APTT纠正实验教学资料
凝血活酶生成试验及纠正试验原理
凝血活酶生成试验及纠正试验原理哎呀，你们这些小伙伴们，今天我要给大家讲一个特别有趣的话题，那就是凝血活酶生成试验及纠正试验原理。
听起来好像很高大上的样子，其实呢，这个话题可是关系到我们身体健康的大问题哦！所以，小伙伴们可要认真听好了，不要走神哦！我们来说说凝血活酶生成试验。
这个试验呢，是用来检测我们体内有没有凝血活酶的。
凝血活酶是什么呢？简单来说，就是一个小小的蛋白质，它的作用可大了，可以帮助我们止血呢！所以，如果我们体内没有足够的凝血活酶，那就会出现各种各样的问题，比如说流鼻血啊、皮下出血啊等等。
那么，这个凝血活酶生成试验是怎么做的呢？这个试验分为两个部分：一部分是采集我们的血液样本，另一部分是在实验室里观察血液样本中的凝血活酶。
我们要先抽一管血，然后把血放在一个特殊的试管里。
接下来，科学家们会在试管里加入一些化学物质，让血液样本发生一些变化。
这时候，我们就可以观察到血液样本中是否产生了凝血活酶。
如果产生了凝血活酶，那么就说明我们的体内是有足够凝血活酶的；反之，如果没有产生凝血活酶，那就说明我们的体内可能缺乏凝血活酶。
接下来，我们再来说说纠正试验。
纠正试验的作用呢，就是帮助我们找出体内凝血活酶不足的原因。
那么，这个纠正试验又是怎么做的呢？纠正试验的方法有很多种，但是基本上都是通过给身体补充一些特定的物质来达到纠正的目的。
比如说，如果我们的体内缺乏维生素K,那么科学家们就会给我们补充维生素K,让我们的身体自己产生足够的凝血活酶。
当然啦，这个过程可不是一蹴而就的，需要我们在医生的指导下进行长期的治疗和观察。
凝血活酶生成试验及纠正试验虽然看起来很复杂，但是对于我们的身体来说却是非常重要的。
只有了解了自己的身体状况，我们才能更好地保护自己的健康。
所以，小伙伴们可要重视这个话题哦！当然啦，如果你们有什么关于这个话题的问题，欢迎随时来找我哦！我会尽我所能地帮助大家解答疑惑的！。
APTT纠正试验检测方法的建立及临床应用
㊃短篇论著㊃A P T T纠正试验检测方法的建立及临床应用*王贤,夏茂,夏永泉,沈瀚ә南京大学医学院附属南京鼓楼医院检验科,江苏南京210007摘要:目的建立活化部分凝血活酶时间(A P T T)纠正试验的检测方法和解释规则,分析其在临床A P T T延长患者中的应用价值㊂方法选取该院A P T T延长,凝血酶原时间(P T)㊁凝血酶时间(T T)㊁纤维蛋白原(F g)正常的患者,根据患者确诊情况,将其分为单纯因子缺乏组㊁抗磷脂抗体阳性组㊁Ⅷ因子抗体阳性组(后两组均属于凝血抑制物阳性患者)㊂用枸橼酸钠抗凝静脉血进行A P T T纠正试验㊂绘制受试者工作特征曲线(R O C曲线),确定纠正试验中即刻试验R o s n e r指数(R I)㊁温育试验差值(温育差)的诊断界值,分析A P T T 纠正试验在筛查A P T T延长原因中的应用价值㊂结果即刻试验R I鉴别抗磷脂抗体阳性与单纯因子缺乏的诊断效能高于即刻试验R I鉴别凝血抑制物阳性与单纯因子缺乏的诊断效能(P<0.05)㊂即刻试验R I的诊断界值为11.0%,鉴别抗磷脂抗体阳性与单纯因子缺乏的灵敏度为85.7%,特异度为91.2%;温育试验差值的诊断界值为3s,鉴别检测Ⅷ因子抗体阳性与阴性的灵敏度为85.7%,特异度为'.2%㊂根据A P T T纠正试验中即刻试验R I㊁温育差将患者分为3类:单纯因子缺乏㊁非时间依赖性抑制物㊁时间依赖性抑制物㊂115例患者的A P T T纠正试验结果判定正确率为89.8%(103/115)㊂4例单纯因子缺乏患者被误判,其中2例患者的即刻试验R I及2例患者的温育差均接近诊断界值;8例被误判为单纯因子缺乏的患者,5例为低滴度狼疮抗凝物(L A)阳性,3例为低滴度Ⅷ因子抗体阳性㊂2例L A阳性患者被误判为凝血抑制物呈时间依赖性㊂结论该研究建立了A P T T纠正试验的检测方法和解释规则㊂A P T T纠正试验可以用于临床A P T T延长原因的鉴别诊断,是一项简单有效的筛查试验㊂关键词:A P T T纠正试验;诊断界值;抑制物;时间依赖性;非时间依赖性D O I:10.3969/j.i s s n.1673-4130.2021.04.026中图法分类号:R446.1文章编号:1673-4130(2021)04-0497-04文献标志码:A活化部分凝血活酶时间(A P T T)延长是临床常见的凝血功能障碍,原因主要是凝血因子的缺乏或者凝血抑制物的存在,其中凝血抑制物以抗磷脂抗体㊁Ⅷ因子抗体最常见㊂不同原因导致的A P T T延长,临床治疗方案不同[1-2]㊂A P T T纠正试验是分析A P T T延长原因的凝血筛查试验,用于判断患者是存在凝血因子缺乏还是凝血抑制物,为下一步治疗提供信息㊂A P T T纠正试验操作简便易行,不需要昂贵的仪器,基层单位也可开展㊂但是目前A P T T纠正试验没有标准化[3-4],国内文献较少见关于完整的A P T T纠正试验操作方法和解释规则建立㊁分析的报道,这影响了A P T T纠正试验的临床应用㊂本研究旨在建立完整的A P T T纠正试验的操作方法及解释规则,探讨A P T T纠正试验在鉴别A P T T延长原因中的应用价值,推进A P