杨树植物组织培养
大叶黄杨组织培养
大叶黄杨组织培养中南林业科技大学生命科学与技术学院09生物技术2班组员：唐清政、李秀菊、易文国、徐增海指导老师：韩文军大叶黄杨组织培养1. 综述大叶黄杨易于人工修剪塑性，是一种很好的美化环境的常绿灌木。
现在一般利用扦插技术进行大叶黄杨的繁殖扩增，而用于扦插的部分一方面体积较大，另一方面难于进行消除处理，这就容易造成病变的积累，最终导致植物品质的下降。
如果通过植物组织来进行大叶黄杨的繁殖扩增，可以得到高品质的苗木，这就降低了需要进行病虫害防治的概率，理论上为城市绿化降低经济成本和劳力成本。
我们利用大叶黄杨的茎尖、叶片和带芽茎段作为外植体，在不同的培养基上通过不同激素水平诱导产生愈伤组织、从而生芽和根，并且在各个阶段设置不同的培养条件，完成植株再生。
其目的是找到一种繁殖系数和芽分化率高,容易形成愈伤组织,形成芽和根并最终形成良好植株的最佳激素和大叶黄杨外植体、各阶段培养条件的最佳组合。
《大叶黄杨带腋芽茎段组织培养研究》（吴广宇，杨玲玲，湖北荆州434025）研究表明以pH值6.2的MS+6BA2.0mg/L为培养基，用浓度为0.1%的升汞溶液消毒大叶黄杨带腋芽茎段5min，其试管苗生长良好，成活率可达93%；生根培养基采用1/2MS+NAA1mg/L+0.5%活性炭，生根率可达95%.[1]研究表明：在诱导培养阶段,较低浓度的细胞分裂素能促进大叶黄杨茎段侧芽的萌发,其适宜的诱导培养基为MS+BA0.5 mg/L;继代增殖阶段,以MS+BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+GA32.0 mg/L为培养基效果较好;生根阶段,最适宜的培养基为1/2MS+NAA0.5 mg/L。
[2]《金心大叶黄杨组织培养技术体系建立及叶片颜色变化研究》茎段启动培养中以MS+BA4.0 mg/L+TDZ0.05～0.1 mg/L+IBA0.1mg/L+NAA0.01 mg/L+蔗糖3%为较适宜培养基配方组合,其出芽率为75.84%,出芽指数为2.57。
《高效杨树栽培技术与关键措施》
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感谢支持！(Thankyou for downloading and checking it out!)《高效杨树栽培技术与关键措施》一、杨树栽培概述杨树种类及其特点杨树是杨柳科杨属植物的通称，我国杨树资源丰富，共有40余种。
根据生长习性和生物学特性，杨树可分为三大类：落叶杨、常绿杨和杂交杨。
落叶杨包括欧美杨、亚洲杨和乡土杨，其特点是生长迅速、适应性强、耐修剪、抗病虫害。
常绿杨主要指四季常绿的杨树品种，如葡萄牙杨、意大利杨等，其特点是四季常绿、树形优美、抗逆性强。
杂交杨则是通过人工杂交培育出的新品种，具有优良的遗传特性，如速生、抗病、适应性强等。
杨树栽培的意义与前景杨树栽培在我国具有重要的意义和广阔的前景。
首先，杨树是优质的木材资源，其木材纹理美观、质地坚韧，可广泛应用于家具、建筑、造纸等行业。
其次，杨树具有很强的生态功能，可以防风固沙、保持水土、净化空气、减缓气候变化等。
此外，杨树还具有较高的观赏价值，可作为绿化树种，美化城市环境。
随着我国林业和生态建设的不断发展，杨树栽培前景十分广阔。
政府加大了对杨树产业的支持力度，推动了杨树栽培技术的创新和普及。
同时，市场需求逐年增加，杨树产业链不断拓展，为农民增收提供了新的途径。
在未来，杨树栽培将继续发挥其在生态、经济、社会等方面的优势，为我国林业和绿色发展作出更大贡献。
二、高效杨树栽培技术选址与土地整理土壤选择杨树对土壤的适应性较强，但在较好的土壤条件下生长较快。
因此，在选择栽培杨树的地点时，应选择土层深厚、肥沃、排水良好的土壤。
刍议银中杨的组织培养技术
