高效液相色谱分离7503光学异构体

〔 ７〕郑如玉等，色谱，１４ １８） ，０（９４ ．
（ 收稿 日期：１８年 ６月１ 日） ９５ ７
在苯基键合固定相微型柱上儿茶酚胺的
反相离子对色谱的研究
邹公伟 史蓉蓉
（南 京 大 学 化 学 系
高 鸿
Ｍｉｒ Ｈ Ｌ — ｃｏ Ｐ Ｃ Ｅ ）的 ＣＤ
〔 提要〕本文应用微型高效液体色谱—
电化学检测
方法，进行了在苯基键合固定相微型柱上，用反相离子对色谱分离儿茶酚胺 ＣＡ） 的研究。 用流动伏安法确定了薄层池安培检测器的实验条件。比较了十八烷基键合固定相 （ ＹＷＧ Ｃ１ ７ 、阳离子交换剂 （ａｔｉ ＣＸ ８ Ｈ３ Ｐ ｒｓ－Ｓ ）和苯基键合固定相 （ ｉｉ ＹＷＧＣ Ｈ５ ６ ）柱上ＣＡ的 色谱行为，讨论了ＹＷＧ Ｈ柱上，流动相ｐ Ｃ６ Ｈ的变化对Ｃ Ａ分离的影响，确定了应用Ｍｉｒ ｃｏ ＨＰ Ｃ Ｅ 方法，在ＹＷＧＣ Ｈ 柱上，用１－ Ｌ － ＣＤ ６５ 庚烷磺酸钠作为离子对试剂，分离ＣＡ 的实
（ 收稿 日期：１８年１月２ 日） ９３ １ ０
高效液相色谱分离７０光学异构体 ５３
郑如玉 刘锦慧 胡菊华 陈伯昆 ＊
（ 国科 学 院 动物 研究 所 ， 北 京 ） 中
〔 提要〕本文将消旋的７０醇和光学纯的 （ ５３ ＋）或 （ －）的α 异丙基－ 氯苯乙酸反 － ４－ 应，生成非对映异构体的酯衍生物，再用高效液相色谱 分离。十分钟内可完成两种异构体 含量的定量分析，其标准偏差小于０４ ． ％。几百毫克量的制备可得到高效液相色谱纯的Ｒ Ｓ 和Ｒ Ｒ或Ｓ 和Ｓ Ｓ Ｒ两种组分。
１ （，－ －３４二氯苯基） ，，－ － ２２三氯乙醇 （５３＊是制备药效长、毒性低、能生物降 ２ ７０）
解 新农 － ，－ 苯 － ２２三 酸乙 （ ６） 的 要 料 １ ７ ３ 的 药１（ ４二氯 基） ２，－ 氯乙 酯 ７ ４＊ 最主 原 〔〕 ５ ３ ２ ５ ２ 。 ０
有一个不对称碳原子，所以由它合成的７０ 有左旋和右旋的两种光学异构体，而左旋的 ５４
液相 谱分 ３ ７。 ７ ３ 学 构 工 未见 。 色 离〔－ 〕 拆分 ５ 光 异 体的 作尚 报导 ０
我们先用光学纯 （ ＋）或 （ －）的 － 异丙基－ 氯苯乙酸＊ 分别与消旋的７ ０醇反 ４－ ３ ５３
应使生成非对映异构体的酯衍生物１ （，－ －３４二氯苯基）２２２ 三氯乙醇－－ －，，－ α异丙基－ － ４ 氯苯基乙酸酯＊。用高效液相色谱能完全分离这两种异构体。大量制备得到高效液相色 ４ 谱纯的左旋和右旋的酯衍生物。定量测定各异构体的含量，其标准偏差小于 ０４ ．％。
所得的产品是高效液相色谱纯的。从表 １ 所列各馏分的纯度和收率可见，未检出组分Ⅱ 的组分 的收率可达６ ％以上。没有得到不含组分 的组分 产品，把纯度为８ ％ ８ ２ ２ －８ 的组分 粗产品再经过一次制备柱，可得到纯度＞９％的组分 ，但收率很低。 ９
７０ （ ５３ ±）的α－ 丙基－ － 异 ４ 氯苯 乙酸衍 生物 的制 备分 离 表１
酸于１０ ０ 毫升反应瓶中，加５毫升甲苯，加热回流２ 小时，反应完毕后，用 ５％碳酸氢 ０ 亓 ４ 钠处理，有机层用水洗三次，用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂后即得到所要的酯衍生
物。
（ 四）色谱条件
