HPLC异常问题原因及解决办法办法
HPLC常见异常及解决方法_R130326
20% - 100% MeOH 梯度洗脱没有进样
23
现鬼峰的可能原因 1. 2. 3. 4. 5. 6. 上次进样残留 流动相污染 样品中不明干扰物 离子对： 离子对：破坏平衡 肽谱： 肽谱：三氟乙酸氧化 反相： 反相：水受污染 1. 2. 3. 4. 5. 6.
解决方法 运行结束时用强溶剂冲洗色谱柱或延长 运行时间 冲洗色谱柱除去污染物 样品净化或预分馏 在实际应用的流动相中制备样品 每天新配样品， 每天新配样品，使用抗氧化剂 用不同量的水通过反相柱检查水的适用 性且洗脱后测量峰高
HPLC常见故障及解决方法
Eddy Zhou
1
培训目的
∗ 通过此课程的学习， 通过此课程的学习， 使我们了解日常使用 HPLC 过程中最常见 的异常现象、 的异常现象、引起此 异常的可能原因及其 解决办法
2
HPLC常见异常现象 HPLC常见异常现象
∗ ∗ ∗ ∗ ∗ ∗ ∗ ∗ 溶剂(Solvent) 色谱峰(Peaks) 泄漏(Leaks) 灵敏度(Sensitivity) 保留时间(Retention) 平衡(Equilibration) 基线(Baseline) 压力(Pressure)
灵敏度( 灵敏度(Sensitivity)
出现灵敏度低的可能原因 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 自动进样器流路堵塞 检测器衰减设置过高 样品吸附于定量环或柱 1. 2. 3. 解决方法 检查流路和清除任何障碍 降低检测器衰减值 用高浓度样品初始化定量环和柱子 用样品充满定量环 增加进样量 稀释或浓缩样品， 稀释或浓缩样品，使检测器响应落在线性范 围之内 在样品制备过程中使用内标物， 在样品制备过程中使用内标物，优化样品制 备方法 使用聚合物填料， 使用聚合物填料，改变柱的类型和模式
hplc压力问题及排查方法
hplc压力问题及排查方法
HPLC(高效液相色谱)的压力问题可能包括压力过高或过低。
下面是一些常见的排查方法：
1. 检查柱连接：确保柱连接紧密，并且没有漏气或松动的地方。
可以用手轻轻转动连接处，看是否有松动。
需要重新连接的话，确保连接处干净无异物。
2. 检查管道：检查管道是否有任何堵塞或压力泄漏的情况。
可以检查压力节流阀、减压阀和调节阀等部件。
3. 检查流量设置：检查流量设置是否正确。
如果设置过高，则可能会导致压力过高。
参考仪器的操作手册，按照所需的分析条件进行设置。
4. 检查溶剂：确保使用的溶剂无杂质或气泡。
杂质或气泡可能会导致压力过高。
可以尝试更换新鲜的溶剂，或者通过过滤器除去杂质。
5. 检查柱压力：检查柱的压力是否正常。
柱的堵塞、损坏或老化可能导致压力过高。
如果怀疑柱的问题，可以尝试更换新的柱试试。
6. 检查泵：检查泵的泵头、活塞和密封环是否良好。
泵的密封环磨损或泵头松动可能导致压力问题。
7. 检查压力传感器：检查压力传感器是否正常工作。
如果压力传感器损坏或失灵，可能导致压力测量不准确。
如果以上排查方法仍然无法解决问题，建议联系仪器厂家或技术支持，寻求进一步的帮助和建议。
HPLC 故障及排除方法
氨基柱的使用：
需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。
反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。
所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时（分析其中的糖份），酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。
这时，Kromasil专家所给的建议是：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
高效液相色谱仪常见故障及解决方法
高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象：泵无法正常启动或启动后无法正常停止。
解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧。
2. 故障现象：泵的流量不稳定或无法调节。
解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧；检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏，如损坏，更换密封圈。
二、流动相跑空1. 故障现象：流动相液位下降至最低液位以下，导致无法正常进样。
解决方法：检查流动相的储液瓶是否已空，如已空，重新更换储液瓶；检查流动相的流速设置是否正确，如不正确，重新设置流速；检查管路是否有泄漏点，如存在泄漏点，修复泄漏点。
2. 故障现象：流动相液位迅速下降，导致无法正常进样。
