DNA抽提的操作步骤
最全DNA提取步骤
最全DNA提取步骤DNA提取是生物学研究和实践中的一项重要技术，它是获取分析DNA序列的前提。
DNA提取步骤可能会因不同实验目的和样本类型而有所差异，但通常包括以下主要步骤：1.样本选择：选择合适的样本进行DNA提取。
常见的样本包括细胞、组织、血液、口腔拭子、植物材料等。
根据样本类型的不同，选择相应的提取方法。
2.预处理样本：将样本进行必要的预处理，以去除可能干扰DNA提取和分析的物质。
例如，清洗组织或细胞以去除外部污染物，离心分离红细胞等。
3.细胞破碎：将样本中的细胞破碎，释放DNA。
常见的方法包括机械破碎、化学裂解和酶处理等。
机械破碎可以使用高压设备或超声波破碎仪，化学裂解可以使用蛋白酶K和SDS等。
4.蛋白质去除：添加蛋白酶处理样本，降解蛋白质。
蛋白酶的选择和用量会根据样本类型和实验需求而有所差异。
蛋白质降解后，可以使用酚/氯仿方法或商用DNA提取试剂盒去除蛋白质。
5.核酸沉淀：用盐酸或其他化学品调节样品的pH值，使DNA成为可溶性物质而使其他成分沉淀。
沉淀后，用离心将DNA沉淀物分离出来。
6.DNA纯化：将DNA溶液从其他杂质中纯化。
可以使用酚/氯仿法、硅胶纯化法或商用DNA纯化试剂盒。
这些方法可以去除卟啉、盐、蛋白质和其他杂质。
7. DNA溶解：将纯化的DNA溶解于适当的缓冲溶液中，使其稳定且可供后续实验使用。
可以使用Tris-EDTA（TE）缓冲液或无菌水。
8.DNA质量和浓度检测：使用分光光度计或荧光分析仪检测DNA的质量和浓度。
合适的质控参数可根据实验目的和要求来确定。
以上是常见的DNA提取步骤，但实际操作中可能会因实验目的、样本类型和材料可用性而有所不同。
因此，在进行DNA提取时，一定要根据实际需求选择合适的方法和试剂，并严格按照操作步骤进行，以确保提取的DNA质量和纯度满足实验要求。
DNA的提取及电泳检测
外周血DNA提取【实验原理】真核细胞DNA分子存在于细胞核中，并与核蛋白结合而稳定存在，故而可以通过提取Buffer液破坏胞膜及核膜，释放出高分子量的基因组DNA，并用蛋白酶K将核蛋白降解成小片段从核酸上分离下来，这样便初步得到了基因组DNA，然后通过苯酚、氯仿等提取进一步去除蛋白质，再用乙醇洗涤沉淀，得到的DNA分子便可以满足一般的实验要求了。
【操作步骤】1.取500μl冰冻血样，加等体积1×PBS，混匀15000r/min离心4min，弃去上液重复两次。
2.加350μl抽提Buffer，RNase1μl（10μg/ml）37℃温育30min。
3.再加prok酶（10mg/ml）10μl，55℃消化过夜，根据消化情况可补加一次prok酶。
4.加等体积（500ul）酚抽提，离心（15000r/min 5min），取上层液于另一支Eppedorf管中。
5.加酚：氯仿（1∶1）(200ul:200ul)抽提，离心（15000r/min 5min）取上层液与另一支Eppedorf管中。
6.加氯仿（等体积）(500ul)抽提，离心（15000r/min 5min）取上层与另一支Eppedorf管中。
7.加1/5V(60ul)的乙酸铵和2V(600ul)的无水乙醇（-20℃）静置10min后，离心（15000r/min5min），倒去上清夜。
8.加75%乙醇(500ul)洗DNA沉淀一次，（12000r/min 1min），倒去上清夜，将离心管倒置在滤纸上，除尽残余的乙醇，9.加灭菌水70-80μl溶解（室温1-2h，4℃过夜）。
琼脂糖凝胶电泳【实验原理】核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中（PH8.0~8.3），其碱基不解离，而磷酸全部解离，核酸分子带负电荷，向正极移动，采用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，达到分离目的。
DNA提取
组织样DNA的提取方法：1．取黄豆大小组织样，用70%酒精棉球擦干净，尽量剪碎，置于2 ml离心管中。
（剪刀、镊子每次都擦干净）2．每管中加裂解液800ul，蛋白酶K 30ul。