T T纠正试验的标准化和临床普及㊂1资料与方法1.1一般资料选取2019年1月至12月本院收治的A P T T延长㊁凝血酶原时间(P T)㊁凝血酶时间(T T)㊁纤维蛋白原(F g)正常的患者共115例㊂其中临床确诊为单纯内源凝血因子缺乏(简称单纯因子缺乏)的患者68例,各种不同类型凝血抑制物阳性患者47例㊂凝血抑制物阳性患者中,抗磷脂抗体阳性患者29例,包括狼疮抗凝物(L A)阳性25例,抗心磷脂抗体阳性4例;Ⅷ因子抗体阳性患者18例㊂所有患者均符合临床及实验室诊断标准㊂本研究所使用的标本均为本实验室进行凝血试验后剩余的枸橼酸钠抗凝血标本,排除有分析前误差及行抗凝治疗的患者标本㊂所有标本均进行A P T T纠正试验检测㊂1.2仪器与试剂日本S y s m e x C S-5100全自动凝血分析仪,试剂均为配套产品,包括A P T T检测试剂盒(凝固法)和氯化钙㊂1.3方法1.3.1制备正常血浆选取至少20份健康者的血浆混合,要求:A P T T结果接近参考范围(28~32s)的㊃794㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第4期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.4*基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(81602702)㊂ә通信作者,E-m a i l:s h e n h a n10366@s i n a.c o m㊂本文引用格式:王贤,夏茂,夏永泉,等A P T T纠正试验检测方法的建立及临床应用[J].国际检验医学杂志,2021,42(4):497-500.中间值;避免选择妊娠妇女的血浆标本㊂混合后的正常血浆进行凝血因子(Ⅰ㊁Ⅱ㊁Ⅴ㊁Ⅶ㊁Ⅷ㊁Ⅸ㊁Ⅹ㊁Ⅺ㊁Ⅻ)活性和血小板计数的检测,要求:所有凝血因子水平要接近100%;血浆中血小板计数<10ˑ109/L㊂制备好的正常血浆分装后于-70ħ冷冻保存㊂1.3.2即刻试验取3支试管(1㊁2㊁3号),依次放入患者血浆㊁正常血浆㊁混合血浆(患者血浆与正常血浆1ʒ1混合),上机检测A P T T,测得的结果分别标记为A㊁B㊁C,计算R o s n e r指数(R I)=[(A-B)/C]ˑ100%㊂1.3.3温育试验即刻试验完成后,将混合血浆全部放入37ħ水浴温育2h,结束后再取1支试管(4号),放入温育后的混合血浆,上机检测3㊁4号管的A P T T,测得的结果分别标为D㊁E,计算温育试验检测管D与对照管E之间的差值(温育差)㊂1.4统计学处理采用S P S S17.0软件进行统计分析㊂计量资料呈非正态分布,以M(P25~P75)表示,组间比较采用秩和检验(Z检验)㊂采用非参数法构建受试者工作特征曲线(R O C曲线),确立诊断界值, R O C曲线间的比较采用Z检验㊂计数资料以百分率或频数表示,组间比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1建立A P T T纠正试验中即刻试验R I的诊断界值凝血抑制物阳性患者的即刻试验R I[18.7% (6.7%~24.9%)]高于单纯因子缺乏患者[3.8% (1.6%~9.8%)],差异有统计学意义(Z=-8.847, P<0.001);绘制即刻试验R I用于凝血抑制物阳性与单纯因子缺乏患者鉴别诊断的R O C曲线,曲线下面积(A U C)为0.829(标准差为0.03),见图1㊂抗磷脂抗体患者的即刻试验R I[21.4%(11.2%~24.9%)]高于单纯因子缺乏患者[3.8%(1.6%~9.8%)],差异有统计学意义(Z=-11.484,P<0.001);绘制即刻试验R I用于抗磷脂抗体阳性与单纯因子缺乏患者鉴别诊断的R O C曲线,A U C为0.930(标准差为0.02),见图2㊂两条R O C曲线的A U C比较,差异有统计学意义(Z=2.801,P=0.002),即刻试验R I用于鉴别凝血抗磷脂抗体阳性与单纯因子缺乏的诊断效能比用于鉴别凝血抗磷脂抗体阳性与单纯因子缺乏的诊断效率高㊂即刻试验R I用于鉴别抗磷脂抗体与单纯因子缺乏患者的最佳诊断界值为11.0%,灵敏度为85.7%,特异度91.2%㊂即刻试验R I用于鉴别诊断的结果分析:68例单纯因子缺乏患者中,66例A P T T纠正试验结果显示为被纠正,纠正率97.1%;18例Ⅷ因子抗体阳性患者中,8例被纠正,纠正率44.4%;29例抗磷脂抗体阳性患者中,5例被纠正,这5例均为低滴度L A阳性患者,L A标准化比值依次为1.2㊁1.2㊁1.3㊁1.5㊁1.5㊂单纯因子缺乏患者㊁Ⅷ因子抗体阳性患者㊁抗磷脂抗体阳性患者的纠正率依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)㊂图1即刻试验R I用于鉴别凝血抑制物阳性与单纯因子缺乏患者的R O C曲线图2即刻试验R I用于鉴别抗磷脂抗体阳性与单纯因子缺乏患者的R O C曲线2.2建立A P T T纠正试验中温育差的诊断界值 Ⅷ因子抗体阳性患者的温育差[6.5(2.6~19.4)s]与Ⅷ因子抗体阴性患者[0.6(-1.3~2.7)s]相比,明显升高,差异有统计学意义(Z=-6.803,P<0.001)㊂绘制A