解决方法：检查废液瓶是否已满，如已满，倾倒废液；检查管路是否有堵塞或弯折，如有，更换管路或调整管路布局。
三、峰面积重复性差1. 故障现象：同一色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。
解决方法：检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查进样针的清洗是否彻底，如不彻底，加强清洗；检查样品前处理的稳定性是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。
2. 故障现象：不同色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。
解决方法：检查流动相的组成是否恒定，如不恒定，重新配制流动相；检查色谱柱的稳定性是否可靠，如不可靠，更换色谱柱；检查检测器的波长是否准确，如不准确，重新调整波长。
四、峰丢失1. 故障现象：在色谱图中看不到预期的峰。
解决方法：检查进样针是否堵塞或断裂，如堵塞或断裂，更换进样针；检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查样品前处理是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。
2. 故障现象：在流动相中添加了某种物质后，出现了预期之外的峰。
解决方法：检查流动相中添加的物质是否稳定，如不稳定，重新配制流动相；检查检测器的灵敏度是否足够高，如不够高，调整灵敏度；检查色谱柱的类型是否正确，如不正确，更换色谱柱。
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
HPLC的故障诊断及其维修
HPLC的故障诊断及其维修在实验室中，高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析方法，但是使用过程中可能会出现一些故障。
下面将对HPLC的常见故障进行诊断和维修。
1. 压力问题如果HPLC系统的压力异常升高或降低，可能是由于柱堵塞、封口件失效或泵的问题引起的。
此时需要检查柱是否需要更换，清洗封口件或者校准泵的工作方式。
2. 色谱峰形问题如果HPLC的色谱峰出现拖尾、畸变或分离不良的情况，可能是由于进样器、柱或检测器的问题。
此时需要检查进样器的清洁程度、柱的使用寿命以及检测器的工作状态。
3. 泄漏问题HPLC系统的泄漏可能会导致试剂的浪费并且对操作人员造成危险。
在发现泄漏时，需要立即停止使用HPLC系统，并检查管路和连接件是否紧固，替换损坏的零件。
4. 溶剂问题HPLC的溶剂可能会受到污染或者流速不稳定，导致分析结果不准确。
此时需要更换新的溶剂瓶、清洗管路和泵，并重新校准流速。
以上是HPLC常见的故障诊断和维修方法，为了保证分析结果的准确性和仪器的稳定性，实验室操作人员需要定期对HPLC进行检查和维护。
高效液相色谱（HPLC）作为一种准确、灵敏和可靠的分析技术，在化学、生物和制药领域中得到了广泛的应用。
然而，HPLC分析过程中常会遇到一些故障，这些故障可能会影响分析结果的准确性和可靠性。
因此，了解常见的HPLC故障并掌握相应的维修方法对于保障实验室分析工作的顺利进行至关重要。
5. 柱温度问题HPLC柱温度的稳定对于分离和检测分析结果非常重要。
如果发现柱温度不稳定或者超出设定范围，一般可以通过检查柱箱温度控制器、换热器或者冷却器来确定问题所在，并及时调整或更换相关部件。
6. 泵的稳压性能问题HPLC泵的稳压性能直接影响流速和流量的准确性。
如果发现流速或者流量不稳定，需要检查压力传感器、活塞密封件等部件是否出现损坏或者磨损，及时更换损坏部件进行维修。
7. 检测器故障检测器在HPLC分析中起着至关重要的作用，如果出现检测信号异常、漂移或者峰形畸变，需要检查检测器灯泡是否老化，光路是否受到污染或者调整参数设置是否准确，进行相应的维修和调整。
高效液相色谱（HPLC）使用中常见故障及解决方法（三）峰型异常问题
高效液相色谱（HPLC）使用中常见故障及解决方法（三）峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。
1、色谱图中未出峰。
解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。
2、一个峰或几个峰是负峰。
解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
3、所有峰均为负峰。
解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
4、所有峰均为宽峰。
解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
、5、所出峰比预想的小。
解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6、出现双峰或肩峰。