3．55℃水裕14-20小时至管中无组织块为止（加封口膜防水）4．每管加等体积（800ul）饱和酚，摇匀器上摇出10-15分钟，10000转4℃离心10-15分钟5．取上清，置于另一管中，加500ul饱和酚，500ul氯仿（氯仿：异戊醇=24：1），混摇10-15分钟，10000转4℃离心10-15分钟6．取上清置于另一管中，加800ul氯仿，混摇10-15分钟，10000转4℃离心10-15分钟7．取上清，加800ul无水乙醇，室温混摇15-20分钟，10000转4℃离心7-8分钟8．倒掉管中液体（小心DNA 团块），再用70%乙醇轻洗，吸干乙醇，通风橱内风干加灭菌水溶解，4℃放置几个小时重要仪器、设备和试剂●UV-754型紫外线分光广度计●PCR扩增仪●DYYⅢ－12型电脑恒功率多功能电泳仪●TGL－16G高速台式离心机●DF110电子天平●HY-1型自动旋转式混匀仪●H-1微型混合器●蛋白酶K：MERCK公司产品●三羟基氨基甲烷（Tris）●十二烷基磺酸钠（SDS）●Tris饱和酚●琼脂糖●丙稀酰胺●N,N’-亚甲基双丙烯酰胺●TaqDNA聚合酶●4dNTP●PBR332 DNA/MSPI Markers: 华美生物工程公司●微卫星引物溶液配制(1) 10%十二烷基硫酸钠SDSSDS 10g溶于100 mL双蒸水中，30℃以上贮存。
(2) 组织样裂解液Tris.Cl（pH=8.0）50mM乙二胺四乙酸二钠（EDTA）100mM氯化钠（NaCl）100mMSDS 0.5%(3) 蛋白酶K：20mg/mL贮存液，-20℃保存(4) 1M Tris·Cl（pH 8.0，高压灭菌，NaOH调pH值）Tris 12.11g浓HCl 4.2ml加双蒸水定容至100ml(5) 0.5M EDTA（pH 8.0，高压灭菌，NaOH调pH值）EDTA 18.61g；加双蒸水定容至100ml(6) 1M NaCl（分装高压灭菌）NaCl0.5g；加双蒸水定容至50ml(7) 氯仿：异戊醇（24:1）氯仿480ml+异戊醇20ml(8) TE缓冲液（pH8.0）1M Tris.Cl 1 mL （Tris: 12.11g）0.5M EDTA 0.2 mL（EDTA: 18.61g）加蒸馏水定容至100ml（1） 10％SDS: SDS 10.0g溶于双蒸水中。
全血DNA抽提步骤
人淋巴细胞分离液分离血液中单个核细胞1、取新鲜抗凝血1ml，与生理盐水或PBS 1:1混匀后，小心加于1ml的细胞分离液之液面上，以2000rpm，离心20min。
2、分四层，第一层为血浆或组织匀浆液层，第二层为环状乳白色淋巴细胞或单核细胞层，第三层为透明分离液层，第四层为红细胞层。
3、收集第二层细胞（淋巴细胞），沉淀反复洗二次即得单个核细胞。
全血提取DNA开始前准备：1、所有的离心步骤均在室温下进行。
2、使AL和ATL中的沉淀溶解。
3、向AW1和AW2溶液中加无水乙醇。
4、将冰冻组织或细胞沉淀平衡的室温。
5、预热孵育器到56℃。
哺乳动物血液（人）：吸取20ul蛋白酶K到1.5ml或者2ml离心管中，加50-100ul抗凝血。
将总体积用PBS补到220ul。
细胞：离心收集5x106个细胞，用200ulPBS重悬，加20ul蛋白酶K。
2、加200ulAL（提前预热到56℃），vortex充分混匀，56℃孵育10min。
3、加200ul无水乙醇，vortex充分混匀。
4、将混合物吸到装有2ml收集管的DNeasy mini旋转柱中，最大速离心1min，弃去收集管及管中液体。
5、将旋转柱装到一个新的2ml收集管中，加500ul AW1，最大速离心1min，弃去收集管及管中液体。
6、将旋转柱装到一个新的2ml收集管中，加500ul AW2，大于14000rpm离心3min，弃去收集管及管中液体。
7、将旋转柱移到一个新的1.5ml微量离心管上。
8、加100ul AE buffer到旋转柱薄膜中央溶解DNA,室温孵育1min，最大速离心1min。
9、可选：重复步骤8增加DNA沉淀的产量。
实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)
实验一、血液标本提取DNA（蛋白酶K-酚抽提法）一、实验原理离心分离到外周血的白细胞层；用细胞裂解液溶解细胞膜、核膜，使组蛋白与DNA分离，再用酚、三氯甲烷/异戊醇抽提去除蛋白质，最后经乙醇沉淀即可得到基因组DNA片段。
二、实验步骤：1、血液标本处理 1.0ml抗凝全血(ACD、EDTA抗凝均可)2000rpm离心10min（1.5mlEP管）。
轻轻去上清液（血浆），吸出淡黄色悬浮液（白细胞层）置于另一2.0mlEP管中。
（约50μl）2、细胞裂解加入10倍体积组织细胞裂解液，37℃1h，3、加入蛋白酶K消化加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml（约4μl），充分混匀，37℃震荡12-24h或37℃1h后，56℃水浴3h。
保温过程中不时摇动，混匀反应液。
液体逐渐变粘稠，表明已有DNA释放出来，操作应轻柔。
4、酚抽提：将上述溶液冷却至室温，加等体积的Tris饱和酚（pH8.0）溶液，温和缓慢颠倒离心管10min，混匀两相成乳液。
12000rpm 5分钟，两相分层。
用宽口径移液管小心吸出上层粘稠的水相，移至一新的2.0mlEP管中。
（小心一点，不要吸入蛋白层。
