过氧化氢酶米氏常数的测定
过氧化氢酶米氏常数的测定
过氧化氢酶米氏常数的测定一、实验目的了解并掌握米氏常数的意义和测定方法二、实验原理H2O2被过氧化氢酶分解出H2O和O2，未分解的H2O2用KMnO4在酸性环境中滴定，根据反应前后H2O2的浓度差可求出反应速度。
2H2O2 = 2H2O + O22KMnO4 + 5H2O2 + 3H2SO4 = 2MnSO4 + K2SO4 + 5O2↑ + 8H2O本实验由马铃薯提供过氧化氢酶。
在保持恒定的条件下，用相同浓度的过氧化氢酶催化不同浓度的H2O2分解。
在一定限度内，酶促反应速度与H2O2浓度成正比。
用双倒数作图法(即以1/v对1/[S]作图)可求得过氧化氢酶的Km值。
三、实验器材锥形瓶(6个) 吸管、酸式滴定管四、实验试剂1、0.02mol/L 磷酸缓冲液(pH=7)2、0.004 mol/L KMnO4(需标定)3、0.05 mol/L H2O2(需标定)4、25% H2SO4五、实验操作1、酶液的提取：称取马铃薯（去皮）5克，加0.02mol/L 磷酸缓冲液10mL，再加少量海砂，研磨成匀浆，离心(3000r/ min，10min)，上清液即为酶液。
2、滴定：取干燥锥形瓶6只，按下表顺序加入试剂：先加好0.05mol/L H2O2及蒸馏水，加酶液后立即混合，依次记录各瓶的起始反应时间。
各瓶时间达5min时立即加2.0mL 25% H2SO4终止反应，充分混匀。
用0.004 mol/L KMnO4滴定各瓶中剩余的H2O2至微红色，记录消耗的KMnO4体积。
六、实验计算分别求出1─5瓶的底物浓度[S]和相应的反应速度v。
C1V110[S] =5 ∕2C2V2C1V1–v =式中 [S]：为底物物质的量浓度(mol/L)C1：为H2O2物质的的量浓度(mol/L)V1：为H2O2的体积(mL)10：反应的总体积v：反应速度(mmol/min)C2: KMnO4物质的量浓度(mol/L)V2：KMnO4的体积(mL)以1/v对1/[S]作图求出Km。
过氧化氢酶动力学常数测定
过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名: 赵家熙指导教师: 谭志文实验室: 6503 组员:?章恒炯 ? ? 成绩: 第三部分:实验记录与分析一、酶活力测定,一,原始数据1.样品原始质量:5.032g2.标定数据:,1,KMnO质量数及配制:158 4,2,NaCO质量数:134 224,3,标定数据:0.02mol/L,4,KMnO实际浓度:0.019mol/L 43.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液,ml,:实验,1,0.65实验,2,0.50对照,1,1.45对照,2,1.30,二,结果计算1(换算系数,1mL KMnO溶液相当于多少mg HO, 4221.72.样品酶活计算,每克鲜重样品1min内分解HO的毫克数表示:mg 22HO/g•min, 22().ABV,，，T171酶活(mgH2O2/g?min)= FWVt，，,A-B,=0.8 V=20.25 FW=5.032 V=2.5ml t=10min T1酶活(mgH2O2/g?min)=0.218二、动力学常数的测定,一,原始数据编号1 2 3 4 5 消耗的0.10 0.10 0.40 0.30 0.30 KMnO,mL, 4,二,求出各管反应前的底物浓度[S]和反应速度V 00编号1 2 3 4 50.005 0.0067 0.0082 0.0125 0.0250 [S],mol/L,00.0099 0.0124 0.0126 0.0221 0.0471 V,mmol/min,0,三,以1/V对1/[S]作图,用excel作图, 001/s 200 149.2 121.9 80 40 1/v 111.1 80.6 79.3 45.1 21.2,四,求出Km,mol/L,和Vmax,mmol/min,1K1m,，如,三,中图 vv[S]vmaxmaxy=0.5572x+1.5829 x=0时 y=1/Vmaxy=0时 x=-1/Km Km=0.35 Vmax=0.63第四部分:课后研讨题 1.总结本实验操作过程的注意事项。
过氧化氢酶米氏常数
