高效液相色谱在生物医药研究中的应用第七讲生物胺的分离和测定(上)――儿茶酚胺、5-羟基色胺及
高效液相色谱电化学检测生物样品中儿茶酚胺的研究
高效液相色谱电化学检测生物样品中儿茶酚胺的研究李炳源;黄慧伟;黄彦;李新玲;邱一华【期刊名称】《南通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2005(025)003【摘要】采用Atlantis C18反相色谱柱,成功地分离去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺等儿茶酚胺类物质.研究了儿茶酚胺在Atlantis C18和Novle pak C18柱的保留特性,比较了流动相中离子对试剂辛烷基磺酸钠(B8)浓度对儿茶酚胺容量因子k'的作用,确认采用Atlantis C18柱分离儿茶酚胺,色谱条件优化空间更大,更适于复杂生物样品分析.色谱条件:Atlantis C18柱,电化检测,流动相:NaH2PO450mmol/L、柠檬酸钠50mmol/L缓冲液-乙腈(体积比为75:25),检测限(S/N)在0.93～2.43pg 以下,绝对回收率均≥98.5%,样品日内相对标准差<1.2%.方法精密、准确.【总页数】3页(P177-179)【作者】李炳源;黄慧伟;黄彦;李新玲;邱一华【作者单位】南通大学公共卫生学院;南通大学基础医学院生理学教研室,南通,226001;南通大学基础医学院生理学教研室,南通,226001;南通大学公共卫生学院;南通大学基础医学院生理学教研室,南通,226001【正文语种】中文【中图分类】R33-33【相关文献】1.高效液相色谱法测定生物样品中儿茶酚胺及其代谢产物 [J], 黄新华;陈本美;陈新2.高效液相色谱—电化学检测法测定血浆中儿茶酚胺含量 [J], 王长连3.高效液相色谱—电化学检测法测定心肌组织中的儿茶酚胺 [J], 朱珠;陈兆珍4.高效液相色谱-电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物 [J], 杨佳凤;李娟;杨虹;潘桂湘;高秀梅5.高效液相色谱紫外电化学串联检测生物样品中克仑特罗残留 [J], 苗虹;吴永宁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
用高效液相色谱―电化学检测器测定人血浆中儿茶酚胺浓度
检测器：ＬＣ－４Ｂ电化学检测 器，Ａｇ／ＡｇＣｌ 为参比电极，ＴＬ－５玻璃碳电极为工作电极，设置 电位＋０．７２Ｖ Ｒａｎｇｅ０．２ｎＡ／Ｖ。
积分仪：ＡＴ＝１６，ＣＳ＝０．１ｃｍ／ｍｉｎ。
（四）样 品处理 ： 在１．０ｍｌ血浆中加入１．０ｍｌＴ ｒｉｓ缓冲液（ｐＨ８．６）， 再加入固体氧化铝２０ｍｇ，轻轻振摇１０ｍｉｎ，放置，弃 上清液，用５ｍｌ重蒸水洗涤沉淀三次并将沉淀转移 至微过滤瓶中，用０．５ｍ１０ ．１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌｏ 洗脱吸 附于氧化铝上的儿茶酚胺，洗脱液２０ 用于注射， 根据外标法定量。
实验部分
（一 ）仪器 美 国 Ｂｅｃｋｍａｎ公 司 ３４４型 色 谱系统，４２７型积分仪；美国ＢＡＳ公司ＬＣ－４Ｂ电 化学 检测器 。
（二）试剂 １．５ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－２％ ＥＤＴＡ缓 冲液 （ｐＨ８．６），０．１ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌＯ４酸洗氧化铝， 儿茶酚胺标准混合液。
（三）色谱条件 柱：ＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅＯ ＤＳ （２．０ １５０ｍｍ， 流动相： ０，１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＨＰＯ４＋０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴ Ａ＋０．５ｍｍｏｌ／Ｌ 庚基磺酸钠，ｐＨ５．０，０．２２
应用 实例
用高效液相色谱—电化学检测器测定人血浆中儿茶酚胺浓度
向春
（第 三军医大学野战外科研究所，重庆 ，６３００４２）
国内外文献已报道过很多测定儿茶酚胺 的 方 法，作者在此基础上用反相离子对色谱电化学检测
器，也达到了分离测定人血浆儿茶酚胺浓度 的要
求，结果与文献报道基本一致［１－３］，可用于临 床 及科研中人血浆儿茶酚胺浓度的测定。
乙酸乙 酯（７０：３０）；流 速：２．５ｍｌ／ｍｉｎ；ＵＶ检 测 器 ： ＝２８０ｎｍ；纸速 ：５．０ｍｍ／ｍｉｎ；进样 量：１００
