人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析
降钙素基因相关肽对神经系统的作用研究
海南医学2005年第16卷第7期降钙素基因相关肽Caicitonin gene reiated peptide CGRP是一种含有37个氨基酸的神经肽广泛分布于中枢外周神经系统及其他组织作为一种新型神经肽在神经系统疾病的发生过程中有着重要的作用本文对近年来CGRP对神经系统作用的研究进展作一综述1CGRP的舒血管作用及机制1.1CGRP作为一种内源性舒血管神经肽在三叉神经脑血管系统内浓度较高对全身血管有不同程度的扩张作用但在脑心血管的作用更为显著实验及临床研究证实CGRP具有很强的血管扩张改善缺血脑的脑血流量其脑血流量增加30%~80%而无明显副作用[1] Nozaki[2]实验证明CGRP血管舒张反应呈现不同程度的剂效依赖性即适当加大CGRP注入剂量时反应增强浓度低则效应缓慢但持续时间长其作用强于SP VIP等其它血管扩张介质1.2CGRP的舒血管作用机制CGRP舒血管作用的两种机制目前已有较明确的解释[3]CGRP作用于内皮细胞上的受体通过cAMP途径增加细胞内钙离子浓度上调一氧化氮合酶NOS产生NO内皮细胞产生的NO直接穿过细胞膜活化平滑肌内可溶性鸟苷酸环化酶sGC通过环磷酸鸟苷cGMP通路活化蛋白激酶G PKG后者作用于Ca2+ ATP酶使细胞内游离钙离子减少从而舒张平滑肌在另一些血管CGRP也可能通过前列环素PGI2活化cAMP/蛋白激酶A PKA途径发挥舒血管作用CGRP也可不经过内皮直接作用于VSMC上的受体通过cAMP活化PKA或通过活化三磷酸腺苷ATP敏感的钾通道K+ATPChannei促进钾离子外流抑制钙内流最终减少细胞内游离钙离子浓度产生舒张效应2GCRP的神经保护作用及抑制神经元凋亡的部分机制2.1体外实验证实CGRP能促进海马神经元的生长发育而且对大鼠海马脑片脑缺氧损伤具有明显的保护作用延缓不可逆损伤的发生提高复氧后脑片功能的恢复率[4]动物实验证实[5]CGRP具有神经保护功能对减轻脑缺血再灌注脑组织的损伤有显著作用脑缺血可激活一些在细胞凋亡过程中起协同作用的基因及其表达产物通过对促细胞凋亡基因和抑细胞凋亡基因的调控发挥着重要的作用[4]近年来对CGRP的抑制神经元凋亡机制有了较深入的研究2.1.11PKC是Ser/Thr蛋白激酶Nishizuka1997日本首先从鼠脑细胞质中发现受SD及Ca2+激活属钙调节酶[7]在缺血状态下细胞中PKC的活化可引起癌基因c-fos和c-jun的表达引起神经元坏死或凋亡邢雪松等[8]采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型采用免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海成及皮质内PKC的表达结果注射CGRP后大鼠缺血再灌注海马CAI区及顶叶皮质内PKC阳性产物平均灰度值明显高于缺血再灌注组P<0.01而且与神经生长因子NGF有协同作用NGF可以增强CGRP的表达刺激CGRP的合成[9]共同发挥神经元保护作用2.1.2c-fos和jun基因属早期快速反应基因家族又称即早基因immedi-ateiy eariy gene IEG正常情况下表达水平很低难于用免疫组化方法检测当中枢神经组织受到撞击性刺激或缺血缺氧时c-fos基因快速反应张辉[10]等研究提示脑挫伤c-fos基因表达与损伤程度和损伤时间有关因此c-fos表达时相可以作为临床推测受伤时间和严重程度的指标之一实验观察到[11]经CGRP孵育的海马神经元缺氧后fos-IR阳性胞核数比对照组明显减少fos-IR阳性胞核的平均光密度也比较对照组明显降低表明CGRP对缺氧后海马神经元c-fos表达有明显抑制作用2.1.3细胞凋亡是受多基因调控的主动过程其中抗凋亡基因bac-2在对抗细胞凋亡中起重要作用bac-2的高度表达可减少脑缺血时神经元的凋亡[18]花放等[13]在大鼠全脑缺血再灌注模型上采取颈动脉直接注入CGRP应用免疫组化学染色方法观察其对缺血再灌注脑组织Bc1-2蛋白表达的影响结果CGRP组大脑皮质及海马区bc1-2蛋白的表达较降钙素基因相关肽对神经系统的作用研究许刚1!黄新2,审校"黄勤2#1$广西中医学院!广西南宁530011;2$广西中医学院瑞康医院神经外科%关键词降钙素基因相关肽脑血管神经细胞凋亡偏头痛颅内感染痛觉传递神经免疫中图分类号!R741文献标识码!A作者简介许刚1978男文章编号10036350200507015003综述!"