P T T纠正试验中温育差用于鉴别Ⅷ因子抗体阳性与阴性患者的R O C曲线,A U C为0.927(标准差为0.02),最佳诊断界值为3s,灵敏度为85.7%,特异度为89.8%,见图3㊂2.3A P T T纠正试验结果判定规则的建立及应用根据A P T T纠正试验中即刻R I㊁温育差将患者分为3类:单纯因子缺乏㊁非时间依赖性抑制物(本研究中为抗磷脂抗体)阳性㊁时间依赖性抑制物(本研究中为Ⅷ因子抗体)阳性,见表1㊂A P T T纠正试验结果判定的正确率为89.6%㊃894㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第4期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.4(103/115),见表2㊂单纯因子缺乏组中,4例患者判定错误;其中2例被误判为时间依赖性抑制物阳性,温育差接近诊断界值,分别为3.0㊁3.3s;2例被误判为非时间依赖性抑制物阳性,即刻R I分别为11.2%㊁11.8%㊂抗磷脂抗体阳性组中,5例患者被误判为单纯因子缺乏,均为低滴度L A阳性患者;2例被判定为时间依赖性抑制物阳性,温育差分别为6.1㊁4.4s;Ⅷ因子抗体阳性组中,3例患者被误判为单纯因子缺乏,温育差分别为2.6㊁2.9㊁2.9s,Ⅷ因子抗体滴度分别为0.9㊁1.2㊁1.0B U/m L ㊂图3温育差用于鉴别Ⅷ因子抗体阳性与阴性患者的R O C曲线表1 A P T T纠正试验的结果判定规则即刻R I(%)温育差(s)结果判定<11.0<3单纯因子缺乏<11.0ȡ3时间依赖性抑制物阳性ȡ11.0ȡ3时间依赖性抑制物阳性ȡ11.0<3非时间依赖性抑制物阳性表2 A P T T纠正试验的判定结果分析(n)组别单纯因子缺乏时间依赖性抑制物阳性非时间依赖性抑制物阳性合计单纯因子缺乏组642268抗磷脂抗体阳性组522229Ⅷ因子抗体阳性组315018合计721924115 3讨论临床引起A P T T延长的原因主要有两大类,一类是凝血因子缺乏,一类是凝血抑制物存在,其中凝血抑制物主要有抗磷脂抗体和凝血因子抗体两类,根据反应特性又可以分为时间依赖性抑制物和非时间依赖性抑制物[3],其中时间依赖性抑制物中最常见的是Ⅷ因子抗体,非时间依赖性抑制物最常见的是抗磷脂抗体㊂A P T T延长原因不同患者的临床治疗方案差异很大:(1)凝血因子缺乏容易增加患者的出血风险,治疗上需要补充相应的凝血因子㊁解决凝血因子缺乏的原因;(2)Ⅷ因子抗体会抑制Ⅷ因子的活性,容易引起出血,加重血友病A患者的病情,使其原有治疗手段失效[5];(3)抗磷脂类抗体因为与磷脂结合,会干扰A P T T检测和基于A P T T试验的凝血因子检测,造成A P T T假性延长㊁凝血因子假性减少,抗磷脂抗体对于临床而言,更多的是增加血栓发生风险,而不是出血风险[6]㊂A P T T纠正试验是有助于临床判定A P T T延长原因的筛选试验,操作简单㊁耗时短且易于开展,为治疗方案的制订提供参考㊂目前,A P T T纠正试验无论是操作流程还是解释规则都没有统一的共识,缺乏标准化,各实验室间都存在很大的差异,所选取的诊断界值灵敏度和特异度差异也很大[7-10],限制了A P T T纠正试验的临床应用,尤其是在基层医院临床实验室㊂本研究确立了A P T T纠正试验的即刻R I和温育差的诊断界值,建立了A P T T纠正试验的完整解释规则,并将其应用于临床A P T T延长原因的筛查㊂本研究采用建立的A P T T纠正试验方法和解释规则进行判定,正确率为89.6%,说明本研究建立的A P T T纠正试验方法可以有效地用于临床A P T T延长原因的筛查,为进一步推进A P T T纠正试验的标准化提供了依据㊂本研究中,4例被误判的单纯因子缺乏患者,2例的即刻R I,另2例的温育差均接近诊断界值;被误判为单纯因子缺乏的患者中,5例为低滴度L A阳性患者,即刻R I接近诊断界值,3例为低滴度Ⅷ因子抗体,温育差接近诊断界值㊂笔者认为当A P T T纠正试验在即刻R I㊁温育差检测值接近诊断界值时,结果判定的准确性下降,对于低滴度的抗磷脂抗体和低滴度的Ⅷ因子抗体阳性的患者,容易出现假阴性结果,导致漏诊㊂A P T T纠正试验在临床的应用中,对于这种现象应加以重视[11-13]㊂本研究认为,A P T T纠正试验稀释效应造成了低滴度凝血抑制物检测的假阴性[2,11],英国血液学标准委员会指南(B C S H2012)中指出稀释效应可导致弱阳性L A检测结果出现假阴性,即使1ʒ1混合试验结果阴性,筛选试验和确证试验检测结果呈阳性时,仍应判定结果为阳性㊂美国临床和实验室标准协会指南(C L S I2014)则完全更改了L A的检测流程(筛选试验-确证试验-1ʒ1混合试验)并指出只有在筛选试验和确证试验结果难以解释时再进行1ʒ1混合试验[5]㊂本研究结果与上述理论一致,A P T T纠正试验对于低滴度L