高效液相色谱法测定血浆中儿茶酚胺
高效液相色谱法测定血浆中儿茶酚胺
彭贵华;唐银;曾立明;刘文恩
【期刊名称】《中南大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2001(026)005
【摘要】目的:建立用高效液相色谱(HPLC)电化学检测器同时测定血浆中儿茶酚胺水平的方法,以诊断嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤.方法:利用离子对提取血浆中儿茶酚胺,电化学检测器检测血浆中儿茶酚胺水平,并测定其回收率、线性范围、精密度及最低检查限度,参考18例正常人儿茶酚胺水平建立正常参考范围.结果:肾上腺素、去甲肾上腺素回收率分别为86.2%和90.5%.该方法测定肾上腺素在0.2～10.6 nmol@L-1内呈良好线性关系,最低检查限度为0.05nmol@L-1,批内、批间变异系数别小于10.7%和11.1%.结论:本法用于检测血浆中儿茶酚胺水平具有准确、灵敏、简便的特点,适合临床诊断.
【总页数】3页(P485-487)
【作者】彭贵华;唐银;曾立明;刘文恩
【作者单位】中南大学湘雅医院检验科;中南大学湘雅医院检验科;中南大学湘雅医院检验科;中南大学湘雅医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7+2
【相关文献】
1.高效液相色谱—电化学检测法测定血浆中儿茶酚胺含量 [J], 王长连
2.高效液相色谱-电化学法测定人尿液中儿茶酚胺的浓度 [J], 陈静;丘宏强
3.用高效液相色谱-电化学检测器测定人血浆中儿茶酚胺浓度 [J], 向春
4.固相萃取联合超高效液相色谱-串联质谱法测定畜肉中3种儿茶酚胺类物质 [J], 任南;赵文涛;陈超;吴彦超;张颖颖;李莹莹;郭文萍;范维;王守伟
5.荧光-高效液相色谱法测定血浆中儿茶酚胺类化合物的研究 [J], 张晚萍;王国民;邱宗荫;赵华;李惠芝
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高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺-最新文档资料
高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinson’s disease）发病的一个重要影响因素。
另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。
所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。
本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。
高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的检测方法。
近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。
高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。
CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。
儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。
吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对样品进行调酸、萃取、调碱、吸附、洗涤、解析处理后，100微升进样，结果可见：多巴胺浓度在1.3*10-7mol/L～3.8*10-6mol/L内与色谱峰峰高的线性关系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）4.2%～10.3%。
衍生化可分成柱前衍生化和柱后衍生化两种，在分离前需要制备荧光衍生物的柱前衍生化是，有邻苯二甲醛（OPA）、荧光胺（FA）、丹磺酞氯（DNSCI） l，2一二苯基乙二胺（DPE）及萘一2，3一二羧醛等属于柱前衍生化试剂。
高效液相色谱法测定酚类物质的探讨
[1] 周 晓 珍,肖 熳.高 效 液 相 色 谱 法 测 定 水 中 六 种酚 类 化 合 物 [J].南 昌 高 专 学 报,2005,1 (56):103-105.
[2] 刘桂明,邓义敏.水 中 苯 酚、五 氯 酚、2,4,6三氯酚 的 高 效 液 相 色 谱 法 [J].云 南 环 境 科 学 ,2005,4(19):59-61.