１ ． 绪论 。银 中杨是 以银 白杨 为母 本 ， 中东杨 为 父本 的 人工 杂交 而 成 ， 树种 生 长 迅 速 ， 质 结 构 细 密 ， 实 ， 旱 ， 该 材 结 抗 耐寒 （ 低 温 一 ９ 抗 ３７ ｃ）是 优 良造 林 树种 ， 树 干 通 直 ， 皮光 滑 ， ， 其 树 灰绿 色 ， 叶被 面呈 银 白 色 ， 形 美观 ， 树 风格 独 特 ， 系 ， 性 系 不 飞 絮 ， 城 乡绿 化 ， 化 ， 雄 无 是 美 净 化 环境 的优 良树 种 。 本试 验 的地 点 是辽 宁 省 开原市 石 台苗 圃 ，试 验 时 间是 ２ ０ ０ ６年至 ２ ０ ０ ７年 。
表 ４１ 三 种 灭 菌 方 法 污 染 率 与 褐 化 率 ．
第一种 第二种 第三种
ｐ Ｈ值 为 ５８ ． ２２４接种 ．． ２２４１幼 茎接 种 ．．． 将 表 面灭 菌后 的材 料放 在 滤纸 上 ， 镊 子剥 去 叶 片 ， 手术 刀 将 用 用 幼茎 切成 １２ｍ长 的茎 段 ， 个茎 段 保持 １２ 节 ， －ｃ 每 －个 用镊 子 将茎 段 基 部直 插 到培 养基 中 ， 茎段 的 顶 端 向上 ， 是 保持 形 态学 的极性 。还 要 注 意使 茎段 上 的腋芽 留在 培 养基 上 ， 每个 培养 瓶 中接种 一 个茎 段 。接种
２２ 试 验 方 法 ．
２． ． １外植 体 的采取 及处 理 ２ ６ 月上 旬 开始 在苗 圃地 选择 生 长健 壮 、 无病 虫害 的二 年 生植 株作 为 外植 体来 源 ， 择 晴天 上午 剪 取 当年 生 幼嫩 枝条 ， 回实 验室 后 用 选 带 自来水 冲 洗 ， 去掉 表 面泥 沙 污物 ， 入烧 杯 中 ， 放 加入 适 量洗 涤 剂 搅匀 ， 浸 泡 ６ ７ ｉ 后倒 掉洗 涤 剂溶 液 ， 流 水下 冲洗 ３ｒ ｎ －ｍ ｎ 在 ０ ｉ 左右 ， ａ 以清洗 掉 材料 表 面 的油脂 性污 物 。 ２２ ． ２外 植体 的 表面 灭菌 ． 将 冲洗过 的 材料 移 人超 净 工作 台上进 行 表 面 灭 菌 ，表 面灭 菌剂 用 ０１ ． ％的 升汞溶 液 ， 了提 高灭 菌效 果 ， 为 在表 面灭 菌前 将 材料 用 ７％ ０
杨树组织培养研究综述
杨树组织培养研究综述丁依;巩彦酉;欧品莉;杨巧琳;杨宗涵【摘要】为扩大杨树生产应用,简述了近年杨树组培的研究现状,重点对外植体类型,培养基的选取,激素的选择及组培的分化培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽4个阶段进行概述,以期对杨树组织培养研究提供参考.【期刊名称】《天津农业科学》【年(卷),期】2018(024)011【总页数】4页(P82-85)【关键词】杨树;组织培养;研究现状;展望【作者】丁依;巩彦酉;欧品莉;杨巧琳;杨宗涵【作者单位】大连民族大学环境与资源学院,辽宁大连116600;大连民族大学环境与资源学院,辽宁大连116600;大连民族大学环境与资源学院,辽宁大连116600;大连民族大学环境与资源学院,辽宁大连116600;大连民族大学环境与资源学院,辽宁大连116600【正文语种】中文【中图分类】S792.11杨树是杨柳科（Salicaceae）杨属（Populus L.）落叶乔木植物的通称，杨树是世界上分布最广、适应性最强的树种之一[1]，属下通常分5个组：青杨组（Sect.Tacamahaca Spach）、白杨组（Sect.Lence Duby）、黑杨组（Sect.Aigei-ros Duby）、胡杨组（Sect.Turanga Bge）和大叶杨组（Sect.Leucoides Spach）[2]。
杨树具有无性繁殖容易、生长速度快、生产周期短等优点[3]，广泛用于生态防护林、三北防护林和工农业用材林。
同时，杨树树干高大、整齐，常用作“四旁”绿化及道路绿化树种[4]。
随着各个行业对木材需求量的日益加大，杨树作为重要的木材树种，逐渐体现出它的价值。
但杨树扦插繁殖具有成苗周期长、受季节的影响大和生长条件不易控制等缺点，在短时间内难以繁殖出生长状态统一的苗木。