如交界处有白色沉淀，需重新抽提有机相，用酚重新抽提两次，合并水相）5、三氯甲烷/异戊醇抽提上清液加等体积三氯甲烷：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上层水相0.5ml入另一新的2.0mlEP管；6、DNA沉淀上清液中加0.2倍体积3.0mol/L 醋酸钠，再加2倍体积的4℃冰箱冷却后的无水乙醇，轻柔振摇，充分混匀；应可看到白色絮状物（DNA）。
12000rpm 5分钟，弃上清液；7、纯化：加1ml 70%乙醇洗涤，12000rpm 离心5分钟，去上清夜，重复1次；（此过程不得振荡摇动）8、溶解：弃上清液后，自然干燥（挥发痕量乙醇）后，用30μl pH8.0TE完全溶解，保存在-20℃备用。
三、注意事项1、加样准确，操作轻柔；微量加样器绝对不能超过最大量程；2、加酚试剂时，不要接触到皮肤上，有腐蚀性；如不小心弄到，立即用清水冲洗；3、取上清液时，不可吸到下层溶液；4、加TE液后轻摇10min溶解DNA或-4˚C保存待用。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿（Phenol-Chloroform）抽提DNA是一种常用的DNA 提取方法。
其原理是基于酚在酸性条件下具有与DNA高度亲和性的特点，可以将DNA从细胞溶液中抽提出来。
具体的步骤如下：
1. 细胞溶解：首先将待提取DNA的细胞样品加入适量的细胞裂解缓冲液中，通过机械或化学方法使细胞壁破裂，释放出细胞内的DNA。
2. 酚抽提：加入相同体积的酚溶液，并进行充分混合。
酚能与DNA形成复合物，并与其他细胞组分（如蛋白质和脂质）发生分层，形成一个DNA上层和一个下层。
3. 脱水：将抽提产物转移至新管中，加入酒精或异丙醇，通过离心将DNA沉淀下来。
脱水过程可以去除溶液中的多余酚，提高DNA沉淀的纯度。
4. 酯化：将DNA沉淀物溶解在适量的TE缓冲液（含有EDTA和Tris）中，经过一定的时间酯化，使DNA变得更为稳定。
5. 沉淀：通过低温离心将DNA沉淀下来，去除上清液。
6. 洗涤：用70%的乙醇洗涤并去除残余的盐、酚和脏物质。
洗涤过程中，可以多次进行离心和上清液倒掉操作。
7. 干燥：最后，将DNA输送液置于干燥器中或者自然风干，以去除溶剂中的残留物质，得到纯度较高的DNA。
通过酚氯仿抽提DNA的方法，可以从复杂的细胞中提取出高质量、高纯度的DNA，以供后续分子生物学研究使用。
基因组DNA抽提操作流程
基因组DNA抽提操作流程1.样本选择：选择适合抽提基因组DNA的样本类型，如细胞、组织或血液。
确保样本保存在合适的条件下，以保持DNA的完整性。
2.细胞破碎：对于细胞样本，首先需要将细胞破碎以释放DNA。
可以使用物理方法，如机械剪切或超声波处理，或者使用化学方法，如洗涤溶解和细胞裂解酶处理。
3.DNA溶解：将细胞裂解提取物加入DNA溶解缓冲液中，以彻底溶解DNA。
通常，添加蛋白酶K来去除蛋白质的干扰，增加DNA产量。
4.蛋白质去除：使用蛋白酶K等酶来去除样品中的蛋白质。
酶处理后，样品经过酚/氯仿萃取，即加入等体积的酚/氯仿混合物混合，离心分离水相和有机相。
DNA会在水相中，而蛋白质会在有机相中。
5.DNA沉淀：将水相中的DNA通过加入盐和冷乙醇来沉淀下来。
经过高速离心后，形成DNA沉淀，此时可以看到白色的DNA沉淀，即可将上清去掉。
6.DNA洗涤：将DNA沉淀用70%乙醇洗涤，去除盐、蛋白质和杂质。
洗涤过程中，可以使用离心将DNA沉淀到底，倒掉上清，重复洗涤2-3次。
7. DNA溶解：将洗涤后的DNA沉淀用TE缓冲液（含EDTA和Tris-HCl）等来溶解，使其在后续的分析和储存中稳定。
此时可以使用紫外可见光谱仪检测DNA的浓度和纯度。
8.DNA质量检测：可以通过琼脂糖凝胶电泳、分光光度计或荧光检测等方法对提取的DNA进行质量检测。
目的是确定DNA的完整性、浓度和纯度。
注意事项：-操作中严格遵守无菌操作，以防止DNA污染。
-样本处理前最好进行冰浴，以保持DNA稳定。
-减少DNA的损伤和降解，所有的操作和试剂都必须在冷冻或低温环境下进行。
- 防止RNase的污染，因为RNase会降解RNA，进而影响DNA的测定。
-严格按照实验操作要求进行步骤，以确保DNA提取的高纯度和高质量。
DNA抽提
1. 处理材料：取植物新鲜组织100 mg或干重组织20 mg，加入液氮充分碾磨。
加入400uL 缓冲液LP1和6uL RNase A(10 mg/ml)，旋涡振荡1 min，室温放置10 min。
2. 加入130uL缓冲液LP2，充分混匀，旋涡振荡1 min。
3. 12000 rpm离心5 min，将上清移至新的离心管中。