A阳性患者会产生假阴性的结果㊂Ⅷ因子抗体有两种类型,一种是来自于血友病A㊃994㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第4期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.4患者的同型抗体,一种是获得性血友病患者的自身抗体,它们与Ⅷ因子的免疫反应均为时间依赖性,是一种慢反应性物质,在37ħ2h才能对Ⅷ因子达到完全的抑制[13]㊂本研究中的18例Ⅷ因子抗体阳性患者中,仅有10例被A P T T纠正试验中的即刻试验判定为未被纠正,8例被判断为被纠正,纠正率达44.4%,这与Ⅷ因子反应特性相符合,说明A P T T纠正试验仅凭即刻试验无法有效对Ⅷ因子抗体等时间依赖性抑制物阳性和单纯因子缺乏进行鉴别[14]㊂有文献报道,有10%~15%的L A也会呈时间㊁温度依赖性,因此纠正试验的温育试验并不能完全鉴别Ⅷ因子抗体和抗磷脂抗体阳性的患者[15]㊂本研究中,2例L A阳性患者被判定为时间依赖性抑制物阳性,温育差分别为6.1s和4.4s,猜测可能是患者体内有部分L A为时间依赖性慢反应抑制物,与文献[15]报道相符㊂这提示,单凭A P T T纠正试验无法完全鉴别抗磷脂抗体与Ⅷ因子抗体,必要时需要增加其他实验室检测项目来辅助结果的判定㊂综上所述,A P T T纠正试验是临床判定A P T T 延长原因,检测凝血抑制物的重要筛查试验㊂建立完整的操作流程和解释规则是A P T T纠正试验开展的关键㊂临床在根据A P T T纠正试验的检测数据进行结果判定时,要充分了解它的优势和局限性,才能得出准确的结论㊂参考文献[1]郭梦妮,华宝来,赵永强,等.北京协和医院住院患者凝血筛查试验异常原因的分析[J].血栓与止血学,2016,22(5):486-490.[2]B A R B O S A A C N,MO N T A L V A O S A L,B A R B O S A KG N,e t a l.P r o l o n g e d A P T T o f u n k n o w n e t i o l o g y:a s y s-t e m a t i c e v a l u a t i o n o f c a u s e s a n d l a b o r a t o r y r e s o u r c e u s e i n a n o u t p a t i e n t h e m o s t a s i s a c a d e m i c u n i t[J].R e s P r a c tT h r o m b H a e m o s t,2019,3(4):749-757.[3]T A N G N,C H E N Y,L I D,e t a l.D e t e r m i n i n g t h e c u t o f f v a l u e o f t h e A P T T m i x i n g t e s t f o r f a c t o rⅧi n h i b i t o r[J].C l i n C h e m L a b M e d,2019,57(5):88-90.[4]K UMA N O O,I E K O M,N A I T O S,e t a l.N e w f o r m u l a sf o r m i x i ng t e s t t o d i s c r i m i n a t e b e t w e e n l u p u s a n t i c o a g u-l a n t a n d a c q u i r e dh e m o p hi l i a A[J].T h r o m b R e s,2016,143(1):53-57.[5]杨仁池.凝血因子Ⅷ/Ⅸ抑制物诊断与治疗中国指南(2018年版)解读[J].临床血液学杂志,2019,1(32):6-12.[6]寿玮龄.狼疮抗凝物测定方法的优化选择及生物变异度研究[D].北京:北京协和医学院,2015.[7]K UMA N O O,MO O R E G W.R u l i n g o u t l u p u s a n t i c o a g u-l a n t s w i t h m i x i n g t e s t-s p e c i f i c c u t o f f a s s e s s m e n t a n d t h e i n d e x o f c i r c u l a t i n g a n t i c o a g u l a n t[J].R e s P r a c t T h r o m bH a e m o s t,2019,3(4):695-703.[8]E S M E D E R E E R E N S,K A R A K U K C U C,C I R A C I M Z,e t a l.A c t i v a t e d p a r t i a l t h r o m b o p l a s t i n t i m e d e r i v a t i v e c u r v e s:h e l pf u l d i ag n o s t i c t o o l i n m i x i n g t e s t i n t e r p r e t a-t i o n[J].B l o o d C o a g u l F i b r i n o l y s i s,2018,29(4):410-414.