方法二:流动相为70% 乙 腈—1% (v/v)乙 酸 水 溶液;流速为1ml/min;柱温 箱 温 度 为 35℃;进 样 量 为 10μL,测 定 波 长 在 254nm。 2.2.2 定性标准溶液的配制
本项目旨 在 确 定 碎 煤 加 压 气 化 酚 氨 回 收 水 中 酚类的检验 方 法,因 此,本 实 验 选 择 了 样 品 中 可 能 存在的 20 中 酚 类 物 质,利 用 标 准 物 质 进 行 定 性 分析。
在反相色谱分 析 体 系 中,待 测 的 酚 类 物 质 在 反 向固定 相 和 流 动 相 之 间 进 行 一 定 比 例 的 分 配,此 时,可以通 过 改 变 流 动 相 的 种 类 以 及 组 成 比 例,或 者是流速,来改变或 者 控 制 待 测 物 质 在 色 谱 柱 上 的 保留时间,以达 到 待 测 物 质 有 效 分 离 的 目 的。 通 过 查询文献 发 [2] 现 多 数 采 用 甲 醇 或 者 乙 腈 作 为 流 动 相,而且在流 动 相 中 加 入 1% 的 冰 乙 酸 能 够 有 效 的 改善目 标 物 峰 形 并 且 降 低 峰 宽,获 得 更 好 的 分 离 度。本文 中 选 用 两 种 流 动 相,一 种 是 70% 甲 醇— 1%(v/v)乙酸水溶液,另 一 种 是 70% 乙 腈—1%(v/ v)乙 酸 水 溶 液 。 2.3.2.3 酚类化合物色谱分析结果
儿茶酚胺测定方法
儿茶酚胺测定方法儿茶酚胺(也称为生物胺)是一类含有芳香胺结构的有机化合物，包括组胺、色胺、肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等。
它们在人体内起着重要的生理功能，包括调节血压、控制神经传递、参与免疫反应等。
因此，准确测量儿茶酚胺的含量对于临床诊断、药物研发以及食品安全等方面具有重要意义。
目前，有多种方法可以用来测定儿茶酚胺的含量，其中最常用的方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和电化学法。
下面将详细介绍这些方法的原理和优缺点。
1. 高效液相色谱法(HPLC)是测定儿茶酚胺含量最常用的方法之一。
它基于样品中的儿茶酚胺在液相中的化学行为进行分离和检测。
首先，样品经过合适的前处理步骤，如固相萃取、酸解等，以提取出儿茶酚胺。
然后，将提取液注入高效液相色谱仪中，通过固定相的相互作用与待测儿茶酚胺发生分离。
最后，使用紫外光检测器或电化学检测器在特定波长下进行检测和定量。
这种方法的优点是分离效果好、测量灵敏度高，具有较高的选择性和准确性。
然而，HPLC方法需要复杂的仪器装置和操作技术，在分析过程中可能会受到杂质的干扰。
2. 气相色谱法(GC)是另一种常用的儿茶酚胺测定方法。
与HPLC类似，样品需要经过前处理步骤来提取儿茶酚胺。
然后，将提取液注入气相色谱仪中，通过气相载气流动相与待测儿茶酚胺发生分离。
最后，使用火焰离子化检测器或电子捕获检测器进行检测和定量。
气相色谱法的优点是分离效果好，分析速度快，且对样品矩阵的干扰较小。
然而，这种方法对于热稳定性较差的儿茶酚胺样品可能会导致峰形变形或降解，同时需要较高的操作技术水平。
3. 电化学法是一种测定儿茶酚胺含量的简便方法。
基于儿茶酚胺的电化学活性，在适当的电极上触发与儿茶酚胺的氧化或还原反应，并利用产生的电流或电势信号进行测定和定量。
电化学法的优点是样品前处理简单，测量速度快，操作简便。
同时，电化学法对儿茶酚胺的测量灵敏度较高，且具有良好的选择性。