１．分析 柱：自装硅胶柱或Ｚ ｒａ Ｓｌ ｏｂ ｘ 硅胶柱。流动相：己烷：乙酸乙酯 ＝ ｉ
５０ ７ ０ ： 或含 １ ％异丙醚的己烷。 ２．制备 柱：药物所自 装柱 （４ ２０毫米，青岛１－４μ硅胶Ｈ 。流动相： ４× ５ ０ ０ 含 １５ ．％异丙醚的己烷。每次进样 ４０ ０ ０－６０毫克，根据峰的位置收集柱流出物。产品 由分析柱测定纯度，最后用质谱鉴定成分。
〔 ５〕Ｔｏ ｏ ｏ ｍ ｈ Ｔａ ｇ ｉ ｔ ． ｉ， ９ ．８ ９ ０ ． 产 品 ｚ ｍｅ ａ ｅ ａ ， ｄ１ ４ ３ ８ ） ｌ 〔 ６〕 Ｍａ ｓｏ ｒ ａ ｔ ｌ ｒｉ． ｓａ Ｈｏｉ ｂ ｅ ａ． ， ｃ 瓸Ｂｏ ． ｈ ｍ ，４ ， １６ （ ９ ０ ． ｌＣ ｅ ． ４ １ １ ８）
参 考 文 献
〔 〕中国科学院动物研究所药剂毒理室，昆虫学报，２，３０（９９ １ ２ ９ １７）
〔 〕Ｔ ｏ ｓ ｈ ｉｄ ｔ ．ｒ ｆ１ ２ ｈ ｍａ ｃ ｍ ｆ ， ｌ ， ５ ５，４ （ ９６ ． 分 ， １５８ １ ２ ａｏ ． ２２ ９１ ８） ；５９３（１ ３ ． ， ８ （ ９２ ， １ ９） 〔 ４〕Ｊｈ Ａ ｈ ｍ ｓｎ ， ｂ ３， ７（９２ ｏ ｎ ． ｏ ｐ ｏ ａ Ｉ ｄ２８４０ １８ ）．
参
考
文
献 Ａ Ａ
〔 １〕Ｒ． ｏ ， ｌｏｒＥＬ． ｈｏ ，． ｒｍ ｔｇ ．ｃ ．１ ，１１ ７． ｏ ｓ ｎＪ Ｃ ｏ ａｏ ｒＳ ｉ ５４ （９ ） 〔 ２〕Ｂ Ａ． ｄｉ ｍ ｅ ， ｈ ｍｔｏｒ Ｓ ．１ ２ （９ ０ ） ． ｉ ｌｎ ｅｙ ｒＪＣｒｏａ ｇ． ｃｉ ，，５ ８ ｇ
〔 ３〕Ｌ ．Ｖ ａＡ ｉ ａ ．ａ ｕ Ｒ Ｒ ｓｅ ｎ ｙ ． ｒ －ｖ ｌ， Ｍ ｅ， ． ｏ ，Ａａ ｓｓ， ０３（ ８ ） ｌ ｌ，６１ ２
〔 ８〕Ｄ Ｓ ｉ ，．ａ ｌ，．ｏｎ ｒｙＪＣ ｍ ｏｒ ２８１ ８ ） 影 跋，Ｂ ａ ｌ Ｖ ｌｅ ｈｕ Ｒ ｅ ａ，． ｈｏｔ ｇ．，６，（９３ 欤珺Ｔ
〔 ９〕Ｋ． ａｓ Ｋ ｒ ｉＪ Ｃｒ ａｔｇ ，１ １ １ ４ ㄖ酸 的 ｌ ｉ， Ｍ ｊｃ， ． ｏ ｏｒ．９ ， ６（ ９ ） 岬腁
＊ 北京大学论文生
实
验
部
分
（ 一）仪器：Ｆ Ｃ ５ Ｌ －３０高效液相色谱仪。ＵＶ ＤＥ －１０ Ⅱ型紫外分光光度计。医 Ｉ Ｃ ０－ 蛐
学科学院药物所自装的制备色谱仪。岛津Ｌ －３ Ｃ Ａ高效液相色谱仪，Ｕ Ｄ ２ Ｖ － 型紫外检
测器，Ｃ－ＲＩ Ｂ型微处理机。
Ｊ －Ｄ３０ Ｇ －ＭＳ气相色谱和质谱联用仪。 ＭＳ ０ Ｓ Ｃ
体。
所装的制备柱用了９小时，分离３ 克样品，柱子未见异常。所用流动相全部蒸馏回 ０ ４
（ ）制备出来的组分 １
条 件 同 图 １ ｂ。
液体 ； （ ） 制备 出来的组分 Ⅰ ２ 晶体， （ ３）消旋 的７０ 衍生物。其它条 ５３
收继续使用。
（ 三）两种异构体的定量分析：从表２ 所列两种异构体的定量分析结果可见，对不 同比例的异构体 （ 组分Ⅰ 的含量从９ ．７％到４５％），其定量分析标准偏差都小于 ６６ ．１ ０４％两种不同流动相的分析结果非常接近。０２微克的样品１分钟内可给出准确的结 ． ． ０
验条 件 。
反相离子对色谱法逐渐成为Ｃ 测定的主要方法，大部分文献报道了Ｃ 在十八烷基 Ａ Ａ