[9]A s a i H,S h i r a y a m a R,O s h i d a K,e t a l.A p e d i a t r i c c a s e o fa c q u i r e d h e m o p h i l i a A:t h e u s e f u l n e s s o f t h e a c t i v a t e d p a r t i a l t h r o mb o p l a s t i n t i m e(A P T T)c r o s s-m i x i n g t e s tf o r e a r l y d i ag n o s i s[J].J U O E H,2018,40(4):331-337.[10]K UMA N O O,MO O R E G W.L u p u s a n t i c o a g u l a n t m i x-i n g t e s t s f o r m u l t i p l e r e a g e n t s a r e m o r e s e n s i t i v e i f i n t e r-p r e t e d w i t h a m i x i n g t e s t-s p e c i f i c c u t-o f f t h a n i n d e x o f c i r c u l a t i n g a n t i c o a g u l a n t[J].R e s P r a c t T h r o m b H a e m-o s t,2017,2(1):105-113.[11]李刚,陈振萍,唐凌,等.血浆纠正试验差值在血友病A患儿抑制物中的诊断价值[J].检验医学与临床,2015,12(23):3451-3452.[12]MA T S UMO T O T,N O G AM I K,S H I MA M.A c o m b i n e da p p r o a c h u s i n g g l ob a lc o a g u l a t i o n a s s a y s q u i c k l yd i f fe r e n-t i a t e s c o a g u l a t i o n d i s o r d e r s w i t h p r o l o n g e d a P T T a n d l o w l e v e l s of FⅧa c t i v i t y[J].I n t J H e m a t o l,2017,105(2): 174-183.[13]李刚,陈振萍,甄英姿,等.血友病A患儿血浆纠正实验与凝血因子Ⅷ抑制物相关性研究[J].中华检验医学杂志,2015,38(7):480-483.[14]K E R S HAW G.D e t e c t i o n a n d m e a s u r e m e n t o f f a c t o r i n-h i b i t o r s[J].M e t h o d s M o l B i o l,2017,1646:295-304.[15]K E R S HAW G,O R E L L A N A D.M i x i n g t e s t s:d i a g n o s t i ca i d e s i n t h e i n v e s t i g a t i o n o f p r o l o n g e d p r o t h r o mb i n t i m e s a n d ac t i v a t ed p a r t i a l t h r o m b o p l a s t i n t i me s[J].S e m i nT h r o m b H e m o s t,2013,39(3):283-290.(收稿日期:2020-06-22修回日期:2020-11-19)㊃005㊃国际检验医学杂志2021年2月第42卷第4期I n t J L a b M e d,F e b r u a r y2021,V o l.42,N o.4。
纠正试验
35”
70”
60”
判断
因子缺乏 时间依赖抑制物， 即刻反应抑制物，
eg.FVIII抗体
eg LA
24 de noviembre de 2015
19
解释“correction”
24 de noviembre de 2015
20
解释“correction”
CLSI
1. 纠正 < X + 2,3 SD 2. 纠正 ≤ NPP + 5s 3. 纠正 ≤ Rosner Index
31
24 de noviembre de 2015
32
?
PK/HMWK
In case of the HMWK the prolonged APTT will not have the same correction (much less) with the 20 minutes incubation time for the APTT.
