人降钙素基因相关肽CGRPELISA试剂盒使用方法
人和肽素(copeptin)ELISA试剂盒使用说明书
人和肽素(copeptin)ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人和肽素(copeptin)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人和肽素(copeptin)水平。
用纯化的人和肽素(copeptin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入和肽素(copeptin)，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的和肽素(copeptin)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人和肽素(copeptin)含量。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析
人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T2 ng/L -60 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本降钙素基因相关肽(CGRP)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人降钙素基因相关肽(CGRP)水平。
用纯化的人降钙素基因相关肽(CGRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素基因相关肽(CGRP)，再与HRP标记的降钙素基因相关肽(CGRP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的降钙素基因相关肽(CGRP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人降钙素基因相关肽(CGRP)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
人(Human)和肽素(copeptin)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）和肽素（copeptin）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被和肽素（copeptin）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的和肽素（copeptin）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1.5、3、6、12、24pmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒 说明书
人降钙素基因相关肽（CGRP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：1.56pg/ml-100pg/ml最低检测限：0.39pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人CGRP，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中CGRP 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗CGRP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗CGRP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的CGRP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
人降钙素原(PCT)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书
2022年修订第一版（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!）产品货号：E-EL-H1492c产品规格：96T/48T/24T/96T*5Elabscience 人降钙素原(PCT)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human PCT(Procalcitonin) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话技术部电话************电子邮箱（销售）********************电子邮箱（技术）**************************网址：具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
Copyright ©2021-2022 Elabscience Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved目录用途 (3)基本性能 (3)检测原理 (3)试剂盒组成及保存 (4)试验所需自备物品 (5)样品收集方法 (5)注意事项 (6)■ 试剂盒注意事项 (6)■ 样品注意事项 (6)样本稀释方案 (6)检测前准备工作 (7)操作步骤 (8)结果判断 (10)技术资源 (10)典型数据 (10)性能 (11)■ 精密度 (11)■ 回收率 (11)■ 线性 (11)声明 (12)Intended use (13)Character (13)Test principle (13)Kit components & Storage (14)Other supplies required (15)Sample collection (15)Note (16)■ Note for kit (16)■ Note for sample (16)Dilution Method (17)Reagent preparation (17)Assay procedure (18)Calculation of results (20)Technical resources (20)Typical data (20)Performance (21)■ Precision (21)■ Recovery (21)■ Linearity (21)Declaration (22)用途该试剂盒用于体外定量检测人 血清、血浆或其他相关生物液体中PCT浓度。
