氨基酸( AA)含量检测试剂盒说明书可见分光光度法

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肥料氨基酸含量检测方法

肥料氨基酸含量检测方法
肥料中氨基酸含量的检测方法可以采用多种技术和方法，以下是其中一些常用的方法：
1.高效液相色谱法（HPLC）：这是一种常见的氨基酸含量检测方法。

它通过将样品中的氨基酸分离，并使用紫外检测器或荧光检测器检测各种氨基酸的浓度。

HPLC法通常具有高灵敏度和高分辨率，能够准确地测定各种氨基酸的含量。

2.气相色谱法（GC）：气相色谱法也可用于氨基酸含量的检测。

在这种方法中，样品中的氨基酸首先转化为相应的氨基酸甲酯衍生物，然后通过气相色谱柱进行分离和检测。

GC法通常需要较长的分析时间，但具有较高的精确度和可靠性。

3.红外光谱法（IR）：红外光谱法可以用于氨基酸的快速检测。

该方法通过分析样品中氨基酸分子的振动和拉伸模式来确定其含量。

红外光谱法具有快速、简便的优点，但灵敏度相对较低。

4.比色法：比色法是一种常用的定性和定量分析方法。

对于氨基酸含量的检测，可以使用特定的试剂与氨基酸反应产生显色反应，然后通过比色计或分光光度计测定溶液的吸光度来确定氨基酸的含量。

5.离子交换色谱法（IEC）：离子交换色谱法是一种常用于分析氨基酸的方法。

在这种方法中，氨基酸根据其电荷性质在离子交换树脂柱上进行分离，并通过检测器检测各个氨基酸的浓度。

在选择合适的检测方法时，需要考虑样品的性质、所需的分析精度和灵敏度、分析时间以及实验室设备和经验等因素。

常见的检测方法通常会结合使用，以确保结果的准确性和可靠性。

茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸含量的方法探讨

ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅｐＨ５．５，ｉｎａｂｏｉｌｉｎｇｗａｔｅｒｂａｔｈｈｅａｔｉｎｇ
ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｉｓ０．９９９５，ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｆｒｏｍ９５．５％ｔｏ１０４．３％ｒａｎｇｅ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｗｉｔｈｓｉｍｐｌｅｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ａｃｃｕｒａｔｅｒｅｓｕｌｔｓａｎｄｇｏｏｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓｎｉｎｈｙｄｒｉｎ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｙ；ａｒｌｐｈａａｍｉｎｏａｃｉｄ；ｇｌ泽市疾病预防控制中心，山东菏泽
ＤＩＮＧＹｏｎｇｘｉａ
２７４０１０）
（Ｈｅｚｅｃｉｔｙｃｅｎｔｅｒｆｏｒｄｉｓｅａｓｅｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ＳｈａｎｄｏｎｇＨｅｚｅ２７４０１０，Ｃｈｉｎａ）
１材料与方法

氨基酸使用说明书LC98-AAA()

北京温分公司LC98-I AAA 氨基酸分析系统北京温分分析仪器技术开发有限公司第1章简介1.1 LC98-I AAA氨基酸分析系统氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是生物、医药、卫生、农牧业、食品、饮料及饲料等行业生产和科研中必须的分析测试项目，氨基酸的定性和定量分析必将成为企业的必备检测项目。

由于氨基酸种类较多，结构接近，大部分没有紫外或荧光响应，使得氨基酸分析一直是高效液相色谱领域较难解决的问题之一。

LC98-I AAA氨基酸分析系统采用二元梯度高效液相色谱系统及专用C18色谱柱使18种氨基酸得到很好的分离，采用紫外检测器完成氨基酸的检测。

1.2 原理反相色谱具有分离效率高、应用范围广、性能稳定等特点，是HPLC中应用最为广泛的分离模式，但是由于氨基酸带电荷，在反相色谱柱上保留弱。

用离子对试剂虽然能够在一定程度上增加保留，但是选择性差异小，分离比较困难；同时氨基酸的检测也是难点。

目前最为常用的氨基酸分析方法是在分离之前使氨基酸与带疏水性基团的衍生试剂反应生成利于在反相柱上保留、分离的化合物，经柱分离后，通过相应的检测器定性、定量。

氨基酸与苯异硫氰酸（PITC）的反应LC98-I AAA氨基酸分析系统采用苯异硫氰酸（PITC）作为柱前衍生的衍生试剂，在弱碱性条件下，氨基酸的α-氨基可与苯异硫氰酸（phenylisothiocyanate, PITC）反应生成相应的苯氨基硫甲酰氨基酸（简称PTC-氨基酸）。