1:1纠正试验
结论
因子缺乏 即刻反应抑制物 时间/温度依赖抑制物
即刻纠正实验 孵育纠正实验
纠正
纠正
不纠正
不纠正
部分纠正
不纠正
24 de noviembre de 2015
18
测试样本
APTT结果
NPP（B）
30”
30”
30”
患者标本（A）
90”
90”
90”
A+B 1:1 即刻
35”
48”
60”
A+B 1:1 孵育
维生素K缺乏/抗凝治疗
在口服抗凝剂治疗下，因子的合成受阻（II/VII/IX/X ），PT明显延长
APTT操作规程一例(检验SOP)
APTT操作规程一例活化部分凝血活酶时间测定（APTT）一、项目名称：活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time, APTT）二、检验方法名称：凝结法三、方法学原理：在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后，加入试剂。
加入试剂后，采用波长为660nm 的光照射样本。
凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。
从散射光光强度的测定，可以做出凝血曲线，通过Percentage Detection Method方法求得凝血时间。
四、方法学溯源：37℃条件下，以白陶土激活因子Ⅻ和Ⅺ，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板，在Ca²+参与下，观察贫血小板血浆凝固所需时间，即为活化部分凝血活酶时间，是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验。
五、仪器：（一）型号：Sysmex CA—1500自动血液凝血分析仪（二）分析和计算参数：1．处理量：约120个测试/小时2．所需样本量：50μl3．检验时间：在最长检验时间之内测出结果，典型最长检验时间：190秒4．重复性：CV≤2%六、试剂及配套品：（一）试剂：1. 肌动蛋白活化Cephaloplastin试剂（Dade® Actin® Activated Cephaloplastin Reagent）（1）商标：德灵（DADE BEHRING）（2）包装规格：Pack for 10×4ml（3）代码：B4218 G1 E0533 (0450) H/W（4）成分：脑磷脂（从干燥兔脑粉中提取）加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0×10-4M的鞣酸溶液。
2. 氯化钙溶液（Calcium Chloride Solution）（1）商标：德灵（DADE BEHRING）（2）包装规格：Pack for 6×15ml（3）代码：ORHO 33（4）成分：0.025mol/L的氯化钙溶液3．佛罗那巴比妥缓冲液（Dade® Owren'S Veronal Buffer）（1）商标：德灵（DADE BEHRING）（2）包装规格：Pack for 10×10ml（3）代码：B4234 G25 E0533 （0461）W（4）成分：1）2.84×10­²M的巴比妥钠(sodium barbital)2）1.25×10­¹M的氯化钠(sodium chloride)3) PH 7.35±0.14. 清洗液（Cleaning）2%次氯酸钠溶液（自配）（二）配套品：1.标准血浆（Standard Human Plasma）(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）(2) 代码：No. ORKL2.校准质控血浆（Ci-Trol®）(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）(2) 代码：Level 1, B4244-10Level 2, B4244-20Level 3, B4244-303.质控血浆（Control Plasma）(1) 商标：太平洋（Pacific Hemostasis）(2) 代码及规格：Level 1 (Normal), 100595 10×1mlLevel 2 (Abnormal), 100596 10×1mlLevel 3 (Abnormal), 100597 10×1ml七、操作步骤：（一）开机：开机前，先打开连机的打印机。
APTT纠正试验
关于APTT纠正试验的说明
测定原理：将正常混合血浆（20份结果正常的标本）与患者血浆1：1混合，在混合后立即以及在37℃孵育1小时后再次测定APTT，观察混合血浆的检测结果是否被纠正到APTT的正常对照值附近，以协助判断APTT延长的可能原因。
结果的判读，推荐的检测流程如下图：
APTT延长，即时的纠正试验能够纠正到正常对照值附近，提示因子缺乏，单纯APTT延长提示内源性因子缺乏，若PT同时延长，还需要考虑外源性因子以及共同通路因子的缺乏，若APTT延长同时缺乏出血的症状，需要警惕Ⅻ因子，PK（prekallikrein）的缺陷。
APTT延长，即时的纠正试验不能够纠正到正常对照值附近，提示可能存在抗凝物，以狼疮抗凝物（LACs）常见，一般不伴有出血症状，可以进一步推荐行狼疮抗凝物相关检测。
