土壤有效磷的测定
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土壤有效磷的测定
0.5mol/L NaHCO3 浸提—钼锑抗分光光度法 （Olsen法）
崔玉玲 黑龙江省农垦科学院测试中心
一、概述
土壤有效磷是土壤肥力的重要指标之一,表 明土壤的供磷水平,可以作为判断施用磷肥 的指标,为推荐施肥提供依据。
一、概述
土壤有效磷含量只是一个相对的指标，同 一土壤用不同方法测得的有效磷量可以相 差很多，即使用同一浸提剂，由于浸提条 件如土液比、温度、时间、振荡方法不同 其结果有很大差异，在相同条件下测得的 结果才有相互比较的意义。
七、质量控制
6、正确的采样及样品处理； 7、合乎要求的原始记录和数据处理； 8、必要的检查程序等。
五、操作步骤
4、以空白溶液为参比液，使用1cm比色皿， 在分光光度计上，用880nm或700nm波长 比色测读吸光度。
五、操作步骤
注1: 由于取浸提滤液10mL于50mL容量瓶中，
加水和钼锑抗试剂后，即产生大量的CO2气 体，由于容量瓶口小， CO2气体不易逸出， 在摇匀过程中，常造成试液外溢，造成测 定误差。为了克服这个缺点，可以准确加 入提取液、水和钼锑抗试剂于三角瓶中， 混匀，显色。
常用标准筛对照数据表
国际标准ISO 2.00mm 1.00mm 0.841mm 0.355mm 0.250mm 0.150mm
美国筛制标准 中国药典筛标准
No.10
一号筛
No.18
No.20
二号筛
No.45
三号筛
No.60
四号筛
No.100
七号筛
五、操作步骤
2、如发现滤液的颜色较深，应向土壤悬浊 液中加入约0.3-0.5g 无磷活性炭粉，摇匀后 立即过滤，也可在振荡前加入活性炭。
六、结果计算
2、样品的吸取体积小于10mL时：
有效P (mg/kg)=C×20×10/V
C—从标准曲线求得查得浓度，mg/L； 20—浸提时的液土比， 50mL/2.50 g ； V—吸取体积，mL。
七、质量控制
质量控制的基本要素： 1、人员的技术能力； 2、合适的仪器设备； 3、好的实验室和好的测量操作； 4、合适的测量方法、标准的操作规程； 5、合格的试剂及原材料；
四、试剂
（4）钼锑抗显色剂 称取0.50g 抗坏血酸(左旋)溶于100mL钼锑
抗贮备液中。 (有效期24小时，如贮于冰箱 中2-8℃，则有效期7天。)
四、试剂
（5）磷标准贮备溶液（100 mg/L） 称取0.4394g KH2PO4 (105℃烘2小时) 溶于
约200mL 水中，加入5mL 浓H2SO4，转移 入1L 容量瓶中，用水定容，可较长时间保 存。
在目前使用较广的几种浸提剂中，一般认 为以 0.03mol/L NH4F- 0.025mol/LHCl (BrayⅠ法)浸提剂比较适合于风化程度较高 的酸性土壤；
石灰性土壤通常用 0.5 mol/L NaHCO3 (pH 值为8.5)( Olsen法)浸提比较满意；对于中 性和酸性水稻土NH4F— HCl 法和NaHCO3 法都有应用。
880nm为近红外光，在此波长处对磷有吸 收，而对杂色又不吸收，故不用脱色。
物质颜色和吸收光颜色的关系
物质颜色
吸
颜
色
收 波
光 长(nm)
黄绿 黄 橙 红
紫红 紫 蓝
绿蓝 蓝绿
紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 绿 红
400 ~ 450 450 ~ 480 480 ~ 490 490 ~ 500 500 ~ 560 560 ~ 580 580 ~ 600 600 ~ 650 650 ~ 750
五、操作步骤
5、标准曲线绘制： (1) 分别准确吸取5mg/L磷标准使用溶液0、