键合固 定相上的分离〔－８。尽管使用苯基键合固定相的分离文 １ 〕 献报道较少〔 〕 ９，但从
理论的观点来看，它对Ｃ 等具有极性的非同系物，且官能团有差异的化合物的分离，可 Ａ 望得到更高的选择性、更好的峰形和分离度。本文应用Ｍｉｒ Ｈ Ｌ －Ｅ Ｄ ｃｏ Ｃ Ｃ 实验技术， Ｐ
〔 ４〕Ｍ． ｋｒ， ａ ｚ ｌ ，． ｅｎｅ ｔ ＬＨ ｋ ｅｌ Ｇ Ｓｈｉ， ．ōｇｅ Ｊｈ ｏ ｏ ．２１，１１８） ）┑汁酸 ｌ ＥＳ ｊ ， ｒ ｍｔｇｒ， ８３（ １ ．澹 ㄖ 岬淖
〔 ５〕Ｌ Ｈ ｃ ｚ ｌ Ｇ． ｃ ｉ ， ｈｒｍ ｏｒｐ ｉ， ， ３（ ９ ８． 譇 ． ａ ｋ ｅｌ Ｓ ｈｌ ／ ｌ ｏａｔｇ ａｈ ａ１ ４ １ ） Ａ 〔 ６〕ｗ ． ｌｌ ｔ， Ｓｈ ｗ Ｃｈｏｍｔ ｒＳ ｉ． １１１ ８ ） ．Ｅ ｉ ｔ ｏ Ｇ ａ， ａｏｇ． ｃ ，６ ９ Ａ 〔 ７〕Ｆ Ｓｅｌａ ｄ ． ｔｌ ｒ，．Ｌ Ｈ ｃ ｅ ， Ｄ ｌｅ Ａａ ａ ． ａ ｈ ｙ Ｐ ． ｎ，ｎｌＢｉ ｃ ．８ ， ７１ ７ ）示 尽在２ ｏｈｍ ， ７ ３５ ９ Ｔ Ｑ
（ 五）定量分析数据的处理方法：由Ｃ－ＲＩ Ｂ微处理机给出组分 Ⅰ和 的含量 （ 和 Ｃ１ Ｃ ），将组分 的含量Ｃ 列表讨论。每个样品进样四次以上，求得平均值和标准偏差。 ２ １
结 果 和 讨 论
（ 一）四种异构体的分离：从图 １可见，在硅胶柱上分别用己烷：乙酸乙酯＝５０ ７和 ０：
含１ 异丙醚的己烷为流动相 两个异构体在１分钟内都能完全分离。 （ ０ ＋）和 （ －） 的酸与７０ （ ）合成的酯衍生物分离图谱基本相同。 ５３ （ 二）异构体的制备：参考分析柱的色谱条件，用医科院药物所的制备柱分离消旋衍生 物。从图２的分离图谱可见，每次进样大至 ４０ ０ ０ ～６０毫克，异构体的分离还是较好的。 得到显然不同的两种产品— 晶体的组分 和粘度很大的液体组分Ⅱ。图３ 颉 指出，制备
７ ４ 虫 比 旋的 ２ ２ 光 的 ５ 醇 容易 化成 学 ７ ４ ５ 杀 能力 右 高 ０ 〕。 学纯 ７ ３ 很 酯 光 纯的 ５ 酯。 ０ 倍〔 ０ ０
所以，制备光学纯的７０醇是得到高效农药的关键。 ５３ 用高效液相色谱法分离光学异构体较之古老的分布结晶等方法简便得多。常用的方 法之一是先将光学异构体与左旋或右旋的光学试剂反应使成为非对映异构体后再用高效
制备得到的两对异构体产品分别做质谱分析，它们的质谱图完全一样 （ 图４）。 Ｍ－ ４８等于酯衍生物的分子量Ｍ＋２ ＝３ ，除了有７０酸的特征峰２７ ４ 外，还有酯 ５３ ７和２２ 衍生物的特征峰３９ ７ 以及α异丙基－ 氯苯乙酸的特征峰１７ ９。这说明α异丙 ６和３１ － ４－ ６和１５ － 基－ 氯苯乙酸已接上去。而且色谱图上的两个峰分别是Ｒ 和Ｓ 或Ｒ 和Ｒ 两对异构 ４－ Ｓ Ｓ Ｒ Ｓ
果。
（ 四）小结：消旋的７０ 醇和光学纯的 （ ５３ ＋）或 （ －）的 α－ 异丙基－ －氯苯乙酸 ４
反应，生成非对映异构体的酯，再用高效液相色谱分离。此法可用于这种光学异构体的 定量分析和大量制备。 致谢：医科院药物所姜振哲和王津生同志协助做制备。环化所王孝明和孙思恩同志
协助做质谱分析，特此致谢。
（ 试剂 为 析 流 相用５ 分 筛干 蒸 制备 溶 部 收 用 二） 均 分 纯， 动 Ａ 子 燥后 馏。 用的 剂全 回 再 。