#海南医学2005年第16卷第7期全脑缺血再灌注级明显增加P<0.01说明CGRP可上调缺血再灌注脑组织bcl-2蛋白的表达2.1.4AP l作为一种转录因子可被短暂性全脑缺血激活与缺血性损伤机制有关[l4]从缺血引起的早期细胞内外信号改变到最终的细胞死亡或存活存在着若干信号通路其中转录因子AP l是连接这类通路的重要环节之一张璐等[l5]采用EMSA法经颈动脉直接注入CGRP对缺血后大鼠CAI区的AP-ID-NA活性进行观察发现CGRP能不同程度的减轻再灌注72h和7d的神经元损伤CAI区存活细胞数目较NS组明显增加P<0.05CGRP能明显提高缺血后海马CAI区AP l的DNA结合活力提示CGRP的神经保护作用可能与其调节AP l的DNA结合活力有关2.l.5P38是一种分子量为38KD 的钙结合糖蛋白在神经元胞体合成后主要转运到轴突终末特异性分布于突触前囊泡膜上通过测定特异性免疫反应产物的平均灰度值在光镜水平对P38含量进行间接定量从而推测突触数量的变化[16]丁晓慧等[17]采用暂时夹闭双侧颈总动脉法制作大鼠脑缺血再灌注模型经右侧颈内动脉注入CGRP采用单克隆抗P38抗体免疫组织化学染色及显微图像方法研究CGRP对大鼠再灌注海马内P38的影响结果注射CGRP组阳性产物明显高于缺血再灌注组P<0.01表明CGRP可上调缺血再灌注海马神经元P38表达证实了CGRP对缺血神经组织的恢复作用且提示可能与调节突触的可塑性有关3CGRP与偏头痛的关系研究表明偏头痛发作与头颅血管周围组织产生的血管活性物质特别是与三叉神经血管系统的CGRP含量变化有关沈君等[18]通过对降钙素基因相关肽与偏头痛的关系研究发现偏头痛发作时颈外静脉血中CGRP含量较肘静脉血中CGRP含量明显增高典型偏头痛较非典型偏头痛增高更显著表明发作期三叉神经节的激活及颅脑血管传入神经通路的活动增强致神经肽局部释放增加提示偏头痛发作与三叉神经血管系统被激活CGRP强烈扩血管作用及致痛作用密切相关4颅内感染对CGRP的影响近年来CGRP在中枢神经系统感染的病理生理过程中的变化逐渐受到重视张育才等[19]研究发现于兔脑池内注射内毒素后脑组织脑脊液和血浆中CGRP含量均呈显著升高12~24小时达高峰说明CNS炎症情况下CNS和周围组织CGRP表达增强脑组织和脑脊液CGRP含量最高时脑含水量增多亦达高峰临床证实小儿[20]CNS感染急性期血浆和脑脊液CGRP含量呈显著升高且GCS!8分者脑脊液CGRP升高更明显显示病情愈严重CGRP释放愈多其机制可能是CGRP导致脑血管过度扩张引起脑血流自动调节障碍脑血流过多血管通透性增加5CGRP与痛觉传递的关系有人推测CGRP与痛觉传递密切相关[21]在脊髓水平CGRP能促进痛觉信号的传递脊髓蛛网膜下腔注射CGRP可使痛阈降低有研究表明CGRP可促进SP的释放而有利于痛觉的传递脑内注射CGRP可提高痛阀纳洛酮不能阻断这种作用表明脑内CGRP的镇痛作用不依赖于内源性鸦片肽镇痛系统6CGRP与神经免疫CGRP对多种免疫功能均有调节作用CGRP调节内毒素激活的巨噬细胞的多种功能抑抑制致炎细胞因子肿瘤坏死因子!和白介素12的产生双相调节白介素6的产生小剂量增加大剂量抑制增加CXC趋化因子KC和巨噬细胞炎症蛋白2以及一氧化氮和前列腺素的产生[22]Sakuta[23]也证明CGRP有调节T B淋巴细胞的功能并且免疫细胞也能合成和释放神经肽CGRP7结语CGRP和神经系统疾病有着十分广泛且重要的相关性然而CGRP受体广泛作用机制复杂许多机制尚未完全明了且神经系统疾病的病理生理过程也十分复杂因此研究二者作用的相互关系及机制对认识神经系统疾病的病理生理过程及指导治疗有着十分重要的意义参考文献l杨希秀,李玉华,李鲁生,等.缺血性脑血管病患者血浆ET,CGRP的含量变化及临床意义[J].放射免疫学杂志,2003,l6(5):268-270.2Nozaki K,Okamoto s.vemura Y.et ai.vascuiar re-iaxation properties of caicitonin gene-reiated peptideand vasoactive intestinai poiypeptide in subarachnoidhae morrhage[J].J Neurosurg,l990,72:792-797.3Wimaiawansa SJ.Caicitonin gene-reiated peptideand its receptors:moiecuiar gengetics,physioiogy,pathophysioiogy,and thereapeutic potentiais[J].En-docr Rev,1996,17:533-585.4王福庄,丁爱石,陈嘉,等.降钙素基因相关肽对低氧下海马脑片突触功能的保护作用[J].生理学报,1994,46(6):529-538.5花放,方秀斌,张璐,等.降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注脑组织的保护作用[J].