2.50、5.00、10.00、15.00、20.00、 25.00mL于50mL容量瓶中，用0.5 mol/L NaHCO3溶液定容。此标准系列中磷的浓度 依次为0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、 2.50mg/L 。
五、操作步骤
(2) 吸取标准系列溶液各10.00mL于三角瓶 中，同样品处理显色，测读吸光度。
(3) 以上述标准系列的磷浓度为横坐标，相 应的吸光度为纵坐标绘制曲线。
六、结果计算
1、样品的吸取体积为10mL时：
有效P (mg/kg)=C×20
C—从标准曲线求得查得浓度ห้องสมุดไป่ตู้mg/L； 20—浸提时的液土比， 50mL/2.50 g。
将各次连续测定值与各参比标准进行相关 性分析，结果表明Olsen法对土壤有效磷进 行一次提取已经能够反应土壤的有效磷水 平，无需进行多次提取。
一、概述 3、Olsen法的影响因素
温度： Olsen法不同温度浸提的土壤有效磷试验结
果表明：提取温度对Olsen法测定的土壤有 效磷影响极大，在10～30℃范围内，有效 磷测定值随温度升高而增加，温度每升高 1℃所增加的磷值的平均值为0.44mg／kg， 且随着土壤含磷量高低，其影响程度不同。
分光光度计
物质呈现出特征的颜色，就是它们对可见 光中某些特定波长的光线选择吸收的缘故。
一切物质都会对可见和不可见光中的某些 波长的光进行吸收。
分光光度计
日常所见的白光实际上是波长400-750nm 连续光谱的混合光，它是由七色光按一定 的强度比例混合而成。这段波长范围的光 是人们视觉可觉查到的，所以称为可见光。
一、概述 3、Olsen法的影响因素
因此，在报告有效磷结果时必须同时说明 所用的测定方法。
注意测定方法和标准化。
二、方法原理
石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不 能用酸溶液来提取有效磷。一般用碳酸盐 的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，提 取液中的 HCO3-可和土壤溶液中的 Ca2+ 生 成 CaCO3 沉淀，从而抑制了 Ca2+的活度 而使某些活性较大的 Ca—P (磷酸钙盐) 被 提取出来。
四、试剂
（2）无磷活性炭 活性炭常含有磷，应做空白试验，检验有 无磷存在。如含磷较多，须先用后 HCl （1+1）浸泡过夜，在平板漏斗上抽气过滤， 用蒸馏水冲冼多次至无 Cl-为止；再用0.5 mol/L NaHCO3浸泡过夜，在平板漏斗上抽 气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并 检查到无磷为止，烘干备用。 如含磷较少，则直接用NaHCO3 处理即可。
活性炭和滤纸是否含磷可进行空白试验来 验证。
五、操作步骤
3、吸取滤液10.00mL（含磷量高时少吸， 同时应补加0.5 mol/L NaHCO3溶液至 10.00mL）于三角瓶中（注1），然后加入 钼锑抗显色剂5.00mL，慢慢摇动，使CO2 逸出，再准确加入10.00mL水，充分摇匀， 逐尽CO2，在室温高于15 ℃处放置30min 后，进行比色。
1、浸提剂
浸提剂的选择主要根据各种土壤性质而定。 土壤有效磷测定的化学提取法采用的提取 剂种类很多，目前应用的主要测定方法有 三种：Olsen法、 BrayⅠ法和Mehlich3法。 究竟何种方法测得的土壤有效磷与作物的 相关性更好，是否适合在测土配方施肥中 应用，尚无定论。
一、概述 1、浸提剂
因此NaHCO3不仅适用于石灰性土壤，也适 应于中性和酸性水稻土壤中速效磷的提取。