过氧化氢酶米氏常数篇一：过氧化氢酶动力学常数测定实验项目2：过氧化氢酶活性和动力学常数的测定姓名：赵家熙指导教师：谭志文实验室：6503组员：①章恒炯②③成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：5.032g2校准数据：（1）kmno4质量数及配制：158（2）na2c2o4质量数：134（3）标定数据：0.02mol/l（4）高锰酸钾的实际浓度：0.019mol/l3样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液（ml）：实验（1）0.65实验（2）0.50对照（1）1.45对照（2）1.30（二）结果计算1.换算系数（mgh2o2相当于1mlkmno4溶液的量）1.72.样品酶活性的计算（每克鲜重样品1min内分解的H2O2 mg，以mgh2o2/g？Min表示）(a?b)?vt?1.7fw?v1?t酶活(mgh2o2/gmin)=酶活性（mgh2o2/gmin）=0.218（a-b）=0.8vt=20.25fw=5.032v1=2.5mlt=10min二、动力学常数的测定（I）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[s]0和反应速度v0（三）以1/v0对1/[s]0作图（用excel作图）1/s1/v200111.1149.280.6121.979.3八千零四十五点一4021.2（四）计算km（mol/L）和Vmax（mmol/min）km11??vv[s]v如（三）中图麦克斯y=0.5572x+1.5829x=0时y=1/vmax当y=0时，x=-1/kmkm=0.35vmax=0.63第四部分：课后讨论问题1.总结本实验操作过程的注意事项。
1酶的提取和储存一般在0-4℃进行。
2每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。
3各反应瓶的滴定终点微红色为同一标准。
4使用前，应检查滴定管是否泄漏，并在滴定过程中逐滴添加滴定管。
2.影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些?1.温度过高或过低都会降低过氧化氢酶的活性。
过氧化氢酶动力学常数测定
过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名: 赵家熙指导教师: 谭志文实验室: 6503 组员:?章恒炯 ? ? 成绩: 第三部分:实验记录与分析一、酶活力测定,一,原始数据1.样品原始质量:5.032g2.标定数据:,1,KMnO质量数及配制:158 4,2,NaCO质量数:134 224,3,标定数据:0.02mol/L,4,KMnO实际浓度:0.019mol/L 43.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液,ml,:实验,1,0.65实验,2,0.50对照,1,1.45对照,2,1.30,二,结果计算1(换算系数,1mL KMnO溶液相当于多少mg HO, 4221.72.样品酶活计算,每克鲜重样品1min内分解HO的毫克数表示:mg 22HO/g•min, 22().ABV,，，T171酶活(mgH2O2/g?min)= FWVt，，,A-B,=0.8 V=20.25 FW=5.032 V=2.5ml t=10min T1酶活(mgH2O2/g?min)=0.218二、动力学常数的测定,一,原始数据编号1 2 3 4 5 消耗的0.10 0.10 0.40 0.30 0.30 KMnO,mL, 4,二,求出各管反应前的底物浓度[S]和反应速度V 00编号1 2 3 4 50.005 0.0067 0.0082 0.0125 0.0250 [S],mol/L,00.0099 0.0124 0.0126 0.0221 0.0471 V,mmol/min,0,三,以1/V对1/[S]作图,用excel作图, 001/s 200 149.2 121.9 80 40 1/v 111.1 80.6 79.3 45.1 21.2,四,求出Km,mol/L,和Vmax,mmol/min,1K1m,，如,三,中图 vv[S]vmaxmaxy=0.5572x+1.5829 x=0时 y=1/Vmaxy=0时 x=-1/Km Km=0.35 Vmax=0.63第四部分:课后研讨题 1.总结本实验操作过程的注意事项。
过氧化氢酶km值的测定实验报告
过氧化氢酶km值的测定实验报告过氧化氢酶（catalase）是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。
本实验旨在通过测定过氧化氢酶的Km值，来研究该酶对底物浓度的敏感程度，从而深入了解过氧化氢酶的催化特性。
首先，我们需要准备实验所需的材料和试剂，包括过氧化氢酶样品、过氧化氢底物溶液、缓冲液、吸光度计等。
