；用酶1切割目的基因，产生的是黏性末端，用酶3切割质粒，产生的是平末端，无法连接，B错误；质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后，可使用T4 DNA连接酶连接，使目的基因定向插到质粒中，C正确；酶2和酶4切割后产生的黏性末端相同，易导致目的基因和质粒自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接，并且用酶4切割会破坏标记基因，D错误。
3.[2023·浙江6月]某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如图甲所示。
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华中农业大学本科课程考试评分标准考试课程与试卷类型：基因操作原理姓名：学年学期：学号：考试时间：班级：一、填空题（每小题2分，共30分）1.PCR技术应用广泛，以下不属于PCR应用的为 ___D_____：(A) 随机扩增多态性DNA(RAPD)； (B) 扩增片段长度多态性(AFLP)； (C) RACE； (D) S1 酶作图。
2.λ噬菌体线性 DNA 分子的两端各有一个____12_____个碱基组成的天然黏性末端。
3.PCR扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是___B______：(A) 退火温度过低； (B) 退火温度过高； (C) dNTP 浓度过高； (D) 循环次数过多。
4.下列哪一种酶作用时需要引物____B_____：(A) 末端转移酶； (B) 反转录酶；(C) DNA连接酶； (D) 限制酶。
5.Cosmid 实际上是由_λ噬菌体__和__质粒_____构成的杂合载体，也可以说是带有__cos__序列的质粒。
6.限制性内切酶的命名主要根据__来源菌株属名第一个字母，种名头两个字母以及菌株号、序号_____来确定，以下各种书写方式中哪种或哪几种是正确的____AC____：(A) Pst I;(B) KpnI； (C) Hin dIII; (D) Hind III; (E) T th111I; (F) Bsp1286I； (G) XbaI7.在分子克隆常用的E.coli菌株中Dam 和Dcm 甲基化酶都是有活性的，它们可在DNA的特定位点作甲基化修饰。
而许多限制性内切酶对甲基化是敏感的，一旦所识别的酶切位点被甲基化就不能切割该位点，如Cla I (AT/CGAT)。
请问Cla I不能切割以下哪个或哪些来自dam+ dcm+ E.coli菌株的DNA序列____C_____。
(A) ATCGATA； (B) ATCGATG；(C) ATCGATC； (D) ATCGATT。
8.限制性内切酶有其特定的识别位点，如Eco RI 的识别位点为 ___GAATTC___；有些限制性内切酶切割DNA后可产生带有相同末端的DNA产物，这些酶称为同尾酶，例如__Bam HI__限制性内切酶与___Sau3AI_________限制性内切酶切割DNA形成的末端相同。
（任举一例都可以）9.在基因操作过程中会使用一些多对人体有害的物质, 操作时应小心谨慎, 常用的有害物质有UV light、DEPC、____EB___和____苯酚____等。
（任举一例都可以）10.根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。
在下列文库中_C_是cDNA文库。
(A) YAC文库； (B) PAC文库； (C) 扣减文库； (D) BAC文库。
11.M13KO7是一种辅助噬菌体，可用它帮助噬菌粒制备单链DNA，这是因为以下原因_B_：(A) M13KO7能够进行滚环复制，得到大量的单链噬菌体DNA； (B) M13KO7能够提供成熟包装的蛋白； (C) M13KO7提供了成熟包装所需的信号； (D) M13KO7的10个基因都是正常的。
12.在制作DNA嵌套缺失突变体时主要有3种方法，其核心技术都使用了一种核酸酶，它们分别是__外切核酸酶III__、__BAL31__和___DNaseI___。
13.在核酸杂交过程中，一般都要先做预杂交，这是为了__B__：(A) 做预备试验，寻找最佳反应条件； (B) 封闭背景； (C) 使杂交信号更强； (D) 减少非特异性杂交信号。
14.在许多克隆载体中都使用了 -互补机制来做筛选标记，也就是俗称的“蓝白菌落”筛选，在应用过程中使用了两种引起颜色变化的试剂，它们是___x-gal__和____IPTG__。
15.在基因操作中有些不同的名称具有相同的缩写，例如RT-PCR, 可以是___实时定量PCR__或___反转录PCR___的缩写。
二、名词解释（每小题3分，共21分）1．Star Activity (in restriction enzymes)星星活性，（1’）极端非标准条件下，限制性内切酶切割与识别序列相似的序列，这个改变的俄特殊性称星星活性。
（2’）2．Northern blottingNorthern 杂交，（1’）即DNA与RNA的杂交，与Northern杂交的不同之处在于转移的是RNA而不是DNA。
（1’）Northern 杂交是转录水平的检测，用于检测样品中是否有与探针同源的mRNA分子。
（1’）3．Shuttle vector穿梭载体，（1’）能够在两类不同的宿主中复制、选择和增殖的载体。
（2’）4．Chromosome Walking染色体步查，（1’）采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针，以鉴定含有相邻序列的重组克隆的方法称染色体步查。