三、主要仪器设备
1、可控温的往复振荡机： 本法浸提温度对测定结果影响很大。因此
必须严格控制浸提时的温度条件。一般要 在室温（20～25℃）下进行，本方法要求 是25±1 ℃ ，在恒温振荡机上进行提取。
三、主要仪器设备
2、分光光度计 可在880nm波长处测读吸光度。 波长不能达到880nm时可用700nm，浸出
液有颜色时可用活性炭脱色。
分光光度计
光的选择吸收： 当一束光照射到某种物质的固态物或溶液
上时，一部分光会被吸收或被反射，不同 的物质对于照射它们的光束的吸收程度是 不同的，对某个波长的光吸收强烈，对另 外波长的光吸收很小或不吸收，我们把这 种现象称为光的选择吸收。
一、概述 1、浸提剂
Mehlich3法是近年来研究较多并逐步推广 应用的—种测试方法，其优点主要是一次 浸提可测定土壤中大部分有效养分，便于 大批量分析；缺点是应用时间不长，尚未 建立土壤的丰缺指标体系，需要进行试验 确定。
2、评价结果
即使简单地以“高”、“中”、“低”来 分档,不同提取方法的结果分起档来其数值 相差很远;而且同一提取方法的结果对不同 土壤,不同作物还应该有不同的分档标准。
一、概述 2、评价结果
测定方法 0.03mol/L NH4F-
评价标准
0.025mol/LHCl 法
低
﹤15
中
15-30
高
﹥30
0.5 mol/L NaHCO3法
﹤6 6-10 ﹥10
3、Olsen法的影响因素
浸提时间： Olsen法连续提取测定的土壤有效磷的结果
表明，浸提次数对Olsen-P的测定值影响很 大， 0.5 mol/L NaHCO3溶液浸提出的土壤 有效磷量随振荡时间而增加。
四、试剂
（1） 0.5 mol/L NaHCO3浸提液 称取42.0g NaHCO3 于800mL水中，稀释 定容至1L。以50%（m/V）NaOH 溶液调节 浸提液的pH至8.5（用pH计测定） 。贮存 于聚乙烯或玻璃瓶中，用塞塞紧。此溶液 曝于空气中可因失去CO2而使pH增高，使 用前应检查pH是否改变并校准。
二、方法原理
同时由于碳酸盐的碱溶液，在酸性土壤中 因 pH 提高而使 Fe-P （磷酸铁盐）、Al-P （磷酸铝盐）水解而部分被提取，也降低 了铝和铁离子的活性，在浸提液中由于 Ca 、 Fe 、 Al 浓度较低，不会产生磷的次生沉淀。
二、方法原理
此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、 HCO3-、CO32-等阴离子，有利于吸附态磷 的置换。
四、试剂
（3）钼锑抗贮备液 称取酒石酸锑钾0.3g，溶于100毫升水中，制成 0.3％的溶液。 (Ⅰ)
称取10.0g 钼酸铵溶于300mL 约60 ℃水中，冷却。 (Ⅱ)
另取181mL 浓硫酸缓缓注入约800mL水中，搅匀 冷却 。 (Ⅲ)
将稀硫酸溶液(Ⅲ)注入钼酸铵溶液(Ⅱ)中，边加边 搅动；再将100mL 0.3％的酒石酸锑钾溶液(Ⅰ) 加 入到钼酸铵液中，最后用水稀释至2L，贮于棕色 瓶中，此为贮备液钼酸铵浓度为0.5%，酸浓度为 3.26mol/L (1/2H2SO4)。
四、试剂
（6）磷标准工作溶液（5 mg/L ） 取磷标准贮备溶液用0.5 mol/L NaHCO3准
确稀释20倍即为磷标准工作液，此液不宜 久存。
五、操作步骤
1、称取通过1mm (18号筛)筛子的风干土样 2.50g（精确到0.01g）于干燥的200或 250mL塑料瓶中，加入0.5 mol/L NaHCO3 溶液50mL，塞紧瓶塞，在振荡器上振荡 30min(速率为每分钟180次， 25±1 ℃ )， 立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于干燥的 三角瓶中，最初7～8ml滤液弃去，同时做 空白试验。
