核酸检测实验室的规范化管理 ppt课件

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4.扩增产物分析区
▪ 下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。
▪ 本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本
区的物品及工作服将扩增产物带出。
▪ 本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、
丙稀酰胺、甲醛或同位素等，应注意实验人员的安全防护。
▪ 本区如采用负压或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前
Tris—1mmol／L EDTA缓冲液(pH7.5—8.0)中4℃保存。 ▪ 用于RNA测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中-80℃或液
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3. 扩增区
▪ 下述操作在该区进行：DNA或RNA扩增。 ▪ 在巢式PCR测定中，通常第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢
式扩增由较高的危险性，第二次加样必须在本区内进行。 ▪ 不能从本区再进入任何“上游”区域，可降低本区的气压以避免
气溶胶从本区漏出。 ▪ 为避免气溶胶所致的污染，尽量减少在本区的走动。
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
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(一) 临床基因扩增检验实验室区域设置原则
1．临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域： 试剂贮存和准备区；标本制备区； 扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区。 （如使用全自动分析仪，区域可适当合并）
2．各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、 物品混用。
3．进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即：
试剂贮存和准备区 标本制备区 扩增反应混合物配制和扩增 区 扩增产物分析区。
4．不同工作区域使用不同的工作服(例如不同的颜色)。工作人员 离开各工作区域时，不得将工作服带出。
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（二）工作区域仪器设备配置标准
1．试剂贮存和准备区
2-8℃和-15℃冰箱；混匀器；微量加样器(覆盖1--1000μl)； 移动紫外灯(近工作台面)；消耗品： 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯)； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
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2. 标本制备区
▪ 下述操作在该区进行： 标本保存、核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩 增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
▪ 为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反 应混合液的反应管。
▪ 对具有潜在传染危险性的材料，必须有明确的样本处理和灭 活程序。
▪ 样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取 方法。
核酸检测实验室的规范化管理
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一、规范化设置及管理
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精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
玻璃器皿在使用前应高压处理。
临床用于RNA（如HCV RNA）扩增检测的血标本建议进行抗凝 处理，并尽快（3小时以内）分离血浆，以避免RNA的降解。如 未作抗凝处理，则抽血后，必须在1小时内分离血清。
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（二）标本的稳定化处理
▪ 用于DNA扩增检测的标本，应及时送至实验室。
▪ 用 于 RNA 测 定 的 标 本 应 进 行 稳 定 化 处 理 ， 异 硫 氰 酸 胍 盐 (Guanidine thiocyanate，CITC)可使DNA酶和RNA酶立即失 活，因此在采集标本时，可将标本材料如血清或血浆按1：4的比 例加至含有5mol／L GITC的试管中，从而使血清(浆)中的RNA 酶不可逆失活。
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（三）标本的运送
标本采集后必须尽快送至实验室。 经过稳定化处理的标本可在常温下邮寄运送。 用于RNA检测的标本，如果未经稳定化处理，须速冻
后，放在干冰中运送。
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（四）标本的贮存
▪ 临床体液标本如血清／血浆等可于-70℃下长时间贮存。 ▪ 用于DNA测定的已纯化核酸样本可在10冰箱；高速台式冷冻离心机； 混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器(覆盖1--1000μl)； 可移动紫外灯(近工作台面)；超净工作台；消耗品; 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯)；
专用工作服和工作鞋；专用办公用品； 如需处理大分子DNA，应备有超声波水浴仪。
（九）质量控制
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（一）标本的采集
常用于基因扩增检测的临床标本包括EDTA或构橼酸钠抗凝全血 或骨髓、血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。采血液等样 本时，应使用一次性密闭容器，如真空采血管。当使用非密闭采 样系统时，如尿、分泌物和骨髓的采样，必须注意防止来自采样 者的皮屑或分泌物的污染。采样时必须戴一次性手套。
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3.扩增反应混合物配制和扩增区
核酸扩增仪；微量加样器(覆盖1--1000μl) ； 可移动紫外灯(近工作台面)；消耗品（一次性手套、一次性吸水纸、 耐高压处理的离心管和加样器吸头(带滤芯)； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品.
4.扩增产物分析区
基本仪器设备如下： 微量加样器(覆盖1--1000μl) ； 可移动紫外灯；消耗品； 专用工作服和工作鞋；专用办公用品。
面区域的可能性
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二、质量保证
临床基因扩增检验实验室质量保证涉及到整个基因扩 增检验所有阶段，即测定分析前的标本采集处理、测定中 的核酸提取，扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。
（一）标本的采集 （二）标本的稳定化处理 （三）标本的运送 （四）标本的贮存 （五）标本的处理(核酸提取) （六）靶核酸的逆转录CFIT)和扩增 （七）污染 （八）扩增产物的分析
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（三）各区操作注意事项
1. 试剂贮存和准备区
▪ 下述操作在该区进行： 储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
▪ 在本区的实验操作过程中，必须戴手套并经常更换。 ▪ 操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 ▪ 严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。 ▪ 工作结束后必须立即对工作区进行清洁。 ▪ 实验室及其设备的使用必须有日常记录。