接着，按照实验方案，我们将过氧化氢底物溶液分别配制成不同的浓度，然后将不同浓度的底物溶液与过氧化氢酶样品混合，反应一定时间后，利用吸光度计测定反应体系中过氧化氢的浓度。
通过对不同浓度底物下反应体系中过氧化氢浓度的测定，我们可以得到不同底物浓度下过氧化氢酶催化反应的速率。
在实验过程中，我们需要注意保持反应体系的温度稳定，避免温度对反应速率的影响。
此外，为了减小误差，我们需要进行多次重复实验，取平均值作为最终结果。
在实验结束后，我们将利用实验数据，通过线性回归分析，计算出过氧化氢酶的Km值。
通过本实验，我们可以得到不同底物浓度下过氧化氢酶的催化速率，进而绘制出酶的底物浓度与催化速率的曲线。
通过分析曲线斜率的变化，我们可以得到过氧化氢酶的Km值。
Km值表示酶与底物结合的紧密程度，Km值越小，表示酶对底物的亲和力越大，反之亦然。
在实验结果分析中，我们可以得出不同底物浓度下过氧化氢酶的Km值，从而揭示了过氧化氢酶对底物浓度的敏感程度。
这有助于我们更深入地了解过氧化氢酶的催化特性和底物结合机制。
同时，对于医学和生物工程领域，对过氧化氢酶的Km值的准确测定也具有重要的应用意义。
综上所述，通过本实验的Km值测定，我们可以更深入地了解过氧化氢酶的催化特性和底物结合机制，为相关领域的研究和应用提供重要的参考依据。
希望本实验能为相关领域的研究工作提供一定的帮助和启发。
过氧化氢酶米氏常数
过氧化氢酶米氏常数各位读友大家好，此文档由网络收集而来，欢迎您下载，谢谢篇一：过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名：赵家熙指导教师：谭志文实验室：6503 组员：①章恒炯②③成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：2.标定数据：（1）KMnO4质量数及配制：158 （2）Na2C2O4质量数：134 （3）标定数据：/L（4）KMnO4实际浓度：/L3.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液（ml）：实验（1）实验（2）对照（1）对照（2）（二）结果计算1．换算系数（1mL KMnO4溶液相当于多少mg H2O2）2.样品酶活计算（每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：mg H2O2/g?min）(A?B)?VT??V1?t酶活(mgH2O2/g·min)=酶活(mgH2O2/g·min)=（A-B）= VT====10min二、动力学常数的测定（一）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[S]0和反应速度V0（三）以1/V0对1/[S]0作图（用excel 作图）1/s 1/v2008040（四）求出Km（mol/L）和Vmax （mmol/min）Km11?? vv[S]v如（三）中图maxmaxy=+ x=0时y=1/Vmaxy=0时x=-1/KmKm= Vmax=第四部分：课后研讨题1.总结本实验操作过程的注意事项。
1酶的提取和存放一般在0-4℃下进行。
2每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。
3各反应瓶的滴定终点微红色为同一标准。
4使用前应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加入。
2.影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些?1、温度，温度过高或者过低会降低过氧化氢酶的活性。
2、酸碱度，酸或碱浓度太高会使过氧化氢酶失活。
3.过氧化氢酶与哪些生化过程有关?R(Fe2+)+H2O2 = R(Fe3++OH－) R(Fe3+OH－)2+H2O2 = R(Fe2+)2+2H2O+O24.在反应速度的测定中，加入硫酸有哪些作用？终止反应,为下一步的滴定提供酸的环境。
过氧化氢酶米氏常数