0.5mol/L NaHCO3 浸提—钼锑抗分光光度法 （Olsen法）
崔玉玲 黑龙江省农垦科学院测试中心
一、概述
土壤有效磷是土壤肥力的重要指标之一,表 明土壤的供磷水平,可以作为判断施用磷肥 的指标,为推荐施肥提供依据。
一、概述
土壤有效磷含量只是一个相对的指标，同 一土壤用不同方法测得的有效磷量可以相 差很多，即使用同一浸提剂，由于浸提条 件如土液比、温度、时间、振荡方法不同 其结果有很大差异，在相同条件下测得的 结果才有相互比较的意义。
七、质量控制
6、正确的采样及样品处理； 7、合乎要求的原始记录和数据处理； 8、必要的检查程序等。
五、操作步骤
4、以空白溶液为参比液，使用1cm比色皿， 在分光光度计上，用880nm或700nm波长 比色测读吸光度。
五、操作步骤
注1: 由于取浸提滤液10mL于50mL容量瓶中，
加水和钼锑抗试剂后，即产生大量的CO2气 体，由于容量瓶口小， CO2气体不易逸出， 在摇匀过程中，常造成试液外溢，造成测 定误差。为了克服这个缺点，可以准确加 入提取液、水和钼锑抗试剂于三角瓶中， 混匀，显色。
常用标准筛对照数据表
国际标准ISO 2.00mm 1.00mm 0.841mm 0.355mm 0.250mm 0.150mm
美国筛制标准 中国药典筛标准
No.10
一号筛
No.18
No.20
二号筛
No.45
三号筛
No.60
四号筛
No.100
七号筛
五、操作步骤
2、如发现滤液的颜色较深，应向土壤悬浊 液中加入约0.3-0.5g 无磷活性炭粉，摇匀后 立即过滤，也可在振荡前加入活性炭。
六、结果计算
2、样品的吸取体积小于10mL时：
有效P (mg/kg)=C×20×10/V
C—从标准曲线求得查得浓度，mg/L； 20—浸提时的液土比， 50mL/2.50 g ； V—吸取体积，mL。
七、质量控制
质量控制的基本要素： 1、人员的技术能力； 2、合适的仪器设备； 3、好的实验室和好的测量操作； 4、合适的测量方法、标准的操作规程； 5、合格的试剂及原材料；
四、试剂
（4）钼锑抗显色剂 称取0.50g 抗坏血酸(左旋)溶于100mL钼锑
抗贮备液中。 (有效期24小时，如贮于冰箱 中2-8℃，则有效期7天。)
四、试剂
（5）磷标准贮备溶液（100 mg/L） 称取0.4394g KH2PO4 (105℃烘2小时) 溶于
约200mL 水中，加入5mL 浓H2SO4，转移 入1L 容量瓶中，用水定容，可较长时间保 存。
在目前使用较广的几种浸提剂中，一般认 为以 0.03mol/L NH4F- 0.025mol/LHCl (BrayⅠ法)浸提剂比较适合于风化程度较高 的酸性土壤；
石灰性土壤通常用 0.5 mol/L NaHCO3 (pH 值为8.5)( Olsen法)浸提比较满意；对于中 性和酸性水稻土NH4F— HCl 法和NaHCO3 法都有应用。
880nm为近红外光，在此波长处对磷有吸 收，而对杂色又不吸收，故不用脱色。
物质颜色和吸收光颜色的关系
物质颜色
吸
颜
色
收 波
光 长(nm)
黄绿 黄 橙 红
紫红 紫 蓝
绿蓝 蓝绿
紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 绿 红
400 ~ 450 450 ~ 480 480 ~ 490 490 ~ 500 500 ~ 560 560 ~ 580 580 ~ 600 600 ~ 650 650 ~ 750
五、操作步骤
5、标准曲线绘制： (1) 分别准确吸取5mg/L磷标准使用溶液0、