APTT延长，孵育纠正试验不能够纠正到正常对照值附近：提示可能存在时间/温度依赖性抗凝物，以Ⅷ因子抗体可能性大，可进一步行因子活性及因子抗体检测。
进行APTT纠正试验之前，若TT延长，需要确认是否存在肝素的干扰
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目测即可轻松看懂APTT纠正试验结果
⽬测即可轻松看懂APTT纠正试验结果作者：邹志平唐宁前⾔：APTT纠正试验作为当APTT延长时的初步鉴别试验，⼴泛应⽤于临床实验室，但始终存在未标准化、操作繁琐、结果判断对⼈员要求较⾼等问题，本期我们介绍⼀种通过⾎凝仪⾃动按⽐例混合标本、以图形判读结果的APTT纠正试验新⽅法，希望能推动该试验更为准确、易⽤。
⽬测法与Rosner指数在 APTT纠正试验结果判读上的⽐较当凝⾎检查发现异常时，可以⽤混合纠正试验判断异常是由凝⾎因⼦低下/缺乏，还是由抑制剂（如狼疮抗凝物、凝⾎因⼦抑制物）引起的。
在⽇本，临床实验室会按不同⽐例混合患者⾎浆与正常⾎浆后检测APTT，把结果做成图表，从视觉上判断『上凸』或是『下凹』[1,2]。
此外，国际⾎栓与⽌⾎学会（ISTH-SSC）推荐检测患者⾎浆、正常⾎浆、两者的1：1混合⾎浆三点，使⽤结果的⽐值（Rosner index）来进⾏评价[3,4] 。
※Rosnerindex=(1:1混合⾎浆的APTT秒数-正常⾎浆的APTT秒数)/患者⾎浆的APTT秒数×100(%)Rosnerindex>15: 抑制剂型、<15：因⼦缺乏型积⽔医疗科技（中国）有限公司与华中科技⼤学同济医院检验科合作，收集狼疮抗凝物（LA）阳性标本、乏因⼦标本、VIII因⼦抑制物标本，⽤两种⽅法进⾏检测判读，⽐较两者的灵敏度、特异性和⼀致程度。
LA阳性标本由DRVVT和SCT检测并确认，抑制物标本由改良Bethesda法确认。
实验流程：1、标本：收集20例正常⼈标本制作正常混合⾎浆；已确认的狼疮抗凝物（LA）阳性标本、內源因⼦缺乏标本、VIII因⼦抑制物阳性标本各20例；2、即时型纠正试验：⽇本积⽔CP2000⾎凝仪⾃动进⾏即时型混合纠正实验，⽆需⼈⼯配制。
3、延迟型纠正试验：需⼿⼯配制后温浴2h后再进⾏APTT检测，如下图所⽰。
即时型（仪器⾃动）被检⾎浆⽐例0%20%50%80%100%504025100正常混合⾎浆（ul）待测样本（ul）010254050延迟型（⼿⼯）被检⾎浆⽐例0%20%50%80%100%200160100400正常混合⾎浆（ul）待测样本（ul）0401001602004、绘制图形（下图举例为EXCEL绘制，仪器可⾃⾏绘制及判定）模式⼀(狼疮抗凝物阳性患者标本)：模式⼆（FVIII抑制物阳性患者标本）：模式三（⽆抑制物的FVIII缺乏患者标本）：仪器实例展⽰（⽇本积⽔CP2000⾎凝仪的升级款CP3000的软件界⾯）PS：该图与上⽂EXCEL绘制图形为左右镜像。
APTT标准操作流程
活化部分凝血活酶时间标准操作流程目录1 目的2 测试原理3 产品信息4 试剂配制5 试剂保存和稳定性6 预防和警告7 样本收集和准备8 检测需要但试剂盒中未提供的耗材9 质量控制10 操作流程11 结果12 结果解释13 程序局限性14 预期结果15 性能特征16 参考文献1 目的此程序提供在ACL™ 8000，ACL™ 9000上，用于活化部分凝血活酶时间（APPT）测试的指导。
该测试用于内源性凝血途径的评估、活化部分凝血活酶时间替代检验和肝素治疗监测。
2 测试原理血浆样本与适量的磷脂、以及能激活内源性凝血途径的带负电荷的触酶剂进行共同孵育，在37°C 孵育一定时间后，加入钙离子，启动凝血过程，并记录凝固形成所需的时间。
3 产品信息APTT试剂盒内包含：，0.020 mol/L (P/N )HemosIL SynthASil 试剂和氯化钙CaCl2APTT试剂和氯化钙试剂以液体形式存在。
更多详细信息请参阅试剂盒内说明书。
4试剂配制SynthASil: 每瓶APTT试剂要在15-25˚C 环境下平衡至少15分钟，并在用前充分混匀。
(试剂包装内):可直接使用。
CaCl25 试剂保存和稳定性未开瓶的试剂可保存在2-8 o C至试剂瓶上标注的有效期。
SynthASil：开瓶试剂在原瓶内2-8°C环境下可稳定30天，在15°C ACL®系统上稳定3天。
切勿冻存。
CaCl（SynthASil）:开瓶试剂在2-30°C环境中可稳定30天。
2为了最佳试剂保存，建议不使用时，将试剂从仪器系统取出，使用原瓶，保存于2-8 o C。
6 预防和警告SynthASil：避免与皮肤和眼睛接触(S 24/25)。
不可直接倒入排水沟(S 29)。
需穿着相应的防护服(S 36)。
SynthASil包装中所含的氯化钙试剂因含有50 ppm 汞离子（来源于一种消毒液原料），应当慎重处理。
aptt纠正试验原理
aptt纠正试验原理APTT纠正试验原理什么是APTT纠正试验•APTT (Activated Partial Thromboplastin Time) 是用于评估血液凝血功能的一种常用实验方法。
在一些凝血异常或出血疾病的诊断与治疗过程中，APTT纠正试验可以提供重要的信息。
APTT纠正试验的原理•APTT纠正试验的原理是通过在标准APTT试验中加入不同的试剂来评估凝血因子的活性和功能。