[标签:标题]篇一：过氧化氢酶动力学常数测定实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定姓名：赵家熙指导教师：谭志文实验室：6503 组员：①章恒炯②③成绩：第三部分：实验记录与分析一、酶活力测定（一）原始数据1.样品原始质量：5.032g2.标定数据：（1）KMnO4质量数及配制：158 （2）Na2C2O4质量数：134 （3）标定数据：0.02mol/L （4）KMnO4实际浓度：0.019mol/L3.样品滴定数据消耗高锰酸钾溶液（ml）：实验（1）0.65实验（2）0.50 对照（1）1.45 对照（2）1.30（二）结果计算1．换算系数（1mL KMnO4溶液相当于多少mg H2O2）1.72.样品酶活计算（每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：mg H2O2/g?min）(A?B)?VT?1.7FW?V1?t酶活(mgH2O2/g·min)=酶活(mgH2O2/g·min)=0.218（A-B）=0.8 VT=20.25FW=5.032V1=2.5mlt=10min二、动力学常数的测定（一）原始数据（二）求出各管反应前的底物浓度[S]0和反应速度V0（三）以1/V0对1/[S]0作图（用excel作图）1/s 1/v200 111.1149.2 80.6121.9 79.380 45.140 21.2（四）求出Km（mol/L）和Vmax（mmol/min）Km11?? vv[S]v如（三）中图maxmaxy=0.5572x+1.5829 x=0时y=1/Vmaxy=0时x=-1/KmKm=0.35 Vmax=0.63第四部分：课后研讨题1.总结本实验操作过程的注意事项。
1酶的提取和存放一般在0-4℃下进行。
2每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在5min。
3各反应瓶的滴定终点微红色为同一标准。
4使用前应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加入。
《酶工程实验》word版
实验一过氧化氢酶米氏常数的测定一、目的了解米氏常数的意义，测定过氧化氢酶的米氏常数。
二、实验原理H2O2被过氧化氢酶分解出H2O和O2，未分解的H2O2用KMNO4在酸性环境中滴定，根据反应前后H2O2的浓度差可求出反应速度。
本实验以马铃薯提供过氧化氢酶，以1/ν~1/[S]作图求Km三、实验器材1.锥形瓶100～150ml（×6）。
2.吸管1.0ml（×2）、0.5ml（×2）、2.0ml（×2）、5ml（×2）、10.0ml（×1）。
3.温度计（0～100℃）。
4.微量滴定管5ml（×1）。
5.容量瓶1000ml（×1）。
四、实验试剂1、0.02mol/L磷酸缓冲液（Ph7.0）取磷酸二氢钾 0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液 29.1ml，用水稀释至100ml,即得。
2、酶液：称取马铃薯5g，加上述缓冲液10ml，匀浆，过滤。
3、0.02mol/L KMnO4：称取KMnO4（AR）3.2g，加蒸馏水1000ml，煮沸15min，2d后过滤，棕色瓶保存。
4、0.004mol/L KMnO4：准确称取恒重草酸钠0.2g，加250ml冷沸水及10ml浓硫酸，搅拌溶解，用0.02ml/L的KMnO4滴定至微红色，水浴，加热至65℃，继续滴定至溶液微红色并30s不褪，算出KMnO4的准确浓度稀释成0.004mol/L即可。
5、0.05 mol/L H2O2：取30% H2O223ml加入1000ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度（约0.2mol/L），用标准KMnO4（0.004mol/L）标定其准确浓度，稀释成0.05mol/L（标定前稀释4倍，取2.0ml，加25% H2SO42.0ml，用0.004mol/LKMnO4滴定至微红色）。
6、25% H2SO4五、操作取锥形瓶6只，按下表顺序加入试剂：表一过氧化氢酶米氏常数的测定管号试剂0123450.05mol/L H2O2/ml蒸馏水/ml酶液/ml9.50.51.008.500.51.258.250.51.677.830.52.57.00.55.004.500.5先加好0.05mol/L H2O2及蒸馏水，加酶液后立即混合，依次记录各瓶的起始反应时间。
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过氧化氢酶米氏常数的测定
傅璐121140012
一、实验目的
1. 了解米氏常数的测定方法
2. 学习提取生物组织中的酶
二、实验原理
1.米氏反应动力学
(Michaelis-Menten Equation):
米氏方程
2.米氏常数的意义：
①反映酶的种类：Km是一种酶的特征常数，只与酶的种类有关，与酶浓度、
底物浓度无关。
②米氏常数是酶促反应达到最大反应速度Vmax一半时的底物浓度。
其数值大
小反映了酶与底物之间的亲和力：Km值越大，亲和力越弱，反之Km值越小，亲和能力越强。
③Km可用来判断酶（多功能酶）的最适底物：Km值最小的酶促反应对应底物
就是该酶的最适底物。