4. 加入1.5倍体积的缓冲液LP3，立即充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中，12000 rpm离心30 sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中。
6. 向吸附柱CB3中加入600uL漂洗液PW，12,000 rpm离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
注意：如果吸附柱膜呈现绿色，向吸附柱CB3中加入500uL无水乙醇，12000 rpm离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7. 重复操作步骤6.
8. 将吸附柱CB3放回收集管中，12000 rpm离心2 min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
9. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200uL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000 rpm离心2 min，将溶液收集到离心管中。
全血DNA提取步骤
从全血中抽提基因组DNA的方法1、取全血700µL离心，5000rpm，5min，弃去上清液。
2、沉淀物用1mL的红细胞裂解液洗涤3次，5000rpm，5min，弃去上清液，倒干。
3、加入450µL细胞裂解液和6µL蛋白酶K（20mg/mL），55℃～66℃水浴4小时。
4、用等体积的酚、氯仿、异戊醇（25︰24︰1）抽提2次，12000rpm，5min。
5、用2倍体积冰预冷的无水乙醇沉淀（无水乙醇），有絮状沉淀后置于―20℃，沉淀30min。
6、沉淀结束后，12000rpm，5min，弃上清液。
7、用800µlL70%的乙醇洗涤沉淀，12000rpm，3min。
8、弃上清液，干燥。
9、加入50µL 1×TE缓冲液溶解，―20℃保存备用。
附：DNA提取相关试剂配制1、红细胞裂解液（PH 7.4）配制量：1L配制方法：（1）、称量NH4CL 0.802g、NaHCO3 0.84g、Na2EDTA·2H2O37.22g，置于1L烧杯中。
（2）、向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
（3）、加去离子水将溶液定容至1L后，高压灭菌。
（4）、室温保存。
2、细胞裂解液（PH 8.0）配制量：500Ml配制方法：（1）、称量NaCL 2.92g、SDS 5g、Tris 0.61g，置于1L烧杯中。
（2）、向烧杯中加入约300ml的去离子水，搅拌溶解，在溶解过程中用1mL移液器加入10mL的TriTon-100。
（3）、溶解后加入20mg/mL的蛋白酶K 3µL.（4）、加去离子水将溶液定容至500mL后，高压灭菌。
（5）、室温保存。
DNA抽提方法
1，贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。
2，细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。
3，重复2。
4，加入5ml DNA提取缓冲液，(10m mol/L Tris-cl, 0.1 mol/L EDTA, o.5% SDS),混匀。
5，加入25ul 蛋白酶K ,使终浓度达到100ug/ml, 混匀，50℃水浴3h,6，用等体积的酚抽提一次，2500r/min 离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇=25:24:1）混合物抽提一次，2500r/min 离心收集水相。
用等体积的(氯仿，异戊醇=24:1)抽提一次。
7，加入等体积的5mol/L 的LiCL,混匀，冰浴，10min.8， 2500r/min,离心10min. 转上清与一离心管中。
加入等体积的异丙醇。
室温10分钟。
9， 2500r/min,离心10min。
弃上清。
加入0.1倍体积3mol/L 乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。
-20℃ 20分钟。
10， 12000r/min, 室温离心5分钟。
弃上清。
将DNA溶于适量TE中2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris （pH8.0） 100 mmol/LEDTA （pH 8.0） 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶 20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，-20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚，氯仿，异戊醇（25:24:1）。