2.50、5.00、10.00、15.00、20.00、 25.00mL于50mL容量瓶中，用0.5 mol/L NaHCO3溶液定容。此标准系列中磷的浓度 依次为0、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、 2.50mg/L 。
五、操作步骤
(2) 吸取标准系列溶液各10.00mL于三角瓶 中，同样品处理显色，测读吸光度。
(3) 以上述标准系列的磷浓度为横坐标，相 应的吸光度为纵坐标绘制曲线。
六、结果计算
1、样品的吸取体积为10mL时：
有效P (mg/kg)=C×20
C—从标准曲线求得查得浓度ห้องสมุดไป่ตู้mg/L； 20—浸提时的液土比， 50mL/2.50 g。
将各次连续测定值与各参比标准进行相关 性分析，结果表明Olsen法对土壤有效磷进 行一次提取已经能够反应土壤的有效磷水 平，无需进行多次提取。
一、概述 3、Olsen法的影响因素
温度： Olsen法不同温度浸提的土壤有效磷试验结
果表明：提取温度对Olsen法测定的土壤有 效磷影响极大，在10～30℃范围内，有效 磷测定值随温度升高而增加，温度每升高 1℃所增加的磷值的平均值为0.44mg／kg， 且随着土壤含磷量高低，其影响程度不同。
分光光度计
物质呈现出特征的颜色，就是它们对可见 光中某些特定波长的光线选择吸收的缘故。
一切物质都会对可见和不可见光中的某些 波长的光进行吸收。
分光光度计
日常所见的白光实际上是波长400-750nm 连续光谱的混合光，它是由七色光按一定 的强度比例混合而成。这段波长范围的光 是人们视觉可觉查到的，所以称为可见光。
一、概述 3、Olsen法的影响因素
因此，在报告有效磷结果时必须同时说明 所用的测定方法。
注意测定方法和标准化。
二、方法原理
石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不 能用酸溶液来提取有效磷。一般用碳酸盐 的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，提 取液中的 HCO3-可和土壤溶液中的 Ca2+ 生 成 CaCO3 沉淀，从而抑制了 Ca2+的活度 而使某些活性较大的 Ca—P (磷酸钙盐) 被 提取出来。
四、试剂
（2）无磷活性炭 活性炭常含有磷，应做空白试验，检验有 无磷存在。如含磷较多，须先用后 HCl （1+1）浸泡过夜，在平板漏斗上抽气过滤， 用蒸馏水冲冼多次至无 Cl-为止；再用0.5 mol/L NaHCO3浸泡过夜，在平板漏斗上抽 气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，并 检查到无磷为止，烘干备用。 如含磷较少，则直接用NaHCO3 处理即可。
活性炭和滤纸是否含磷可进行空白试验来 验证。
五、操作步骤
3、吸取滤液10.00mL（含磷量高时少吸， 同时应补加0.5 mol/L NaHCO3溶液至 10.00mL）于三角瓶中（注1），然后加入 钼锑抗显色剂5.00mL，慢慢摇动，使CO2 逸出，再准确加入10.00mL水，充分摇匀， 逐尽CO2，在室温高于15 ℃处放置30min 后，进行比色。
1、浸提剂
浸提剂的选择主要根据各种土壤性质而定。 土壤有效磷测定的化学提取法采用的提取 剂种类很多，目前应用的主要测定方法有 三种：Olsen法、 BrayⅠ法和Mehlich3法。 究竟何种方法测得的土壤有效磷与作物的 相关性更好，是否适合在测土配方施肥中 应用，尚无定论。
一、概述 1、浸提剂
因此NaHCO3不仅适用于石灰性土壤，也适 应于中性和酸性水稻土壤中速效磷的提取。
三、主要仪器设备
1、可控温的往复振荡机： 本法浸提温度对测定结果影响很大。因此