在酸性条件下，PTC-氨基酸环化形成在酸中稳定的苯乙内酰硫脲氨基酸（phenylthiohydantoin，简称PTH）。

蛋白质多肽链N-末端氨基酸的α-氨基也可有此反应，生成PTC-肽，在酸性溶液中释放出末端的PTH-氨基酸和比原来少一个氨基酸残基的多肽链（图1）。

PTH-氨基酸在酸性条件下极稳定并可溶于乙酸乙酯，用乙酸乙酯抽提后，经高压液相就可以确定肽链N-末端氨基酸的种类。

该法的优点是可连续分析出N端的十几个氨基酸。

鱼露中的氨基酸态氮的甲醛法与分光光度计法的比较

T logy科技分析与检测鱼露，是一种有特殊鲜香味的水产调味品，特别是在沿海地区，受到人们的广泛喜爱。

鱼露可以用小鱼小虾或其他水产品的加工下脚料为原材料制作而成，成本低廉且营养丰富。

鱼露制作是利用鱼体所含的酶，在多种微生物共同参与下，对原料鱼中的蛋白质、脂肪等成分进行发酵分解，酿制而成。

其味咸、极鲜美、含有所有的人体必需氨基酸和牛磺酸，还含有钙、碘等多种矿物质和维生素[1-2]。

鱼露不仅在味道上独树一帜，它含有的氨基酸种类和矿物质也很丰富[3]。

鱼露质量好坏的关键是氨基酸态氮含量。

氨基酸态氮含量越高，营养价值越高。

本文主要研究食品安全国家标准食品中氨基酸态氮的测定方法即 GB 5009.235-2016中的两种方法：甲醛法和分光光度计法[4]。

本文利用建立的方法对8份市售鱼露样品进行测定，比较两种检测方法的精密度、加标回收以及优缺点。

1　甲醛法和分光光度计法操作步骤1.1　甲醛法操作步骤吸取鱼露样品5.0 mL至100 mL 容量瓶中，用水定容至标线，混匀后吸取20.0 mL置于200 mL烧杯中，加60 mL水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液c（NaOH）= 0.05 mol/L滴定至pH=8.2，再加入10.0 mL甲醛溶液，混匀。

再用氢氧化钠标准溶c（NaOH）=0.05 mol/L滴定至pH=9.2，记录氢氧化钠标准溶液的毫升数。

同时取80 mL水，做试剂空白试验[4]。

1.2　分光光度计法操作步骤定量吸取鱼露样品1.0 mL置于200 mL容量瓶中，用水定容至标线，混匀。

精密吸取1 mL试样稀释溶液于10 mL比色管中，加入4 mL乙酸钠乙酸缓冲溶液（pH4.8）及4 mL显色剂，用水稀释至刻度，混匀。

置于100 ℃水浴中加热15 min，取出，水浴冷却至室温后，移入1 cm比色皿内，以零管为参比，于波长400 nm处测量吸光度，同时取氨氮标准使用液做标准曲线[4]。

2　样品测定结果取8份市售的鱼露按照甲醛法和分光光度法分别测定试样中氨基酸态氮含量，其结果如表1所示。

氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定

仪器分析实验报告
氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定
zuozhe
一、实验目的
（1）掌握紫外–可见分光光度计的工作原理与基本操作。（2）学习紫外–可见吸收光谱的绘制及定量测定方法。（3）了解氨基酸类物质的紫外吸收光谱的特点。
二、实验原理
紫外-可见分光光度法属于吸收光谱法，分子中的电子总是处在某一种运动状态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。电子由于受到光、热、电等的激发，从一个能级转移到另一个能级，称为跃迁。当这些电子吸收了外来辐射的能量，就从一个能量较低的能级跃迁到另一个能量较高的能级。物质对不同波长的光线具有不同的吸收能力，如果改变通过某一吸收物质的入射光的波长，并纪录该物质在每一波长处的吸光度（A）,然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，这样得到的谱图为该物质的吸收光谱或吸收曲线。当一定波长的光通过某物质的溶液时，入射光强度 I0 与透过光强度 It 之比的对数与该物质的浓度 c 及厚度 b 成正比。其数学表达式为：
312.87
图 7 对待测波长处的放大图像根据峰值绘制标准曲线：
仪器分析实验报告
图12 酪氨酸溶液的4阶导数标准曲线然后带入未知样品在峰值处的一阶导数强度，可以得出c=82.4mg/L。
六、
思考题
（1）本实验是采用紫外吸收光谱中最大吸收波长进行测定的，是否可以在波长较短的吸收峰下进行定量测定，为什么？答：不可以，因为在波长较短的吸收峰处很窄的波长范围内随λ的变化改变很大，此工作条件难于控制准确一致，将会影响测定结果的精密度和准确度。（2）被测物浓度过大或过小对测量有何影响？应如何调整？调整的依据是什么？答：浓度过大容易超出线性范围，浓度过小则会造成较大的误差。应当在粗略估计待测浓度之后将其稀释或浓缩至工作曲线浓度范围内后再进行测量。（3）思考紫外-可见分光光度法应用于蛋白质测量的依据，并设计相应的实验方案，测定奶粉中蛋白质的含量。