而组织培养作为一种快速繁殖技术，可有效地解决这些问题，短时间内能繁殖大量优良树种。
1 杨树组织培养研究现状随着杨树组培技术的日渐成熟，已经有许多不同种类杨树再生体系成功建立的例子，如2001杨[5]（Populus×euramericana cv.‘2001’），大青杨[6]（Populus ussuriensis Kom.），725杨[7]（P.deltoides cl.‘725’），箭杆杨[8]（Populus nigra L.Var.thevestina），巨霸杨[9]（Populus deltoides50×P.deltoides 36），南方四季杨[10]（Populus deltoides×P.nigracv.Chile），欧美杨POR[11]（Populus×euramericana），欧美杨渤丰1号[12]（Populus×euramericana cl.‘Bofeng 1’），山新杨[13]（Populus davidiana×P.bolleana），小黑杨[14]（Populus simonii×Populus nigra）等都有报道。
杨树的组织培养及其基因工程研究
杨树的组织培养及其基因工程研究
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（新疆农业大学林学系
摘要
杨树是林木基因工程的模式植物。在其组织培养过程中， 试管苗的再生不仅与植株的基因型、 年
龄及组织的来源、 状态等有关， 还受许多外界因素如盐浓度及激素的种类与配比的影响。在杨树的转化 过程中， 但后者较为常用。组织培养及转化技术的日趋成 ()* 直接转移法和农杆菌介导法都有应用， 熟， 为杨树基因工程奠定了良好基础。本文对杨树组织培养、 ()* 转化方法及其基因工程进行了较为系 统的概述。 关键词 杨树， 组织培养， 基因工程
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植物学通报
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的诱导到获得完整植株所需时间长， 培养程序复杂， 易发生变异， 不利于保持亲本性状也 不利于扩大繁殖。为了大量繁殖优良树种， 愈伤培养逐渐被器官培养所替代。通过器官 培养不仅对幼嫩植株还对成熟林木实现了扩繁， 其中芽的组织培养比较稳定， 变异率低， 在杨树的组织培养中较为常用。至今杨树已成为林木组织培养中研究最为广泛的树种之 一。以下概述杨树组织培养的影响因素及其应用。 !!! 外植体材料的选择 理论上每一个植物细胞都具有再生成完整植株的能力， 即细胞全能性。但在实际应 用中， 组织的再生受植株基因型、 性别及年龄、 组织来源、 生理状态等多种因素的影响。 （"）植株的基因型起决定性作用。不同基因 型 的 植 株， 其 再 生 能 力 有 很 大 差 别。 （ #$%&’() ()* +,)-.，"/0/） 将 "1 种不同基因型的美洲黑杨 （ % & ’!$"()’!* ） 茎段 #$%&’() !" #$ 接种在附加 2 ! 3 ’4 ・ 有 1 种难诱导， 其余 1 种 5 6 " 78 的培养基中， 9 种诱导率达 32: 以上， 则介于 ; : 至 <; : 之间。 （<）杨树属于雌雄异株植物， 有些杨树的再生能力与性别有 关， 如缘毛杨 （ % & +)$)#"# ） 的雌株再生能力比雄株高 （ =>&,>?，"/0@） 。不过这种差异不是绝 对的， 白杨及其杂交系的雄株和雌株 （ "1 A ;2 年） 上的芽的再生能力就没有显著差别 （BCDE(，"//;） 。 （;）植株年龄对组织的再生有影响。通常幼嫩植株的芽比成熟植株的再 生能力强。这可能是幼嫩植株分生能力旺盛的结果。但林木不同于草本植物， 生长周期 长， 幼苗成年后的性状不易预测， 有时不得不从成年的优良大树上直接选取幼嫩部分或先 复幼再取外植体。