（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。
在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12-24h，间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
DNA抽提的操作步骤
试剂准备：蛋白酶K、白细胞裂解液、苯酚、氯仿、无水乙醇、70%乙醇
1.从冰箱取出冰冻的白细胞，将编号和姓名写在登记本上。
待白细胞融化后，
向管内加入5ml白细胞裂解液和50ul蛋白酶K（20mg/ml）。
将管内液体摇匀，或者借助移液枪反复吹打混匀。
然后将管子放入60℃水浴锅内，过夜（可以根据孵育的时间长短适当调整温度）。
在水浴的过程中，每隔2-3小时将试管震荡摇匀一次。
2.把水浴锅内的试管取出，将其中的液体转移到15ml试管内（15ml的试管事
先做好标记），并依次向试管内加入等体积（即5ml）的酚-氯仿，然后将盖子拧紧。
轻轻上下颠倒混匀（20次左右），然后离心3000rpm，15min。
离心时将离心机的温度调至室温，温度过低会导致有机溶剂凝固。
离心结束后，可以看到试管内的液体分为三层，上层为水相，中间为变性的蛋白质，下层为有机溶剂（酚氯仿）。
3.然后用钝口Tip吸出上层水相转移到干净的试管中（注意：将1ml的Tip尖
端减去2-3mm即可得到钝口的Tip，在吸取上层水相的过程中要尽量避免混入蛋白相，动作要缓慢）多分几次转移），然后再加入等体积的酚氯仿，拧紧盖子，颠倒混匀，离心3000rpm，10min。
4.再次用钝口Tip把上层水相转移到干净的试管中，然后向试管内加入2倍体
×2），拧紧盖子，缓慢颠倒，积的无水乙醇（无水乙醇的体积=V
所吸出的上清的体积
即可看到絮状的DNA沉淀析出。
（如果抽提的数量较少，可以将管子放到Cold Room，等数量多了再一起进行下面的操作）
5.用黄色Tip把白色絮状的DNA沉淀挑出来，放到70%乙醇（预先准备0.5ml
的小管子，加入400ul70%的无水乙醇，洗涤用）中洗涤，重复两次。
6.最后用黄色Tip将DNA沉淀挑出，将DNA连同枪头一同打到1.5mlEP管中。
敞开盖子，室温放置直到乙醇完全挥发，向EP管内加入400ulTE，用Tip头反复吹打，使DNA完全溶于TE，得到DNA溶液。
试剂准备过程中需要注意的问题：
1.白细胞裂解液的制备；2mol/L Tris-Hcl（PH 8.0）
2.5ml、0.5mol/L EDTA （PH 8.0）1ml、3mol/L Nacl 16.67ml、10% SDS 25ml，加水至500ml，混匀（加入SDS 后有沉淀生成，需要混匀）。
2.蛋白酶K买来的时候是粉末状，每瓶100mg，加入5ml双蒸水，配成20mg/ml 的溶液；
3.苯酚常温下是固态，需要提前将其融化成液体：将固态苯酚放入70°水浴锅内，1h左右，即可融化成液体；然后将苯酚、氯仿按1:1比例混匀(大致1:1即可)，在混合液上层加入1ml Tris-Cl和少量蒸馏水（1-2cm高度左右即可）进行封层，防止苯酚被氧化。
4.操作过程中使用的所有的管子进行标记时，管壁和盖子上都要标记（编号和姓名）。
5.废液的处理：两次抽提操作中的废液需倒入专门的容器（通风橱内的废液缸），挑出DNA沉淀后所剩的废液可以倒入实验室的水槽。
苯酚作用
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase的活性
氯仿作用
氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。
（酚易溶于氯仿中）
为什么用无水乙醇沉淀DNA？
乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。
为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液？
在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。
由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳
TE缓冲液配置
10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)
1 mmol/L EDTA(pH 8.0)依地酸钠钙钙离子络合剂，洗涤剂，血液抗凝剂
为什么用钝枪头？
原因就是DNA链容易断裂，所以要轻，要用口大的枪头。