临床检验仪器学(第二版)

临床检验仪器学第四讲第12章血细胞分析仪(Blood Cell Analyzer)南京医科大学第一临床医学院临床医学工程处刘坚•血细胞分析仪(Blood Cell Analyzer)是指对一定体积全血内血细胞异质性进行自动分析的常规检验仪器。

•血液分析仪主要完成以下两大功能:⑴血细胞计数：红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白。

⑵血细胞分类：白细胞中的淋巴、中性、嗜酸、嗜碱、单核、幼稚细胞；红细胞中的网织红细胞。

•根据计数/分类的测定值计算间接测定值红血球容积比(HCT)、平均红血球血红蛋白含量(MCH)、血小板容积比(PCT)，等等1947年Coulter 发明了小孔电阻抗法通过测量细胞的体积大小对细胞进行分类计数主要是用来计数红、白细胞该技术一直被各种血液分析仪沿用至今1953年库尔特家族研制出全世界第一台血细胞计数仪：Model AWallace H. & Joseph R.Coulter血细胞计数(Blood count)早期的血液分析仪主要用来计数红、白细胞全血细胞计数(Complete Blood cell Count)增加光电比色系统用来同时测定血红蛋白血小板可在同一仪器上与红细胞一起计数利用直接测量到的项目运算得到间接计算项目（如血球压积等参数）不包括白细胞分类计数测定标本采用机外人工处理的预稀释方式白细胞分类计数(Differential Leukocyte Cell Count)带电脑的显微镜下辨认细胞的图象识别技术效率低，受制片、染色技术的影响大在计数细胞数不多时，重复性较差没有得到普遍推广阻抗法仪器检测白细胞“二分群、三分群”仪器内部结构的进一步完善微处理器分辨力的进一步提高特殊溶血剂的应用无法对细胞内部结构进行分析，准确性有限白细胞分类计数(Differential Leukocyte Cell Count)检测白细胞从二分群、三分群发展到五分群除了体积测量之外增加了多种手段（联合检测法）激光散射、激光激发荧光检测法射频（高频）传导检测法特殊溶血剂检测法多角度激光、偏振光散射检测法细胞化学染色检测法在实际仪器中至少采用两种以上方法联合对白细胞进行五分类。

白细胞分类计数(Differential Leukocyte Cell Count)五分群血液分析仪提供四十余项实验参数全血细胞计数（CBC）:白细胞总数（WBC）红细胞（RBC）红血球容积比（HCT）血红蛋白（HGB）平均红血球体积（MCV）血小板（PCT）平均红血球血红蛋白含量（MCH）；白细胞分类（DIFF ）：淋巴细胞(LYM) 中性粒细胞(NEUT)单核细胞(MONO) 嗜酸细胞(EOS) 嗜硷细胞(BASO) 网织红细胞分类、计数（RETIC）项 目 单 位 项 目 定 义数据来源 1 W B C x 103/u l 白血球 直接测量 2 R B C x 106/u l 红血球直接测量 3 H G B G /d l 血红蛋白浓度（比色法）直接测量 4 H C T % 红血球容积比 R B C *M C V 5 M C V f l 平均红血球体积直接测量 6M C H p g 平均红血球血红蛋白含量 H G B /R B C 7 M C H C G /d l 平均红血球血红蛋白浓度 H G B /H C T 8 R D W % 红血球体积分布宽度直接测量 9 P L T x 103/u l 血小板直接测量 10 M P V f l 平均血小板容积 直接测量 11 P D W % 血小板容积分布宽度直接测量 12 C B C P C T %血小板容积比 P L T *M P V 1 N E U Tx103/ul ，%嗜中性细胞计数 嗜中性细胞百分比 一次， #NEUT/WBC 2 L Y M Px103/ul ，%淋巴细胞计数 淋巴细胞百分比 一次， #LYMP/WBC 3 M O N Ox103/ul ，%单核细胞计数 单核细胞百分比 一次， #MONO/WBC 4 E O Sx103/ul ，%嗜酸性细胞计数 嗜酸性细胞百分比 一次， #E O S /W B C 5 D I F F B A S Ox103/ul ，%嗜碱性细胞计数 嗜碱性细胞百分比 一次， #BASO/WBC 1 %R e t ic %网状红血球百分比 #Ret/RBCr 2 #R e t ic x 106/u l 网状红血球绝对值直接测量 3 %HRetic %高核酸浓度网状红血球比率 #HRet/#RET 4 %MRetic % 中核酸浓度网状红血球比率 #MRet/#RET 5 %LRetic % 低核酸浓度网状红血球比率 #LRet/#RET 6RETICI R F -H % 低成熟度网状红血球比率(高) #HRet/#RET五分类血液分析仪的基本检查项目血细胞分析仪分型按自动化程度分类：半自动血细胞分析仪；全自动血细胞分析仪；血细胞分析工作站；血细胞分析流水线；按检测原理分类：电容型、光电型、激光型、电阻抗型、联合检测型、干式离心分层型、无创型、按对白细胞分类的水平分类：二分群、三分群、五分群、五分群 网织红（红细胞）血细胞分析仪的结构种类CELL-DYN 1600CELL-DYN 1700 ABX Micro 60HYCEL Hemacell ABX Pentra 60SE-9000ADVIA 120ABX Pentra 120 GEN·S System ⅡSE-9000血细胞分析仪+SPS-100自动推血片机ABX Pentra 120+自动推血片机Sysmex公司血液分析流水线Sysmex公司血液分析流水线白细胞“三分群”型血液分析仪：测定原理( Principle )小孔电阻抗法是利用血细胞混悬液中血细胞的电阻大于电解液溶液（稀释液）电阻的特性，当血细胞通过小孔时引起小孔两端电阻抗增大的原理而进行血细胞计数和体积测定。

