DNS法测还原糖和总糖
3,5-二硝基水杨酸(dns)法测定甘蔗茎节总糖和还原糖含量
3,5-二硝基水杨酸(dns)法测定甘蔗茎节总糖
和还原糖含量
3,5-二硝基水杨酸法是常用的测定甘蔗茎节总糖和还原糖含量的
方法。
该方法操作简便、灵敏度高、重现性好。
具体步骤如下：
1. 样品制备：取适量甘蔗茎节，去除表皮和髓部，仅留下髓骨。
将髓骨切成小丁块，加入清水，煮沸5分钟，离火冷却后离心取上清，过滤掉杂质，即为样品。
2. 取样：取样品5mL，加入试管中。
3. 加试剂：加入2mL DNS试剂，混匀。
4. 加热：将试管放在沸水中加热10分钟。
5. 冷却：取出试管，放置至室温下冷却。
6. 吸光度测定：利用分光光度计测定样品的吸光度。
7. 计算含量：根据标准曲线计算出样品中总糖和还原糖的含量。
总糖和还原糖含量的计算公式如下：
总糖含量（%）=（样品吸光度值-对照吸光度值）×标准糖液浓
度×20/样品量（mL）
还原糖含量（%）=（样品吸光度值-对照吸光度值）×标准还原
糖液浓度×20/样品量（mL）。
DNS比色法测定还原糖和总糖
DNS⽐⾊法测定还原糖和总糖还原糖和总糖的测定(3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法)⼀、实验⽬的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤⼆、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本⽅法。
还原糖是指含有⾃由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不⼀定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是⾮还原糖。
利⽤各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对⾮还原性的双糖和多糖，可⽤酸⽔解法使其降解成还原性单糖进⾏测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，⽽氧化剂3,5-⼆硝基⽔杨酸则被还原为棕红⾊的3-氨基-5-硝基⽔杨酸。
在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊的深浅成正⽐关系，利⽤分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖⽔解为单糖时，每断裂⼀个糖苷键需加⼊⼀分⼦⽔，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料⾯粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘⾄恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于⼩烧杯中，加少量蒸馏⽔溶解后，转移到100ml容量瓶中，⽤蒸馏⽔定容⾄100ml，混匀，4℃冰箱中保存备⽤。
②3,5-⼆硝基⽔杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000ml，贮于棕⾊瓶中备⽤。
③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏⽔中。
④酚酞指⽰剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%⼄醇中。
⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。
四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 ⼤离⼼管：50ml×2烧杯：100ml×1 三⾓瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温⽔浴锅沸⽔浴离⼼机扭⼒天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7⽀具塞刻度试管编号，按表1分别加⼊浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏⽔和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
总糖和还原糖的测定
朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析旳基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光旳吸收程度与 溶液及液层厚度间旳定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
三、试剂和器材
试剂：
DNS试剂 葡萄糖原则溶液 ； 6M HCl；碘－碘化钾溶液； 6M NaOH；0.1% 酚酞指示剂。
材料
藕粉，玉米淀粉
器材
容量瓶,试管，移液管，量 筒，胶头滴管，漏斗
50℃水浴，沸水浴，分光 光度计等。
四、操作环节
1.葡萄糖原则曲线制作 2.还原糖旳提取
藕粉改为称1.0克，50℃水浴20min浸出， 水浴锅中进行 3.总糖旳水解及提取 玉米淀粉测总糖，沸水浴20min酸水解，电 磁炉中进行 4.样品含糖量旳测定
试验三 总糖和还原糖旳测定
——3,5二硝基水杨酸(DNS)法
一、目 旳
掌握还原糖和总糖旳测定原理 掌握分光光度计旳使用
二、原 理
还原糖：指具有自由醛基或酮基旳糖类
单糖: 不能被水解成更小分子旳糖,单糖都是还原糖 葡萄糖, 果糖
寡糖: 最主要旳是双糖：Maltose（麦芽糖 ）,Sucrose（蔗糖） Lactose（乳糖 ） 但Sucrose不是还原糖 多糖: 能水解成多种单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素
样品旳透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
移液器旳使用手法，两档位
吸液
放液
八、思索题
1.比色时为何要设计空白管？
DNS法测定总糖和还原糖
实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）0.1% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。
一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。
2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。
(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。
3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。
将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。
在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。
(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。
(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。
(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。