然而，由于儿茶酚胺具有不同的氧化还原性质，在不同pH值和电极材料条件下可能会出现不同的电化学行为，因此需要根据具体的分析对象选择适当的电极和工作条件。
生物胺实验报告
生物胺实验报告简介生物胺是一类含有胺基的有机化合物，广泛存在于自然界中的生物体内，包括人类和动物体内。
它们在生命活动过程中发挥着重要的生理调节作用，但也会在一些情况下引起健康问题。
为了准确检测生物胺的含量，本实验利用了高效液相色谱法（HPLC）来分析和测定样品中生物胺的含量。
本报告旨在介绍实验的目的、材料和方法、结果和讨论等内容。
实验目的1.掌握高效液相色谱法（HPLC）的基本原理和操作流程；2.了解生物胺的检测方法和意义；3.实际操作并熟悉HPLC仪器；4.测量样品中生物胺的含量。
材料和方法材料•HPLC仪器•高性能液相色谱柱•生物胺标准溶液•样品（如食品、生物样本等）•甲醇•去离子水方法1.样品准备：–将样品加入适量的甲醇中，并进行均匀混合。
注意样品的浓度应适当，过低浓度可能导致检测结果不准确。
–使用0.45微米的滤膜过滤样品，以去除悬浮物和杂质。
–将样品溶液保存在冰箱中，以防止生物胺的降解。
2.仪器准备：–打开HPLC仪器，并将高性能液相色谱柱按照仪器操作手册连接到系统中。
–注入足够的去离子水和甲醇来稳定HPLC系统的流动相。
–调整和校准HPLC仪器的流速、柱温等参数。
3.样品进样：–使用微量注射器取一定体积的标准溶液，进样到HPLC仪器中进行测试，并记录峰面积。
–重复上述操作，对样品进行进样，并记录样品峰面积。
4.计算结果：–利用样品的峰面积值与标准曲线之间的关系，可计算出样品中生物胺的含量。
结果和讨论本次实验使用HPLC分析了多个样品中生物胺的含量，结果如下表所示：样品编号生物胺1含量（mg/L）生物胺2含量（mg/L）样品1 10.5 5.2样品2 12.8 8.9样品3 9.3 6.7从实验结果可以看出，不同样品中生物胺的含量是不同的。
这表明生物胺的含量在不同样品中存在差异，可能与样品来源及处理方法有关。
此外，通过与标准溶液的对比，我们可以进一步了解样品中生物胺的绝对含量，从而评估其安全性和质量。
高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质
高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质高效液相色谱法分离检测废水中酚类物质一、实验目的1.掌握高效液相色谱法分离检测有机化合物的原理及操作步骤；2.熟悉水中分离化合物的分离检测方法。
二、实验原理酚类化合物是指芳香烃中苯环上的氢原子被羟基取代所生成的化合物，根据其分子所含的羟基数目可分为一元酚和多元酚。
酚类化合物具有强烈的杀菌作用。
酚是一种中等强度的化学毒物。
低浓度时使细胞变性，高浓度时使蛋白质凝固。
酚类化合物可经皮肤粘膜、呼吸道及消化道进入体内。
低浓度可引起蓄积性慢性中毒，高浓度可引起急性中毒以致昏迷死亡。
采用高效液相色谱法测定酚类化合物可以保持原化合物的组成不变，直接测定，对各种不同取代基的酚类化合物可以同时进行分离和分析，此法具有重现性好，选择性好，灵敏度高，操作简便的优点。
高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
三、仪器条件1、仪器：高效液相色谱仪、高压泵、紫外光度检测器、六通进样阀、色谱工作站2、试剂：苯酚、甲酚、间苯二酚为分析纯；甲醇为色谱纯；纯水为重蒸水.标准溶液的配制：分别配制苯酚、甲酚、间苯二酚浓度为250 mg/L，甲醇溶液10.0 mg/L。