卒中与神经疾病,2002,9(6):331-334.6Takai Y,Kishimoto A,Inouc M,et ai.Studics on acyctic nuciotide independent protein kinase and itsproenzyme in mamaaiian tissue[J].J Bioi Chem,1997,152:7603-7609.7D'Cruz BJ,Fertig KC,Fiiiano AJ,et ai Hypothermicreperfusion after cardiac arrest augments brain de-rived neurotrophic factor activation[J].J CerebBiood Fiow Metab,2002,22(7):843-85l.8邢雪松,曹德寿,刘晓湘,等.CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织PKC表达的调节作用[J].解剖科学进展,2004,l0(l):50-53.9Supow it SC,Zhao H,Dipette DJ.Nerve growth fac-tor enhances caicitonin gene-reiated peptide expres-sion in the spontaneousiy hypertesive rat[J].Hyper-tension,2001,37:728-732.10张辉,李卫东,薄爱华,等.Fos蛋白在脑挫伤皮质和海马中表达的研究[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2004,13(1):110-113.11丁爱石,王福庄,杨宏,等.降钙素基因相关肽对大鼠海马培养神经元c-fos表达的影响[J].中国神经医学杂志,1997,4(3)110-114.12Lawrence MS,Mciaughiin JR,Sun GH,et ai.Her-pes simpiex virai vectors expressing bci-2areneuroprotective when deiivered after a stroke[J].JCereb Biood Fiow Metab,1997,17:740-744.13花放,方秀斌,张璐,等.CGRP和NGF对大鼠全脑缺血再灌注脑组织Bc1-2蛋白表达的影响[J]脑与神经疾病杂志,2002,10(5):269-274.14Yoneda Y,Azuma y,Inoue K,et ai.Positive cor-reiation between proionged potentiation of bindingof doubie-stranded digonucieotide probe for thetranscription factor API and resistance to transientforebrain ischemia in gerbi hippocampus[J].Neu-roscience,1997,79(4):1023-1037.15张璐,沈霞,崔桂云,等.降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注后海马CAI区活化蛋白SIDNA结合活性的影响[J].徐州医学院学报,2003,23(l):l3-l6.!"!<海南医学2005年第l6卷第7期l6Masiiah E,Terry RD,Aiford,et ai.Ouantitative im-munohistochemistry of synaptophysin in human neo-cortex:an aiternative method to estimate density of presynaptic terminais in paraffin sections .His-tochem Cytochem,l990,38(6):837.l7丁晓慧,花放,刘文瑞,等.CGRP对大鼠缺血再灌注后海马内突触体素表达的影响 .解剖科学进展,2000, 6(4);358-360.l8沈君,傅萱,喻学红,等.降钙素基因相关肽与偏头痛关系的研究 .临床神经病学杂志,l999,l2(5):300-30l.l9张育才,张宇鸣,汤定华,等.家兔内毒素性脑水肿降钙素基因相关肽的表达 .中华儿科杂志,l999,37(l0):60l-603.20张育才,张宇鸣,汤定华,等.中枢神经系统感染患儿血浆和脑脊液降钙素基因相关肽和内皮素的检测.中国危重病急救医学,l999年ll(30:l78-l79.2l Christensen M D,Huisebosch C E.Spinnai cord in-jury and anti NGF treatment resuits in changes inCGRP density and distribution in the dorsai horn inthe rat .Exp Neuroi,l997,l47(2):463-475.22Tang Y,Han C,Wang X.roie of nitric oxide andprostagiandins in the protentiating effects of caici-tonin gene-reiated peptide on iipopoiysaccharide-in-duced interieukin-6reiease from mouse peritoneaimacrophages .Immuoiigy,l999,96:l7l-l75.23Sakuta H,Znaba K,Muramatsu S.caicitonin gene-reiated peptide enhance cytokine-induced IL-6production by Fibrobiasts .Ceiiuiar Immunoiogy,l995,l65:20-25.