必须严格控制浸提时的温度条件。一般要 在室温（20～25℃）下进行，本方法要求 是25±1 ℃ ，在恒温振荡机上进行提取。
三、主要仪器设备
2、分光光度计 可在880nm波长处测读吸光度。 波长不能达到880nm时可用700nm，浸出
液有颜色时可用活性炭脱色。
分光光度计
光的选择吸收： 当一束光照射到某种物质的固态物或溶液
上时，一部分光会被吸收或被反射，不同 的物质对于照射它们的光束的吸收程度是 不同的，对某个波长的光吸收强烈，对另 外波长的光吸收很小或不吸收，我们把这 种现象称为光的选择吸收。
一、概述 1、浸提剂
Mehlich3法是近年来研究较多并逐步推广 应用的—种测试方法，其优点主要是一次 浸提可测定土壤中大部分有效养分，便于 大批量分析；缺点是应用时间不长，尚未 建立土壤的丰缺指标体系，需要进行试验 确定。
2、评价结果
即使简单地以“高”、“中”、“低”来 分档,不同提取方法的结果分起档来其数值 相差很远;而且同一提取方法的结果对不同 土壤,不同作物还应该有不同的分档标准。
一、概述 2、评价结果
测定方法 0.03mol/L NH4F-
评价标准
0.025mol/LHCl 法
低
﹤15
中
15-30
高
﹥30
0.5 mol/L NaHCO3法
﹤6 6-10 ﹥10
3、Olsen法的影响因素
浸提时间： Olsen法连续提取测定的土壤有效磷的结果
表明，浸提次数对Olsen-P的测定值影响很 大， 0.5 mol/L NaHCO3溶液浸提出的土壤 有效磷量随振荡时间而增加。
四、试剂
（1） 0.5 mol/L NaHCO3浸提液 称取42.0g NaHCO3 于800mL水中，稀释 定容至1L。以50%（m/V）NaOH 溶液调节 浸提液的pH至8.5（用pH计测定） 。贮存 于聚乙烯或玻璃瓶中，用塞塞紧。此溶液 曝于空气中可因失去CO2而使pH增高，使 用前应检查pH是否改变并校准。
二、方法原理
同时由于碳酸盐的碱溶液，在酸性土壤中 因 pH 提高而使 Fe-P （磷酸铁盐）、Al-P （磷酸铝盐）水解而部分被提取，也降低 了铝和铁离子的活性，在浸提液中由于 Ca 、 Fe 、 Al 浓度较低，不会产生磷的次生沉淀。
二、方法原理
此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、 HCO3-、CO32-等阴离子，有利于吸附态磷 的置换。
四、试剂
（3）钼锑抗贮备液 称取酒石酸锑钾0.3g，溶于100毫升水中，制成 0.3％的溶液。 (Ⅰ)
称取10.0g 钼酸铵溶于300mL 约60 ℃水中，冷却。 (Ⅱ)
另取181mL 浓硫酸缓缓注入约800mL水中，搅匀 冷却 。 (Ⅲ)
将稀硫酸溶液(Ⅲ)注入钼酸铵溶液(Ⅱ)中，边加边 搅动；再将100mL 0.3％的酒石酸锑钾溶液(Ⅰ) 加 入到钼酸铵液中，最后用水稀释至2L，贮于棕色 瓶中，此为贮备液钼酸铵浓度为0.5%，酸浓度为 3.26mol/L (1/2H2SO4)。
四、试剂
（6）磷标准工作溶液（5 mg/L ） 取磷标准贮备溶液用0.5 mol/L NaHCO3准
确稀释20倍即为磷标准工作液，此液不宜 久存。
五、操作步骤
1、称取通过1mm (18号筛)筛子的风干土样 2.50g（精确到0.01g）于干燥的200或 250mL塑料瓶中，加入0.5 mol/L NaHCO3 溶液50mL，塞紧瓶塞，在振荡器上振荡 30min(速率为每分钟180次， 25±1 ℃ )， 立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于干燥的 三角瓶中，最初7～8ml滤液弃去，同时做 空白试验。