3、实验条件：色谱柱：C18 柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm) ，柱温：28 ℃流动相：甲醇：水= 45:55，流量：1.0 ml·min-1紫外分光检测器：测定波长233、274 nm进样量：20μl四、实验步骤1. 将配制好的流动相于超声波清洗器上脱气15 min 。
2. 根据实验条件，将仪器按照仪器的操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡，基线平直时，即可进样。
3. 吸取20μl 标准溶液进样，记录色谱图，重复进样。
4. 检测废水的酚类物质的含量。
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２反相色谱 一般用于分离中性或非极性化合 ． 物，Ａ５Ｈ Ｃ －Ｔ及其酸性代谢产物都是极性化合物， 因 此在反相色谱中保留时间较短， 容易受生物样本中非 保留物的干扰。 Ａ在柱前荧光衍生时的荧光衍生 但Ｃ
产物极性大为降低 ， 可以用反相 色谱分离 ６８ － 。酸性
代谢产物则可以通过调节流动相的 ｐ Ｈ改变其保留
５ ＩＡ １ －Ａ 等 。 Ｈ
２ 荧光衍 生法 为了提高检测灵 敏度 ， 可用衍 生试剂增 加儿茶酚胺 的荧光强度 ， 衍生可分柱前和柱 后衍 生两种 。柱前衍生在分离前需制备荧光衍生物 ， 操 作比较麻烦 ， 但仪器不需特 殊装置 。柱前衍生试剂
形成一个环状荧光衍生物， 检测灵敏度 Ｎ ＥＥ为
有荧光胺 Ｆ 邻苯二甲醛 Ｏ Ａ 以及 １２二苯基 Ａ Ｐ） ，
被 氧化 时还 可用研磨等方 法清洗 。碳糊 电极 在最佳
条件下其信噪比稍高于玻碳， 但其缺点是耐溶剂能力
低， 只能在低含量 甲醇 ２ ３％） ０ ０ 情况 下使用 ， 当其
电极表面被氧化后不能进行清洁， 只能将碳糊挖去，
填上新的碳糊 。参 比电极 为 Ａ ／ ｇｌ ｇＡ Ｃ， 它在检测器 的
下游， 补偿电极由不锈钢制成， 在检测器出口处。检 测器体积为５ ０ｌ －１ 。 ｉ 工作原理： ｉ ． 分析物质通过电极表面时， 当电极 所加的电位大于该物质的氧化电位（ 若是还原型， 则 电极所加的电位要比该物质的还原电位较负）则在 ，
酸钠 １ ２， 樟脑 磺酸（ ，Ｓ ２ ３ 樟脑磺酸 ９ ７ 以及 － 钠 ＣＡ ８１ －
是由徐修容等开发的用于儿茶酚胺分离的离子对试
剂， 它不仅价格便宜 ， 而且有较大的浓度选择 范围， 一
７１ ５ Ｔ －Ｃ Ａ和 － 及其代谢产物的分离 Ｈ
Ｃ Ａ是具 有氨基和酚经基 的极性化合 物 ， １ 表 为
流 出至检测池时 ， 电极表面发生下列变化 ： 在
７３ － 生物样本的贮存
儿茶酚胺极易被玻璃吸附， 曾有人用玻璃匀浆器
将脑， 电化学检测器已广泛应用于尿液、 血液、 脑脊液（Ｓ ） ＣＦ和组织样本中Ｃ 的测定， 检测极限可
达 Ｐ 水平 。 ｇ
４ 影 响 分 离 的 诸 因素
除 色谱 柱 以 外 ， 脱 液 中 洗
乙 二 胺 （ Ｐ 等 。Ｆ 能 与 伯胺 反 应 对 测 定 Ｄ ＤＥ Ａ Ａ和 Ｎ Ｅ
缓冲液 的离子浓 度 ， ， ｐ 有机改性剂 和离子对试剂 的 Ｈ 种类及 浓度 ， 等都是影 响分 离的重要 因素 ， 柱温 可以 通过变化这些因素来选择最佳 色谱 条件 ３ ２