一般来说， 外植体越幼嫩， 植株越容易再生 （朱大保，"//2） 。 （9）同一 植株上不同器官的再生能力有所不同。如白杨及白杨杂交系的实生苗， 其下胚轴和茎尖 分化芽的能力高于子叶和叶片 （ BCDE(，"//;） 。即使同一器官的不同部位， 再生能力也有 差异。陈维伦等 （"/02） 对山新杨 （ % & ’#,)’)#-# F % & .($$!#-# 5$DG)&） 叶外植体分化的研 究表明， 带有叶柄的下段 （极易在叶柄的切口上形成芽） 分化成芽的频率最高， 达 @2 : 左 右， 而中、 上段 （芽从叶脉上产生） 的分化频率极低。 （3）不同生理状态的外植体对生长素 和细胞分裂素的敏感度不同。郑均宝等 （"//3） 用生根和未生根试管植株的叶片进行芽的 诱导， 发现生长条件一致时， 生根试管植株的叶片分化情况较好， 产生的不定芽数量多且 粗壮。 !!" 外部环境因素 培养基种类、 盐浓度、 生长调节物质、 碳水化合物、 光照和温度等外界环境因素对植株 的再生有很大影响。 （"） 培养基种类和盐浓度。杨树组织培养中， HI 和 J=H 培养基较为常用。它们富含 植物所需的盐类， 其中 HI 又可按盐浓度分为 " K 9 HI、 " K < HI 和 HI。" K 9 HI 和 " K < HI 在 诱导杨树试管苗生根时常用。这是由于高盐浓度对某些杨树的生根不利。此外还有一种 大量元素减半的 " K < HI 培养基， 主要用于芽的诱导。虽然 HI 和 J=H 在杨树的组织培 养中常用， 但都含较高浓度的铵离子。在有些杨树如杂交杨 （ % & #$.# F % & "/!01$# ） 和杂 交杨 （ % & "/)+2(+#/3# F % & ’!$"()’!* ） 的组织培养过程中， 铵离子会富集在叶或茎段内， 不利 于愈伤组织的诱导 （L& M%$G?，"//2） 。因此应根据材料来源、 实验目的来选择培养基。 （<）生长调节物质。组织培养中常用的有生长素和细胞分裂素两大类。生长素主 要促进细胞分裂、 诱导愈伤组织产生和促进生根等。在杨树上常用的有： NBB、 OMB 和
杨树的植物组织培养
2 . 外植体灭菌
从健壮母株上选取适宜外植体，洗衣粉液漂洗，毛刷刷净枝条和腋芽处的污
物和附着物，流动自来水充分冲洗干净，移入超净工作台。杨树外植体常用消 毒方法有两种：第一种是次氯酸钠灭菌法，另一种是氯化汞灭菌法。消毒后用 无菌滤纸吸干多余水分，将材料适当分割后接种。通常将嫩枝剪成带顶芽或1 个腋芽的1~2cm茎段;以芽为外植体时要剥除鳞片，以叶片为外植体时可剪成 0.5~1.0cm2 的碎片。
（二）杨树遗传转化的应用 （1）抗虫基因工程；（2）抗病基因工程；（3）抗病毒基因； （4）抗非生物胁迫；（5）品质改良。
杨树组织培养
一、杨树组织和器官培养
（一）杨树离体培养体系建立
1 . 外植体 实际应用中，一般以茎尖和茎段为外植体，诱导率和增殖率较高，并容易获 得生根率高的试管苗，也可直接从成年大树上选取幼嫩组织培养。芽的萌动率 和增值率收取材季节限制，以冬芽为外植体进行杨树离体快繁时，应在春季芽 即将萌动时取材，生长季节取嫩枝段作外植体时，以4~6月取材为佳。外植体 可以直接取自田间，经灭菌后接种；也可取自试管苗，无菌切割后接种。休眠 枝经水培后芽萌发枝所获取的外植体也是较好的组培材料。
5 . 生根与移栽
杨树不同种类生根的难易程度有极大差异。生根用基本的培养基多为1/2MS
培养基，生长调节剂多用IBA或IAA、NAA。细胞分裂素对根的生成有抑制作用， 但若将分化培养基中诱导出的不定芽直接转入生根培养基中，可能由于细胞分 裂素不足，导致芽苗发黄枯死，宜采用逐步降低细胞分裂素的过渡培养法。移 栽时把有根的完整植株取出，洗去根部附着的培养基，覆盖并保持一定的湿度 与光照，一段时间后移入温室，最后定植在造林地。