卵巢癌发病率较高?死亡率占妇科肿瘤之首?大多数发现于晚期?5年生存率仅为30%?如何做到早期诊断是亟待解决的问题O CAl25是存在于胚胎发育过程体腔上皮细胞的大分子糖蛋白 l O CA7214是由两种单克隆抗体CC49和B72.3所定义的肿瘤相关糖蛋白?它是一种高分子量的糖蛋白复合物?MD>l000KD 2 ?主要在胃肠道恶性肿瘤表达?其次在卵巢和乳腺恶性肿瘤中也有增高O两种标志物目前已广泛应用于临床?我们用电化学发光免疫测定法测定血清CAl25和CA7214水平?以探讨其对卵巢癌诊断的价值Ol材料和方法联合检测血清CAl25和CA72!4对卵巢癌诊断的价值黄文成!黄玲莎!赵惠柳!王英!朱波!李佩章"广西医科大学附属肿瘤医院!广西南宁53002l#摘要目的探讨联合检测血清CAl25和CA7214的含量对卵巢癌的临床诊断的价值O方法卵巢癌患者58例\卵巢良性肿瘤患者48例及健康妇女50例的血清样品?用电化学发光免疫测定法测定CAl25和CA7214含量O结果与卵巢良性肿瘤组和健康妇女组相比?卵巢癌患者血清CAl25和CA7214的含量和阳性率明显升高(P<0.0l)?2项标志物的阳性率分别是79.3%和60.3%?联合检测阳性率为89.6%O结论联合检测CAl25和CA7214对卵巢癌的诊断具有重要临床价值O关键词卵巢癌;CAl25;CA7214;电化学发光中图分类号"R737.3l文献标识码"AThe value of combined detection of serum CAl25and CA72-4in the diagnosis of the ovarian carcinomaHUANG Wen-cheng,HUANG Ling-sha,ZHAO Huiiiu,et ai(Affiiiated Cancer hospitai of Guangxi Medicai University,Nanning53002l,China)Abstract Objective To study the vaiue of combined detection of the serum ieveis of CAl25and CA72-4in the diagnosis of the ovarian carcinoma.Methods Serum ieveis of CAl25and CA72-4in58patientswith ovarian carcinoma,48patients with benign ovarian tumor and50normai controis were measured by Eictro-chemiiuminescence immuno-assay(ECLIA).Results The ieveis of CAl25and CA72-4in ovarian carcinomagroup were significantiy higher than those in benign ovarian tumor and normai controi groups(P<0.0l).Sensitiv-ities of CAl25and CA72-4were79.3%and60.3%,respectiveiy.Sensitivity of combined detection of twokinds tumor markers was89.6%.Conclusions The combined detection of CAl25and CA72-4were of impor-tant ciinicai vaiue in the ovarian carcinoma.Key words Ovary cancer;CAl25;CA72-4;ECLIA作者简介:黄文成(l97l1ll)?男?壮族?广西桂平市人?主管技师?学士O文章编号:l00316350(2005)0710l52102临床检验!"#~~降钙素基因相关肽对神经系统的作用研究作者：许刚， 黄新， 黄勤作者单位：许刚(广西中医学院,广西,南宁,530011)， 黄新,黄勤(广西中医学院瑞康医院神经外科)刊名：海南医学英文刊名：HAINAN MEDICAL JOURNAL年，卷(期)：2005,16(7)被引用次数：3次1.