Ｃ Ａ的微量分析 ， 能对样 品进行预处理 、 但如 富集后就 能 增 加 其 检测 灵 敏 度１， ， 然 荧 光 不 仅 能 检 测 ９４ 天 ３ Ｎ ＥＤ 还 能检测代谢 产物 Ｍ Ｐ Ｈ Ａ Ｖ Ａ及 Ｅ Ａ， ＨＧ Ｖ Ｍ
衍生试剂泵和反应器等。 柱后衍生有Ｏ 、 Ａ 三羟基吲 哚法 ２３以及甘氨酰替甘氨酸（ｙｙｌ ｉ ） ５５ ， ｇ ｃｌｙｎ 法等。 ｌ ｇ ｃｅ
Ｃ Ａ和５Ｈ －Ｔ及其主要代谢产物的名称和结构， 它们
的 分 离 可 采 用 阳 离 子 交换 色 谱 、 相 色 谱 和 反相 离子 反
对色谱 。 １阳离子交换色 谱 ． 阳离子交换 色谱是利 用儿
的功能与人们的健康和疾病有密切的关系， 它们不仅 直接参与行为活动（ 如运动功能、 学习记忆等） 以及参
离子种类 和浓度 、 冲液 的 ｐ 缓 Ｈ以及 电化学检测 器的
是 测 定 代 谢 产 物 如 神 经 母 细 胞 瘤 患者 血 清 中 的
Ｖ ＡＭ Ｐ Ｖ Ｍ Ｈ ＧＨ Ａ则贮存期可达数月。
７４ － 生物样本预处理
有些生物样本可直接 进样 ， 如笔者 曾测定 了未经 预处理 的兔脑脊液 （Ｓ 中的 Ｃ ＣＦ Ａ及其代谢 产物 ， 得 预处理步 骤如下 ： 品与氧化 铝混合 ， 样 加入 Ｔｉ ｒ ｓ
讲
座
高效液相色谱在 生物医药研究 中的应用
第七讲 生物胺的分离和测定（ — 儿茶酚胺、－ 上） ５ 羟基色胺 及其代谢产物的分离和测定
唐琴梅
（ 中国科学院上海药物研究所， ０３ ２ ０１ ０
生物胺是机体代谢反应过程中所产生的胺类化
合物 ， 其中研究得较 多的有两类 ： 神经递质儿茶 酚胺 Ｃ ） ５羟 基色胺 （－ Ｔ ， Ａ和 － ５Ｈ 以及 多胺 。Ｃ Ａ和 ５ Ｔ － Ｈ
值 ， 低 ｐ 时通 过 离 子 抑 制 作 用 延 长 其 保 留 时 在 Ｈ 间 ９１。 － 所以反相 色谱 一般适合于 Ｃ ３ Ａ的柱前荧光衍
生物及其代谢产物的测定。但也有通过梯度洗脱来 分离Ｃ 、 色氨酸及其代谢产物的报道 ４。
３反相离子 对色谱 ． 这是 目 在 Ｃ ５ Ｔ及其 前 Ａ － Ｈ 代谢产 物的分离 中应 用最广的方法 。在洗 脱液 中加 入离子 对试剂 ， 以延长 Ｃ 可 Ａ的 保留 时间， 使保 留时
近年来由于Ｈ Ｌ ＰＣ技术的不断发展， ＰＣ分 用Ｈ Ｌ
离测定体液和组织中生物胺 的方法完善 ， 检测灵敏度 可达 ｐ ｏ水平 。 ｍｌ
间较短的Ｎ ＥＥ从非保留的干扰物中分离出来， 而且 通过改变离子对试剂的浓度可以改变生物胺的保留 时间， 以此来改善生物胺及其代谢物的分离， 所以该 方法能同时分离生物样本中的生物胺及其代谢产物。 常用的离子对试剂有烷基硫酸钠 １１ ５８烷基磺 －
７２ －Ｃ Ａ的检测
１紫外检测法 紫外检测器灵 敏度较低 ， 一般不
适合生物样 品中 Ｃ Ａ的测定 ， 但可用于分泌 儿茶酚胺
Ｍ Ｔ及Ｄ Ｐ Ｃ等反应。Ｎｈ 等用ＤＥ柱前衍生测 ＯＡ ｏｔ ａ Ｐ
定了血浆 和尿液 中的 Ｎ ＥＥ Ｄ Ａ及 Ｄ Ｐ Ｃ 检测灵 敏 ＯＡ ， 度可达 ２ ｏ ６ ｆ ｌ， ｍ ７ 柱后衍生将分离、 衍生物制备和检测 自动连续地 进行 ， 检测灵敏度可达几十个 Ｐ ， ｇ但在仪 器上需引入
绍。
决， 一般Ｅ Ｔ Ｄ Ａ的浓度为 ０１ ｍ ｌ 。 ．ｍ ／ ｏＬ
ｉ ．电化学检测器的结构： 以目前市场上使用较 多的美国Ｂ Ｓ公司的电流检测器为例， Ａ 电化学检测 器由薄层检测器和电路控制两部分组成， 薄层检测池
由工作 电极 、 比电极和补偿 电 组成 。 作电极位 参 极 工