纯化，获得原生质体产量达1.57 ×107 个/g，有活力原生质体占79.41%。 杨树原生质体培养多采用富含有机成分的KM8p和V-KM培养基，培养方法 多为液体浅层培养，密度为5 ×103 ~2.5 ×105 /mL。目前，杨树原生质体再生 植株大多是通过愈伤组织器官分化途径获得的。
浅谈杨树的培育管理
王 娇
（ 黑龙 江省 通 北林 业局 １ ６ ４ ０ ３ １ ）
摘 要 ：杨树是 一种集绿化、经济 用林 、防护林 等多种功能于一体 的树种 ，其培 育和管理显的尤为重要 ，本文从 育苗和修
枝两个方 面概括谈 了杨树的培育和管理。 关键词 ：杨树 ；育苗；修枝 ；培 育管理
１ ． ３ 育苗地准备
鉴于杨树 育苗对 土壤条件 和水 分条件要 求 ，我们必须 做 好对垄作 准备工作 ，首先将育 苗地进行 细致深翻 ，深 度 ４ Ｏ厘米 ，为均衡 提高垄两侧的地温 ，垄 应南 北向设 置 ， 垄 距６ ０厘米 ， 按 垄向条状施肥 ， 然后起垄 ， 垄高 ２ ５ 厘米左右； 其 次根据 育苗地 的大小 还要做好排灌 系统 。 １ ． ４ 插穗准备 在剪取插 穗时 ，我们 通常要选 择两种苗 源的 ：其一是 在 专 门的良种 无性 系采穗 圃中 ，每 年通过平 茬 ，提供一 年 生插穗 ；其二 是在培育 二根一千 苗时 ，取得 插穗。木质化 良好 ，并具备 发育正常侧 芽的一年 生苗干上 截取插穗 ，出 自苗干 中、下 部的插穗质 量最好 ，这部 分插穗成 活率高且 生 长快 ，健壮 、没有病虫 害的也是 我们 在选择苗 时 的必备 条件 。 插穗截取时选刀很关键 ，应用锋利 的修枝剪或切刀 ， 刀 口钝时容 易使插穗劈 裂。在不 同生根 的情况 下 ，还不一 样。 扦插一般在 春季进行 ， 这个季节 的温度调节 比较适合 ， 我们在苗床上覆上地膜 可保 证 良好的土壤墒情及增加温度。 最好 使用黑 色地膜 ，这样 可以有效 抑制杂草 生长。扦插前 插穗要在水 中浸泡 ２ ４ 小时， 最好加生根剂 以提高成活率 。 多数 采用手工 直插 ，扦插后 地膜上要 适 当压 土防止风吹 ， 行距在 ６ ０ 厘 米 ，株距 ２ ５厘米 比较合适。 ２ 杨 树 的 修枝 技 术 ２ ． １ 整 形 整形是为 了剪去影 响顶部主梢 生长 的竞争侧 枝 ，保证 树干 通直无权 。随着树木长 高还要修去 树冠下部 和中部粗 大 的竞争 枝 ，直 到树干 ８ ｍ 以下 通直无 权。杨树 是顶 端优 势强 的树种 ，主干有 自然直立 的特性 。其 顶端优 势是 由于 顶端分 生组织 的作用 ，控制 了一级侧枝 的生长 。整形 就是 通过控制侧枝加强主梢 ，人为地加强和形成顶端优势。 经 常可 见到 主干不 通直 的杨树 ，在 ３～６ ｍ之 间有不 同程度 的弯 曲，俗 称 “ 歪脖 ”。这 段木材是 否通直对 旋切 胶合板 的单板关 系很大 ，弯曲部分没法 旋切 ，必 须剔除 。 胶合板 厂 由于剔 除弯 曲的干材 ，原料浪 费很大 。这类 重大
杨树
对组织培养的认识----以杨树组织培养为例姓名：张新慰学号：200816840207 专业：园林（规划设计方向）班级：2班得分：摘要：我国是一个森林资源缺乏的国家, 随着对森林保护工作的日渐重视, 木材供需矛盾表现得更加突出, 发展杨树已成为解决目前木材短缺的重要途径, 杨树白杨派树种根蘖繁殖率低、扦插繁殖周期长, 受季节等诸多因素限制了其大规模繁殖, 组织培养繁殖方法虽然能解决杨树扦插繁殖过程中的一些问题并可在短时期内获得大量组培苗关键词：杨树；组织培养；认识1杨树的概述杨树是杨柳科Salicaceae 杨属Populus 植物落叶乔木的统称, 是用材林、防护林和四旁绿化的主要树种。
由于其生长快、适应性强、轮伐期短、繁殖容易, 在世界上栽培面积较大, 因此杨树的育种工作也倍受关注。
而杨属中白杨派树种如银白杨Populus al-ba、新疆杨Populus alba var. pyramidalis、毛白杨Pop-ulus tomentosa、银新杨Populus alba ×P. alba var.pyramidalis 等, 适生于干旱、半干旱地区, 在我国三北地区的生态环境建设中具有积极的战略地位。