降钙素基因相关肽
一降钙素基因相关肽(CGRP)是由降钙素Cal/CGRP基因表达，是具有强大的扩张血管作用的生物活性多肽。
它不仅改善血流动力学，在全身血压、局部血流灌注等调控中具有重要作用，而且具有拮抗内皮素-1（ET-1）的血管收缩效应，调节T、B淋巴细胞功能，并可能参与了内毒素休克和细胞凋亡的发病机制。
降钙素基因相关肽(CGRP)在痛觉的产生、传导和调节等方面可能起着重要作用二引物设计step by step1、在NCBI上搜索到目的基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。
2、用Primer Premier5搜索引物①打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口，Copy目的序列在输入框内（选择As），此窗口内，序列也可以直接翻译成蛋白。
点击Primer，进入引物窗口。
②此窗口可以链接到“引物搜索”、“引物编辑”以及“搜索结果”选项，点击Search按钮，进入引物搜索框，选择“PCR primers”，“Pairs”，设定搜索区域和引物长度和产物长度。
在Search Parameters里面，可以设定相应参数。
一般若无特殊需要，参数选择默认即可，但产物长度可以适当变化，因为100～200bp的产物电泳跑得较散，所以可以选择 300～500bp.③点击OK，软件即开始自动搜索引物，搜索完成后，会自动跳出结果窗口，搜索结果默认按照评分（Rating）排序，点击其中任一个搜索结果，可以在“引物窗口”中，显示出该引物的综合情况，包括上游引物和下游引物的序列和位置，引物的各种信息等。
④对于引物的序列，可以简单查看一下，避免出现下列情况： 3’不要出现连续的3个碱基相连的情况，比如GGG或 CCC，否则容易引起错配。
此窗口中需要着重查看的包括：Tm 应该在55～70度之间，GC％应该在45％～55％间，上游引物和下游引物的Tm值最好不要相差太多，大概在2度以下较好。
小鼠cgrp elisa说明书
小鼠CGRP ELISA 说明书简介小鼠CGRP（Calcitonin Gene-Related Peptide，降钙素基因相关肽）是一种由CALCA基因编码的神经肽。
它主要存在于中枢和外周神经系统中，并在多种组织和细胞类型中发挥重要生理功能。
CGRP在疼痛传导、血管舒张、炎症反应等方面起着关键作用。
因此，对小鼠CGRP的测定具有重要的研究意义。
本ELISA试剂盒是用于检测小鼠组织或血清样品中CGRP水平的定量分析工具。
该试剂盒采用双抗体夹心ELISA方法进行检测，具有高灵敏度、高特异性和良好的重复性。
实验原理本试剂盒利用特异性抗体与样品中的CGRP结合形成抗原-抗体复合物。
首先，在96孔板上涂覆预包被了兔抗小鼠CGRP特异性抗体的固相载体，使其吸附在孔壁上。
样品加入后，目标蛋白与固相载体上的抗体结合。
随后，加入小鼠CGRP特异性抗体标记的酶标记物，与复合物中的CGRP结合。
洗涤去除未结合的物质后，加入底物使酶标记物发生着色反应。
最后，通过添加停止液终止反应，并使用酶标仪测定吸光度，可以确定样品中CGRP的浓度。
实验步骤1.取出所需试剂，将96孔板置于工作台上。
2.加入预包被兔抗小鼠CGRP特异性抗体，孵育30分钟。
3.倒掉孔内液，用洗涤缓冲液洗涤孔板3次。
4.加入样品和标准品，孵育2小时。
5.倒掉孔内液，用洗涤缓冲液洗涤孔板3次。
6.加入小鼠CGRP特异性抗体标记的酶标记物，孵育1小时。
7.倒掉孔内液，用洗涤缓冲液洗涤孔板3次。
8.加入底物溶液，孵育30分钟。
9.加入停止溶液终止反应，并使用酶标仪测定吸光度。
实验结果分析根据吸光度测定结果，可以计算样品中CGRP的浓度。
通过与标准曲线比较，可以确定样品中的CGRP水平。
注意事项1.所有试剂和样品应在室温下恢复至室温后再使用。
2.所有试剂和标本操作时，请佩戴手套以避免交叉污染。
3.为了减少误差，建议在同一实验中将所有样品和标准品进行重复测试。
4.请按照说明书的步骤操作，并严格控制反应时间。
ELISA检测人降钙素基因相关肽在转基因马铃薯块茎中的专一性表达
ELISA检测人降钙素基因相关肽在转基因马铃薯块茎中的专一性表达宋东光;邓日烈;聂呈荣;张英慧;陈淑珍;仇月明;汪训明【摘要】通过间接ELISA检测了人CGRP基因在转基因马铃薯中的表达.马铃薯class I patatin基因5′侧翼区驱动下人CGRP的表达表现了明显的块茎专一性,茎段中没有检测到CGRP活性,CGRP的表达量在不同转基因株系中有差异,最高达到约50 ng/mg可溶性蛋白.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2010(000)007【总页数】3页(P117-119)【关键词】人CGRP;ELISA;转基因马铃薯【作者】宋东光;邓日烈;聂呈荣;张英慧;陈淑珍;仇月明;汪训明【作者单位】佛山科学技术学院园艺系,佛山,528231;佛山科学技术学院园艺系,佛山,528231;佛山科学技术学院园艺系,佛山,528231;佛山科学技术学院园艺系,佛山,528231;佛山科学技术学院园艺系,佛山,528231;佛山科学技术学院园艺系,佛山,528231;复旦大学遗传所,上海,200433【正文语种】中文近年来利用转基因植物表达外源医用多肽，如细胞因子、抗体、口服疫苗等取得了重要进展，外源多肽能够在植物细胞中正确折叠并具有活性，可选择在植物特定组织器官表达并直接食用，廉价的转基因植物表达系统将在基因药物生产中具有重要的意义［1］。
人降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)含37个氨基酸，广泛分布于中枢和周围神经、心血管、循环、消化和内分泌等系统［2］，是具有重要生理活性的神经肽之一。