氨基酸分析的检测方法评述

文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。

主要研究方向:分析检验。

氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘　要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。

关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q503 文献标识码:ADetermination M ethods of Amino A cids A nalysisDA I Hong ,ZHA N G Zong 2cai ,ZHA N G Xi n 2shen (Key L aboratory of L eather Chemist ry and Engi neeri ng(S ichuan U niversity ),M i nist ry of Education ,Chengdu 610065,Chi na )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec 2tric 2chemistry determination ,spectrophotometer determination and conductivity detection method were reviewed for the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy.The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualytic methods.K ey w ords :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。

氨基酸检测试剂盒（茚三酮比色法）

氨基酸检测试剂盒（茚三酮比色法）氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：氨基酸(Amino acid ，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。

动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans 紫)，其吸收峰在波长570nm 处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。

该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：AA Lysis buffer=的比例加入AA Lysis buffer 匀浆或研磨，用去离子水稀释至，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer 进行适当匀浆，离心5min ，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存备用，用于氨基酸的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer 进行恰当的稀释。

2、配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AAAssaybuffer ，按茚三酮显色液：AAAssaybuffer=的比例混合，即为茚三酮工作液。

4℃避光密闭保存，2周有效。

3、配制维生素C 工作液: 取出1支维生素C ，准确溶解于10ml 去离子水，混匀。

4℃预冷备用。

-20℃保存1周有效。

注意：该试剂盒提供的维生素C 及其配制的工作液为过编号名称TC2153 100T Storage试剂(A): 氨基酸标准(50μg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): AALysisbuffer 250ml RT 试剂(C): 茚三酮显色液120ml RT 避光试剂(D):AAAssaybuffer 10.5ml RT 试剂(E): 维生素C 2支RT 使用说明书1份量。

氨基酸(AA)含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4434

可见分光光度法氨基酸（AA）含量检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4434规格:50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前加入4mL无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入56mL蒸馏水混匀，避光保存。

2、试剂四：临用前加5mL蒸馏水，充分溶解。

3、标准品：10mg半胱氨酸，临用前加入8.26mL蒸馏水，得到10μmol/mL的半胱氨酸标准溶液备用。

产品说明：动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。

另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。

植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度，来计算氨基酸含量。

技术指标：最低检出限：0.798μmol/mL线性范围：1-15μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织样本：称取约0.1g组织，加试剂一1mL，室温下充分研磨，转移到1.5mL EP管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴提取15min；自来水冷却后，10000rpm，4℃离心10min，取上清液，待测。

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氨基酸(AA)含量检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC1570
规格:50T/48S
产品内容：
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶（棕色），4℃避光保存。

临用前加入4mL无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入56mL 蒸馏水混匀，避光保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加5mL蒸馏水，充分溶解。

标准品：粉剂×1瓶，10mg半胱氨酸，4℃避光保存。

临用前加入8.26mL蒸馏水，得到10μmol/mL的半胱氨酸标准溶液备用。

产品说明：
动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。

另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。

植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm 吸光度，来计算氨基酸含量。

试验中所需的仪器和试剂：
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取：
(1)组织样本：称取约0.1g组织，加试剂一1mL，室温下充分研磨，转移到1.5mL EP管中，盖紧后（防
止水分散失）置于沸水浴提取15min；自来水冷却后，10000rpm，4℃离心10min，取上清液，待测。

(2)细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试
剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000rpm，4℃离心10min，取上清液，待测。

二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。

2、操作表：
试剂名称（μL）测定管标准管空白管
样本50——
标准品—50—
蒸馏水——50
试剂二500500500
试剂三500500500
试剂四505050混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温15min，冷却后反复颠倒EP管数次，将测定管8000rpm离心5min后取上清，于570nm测定吸光值。

显色后务必在30min内测完。

氨基酸含量计算：
（1）按样本鲜重计算
氨基酸含量（μmol/g鲜重）=[C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×（V 样总÷V样）÷W=10×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W
（2）按蛋白浓度计算
氨基酸含量（μmol/mg prot）=[C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]÷（Cpr×V样）=10×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷Cpr
（3）按细菌或细胞数量计算
氨基酸含量(μmol/104cell)=[C标准品×V标准品×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]÷（500×V样÷V样总）=0.02×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
C标准品：标准品浓度，10μmol/mL；V标准品：反应体系中加入标准品体积，0.05mL；W：样品鲜重，g；V样：反应体系中加入样品体积，0.05mL；V样总：样品提取液总体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；500：细菌或细胞总数，500万个。

注意事项：
1.试剂盒中试剂三和试剂四均需临用前配制，且避光保存。

2.为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于1.5），用蒸馏水稀释后再测定。

3.脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应在570nm处无吸收峰，因此，570nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。