2杨树常规组织培养的研究常规组织培养(Tissue Culture) 是指在无菌条件下, 分离并在培养基中培养离体植物组织(器官或细胞)的技术。
广义的组织培养: 包括器官培养、组织培养、胚胎培养、细胞培养、原生质体培养、花药培养等; 狭义的组织培养是指植物离体快繁技术(Micro-propagation)或试管繁殖技术。
组织培养用离体快繁技术繁殖, 节约繁殖材料,每年可繁殖出几万甚至数百万的小植株。
虽然木本植物的组培要比草本组织培养难, 但是通过国内外众多科研人员的努力, 已经利用茎段、叶片、胚培养、花药培养等获得了目的植株。
组织培养技术在植物无性繁殖中占有十分重要的地位, 它具有繁殖速度快, 易于人工调控, 不受季节限制, 可以生产无病毒苗木等众多优点, 但是传统组织培养技术主要靠手工操作, 浪费人力物力, 导致生产成本过高, 从而限制了其商品应用价值。
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四、生根培养
史绍林等在新西伯利亚银白杨的根诱导过程中 发现，IBA与NAA配合使用效果明显优于单独使用， 两者配合使用时NAA浓度应高于IBA浓度，但NAA浓度 过高易产生大块愈伤。当采用1/2MS+0.1 mg/L NAA+0.02 mg/L IBA作为根诱导培养基配方时，生 根率达90%，根数多，生长健壮。
二、外植体
金顺玉等利用叶片作为外植体，用75%乙醇消 毒1min附加NaClO消毒2min即获得了无菌苗。
沈周高等对3种黑杨杂种叶片进行不同时长的消 毒处理，结果表明，0.1%Hgcl2溶液消毒4 min为最 佳处理，叶片污染率为20%，出愈率为76%。
二、外植体
研究发现，将杨树半木质化新稍浸泡在蒸馏水 中30 min使其吸饱水分，可以减少HgCl2对其内部 细胞组织的侵害。一般情况下，从优树上直接截取 的外植体通常需要较复杂的消毒手段和较长的消毒 时间，而茎尖与茎段等部位消毒时间长于叶片。另 外，对于花粉、子房、未成熟种子等多层包被的微 小材料，为了不影响生长，可不经消毒。
二、外植体
2、外植体的消毒
在杨树无菌体系的建立中，外植体常用乙醇、 次氯酸钠、氯化汞、双氧水和吐温等作为消毒剂。 叶片通常先采用70%-75%乙醇处理10-60s再用HgCl2 处理3-8min 或次氯酸钠处理2-10 min,茎段、茎尖 和腋芽在消毒中通常选用乙醇消毒30-60s,再用滴加 1-2滴叶温的HgCl2溶液处理5-15 min。
一.培养基及外源激素的选择
2.外源激素的选择
植物组织培养过程中，外源生长调节剂是影响培 养物形态建成的主要因子，细胞分裂素主要用于促进 细胞分裂和由器官或愈伤组织上分化不定芽，生长素 则被用于诱导细胞的分裂和根的分化。在杨树的分化 培养过程中，通常选用的细胞分裂素是6-BA、ZT、 KT等，生长素为NAA。
1、褐变现象
褐变概念 ：褐变是指外植体在诱导脱分化或再分化 过程中，自身组织从表面向培养基释放褐色物质， 以至培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变 褐而死亡的现象。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
克服外植体褐变措施： （1）选择适当的外植体 选择生长旺盛的，分生能力 强的部位作为外植体材料，在进行组织培养过程中不 易产生褐变。 （2）培养材料进行预处理 将外植体用流水冲洗后， 在5℃左右处理12~24h，消毒后先接种在只含有蔗糖的 培养基上5~7d，使组织中的酚类物质部分先渗入培养 基。取出外植体，用适当方法清洗，再接种到适合的 培养基上，可减轻外植体的褐变。
四、生根培养