小孔电阻抗法能够进行白细胞、红细胞、血小板计数及体积的测定。

小孔电阻抗法在对白细胞分类上只能将白细胞按体积大小分为三个亚群，故分析精度较差。

（211页）白细胞“三分群”型血液分析仪：测定原理( Principle )采用Coulter原理，即小孔电阻抗法装有宝石小孔的小孔管置与小孔管内外的铂金电极两电极间的恒流电源小孔上端的恒定负压测定原理( Principle )血细胞通过小孔，排开等体积电解液。

小孔中的电解液电阻变大，引起产生等比例增大的电压脉冲。

电压脉冲的个数与细胞个数相当，脉冲幅度与细胞体积成正比。

将脉冲送入相应的计数通道，计算得到某类细胞个数。

白细胞“三分群”型血液分析仪：红细胞白细胞血小板t不同细胞通过小孔产生的电压脉冲256个计数通道1.6fl /每通道通道内计数测定原理( Principle )由检测器产生的脉冲信号经计算机处理后以体积直方图显示。

直方图可以显示特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。

(212页）白细胞“三分群”型血液分析仪：1fl （1立方微米）=10-15升白细胞“三分群”型血液分析仪：测定原理( Principle )由检测器产生的脉冲信号经计算机处理后以体积直方图显示。

直方图可以显示特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。

在进行血细胞分析时，白细胞和血红蛋白为一个检测通道（小孔直径为100µm)；红细胞和血小板为一个检测通道(小孔直径为70µm）。

单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞Monocyte Eosinophil Basophil （统称为中间细胞）体积为90-160fL 淋巴细胞中性粒细Lymphocyte Neutrophil体积为35-90fL 体积为160-450fL白细胞及血红蛋白检测白细胞的五种类型白细胞“三分群”型血液分析仪：正常人外周血中的5种白细胞，最多的是嗜中性，次为淋巴细胞，其他3种在通常情况下加起来不超过10％。

淋巴细胞与嗜中性细胞体积相差较大，其他3种体积相差不多。

LYMP 35fl-90fl MONO EOS BASO90fl-160fl NEUT >160fl白细胞及血红蛋白检测白细胞的计数与分类：（白细胞/血红蛋白通道）血液样品+ 稀释液+ 溶血剂⇒白细胞的计数与分类血红蛋白测定：（白细胞/血红蛋白通道）血液样品+ 稀释液+ 溶血剂+ 转化剂⇒氰化血红蛋白氰化血红蛋白浓度∝ 血红蛋白浓度⇒比色法测量白细胞“三分群”型血液分析仪：LYMP 35fl-90fl MONOEOSBASO90fl-160flNEUT>160fl小孔电阻抗法基本原理白细胞“三分群”型血液分析仪：红细胞及血小板检测由于血小板的体积小于红细胞，两者在同一测量通道中进行。

由于血液中红细胞的总数远大于白细胞，检测样品经二次稀释后直接进入小孔计数。

检测结果同样以直方图形式显示。

小孔电阻抗法不能对红细胞中的网织红细胞进行测量。

联合型检测法基本原理白细胞“五分群”型血液分析仪：测定原理(Principle )单纯依靠细胞体积大小来进行白细胞五分类是难以做到的。

必须采用一些其他检测手段联合应用来进行白细胞五分类。

（联合检测型）常用方法有：高频电磁波（或称射频）传导法细胞化学染色法特殊溶血剂法激光散射法（测不同角度的散射及激发光）其白细胞总数、红细胞、血小板及血红蛋白的测定方法仍基本沿用“三分类”型分析仪的方法。

测定原理(Principle )绝大多数五分类血细胞分析仪在检测通道上都采用了流式细胞分析技术。

流式细胞分析技术的检测光路可分为鞘流通道、激发光源（多为激光）、散射光检测、吸收光检测、荧光检测等几个方面。

在白细胞五分类型血液分析仪中对网织红细胞一般也采用单独的激光流式细胞分析通道进行检测。

联合型检测法基本原理白细胞“五分群”型血液分析仪：半导体激光器 =635nm流动池前向角散射光检测二极管双色性反射镜荧光检测光电倍增管流式细胞检测光路示意图侧向散射光光电倍增管白细胞“五分群”型血液分析仪：散点图(Scattergram)五分类血细胞分析仪白细胞分类结果均采用散点图的形式来显示。

红白细胞总数血小板仍采用直方图显示。

白细胞“五分群”型血液分析仪：散点图(Scattergram)白细胞二维散点图二维散点图及直方图散点图(Scattergram )图中纵坐标为体积;横坐标为吸光度。

各种不同类型的白细胞根据其体积与吸光度的的数值标记在二维坐标的相应位置。

白细胞“五分群”型血液分析仪：AbsorbanceV o l u m eDebrisATLLymphEosMonoNeutIMMCh 127散点图(Scattergram )白细胞“五分群”型血液分析仪：图中三维坐标分别为V 、C 、S ，各种不同类型的白细胞根据其V C S 的值，标记在三维坐标的相应位置。