杨希秀;李玉华;李鲁生缺血性脑血管病患者血浆ET,CGRP的含量变化及临床意义[期刊论文]-放射免疫学杂志 2003(05)2.Nozaki K;Okamoto s;vemura Y vascular relaxation properties of calcitonin gene-rrelated peptide and vasoactive intestinal polypeptide in subarachnoid hae morrhage[外文期刊] 19903.Wimalawansa SJ Calcitonin gene-related peptide and ita receptors:moleculargengetics,physiolgy,pathophysiolgy,and thereapeutic potentials 19964.王福庄;丁爱石;陈嘉降钙素基因相关肽对低氧下海马脑片突触功能的保护作用 1994(06)5.花放;方秀斌;张璐降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注脑组织的保护作用[期刊论文]-卒中与神经疾病 2002(06)6.Takai Y;Kishimoto A;Irouc M Studics on a cyctic nuclotide independent protein kinase and its proenzyme in namaalian tissue 19977.D'Cruz BJ;Fertig KC;Filiano AJ Hypothermic reperfusion after cardiac arrest augments brain derived neurotrophic factor activation 2002(07)8.邢雪松;曹德寿;刘晓湘CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织PKC表达的调节作用[期刊论文]-解剖科学进展 2004(01)9.Supow it SC;Zhao H;Dipette DJ Nerve growth factor enhances calcitonin gene-related peptide expression in the spontaneously hypertesive rat[外文期刊] 2001(2)10.张辉;李卫东;薄爱华Fos蛋白在脑挫伤皮质和海马中表达的研究[期刊论文]-中国组织化学与细胞化学杂志 2004(01)11.丁爱石;王福庄;杨宏降钙素基因相关肽对大鼠海马培养神经元c-fos表达的影响 1997wrence MS;Mclaughlin JR;Sun GH Herpes simplex viral vectors dxpressing bcl-2 are neuroprotective when delivered aft er a stroke 199713.花放;方秀斌;张璐CGRP和NGF对大鼠全脑缺血再灌注脑组织Bcl-2蛋白表达的影响[期刊论文]-脑与神经疾病杂志2002(05)14.Yoneda Y;Azuma y;Inoue K Positive correiation between prolonged potentiation of binding of double-stranded digonucleotide probe for the transcription factor API and resistance to transient forebrain ischemia in gerbi hippocampus[外文期刊] 1997(04)15.张璐;沈霞;崔桂云降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注后海马CAI区活化蛋白&IDNA结合活性的影响[期刊论文]-徐州医学院学报 2003(01)16.Masliah E;Terry RD;Alford Quantitative immunohistochemistry of synaptophysin in human neocortex: an alternative method to estimate density of presynaptic terminals in paraffin sections 1990(06)17.丁晓慧;花放;刘文瑞CGRP对大鼠缺血再灌注后海马内突触体素表达的影响[期刊论文]-解剖科学进展 2000(04)18.沈君;傅萱;喻学红降钙素基因相关肽与偏头痛关系的研究 1999(05)19.张育才;张宇鸣;汤定华家兔内毒素性脑水肿降钙素基因相关肽的表达[期刊论文]-中华儿科杂志 1999(10)20.张育才;张宇鸣;汤定华中枢神经系统感染患儿血浆和脑脊液降钙素基因相关肽和内皮素的检测[期刊论文]-中国危重病急救医学 1999(03)。
降钙素基因相关肽与疼痛相关研究进展