史绍林等在山新杨的组培育苗过程中，采用 了简化生根培养，在生根培养基中用一定比例的 蛙石、草炭土、珍珠岩替代琼脂，用过滤自来水 替代蒸馏水，混合培养基污染率儿乎为零，生根 率达96%。后者有望替代传统生根培养，以获得更 多高质量、高成活率的杨树幼苗。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
• 玻璃化发生是“生长因子不平衡的产物”、 是培养物“中毒”、不能很好适应培养基和培养 环境的结果。因而提高培养物对逆境的耐受能力 是有益的。可适当提高培养基中蔗糖含量或加入 渗透剂，降低培养基中的渗透势，减少培养基中 植物材料可获得的水分，造成水分胁迫。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
四、生根培养
杨树的生根培养大都采用1/2MS为基础培养基， 附加一定量的NAA, lAA, IBA。汪建亚等在山地杨 的快速繁殖研究中指出，以1/2MS为基础培养基附加 0.05mg/L NAA时，生根率达100%，但添加lAA后进 行生根培养时，效果普遍较差。林元震等在甜杨的 组织培养和快速繁殖研究中指出，采用1/4改良 MS+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA;进行生根培养， 生根率可达100%，根短而粗，根数多。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
2.污染的原因及对策
污染是指在植物组织培养过程中，培养基和 培养材料滋生杂菌，最终导致培养失其解决方法
（1）细菌污染及对策 细菌性污染的主要症状是材料附近出现载液状和发
酵泡沫状物体，或在材料附近的培养基中出现混浊和云 雾状痕迹。一般在接种后1-2d即可发现。外植体带菌污 染的解决措施是对外植体进行彻底消毒。即根据不同材 料选择合适的消毒剂和消毒方法;对特殊材料先进行预 处理;对材料内部带菌的组织，在培养基中加入适量抗 生素，以达最佳消毒效果。此外，培养基的灭菌力求彻 底，而且操作人员要严格按照无菌操作顺序操作。
一.培养基及外源激素的选择
康薇等对美洲黑杨叶片离体再生的研究中指出， 不同细胞分裂素与0.02 mg/L NAA配合诱导叶片不定 芽，其效果差异明显，0.02 mg /L 6-BA分化率为 91.1%。, ZT次之，KT浓度小于0. 2 mg/L时只分化出根。
一.培养基及外源激素的选择
Wang等在对银中杨茎段的离体再生研究中指出， 采用MS为基础培养基，附加较低浓度的TDZ，采用正常 光和黄光为光源，有利于银中杨茎段不定芽的分化， 而采用B5为基础培养基附加较高浓度的TDZ会对不定芽 的分化产生抑制。将TDZ与6 -BA配合使用效果明显优 于单独使用，在新疆杨和河北杨叶片不定芽诱导的过 程中添加0.25mg/L 6-BA+0.01mg/LTDZ与单独使用TDZ 相比，河北杨与新疆杨叶片分化率分别增加了14.82% 和25.00%。
三、分化培养
在杨树组织培养过程中，不同类型的外植体经 过人工诱导，都能够重新开始细胞分裂与器官分化， 长出根、芽等器官，最终形成完整植株。不同部位 的外植体的大小及摆放方式直接影响杨树组织培养 的分化率及成活率。
三、分化培养
王树耀等指出84K杨树叶的不同着生部位和同一 叶片的不同切块均对不定芽的诱导有影响，从第1片 叶到第5片叶不定芽诱导总数递减，叶片上切段、中 切段、下切段不定芽的诱导率分别为12.0%、13.3%、 73.3%，不同切段不定芽诱导率存在显著差异，这可 能是由于内源激素水平不同引起的。
一.培养基及外源激素的选择
1、培养基的种类
培养基的种类是影响组培苗生长的关键因素。目 前，在杨树组织培养的过程中MS、1/2MS、WPM等培养 基都有广泛的应用。MS与WFM培养基均属于高盐培养 基，可以提供木本植物生长所需的盐类。
一.培养基及外源激素的选择