于薄层检测器的中央， 电极材料常用的是玻璃碳或碳 糊。 玻璃碳是最好的电极材料， 它的优点是可耐受Ｌ Ｃ 的任何溶剂， 适用电位很宽， 可正、 可负， 当电极表面
与血压 、 、 心率 呼吸和睡眠等植物神经功能的调控 ， 还
与一些功能性疾病如精神分裂症、 忧郁症以及器质性
病 变 （ 巴金森 氏综合症 、 如 心血管性疾病等） 的出现有
茶酚胺的氨基进行离子交换， 因此它主要用于儿茶酚 胺的分离， 也可用于分离带氨基的代谢产物 １ Ａ － ５Ｃ 的酸性代谢产物在阳离子交换柱上没有保留， 因此它
＊ 其结构式参见有关生 物化学方面的 教科 书。
般 的烷 基磺酸钠如 庚烷 磺酸钠在 洗脱液 中的浓度增 至 ５ ｍｌ ｍ ／ ｏ Ｌ时， 儿茶酚胺的 ｋ及分 离效果 不再增加 （ ７１， 图 － 而樟 脑磺酸 的浓 度达 到 １ｍ ｌ ３ ｍ ／ ｏ Ｌ时 Ｃ Ａ
的 ｋ 仍有上升趋势（ ７２ ， 图 － 因此在浓度选择上的烷 基磺酸钠有更大的灵 活性 。
０ ｎ Ｄ 为０ ｎ３７ ．ｇ Ａ ．ｇ ３ ２ ６ ６。
３电化学检测法 ． １电化学检测器及其工作原理 电化学检测器
具有高灵敏度和高选择性 ， 凡具有 电化学活性的化合
工作 电压都对生物胺的 电化学响应有较大 的影 响（ 图
８４５。此外在缓冲液中添加Ｅ Ｔ －， Ｄ Ａ是必不可少的， ＥＴ Ｄ Ａ可从络合洗脱液途经金属管道时溶解少量金
不能同时分 离酸性和 中性代谢产物 。
关， 某些肿瘤如神经母细胞瘤及嗜铬细胞也会导致 Ｃ 的异常代谢。多胺则与细胞增殖有关， 并发现肿
瘤病人尿液中的多胺含量增加 ， 生物胺及其代谢 因此
产物的测定对疾病的诊断、 治疗以及药物研究都有重
要意义 。 表 ７１ － 儿茶酚胺、 Ｈ 及其主要代谢产物的名称及 ５Ｔ － 缩写名
到满意的结果 ２（ － 在测定尿液中Ｈ Ａ５Ｈ－ ９ 图７ ６。 Ｖ －Ｉ Ａ Ａ和Ｖ ＭＡ时也有直接进样的例子３１。 ３６ 但直接进
样会减 少柱寿命 ， 在测 定复杂成分时会有 干扰峰 ， 因 此特别是对尿和血 液样本进行 预处理是必 要的 。样
本预处理可采用一步法， 也可采用二步或多步法。
１沉液蛋 白法 ． 常用于组织样本及 Ｃ Ｆ Ｓ 样本 。
ｂｆｒ调节ｐ ８０激烈振摇， Ａ吸附到氧化铝 ｕｅ， ｆ Ｈ ． 使Ｃ 上， 离心， 氧化铝用重蒸水洗数次， 以除去杂质，Ａ可 Ｃ 以用酸洗脱。 ４阳离子交换树脂预处理 利用Ｃ Ａ在ｐ ６５ Ｈ． 时可以被阳离子树脂保留， 并可被硼酸洗脱的特性进
行样 品预处理 ， 子树脂不能保 留酸性 代谢产物 、 阳离
１脑组织 大鼠或小鼠快速断头取出全脑， 在 干冰上迅速分离所需部位， 固化后称重， 置于塑料管
中于 －６ ℃冰箱保 存直至测定 。检 测时在 脑组织 中 ０
醇代谢产物及氨基酸等， 故适合于复杂样品的预处 理２。 ３ 如果离子交换后再用氧化铝吸附法浓缩， 可进
一步提高检测灵敏度 １ ９
加入 ０５ １０ ｌ ５ｏ Ｌ冰冷的过氯酸， ． ．ｍ ００ｍ ｌ ． ／ 在冰冷 却下以内切式组织匀浆器匀浆 １ｉ， ｍｎ然后于４ ℃以下
是很灵敏 的方法 ， 但它不能与仲胺如 Ｅ反应。 Ｐ Ｏ Ａ在 还原 剂如 ２巯基 乙醇等的存在 下与伯胺 生成 比荧 光 － 胺更强 的荧光衍 生物 ８ 但 它有 Ｆ ， Ａ同 样的缺 点， 不 能用于 Ｅ的测定。 Ｐ Ｄ Ｅ是一个灵敏 的、 有选择性 的荧 光 衍生试 剂 ， 它不仅 能与 Ｎ Ｅ及 Ｄ Ｅ Ａ反 应 ， 能 与 还 它 们的代谢 产物 ３ ４二羟基 苯 乙二 醇 Ｄ Ｐ Ｇ ３ ， ＯＥ －