降钙素基因相关肽与疼痛相关研究进展降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）是1982年发现的由37个氨基酸组成的多功能神经肽，广泛存在于人体各系统中，主要存在于背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）和三叉神经（trigeminal ganglion,TG）的C和Aδ感觉纤维中，约有65%～80%的DRG 神经元表达CGRP，多属于中小型神经元。
CGRP主要定位于初级传入神经末端，在二级神经元胞体中几乎没有CGRP的存在，背根神经节神经元是脊髓CGRP的唯一来源。
CGRP分为两种形式，即α-CGRP和β-CGRP，CGRP受体复合物由三种独立的蛋白质组成：G蛋白偶联受体（G-protein couped receptor,GPCR）、降钙素受体样受体（calcitonin receptor-liker eceptor,CLR）和一种具有配体结合特异性的辅助蛋白受体活化修饰蛋白1（receptor activity modifying protein,RAMP1）。
经典的CGRP受体拮抗剂是含有残基8-37的C末端片段，它结合但不激活受体。
2020年国际疼痛学会（The International Association for the Study of Pain,IASP）将疼痛定义更新为是一种与实际或潜在的组织损伤相关的不愉快的感觉和情绪情感体验，或与此相似的经历。
疼痛是个重大的公众健康问题，目前关于疼痛的管理和治疗仍未达到理想效果。
由于疼痛的病理和机制具有多样性和复杂性，尽管目前疼痛治疗方式多种多样，其中包括中医疗法、认知疗法、药理、介入和手术等，但依然面临不良反应多、疗效欠佳等诸多挑战。
了解疼痛的细胞和分子机制对于疼痛的预防和治疗至关重要，针对这些细胞和分子机制靶向治疗很可能是发展有效的疼痛疗法的关键。
随着人们对CGRP受体结构及功能日益深入的了解，CGRP在参与疼痛方面的作用正在逐渐受到重视，抗CGRP通路的单克隆抗体作为一种新的治疗和预防偏头痛靶向方法，在机制上具有特异性，是一种很有希望的新治疗策略。
人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒 说明书
人降钙素基因相关肽（CGRP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：1.56pg/ml-100pg/ml最低检测限：0.39pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人CGRP，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中CGRP 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗CGRP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗CGRP抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的CGRP呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
降钙素基因相关肽
一降钙素基因相关肽(CGRP)是由降钙素Cal/CGRP基因表达，是具有强大的扩张血管作用的生物活性多肽。
它不仅改善血流动力学，在全身血压、局部血流灌注等调控中具有重要作用，而且具有拮抗内皮素-1（ET-1）的血管收缩效应，调节T、B淋巴细胞功能，并可能参与了内毒素休克和细胞凋亡的发病机制。
降钙素基因相关肽(CGRP)在痛觉的产生、传导和调节等方面可能起着重要作用二引物设计step by step1、在NCBI上搜索到目的基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。
2、用Primer Premier5搜索引物①打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口，Copy目的序列在输入框内（选择As），此窗口内，序列也可以直接翻译成蛋白。
点击Primer，进入引物窗口。
②此窗口可以链接到“引物搜索”、“引物编辑”以及“搜索结果”选项，点击Search按钮，进入引物搜索框，选择“PCR primers”，“Pairs”，设定搜索区域和引物长度和产物长度。
在Search Parameters里面，可以设定相应参数。
一般若无特殊需要，参数选择默认即可，但产物长度可以适当变化，因为100～200bp的产物电泳跑得较散，所以可以选择 300～500bp.③点击OK，软件即开始自动搜索引物，搜索完成后，会自动跳出结果窗口，搜索结果默认按照评分（Rating）排序，点击其中任一个搜索结果，可以在“引物窗口”中，显示出该引物的综合情况，包括上游引物和下游引物的序列和位置，引物的各种信息等。
④对于引物的序列，可以简单查看一下，避免出现下列情况： 3’不要出现连续的3个碱基相连的情况，比如GGG或 CCC，否则容易引起错配。