张蕾等在京2杨再生体系建立的研究中提出，由 于京2杨生长需要较高的营养，MS和WPM培养基明显 优于GMS培养基，且MS培养基更适于腋芽的启动和生 长。在35杨叶片不定芽诱导过程中，WPM培养基诱导 芽迅速，芽发育正常且集中生长于切面大小叶脉处， 各项指标均优于MS培养基。不同杨树的生长环境与 生物学特性不同，导致适合其诱导、增殖及生根生 长的培养基不同。所以，杨树组织培养时，不能片 面评价培养基的优或劣。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
（3）内源菌污染及对策 在植物组织培养过程中，较难处理的是内源菌污染。
内源菌污染是由于外植体材料内部的微生物(如内生细菌、 真菌等)不能被一般的表面消毒方法所清除，随着材料带 入培养过程造成的。针对内源菌污染，有以下防治对策: ①改进外植体消毒方法。②反复检查培养物。③使用抗生 素。抗生素能抑制污染菌的生长，在使用初期效果较好。 但抗生素不能完全杀死污染菌，因此潜伏的污染可能会给 植物以后的生长带来问题。
朱湘渝等利用BN、N6、MS等5种培养基诱导杨树 花药，也成功诱导出了杨树单倍体植株。
但于志水等在研究中指出水培苗的茎尖容易褐化， 不易作为外植体。
二、外植体
从上述研究结果的诱导时间来看，茎段所需时 间最短，叶片与花药所需时间较长。实践证明，杨 树组织培养中，腋芽、茎尖、叶片均为较好的外植 体材料。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
3、玻璃化现象
玻璃化概念：玻璃化是指在培养过程中材料 呈半透明状，组织结构发育畸形的现象，又 称“过度水化“。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
（1）玻璃化防治对策
• 利用固体培养，增加琼脂浓度，降低培养基的 衬质势，造成细胞吸水阻遏，可降低玻璃化。琼脂 浓度应不低于0.8%，条状琼脂先用双蒸水浸泡24 h 去除杂质，粉状琼脂应尽可能选用含灰量低于2. 5% 的琼脂粉。因为琼脂杂质中的Ca2+、Mg2+、Fe2+、 Zn2十、Cu2+等含量较高，会影响培养基中矿质元素 的含量和比例。
三、分化培养
研究还表明，采用畸形、浅绿、皱缩叶片作为 外植体培养，将直接影响叶片的诱导过程，生长速 度缓慢，难以成苗。宋玉霞等在进行银河1号杨树叶 外植体再生体系建立的研究中指出，利用无菌生根 试管植株叶片作为外植体，在分化时间、分化率、 分化芽数方面均优于无菌无根试管植株叶片。茎段 诱导培养中通常采用1cm大小的外植体，较容易诱导 出芽。
• 注意通气，尽可能降低培养容器内的相对空 气湿度和改善氧气供应状况。目前较多使用塑料 薄膜封口，要注意薄膜的通透性或改用透气膜。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
（2）真菌污染及对策 真菌性污染主要指霉菌引起的污染，一般接种后3 -8
d可在培养基中发现各种颜色的菌斑。多由空气污染和瓶 口边缘以及取放封口纸扬起的灰尘和真菌抱子落入器皿中 造成。因此，每次使用接种室和超净工作台前，先用紫外 线灯杀菌20 min，再用75%的酒精喷雾降尘。接种时先用 75%的酒精棉球擦拭瓶子外部，然后再放入超净台。接种 时，瓶子要拿成斜角，瓶口放在火焰上方，利用气流上升 的原理，以阻止空气中飘扬的抱子落入瓶内，取封口纸时 动作要轻。另外，如发现霉菌污染应及时清除。
五、杨树组织培养中应注意的问题及其解决方法
（3）选择适当的培养基和培养条件 在培养基的选 择上应注意适当的无机盐成分、蔗糖浓度、激素水平 与组合以及配合一些抗褐变剂等都可减轻褐变现象的 发生。培养过程中还要注意适宜的培养条件，因为在 酚类物质的合成和氧化过程中，有许多酶系统参与， 其中部分酶系统是光活性的。较高的温度会使酶促褐 变加强。所以建议在培养初期保持较低的温度(15-20 ℃)，黑暗或弱光下培养，均可减轻培养材料的褐变。