这些试剂包括：–钙离子：血液中的凝血因子在钙离子的存在下才能正常发挥作用，所以钙离子是必需的。
–磷脂质：磷脂质是凝血酶形成的基质，可以起到催化作用。
–补体蛋白：补体蛋白可以增强血友病等凝血因子缺乏病例中凝血酶形成的效率。
APTT纠正试验的步骤1.获取患者的血液样本，并离心将血小板和红细胞分离。
2.加入适量的钙离子和磷脂质，开始计时。
3.加入凝血活酶，观察血浆的凝固时间。
4.根据试验结果，判断该患者的凝血功能是否正常。
APTT纠正试验的意义•APTT纠正试验可以用于检测或监测一系列凝血因子的活性。
其中一些重要的应用包括：–诊断和监测出血疾病：通过测量APTT纠正试验的结果，可以判断出血病变的类型和严重程度。
–血友病治疗监测：APTT纠正试验可以用于监测血友病患者的凝血因子替代治疗的疗效。
–抗凝血药物监测：一些抗凝血药物（如肝素和华法林）可以延长APTT纠正试验的时间，用于监测血液的抗凝血效果。
–外科手术风险评估：通过测量APTT纠正试验的结果，可以评估手术患者的凝血功能，确定手术风险。
结论•APTT纠正试验是一种常用的方法，用于评估患者的凝血功能。
通过添加不同的试剂来观察凝固时间，可以判断凝血因子的活性和功能。
这个试验在临床上具有重要意义，可以用于诊断和监测出血疾病，并评估抗凝血药物治疗的疗效。
APTT纠正试验的缺点和注意事项虽然APTT纠正试验在诊断和监测凝血功能方面具有重要意义，但也存在一些缺点和需要注意的事项：1.结果的解读需要综合其他临床信息：APTT纠正试验的结果不能单独作为凝血功能正常与否的唯一标准，需要结合患者的临床病史、其他凝血功能指标等综合判断。
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A P T T纠正实验
什么是纠正试验？
纠正试验（也称混合试验或mixing study）是通过将患者的血浆与正常人的混合血浆按照比例混合后，重新检测相关检测项目。
这个检测项目主要是针对于常规凝血检测项目（如APTT，也可应用于PT、TT）的检测特点而设定的，常规的APTT检测结果只反应了体内50%的内源性凝血因子的活性，也就是说只有体内凝血因子降低>50%（不同试剂检测差异较大，部分试剂可检测出低于正常水平15%~30%血浆凝血因子异常）时，其检测时间才延长（此时临床上出血风险增高）。
患者血浆在加入混合正常人血浆100%的凝血因子，使混合后血浆中含有>50%的凝血因子，可使检测结果纠正至正常或明显短缩。
什么时候需要启动纠正试验？
目前没有统一的共识。
这也是临床医生不做APTT纠正试验的原因之一。
建议APTT结果延长，且无明确影响结果延长的因素时，应启动纠正试验。
当前的教材[2]将APTT时间超过正常对照10秒、PT、TT超过3秒定义为延长。
需要排除的常见原因：使用肝素制剂、血友病史、VWD病史。
怎么做纠正试验？
国内《全国临床检验操作规程（第二版、第三版、第四版）》和检验教材只谈了结果意义确未描述具体操作方法，出现了临床医生想检测纠正试验但检验科不会做的尴尬局面。
具体操作方法如下：
1、制备正常混合血浆国外[3]建议至少20人份正常人制备正常混合血浆。
改至：全国临床检验操作规程(第4版)2015.3 第四章血栓与止血 P97 图1-4-1
为什么APTT延长时，不直接做凝血因子测定呢？
一方面，APTT纠正试验即简单又具有可操作性。
实验室常开展了APTT 检测，但可直接检测因子的实验室较少[6]。
需要时，再进一步检测确认。
另一方面，凝血因子仅是APTT延长的原因之一，更常见是非凝血因子缺陷所致的，例如狼疮抗凝物、因子抑制物、vWF等。
APTT纠正试验也可以作为血友病患者疗效不佳（产生因子抑制物）判断手段之一。
因此，凝血因子检测并不能代替APTT纠正试验。
综上所述，APTT纠正试验是指明APTT延长原因简单而实用工具。
参考文献：
[1] Choi SH, Rambally S, Shen YM. Mixing study for evaluation of abnormal coagulation testing [J]. Jama,2016,316(20):2146-2147.
[2] 熊立凡, 刘成玉. 临床检测基础（第四版） [J]. 人民卫生出版社, 2007,8):70-75.
[3] Kershaw G, Orellana D. Mixing tests:Diagnostic aides in the investigation of prolonged prothrombin times andactivated partial thromboplastin times [J]. Seminars in thrombosis andhemostasis, 2013,39(3):283-290.
[4] 吴竞生. 凝血因子ⅷ抑制物的诊治进展[J]. 血栓与止血学,2013,02(19).
[5] 中华医学会血液学分会血栓与止血学组. 血友病诊断与治疗中国专家共识(2013年版) [J]. 中华血液学杂志, 2013,05(34).
[6] 丛玉隆. 国内凝血试验常规检查的热点话题与思考 [J]. 中华检验医学杂志, 2013,01(36):18-21.。