此窗口中需要着重查看的包括：Tm 应该在55～70度之间，GC％应该在45％～55％间，上游引物和下游引物的Tm值最好不要相差太多，大概在2度以下较好。
降钙素基因相关肽
1 CGRP的组成和影响因素
降钙素基因相关肽是目前已知在体内作用最强的扩张血管活性多肽，与降钙素（Calcitonin,Cal）来自一个共同的基因。1983年，Rosenfeld等首次应用DNA重组技术在小鼠甲状腺髓样癌C细胞中发现CGRP。1984年，Morris等证实在人体中有GCRP，经小鼠Cal基因克隆证实，Cal和CGRP具有相同的基因片段。在人体，Cal/CGRP基因均位于于11号染色体短臂上，由6个外显子和5个内含子组成。按结构可分为CGRPα和CGRPβ两类。CGRP由37个氨基酸组成，多肽的1、7位氨基酸以二硫键相连，C端为苯丙氨基酸残基。人（h）和大鼠（r）CGRP有4个氨基酸不同，hCGRPα和hCGRPβ有3个氨基酸不同，rCGRPα和rCGRPβ有一个氨基酸不一致。CGRP肽链C端与受体识别有关，而肽链的N端二硫键与生物活性有关。
关键词 降钙素基因的相关肽；内皮素-1；淋巴细胞
近年研究表明，血管内皮细胞和支配血管的神经末梢，在体内可以产生多种血管活性物质，它们在全身血压、局部血流灌注及细胞增殖等调控中具有重要意义。本文对近年来降钙素基因相关肽（Calcitonin gene related peptide,CGRP）拮抗ET-1和免疫调节等作用作一综述。
摘要 降钙素基因相关肽(CGRP)是由降钙素Cal/CGRP基因表达，是具有强大的扩张血管作用的生物活性多肽。它不仅改善血流动力学，在全身血压、局部血流灌注等调控中具有重要作用，而且具有拮抗内皮素-1（ET-1）的血管收缩效应，调节T、B淋巴细胞功能，并可能参与了内毒素休克和细胞凋亡的发病机制。
用放射配基结合实验分析小鼠淋巴细胞CGRP受体的功能特征，结果表明125I-[His10]CGRP结合纯化T、B淋巴细胞受体的解离常数Kd，分别是0.807±0.168nmol/L和0.387±0.072nmol/L,ED50=8Pmol/L，此值何以比受体Kd值低得多的原因不清楚。不过，这可能与CGRP延长受体G蛋白调节亚单位作用有关，G蛋白与受体cAMP的产生有关；或者可能与CGRP抑制受体磷酸二酯酶（该酶能反映cAMP的消耗程度）活性有关。另外，经受体竞争试验表明125I-[His10]CGRP与小鼠淋巴细胞CGRP受体结合不能被P物质、Cal或神经肽Y阻断，说明T，B淋巴细胞上存在具有生物效应的高亲和力CGRP受体，这为研究CGRP调节T、B细胞功能提供了依据[10]。
降钙素基因相关肽在哮喘发病中的作用研究进展
降钙素基因相关肽在哮喘发病中的作用研究进展降鈣素基因相关肽（CGRP）生物学效应广泛，研究其在哮喘发病中的作用已有多年的历史。
经分析发现，CGRP可通过促进支气管炎症反应、粘液分泌及组织损伤等作用，参与气道炎症、气道重塑以及气道高反应性，密切影响哮喘的发生、发展。
探讨CGRP的作用机制及与哮喘的关系具有重要意义。
该文将就CGRP在哮喘发病中的作用研究进展进行综述。
标签：哮喘；降钙素基因相关肽；生物效应哮喘是一种复杂的肺部炎性疾病特征的高反应性，重塑和呼吸道炎症。
随着研究的深入，人们发现CGRP及其在哮喘的发病中起着重要的作用，CGRP成为哮喘发病又一作用机制。
进一步探讨CGRP与支气管哮喘疾病的关系，可能为治疗重症哮喘、难治性哮喘提供新的理论依据，也可能为呼吸系统疾病的药物治疗提供新的治疗靶点。
但是，目前尚无直接资料证明，CGRP未能最终改变哮喘事件，因此，需要对CGRP的作用机制及安全性等进一步研究。
该文综述了CGRP 及其在哮喘发病中的作用研究进展。
1 降钙素基因相关肽（CGRP）简述1982年，Amara等[1]发现，人降钙素（Calcitonin CT ）基因可产生两种不同的mRNA，分别合成CT类激素和另外一种激肽，由于其来源与CT基因有关，将其命名为降钙素基因相关肽（CGRP）。
1983年，Rosenfeld等[2]通过基因重组技术在小鼠甲状腺髓样癌细胞中首次分离出CGRP，并提出了CGRP来源的模型。
1984年，Morris等[3]证实，人体中也存在有CGRP，而且两者生物活性具有相近似性。
CGRP是由37个氨基酸残基组成的一种生物活性肽，主要有CGRPRI和CGRPR2两种受体，它们结合CGRP发挥生物学效应。
CGRP在不同部位作用不同，如CGRP分布于气道平滑肌具有支气管收缩效应，而分布于气道血管则具有血管舒张作用，分布于气道上皮可诱导上皮分化。
CGRP自身分泌以及相关神经递质之间的失衡，则会导致呼吸系统疾病乃至哮喘疾病的发生。
神经递质在疼痛感知中的作用机制
神经递质在疼痛感知中的作用机制疼痛是一种复杂的生理和心理现象，它是人体对组织损伤、疾病或损伤信号的一种生理反应。
神经递质在疼痛感知中扮演着重要的角色，它们通过与神经元的相互作用，调节疼痛信号的传递和加强。
一、神经递质在疼痛感知中的基本机制疼痛感知的基本机制可以归结为外周传入神经元和中枢神经系统之间的信号传递过程。