对CGRP及其受体的生理功能及其可能用于临床治疗进行了广泛的研究，预示CGRP可能在血管相关疾病临床治疗中具有重要应用前景［3－6］。
为了探讨神经肽在转基因植物中能否正确表达和具有生物活性，将人αCGRP合成基因通过农杆菌介导转入马铃薯并检测其 mRNA的表达［7］，此外，通过ELISA技术检测人CGRP在转基因马铃薯块茎中的专一性表达，这是CGRP在转基因植物中获得表达的首例报道。
人降钙素原(PCT)ELISA试剂盒说明书
人降钙素原(PCT)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中PCT含量。
实验原理用纯化的PCT抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的PCT抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的PCT呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。
每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2,000 pg/ml，将其稀释为1,000 pg/ml后，再做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成1,000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62.5 pg/ml，31.2 pg/ml，15.6 pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔 0 pg/ml。
如配制500 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml ）1,000 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、样品稀释液：1×20ml。
4、检测稀释液A：1×10ml。
5、检测稀释液B：1×10ml。
6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。
临用前以检测稀释液A 1:100稀释（如：10 检测溶液A / 990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。
7、检测溶液B：1×120/瓶（1:100）。
降钙素基因相关肽
1 CGRP的组成和影响因素
降钙素基因相关肽是目前已知在体内作用最强的扩张血管活性多肽，与降钙素（Calcitonin,Cal）来自一个共同的基因。1983年，Rosenfeld等首次应用DNA重组技术在小鼠甲状腺髓样癌C细胞中发现CGRP。1984年，Morris等证实在人体中有GCRP，经小鼠Cal基因克隆证实，Cal和CGRP具有相同的基因片段。在人体，Cal/CGRP基因均位于于11号染色体短臂上，由6个外显子和5个内含子组成。按结构可分为CGRPα和CGRPβ两类。CGRP由37个氨基酸组成，多肽的1、7位氨基酸以二硫键相连，C端为苯丙氨基酸残基。人（h）和大鼠（r）CGRP有4个氨基酸不同，hCGRPα和hCGRPβ有3个氨基酸不同，rCGRPα和rCGRPβ有一个氨基酸不一致。CGRP肽链C端与受体识别有关，而肽链的N端二硫键与生物活性有关。
关键词 降钙素基因的相关肽；内皮素-1；淋巴细胞
近年研究表明，血管内皮细胞和支配血管的神经末梢，在体内可以产生多种血管活性物质，它们在全身血压、局部血流灌注及细胞增殖等调控中具有重要意义。本文对近年来降钙素基因相关肽（Calcitonin gene related peptide,CGRP）拮抗ET-1和免疫调节等作用作一综述。
摘要 降钙素基因相关肽(CGRP)是由降钙素Cal/CGRP基因表达，是具有强大的扩张血管作用的生物活性多肽。它不仅改善血流动力学，在全身血压、局部血流灌注等调控中具有重要作用，而且具有拮抗内皮素-1（ET-1）的血管收缩效应，调节T、B淋巴细胞功能，并可能参与了内毒素休克和细胞凋亡的发病机制。
用放射配基结合实验分析小鼠淋巴细胞CGRP受体的功能特征，结果表明125I-[His10]CGRP结合纯化T、B淋巴细胞受体的解离常数Kd，分别是0.807±0.168nmol/L和0.387±0.072nmol/L,ED50=8Pmol/L，此值何以比受体Kd值低得多的原因不清楚。不过，这可能与CGRP延长受体G蛋白调节亚单位作用有关，G蛋白与受体cAMP的产生有关；或者可能与CGRP抑制受体磷酸二酯酶（该酶能反映cAMP的消耗程度）活性有关。另外，经受体竞争试验表明125I-[His10]CGRP与小鼠淋巴细胞CGRP受体结合不能被P物质、Cal或神经肽Y阻断，说明T，B淋巴细胞上存在具有生物效应的高亲和力CGRP受体，这为研究CGRP调节T、B细胞功能提供了依据[10]。
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人降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒使用方法
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
2 ng/L -60 ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本降钙素基因相关肽(CGRP)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人降钙素基因相关肽(CGRP)水平。
用纯化的人降钙素基因相关肽(CGRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素基因相关肽(CGRP)，再与HRP标记的降钙素基因相关肽(CGRP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的降钙素基因相关肽(CGRP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人降钙素基因相关肽(CGRP)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。