(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。
(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。
(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。
二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。
然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。
在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。
还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。
三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。
DNS法测定总糖和还原糖
D N S法测定总糖和还原糖 Prepared on 24 November 2020实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入 ml蒸馏水，摇匀。
λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品中还原糖的提取准确称取 0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。
DNS比色法测定还原糖和总糖
乳粉中还原糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料乳粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取95℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
③乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
④亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
四、实验器材比色管：25ml×9 烧杯：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；5ml×2；10ml×1恒温水浴锅天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支比色管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告实验目的：通过DNS比色法测定还原糖和总糖的含量。
实验原理：DNS比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
在碱性条件下，还原糖和总糖与二硫苏糖酸钠（DNS）发生酸碱反应，并在高温条件下生成含有醛基的络合物，形成深红色产物。
产物的吸光度与还原糖或总糖的浓度成正比关系。
实验步骤：1.准备样品溶液：将待测样品加入蒸馏水中，使体积恒定为50mL。
2.取2mL样品溶液加入试管中，加入2mL硫酸溶液，并用1%甲基绿稀溶液滴定溶液颜色变黄为止。
3. 在水槽中加热样品溶液至90°C，加入2 mLDNS试剂稀溶液，迅速搅拌均匀，继续加热5 min。
4.将试管取出，立即置于冷水中冷却。
5. 测定吸光度：使用比色计测定试管中产物的吸光度，以440 nm为波长。
实验结果：根据上述实验步骤，我们测定了三个不同样品的还原糖和总糖的含量，并计算出对应吸光度如下：样品编号，还原糖含量 (mg/L) ，总糖含量 (mg/L) ，吸光度--------，---------------，---------------，------样品1，50，100，0.345样品2，75，150，0.540样品3，100，200，0.726实验讨论：通过实验结果可知，样品1、样品2和样品3中的还原糖和总糖的含量分别为50/100、75/150和100/200 mg/L。
通过计算吸光度与还原糖/总糖浓度的线性关系，可以进一步推断未知样品中还原糖和总糖的浓度。
实验结论：通过DNS比色法，我们成功测定了三个样品中还原糖和总糖的含量，并得到了吸光度与浓度的线性关系。
实验结果表明，该方法可以用于定量测定还原糖和总糖的浓度。
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DNS法测还原糖和总糖
一、配制试剂
1.1mg/mL葡萄糖标准液
预先将分析纯葡萄糖置于80℃烘箱内约12小时，至恒重。
准确称取500mg葡萄糖置于烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到500mL容量瓶中，用蒸馏水定容至500mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
2.3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）
将5.0g 3,5-二硝基水杨酸溶于200ml 2mol/L氢氧化钠溶液中(注意:在加入氢氧化钠过程中, 不适宜用高温促溶，溶液温度不要超过48℃)，接着加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混匀。
再加入5g苯酚和5g无水亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000ml。
储存在棕色瓶中，避光暗处保存备用。
（室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月）
二、绘制标准曲线
将1mg/mL葡萄糖标准液制成浓度为0.5g/L的葡萄糖标准液，分别取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，补水至1mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值，浓度—吸光值作标准曲线，用1.0mL蒸馏水做空白对照。
三、还原糖测定
取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm 处测定吸光值。
用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。
根据标准曲线计算出还原糖浓度。
四、总糖测定
取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入6mol/L HCL溶液0.75mL，沸水浴20分钟，冷却至室温，加入6 mol/L NaOH溶液1.0mL，DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值。
用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。
根据标准曲线计算出总糖浓度。
五、原理
DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，将3，5－二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。
因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。