当组织受到损伤或有其他异常刺激时，感觉神经末梢会释放出神经递质，如降钙素基因相关肽（CGRP）、物质P等。
这些神经递质通过作用于感觉神经元上的受体，使得神经元兴奋和增加活性。
这些感觉神经元将疼痛信号传递到脊髓的传入神经元上。
二、神经递质的类型及其作用机制1. 降钙素基因相关肽（CGRP）CGRP是一种在感觉神经末梢大量存在的神经递质。
它通过活化神经元上的CGRP受体，诱导疼痛相关基因的转录，从而增强疼痛信号的传导。
此外，CGRP还可以通过促进脊髓胶质细胞的活化，从而引发疼痛的维持和加强。
2. 物质P物质P是一种与CGRP类似的神经递质，它在感觉神经末梢释放并与神经元上的受体结合。
物质P具有拓宽感觉神经元动作电位的作用，从而增强疼痛信号的传递。
此外，物质P还可以促进血管扩张和组织炎症反应，进一步加剧疼痛感知。
3. 肿瘤坏死因子α（TNF-α）TNF-α不仅是炎症过程中的重要介质，也参与了疼痛信号的调控。
它可以使感觉神经元上的受体活化，并通过与它们结合，增强疼痛信号的传递。
此外，TNF-α还可以调节脊髓的神经元兴奋性，从而加强疼痛的感知。
4. γ-氨基丁酸（GABA）GABA是一种抑制性神经递质，它通过与GABA受体结合，抑制感觉神经元的兴奋。
在疼痛感知中，GABA的释放能够调节疼痛信号的传递，从而减弱疼痛的感知。
然而，一些研究发现，在疼痛过程中，中枢神经系统中GABA的功能可能遭到抑制，导致疼痛信号的增强。
三、神经递质与疼痛治疗神经递质在疼痛感知中的重要作用为疼痛治疗提供了新的靶点。
许多药物已经开发出来，用于干预神经递质的作用机制，以减轻疼痛感知或阻断疼痛信号的传递。
降钙素基因相关肽(CGRP)抗体治疗偏头痛
降钙素基因相关肽(CGRP)抗体治疗偏头痛于生元; 陈小燕【期刊名称】《《实用药物与临床》》【年(卷),期】2019(022)008【总页数】5页(P785-789)【关键词】降钙素基因相关肽; 三叉神经血管系统; 偏头痛; CGRP受体拮抗剂; CGRP单克隆抗体【作者】于生元; 陈小燕【作者单位】解放军总医院神经第一医学中心神经内科北京100853【正文语种】中文降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide，CGRP)是参与偏头痛发病机制的一种重要的神经肽，具有扩血管的作用。
针对CGRP的治疗在临床试验中获得了显著的效果，本文主要对CGRP与偏头痛的关系以及CGRP单克隆抗体治疗偏头痛进行综述。
1 CGRP及其受体CGRP是由37个氨基酸组成的神经肽，1982年由Amara等最早发现[1]，与降钙素、肾上腺髓质素、胰淀素同属于降钙素家族。
人类存在两种类型的CGRP,α-CGRP由降钙素基因选择性剪切产生，高度表达于周围感觉神经和中枢，与头痛的发生关系密切；β-CGRP则由分离基因编码，表达在肠道、中枢神经系统和血管[2]。
两种形式的CGRP相差3个氨基酸，具有相似的生物学效应[3]。
CGRP半衰期短，快速衰变期7 min，慢速衰变期24 min，在血液中不稳定，分子量大，不能通过血脑屏障[4]。
CGRP受体属于G蛋白偶联受体家族B成员，由降钙素受体样受体(Calcitonin receptor-like receptor，CLR)和受体活动修饰蛋白1(Receptor activity-modifying protein 1，RAMP1)组成。
CGRP作用于CGRP受体后，激活环磷酸腺苷信号通路，引起血管扩张[5]和疼痛[6]。
此外，CGRP也是另一个受体-胰淀素受体(AMY1)的强力激动剂，AMY1 由降钙素受体(Calcitonin receptor,CTR)和RAMP1组成[7]。
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人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
2 ng/L -60 ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本降钙素基因相关肽(CGRP)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人降钙素基因相关肽(CGRP)水平。
用纯化的人降钙素基因相关肽(CGRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素基因相关肽(CGRP)，再与HRP标记的降钙素基因相关肽(CGRP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的降钙素基因相关肽(CGRP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人降钙素基因相关肽(CGRP)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。