3.米氏常数的求法：
该方法的缺点是难以确定最大
反应速度Vmax。
该作图法应用最广。
但在低浓度是v值误差较大，在[S]等差值实验时作图点较集中于纵轴。
因此在设计底物浓度时，最好将1/[S]配成等差数列，这样可使点距较为平均，再配以最小二乘回归法，就可以得到较为准确的结果。
此法优点是横轴上点分布均匀，缺点是1/v会放大误差，同时对底物浓度的选择有要求。
[S]<<Km时图形近于水平线，[S]>>Km时直线将在原点附近与轴相交。
4.氧化酶：生物体内重要的三种氧化酶类，其作用均是消除体内自由基：
①POD：过氧化物酶
②SOD:超氧化物歧化酶
③CAT：；过氧化氢酶
5.过氧化氢酶的作用：
植物体内活性氧代谢加强而使过氧化氢发生积累。
过氧化氢可进行一步生成氢氧自由基。
氢氧自由基是化学性质最活泼的活性氧，可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并且有非常高的速度常数，破坏性极强，可使细胞膜遭受损害，加速细胞的衰老和解体。
过氧化氢酶（catalase，CAT）可以清除过氧化氢、分解氢氧自由基，保护机体细胞稳定的内环境及细胞的正常生活，因此CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的抗逆性密切相关。
6.过氧化氢酶活力的测定方法：
①紫外吸收法：
过氧化氢在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240nm）随反应时间而降低。
根据测量吸光度的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
（以一分钟内A240nm下降0.1为一个单位）
②滴定法（高锰酸钾法、碘量法）
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
根据单位时间内消耗的过氧化氢的量即可测出过氧化氢酶活力大小。
7.实验中的反应：
H2O2被过氧化氢酶分解出H2O 和O2 , 未分解的H2O2 用KMnO4 在酸性环境中滴定, 根据反应前后的浓度差可以算出反应速度:
酶
2H2O2 −→2H2O + O2
2KMnO4+5H2O2+3H2SO4 −→2MnO4+K2SO4+8H2O+5O2
（本实验以马铃薯提供过氧化氢酶）
三、实验试剂
1. 0.02mol/L 磷酸缓冲溶液(pH=7.0): 实验室提供.
2. 酶液: 称取马铃薯5g, 加缓冲液10mL, 匀浆过滤.
3. 0.01mol/L 高锰酸钾.
4. 0.098mol/L H2O2.
5. 25%H2SO4.
四、实验操作
取6 只锥形瓶, 按下表的顺序加入试剂.
先加好过氧化氢和蒸馏水, 加酶液后立即混合, 依次记录各瓶的起始反应时间. 反映到达5min 立即加入2ml 25%硫酸终止反应, 充分混匀.。
用0.01mol/L 的KMnO4溶液滴定瓶中剩余的过氧化氢至微红色, 记录消耗的高锰酸钾体积.。
五、注意事项：
1.反应时间必须准确。
2.酶浓度须均一，若酶活力过大，应适当稀释。
3.滴定终点的判定。
六、实验结果：
过氧化氢浓度：0.098mol/L
称取马铃薯的质量：5.00g 序号 1 3 4 5
V （KMnO4）/ml 2.7 4.4 6.32 12.4
[S]/(mol/L) 0.0098 0.016368 0.0245 0.049
v/(mmol/min) 0.0061 0.010732 0.0174 0.036
1/[S] 102.0408 61.0948 40.8163 20.4082
1/v 163.9344 93.1793 57.4713 27.7778
米氏常数计算曲线y = 1.6828x - 8.7953R 2 = 0.998802040
60
801001201401601800204060801001201/[S]1/v 系列1线性 (系列1)
米氏常数Km= -0.1913
七、实验结果分析：
1.曲线上少一个点的原因：
用移液管移取序号为2的过氧化氢溶液（应为1.25ml）错误的移取了1.75ml，故在制图时将其舍去。
2.曲线线性较好（R²=0.9988）的原因：
本实验采取了两人分工的方法完成实验，控制反应结束及滴定分别由一人完成，所以标准都相同，从而在一定程度上提高了实验的准确性。
3.Km计算结果呈负值的原因：
Km呈负值（即整条直线都向下移动），亦即所有测定的v值都偏大。
由v=(c1*V1-2.5*c2*V2)/5，故推断最可能的原因是V2整体测量偏小，可能的操作失误是编号为0的空白对照组中高锰酸钾的滴加量偏高，从而使除去该点的整体的高锰酸钾量都偏小。