（2’）5．Klenow fragmentKlenow片段，（1’）大肠杆菌DNA聚合酶经枯草杆菌蛋白酶水解的大片段。
（1’）具有5’—3’聚合和3’—5’外切活性。
（1’）6．Universal primer通用引物，（1’）参照载体上多克隆位点两侧的一段固定DNA序列设计的引物，（1’）用于分析插入片段的序列。
（1’）7．Competent cells感受态细胞，（1’）能够吸收外源DNA的细胞称作感受态细胞。
（2’）三、分析简答题（每小题5分，共25分）1. 人类基因组的大小约为3000Mb，测序方法有两种，即图谱测序法和全基因组鸟枪法。
这两种测序结果和分析于2001年分别发表在《Nature》和《Science》杂志上。
在第一种方法中，首先将靶基因组部分酶切产生大分子DNA片段，经电泳分离纯化克隆到BAC载体中。
根据分子标记和指纹图谱构建BAC克隆重叠群，挑选单个克隆采取鸟枪法测序。
在每个BAC克隆内根据测序结果进行顺序拼接，并与BAC克隆重叠群物理图谱对比，完成全部主体顺序的组装(The International Human Genome Sequencing Consortium. Initial sequencing and analysis of the human genome. Nature, 2001, 409: 860~921)。
假如你是测序工作组中的一员，由你负责某个BAC克隆子中约100kb的序列测定，该如何实施？①分离纯化该质粒，构建外源DNA片段大小2-5kb的亚文库。
（1’）②用构建亚文库的载体上的通用引物作大规模末端测序。
（1’）③测序的各reads 拼接，得到contig。
（1’）④借助PCR等手段，填补contig中的gap。
（1’）⑤通过酶切图谱验证测序结果。
（1’）体是常用的一种。
A/T载体也有多种工作方式，下图是pCR2.1-TOPO 载体的核心工作原理示意图。
请说出A/T载体克隆PCR产物的一般原理，以及pCR2.1-TOPO 载体所拥有的特殊工作方式。
①用不具有3’-5’外切活性的高温DNA polymerase（如Taq）作PCR扩增时，其产物3’多一个碱基A。
（1’）②在A/T载体的3’未端各有一个突出的碱基T，用于和A配对，从而克隆Taq polymerase的PCR产物。
（2’）③Topoisomerase第274位的酪氨酸与DNA 5’端磷酸之间形成的磷酸二酯键是不稳定的，容易受到DNA 3’羟基的攻击。
TOPO 载体利用其末端自身携带的Topoisomerase形成磷脂键，不需要外加连接酶。
（2’）3. 从苏云金芽胞杆菌拟步行甲亚种YBT-1765中克隆得到一个质粒pBMB175，选用限制性内切酶Cla I和Xba I对该质粒进行酶切分析，得到以下如表所示的结果。
请根据所得的酶切片段大小，标出Cla I酶切位点在质粒pBMB175上的位置。
Xba限制片段的大小（kb）片段序号ClaⅠ XbaⅠ Cla I+Xba I1 11.0 8.8 7.62 4.2 5.4 3.03 1.0 2.44 1.25 1.0总计15.2 15.2 15.23.0kb 和14.0 kb ，答对一处给2分4．许多限制性内切酶切割DNA 后可产生相同的突出末端，这些产物彼此之间可进行粘端连接。
但在连接产物中相应位置的酶切位点就不存在了。
例如某DNA 片段用Cla I (AT/CGAT)酶切后，可与Acc I (GT/CGAC)切割的载体连接，但在连接点处的Cla I 和Acc I 位点都消失了，相应的序列变成了ATCGAC 。
下图最上面的序列为Cla I/ Acc I 连接处的DNA 序列。
通过这些步骤可在连接点处恢复Cla I 位点，请指出每一步所用的关键酶和底物。
1.Sph I2.Klenow （或T 4 T 7 polymerase ）3.过量dATP4.S1酶（或绿豆核酸酶）5.ligase 每空一分Recovering Cla I--ATCGACAAGCTT----TAGCTGGCC AA----ATCGA TT-- --TAGCT AA----ATCGATT-- --TAGCTAA----ATCGA CCGGCATGCAAGCTT----TAGCT GGCCGTACGTTCGAA----ATCGACCGGCATG CAAGCTT----TAGCTGGCC GTACGTTCGAA--D ( 5 )C ( 4 )B ( 2 ， 3 )A( 1 )5. 用于cDNA 克隆的方法很多,下图是 SMART 技术构建全长cDNA 文库的基本原理流程图。
请叙述其核心步骤。
①polyT 引物合成cDNA 第一链，反转录酶具有末端转移酶活性，自动在产物末端加上几个d （C ）。
（2’）②反转录过程中同时添加了带有3个d （G ）的引物，以该引物合成第一链的互补链，锚定全长cDNA 。
（2’）③引物延伸或长距离PCR 得到双链cDNA 。
（1’）四、问答题 （每小题8分，共24分）1. 通过生物测定，发现一种真菌具有抗某种细菌的抗菌活性。
通过生物化学的方法从该真菌中分离到一个具有抗细菌活性的蛋白质，该蛋白表现出良好的开发成蛋白药物的潜力。
若要在E.coli 或酵母菌中大量表达并制备该抗菌蛋白质，试问如何分离得到该蛋白的编码基因。
①测定该蛋白质的N 未端氨基酸序列（1’）②根据氨基酸序列设计简并引物，用作基因克隆的探针（2’） ③构建真菌的cDNA 文库（2’）④用探针作Southern 杂交，从文库中筛选含该基因的重组子（2’） ⑤重组子的纯化、验证测序（1’）①中如果是制备该蛋白的抗体③构建表达文库，从中筛选则该题亦可给分。
2. 魔芋 (Amorphophallus ) 是单子叶植物纲 (Monocotyledoeae )、泽泻目 (Alismatales )、天南星科 (Areaceae ) 的多年生草本块茎植物。