解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。
解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。
8、拖尾峰。
解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。
9、出现平头峰。
解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10、出现鬼峰。
解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。
HPLC中异常峰的分析与处理
HPLC中异常峰的分析与处理HPLC（高效液相色谱）是一种重要的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
在实际应用中，常常会遇到一些异常峰的出现，这些异常峰可能是由于仪器问题、样品准备问题或者操作问题引起的。
本文将详细介绍HPLC中异常峰的分析与处理方法。
一、异常峰的种类1.计算误差引起的峰：由于色谱计算误差或者柱温不稳定等因素引起的峰。
2.操作问题引起的峰：如进样量过大、进样错误、流动相选择错误等引起的峰。
3.仪器问题引起的峰：如漏气、泵浦故障、进样器故障、柱温不稳定等引起的峰。
4.柱问题引起的峰：如柱老化、杂质吸附等引起的峰。
5.试剂问题引起的峰：如流动相准备不当、试剂纯度不高等引起的峰。
二、异常峰的分析方法1.观察异常峰的峰形特征：异常峰的出现大多会导致色谱图上的峰形发生变化，比如峰形变宽、耳尖、分离度下降等。
可以通过观察峰形特征来初步判断异常峰的原因。
2.检查仪器状态：检查HPLC仪器的各个部分是否正常工作，如检查泵浦、进样器、柱温控制器等是否稳定工作，确定是否与仪器故障有关。
3.检查样品制备及进样：检查样品制备是否正确，是否存在未溶解的颗粒等问题。
同时，检查进样器设置是否正确，如进样量是否过大或过小，进样速度是否合适等。
4.检查流动相：检查流动相的准备是否正确，如流动相配制是否准确、流动相纯度是否高等。
5.检查柱状态：柱是HPLC分析的核心部分，柱的状态对分离效果有重要影响。
检查柱是否老化、是否被杂质吸附等。
三、异常峰的处理方法1.调整进样条件：如果异常峰是由于样品进样错误导致的，可以通过调整进样量、进样速度等参数来减小或消除异常峰。
2.更换柱：如果柱老化或者被杂质吸附导致的异常峰，可以考虑更换新的柱，并检查样品制备和进样条件，以防止柱再次受到污染。
3.调整流动相条件：如果异常峰是由于流动相准备不当导致的，可以调整流动相配比、纯化程度等参数来消除异常峰。
4.维修仪器：如果异常峰是由于仪器故障引起的，需要进行仪器的维修和维护工作，确保仪器正常工作。
HPLC中异常峰的分析与处理
HPLC中异常峰的分析与处理HPLC是高效液相色谱的缩写，是一种常用的分离分析技术。
在HPLC分析过程中，有时会出现异常的峰，即对分析结果产生干扰或影响的峰。
这些异常峰可能是由于实验样品中杂质、仪器设备问题或方法操作不当引起的。
本文将对HPLC中异常峰的分析与处理进行详细阐述。
首先，对HPLC中的异常峰进行分析，我们可以通过以下几个方面进行了解：1.峰形异常分析：检查异常峰的峰形，比如是否呈现肩峰、前峰或后峰等。
这些峰形异常可能是由于样品纯度或混杂物的影响而导致的。
2.峰面积异常分析：对异常峰的面积进行比较。
如果异常峰的面积显著高于正常峰，可能意味着该成分浓度异常增加。
如果异常峰的面积显著低于正常峰，可能意味着该成分浓度异常减少或者被其他物质干扰。
3.保留时间异常分析：对异常峰的保留时间进行比较。
如果异常峰的保留时间明显偏移，可能意味着方法操作不当，如流速、温度等参数有误。
也可能是仪器设备问题，如柱温、流动相、检测器等引起。
4.峰宽异常分析：对异常峰的峰宽进行比较。
如果异常峰的峰宽过宽，可能是操作参数有误，如柱温过高、流速过慢等。
也可能是柱损坏、装填不均匀等问题引起。
在分析了异常峰的原因后，我们需要进行相应的处理措施：1.样品制备：样品制备是HPLC分析中一个非常重要的步骤。
样品制备的不当可能导致样品中存在杂质或溶剂未去除干净等问题，从而引起异常峰。
因此，我们应该保证样品制备步骤的正确性和严谨性。
2.仪器检测：在HPLC分析中，仪器设备的问题也是引起异常峰的一个重要原因。
因此，我们需要定期检查和维护仪器设备，包括柱子、流动相、检测器等部件，确保它们的正常运行。
3.柱子选择与使用：柱子是HPLC分析中的核心组成部分，它的选择和使用对分析结果有着重要的影响。
如果异常峰是由柱子问题引起的，我们可以尝试更换新的柱子，并优化柱子的使用条件。
4.参数优化：对于异常峰的处理，我们可以尝试优化分析方法的各项参数，如流速、温度、柱温等。
液相色谱峰形异常
液相色谱峰形异常液相色谱（HPLC）是一种高效、灵敏的分离和分析技术，广泛应用于化学、药学、食品科学等领域。
在实际应用中，我们可能会遇到液相色谱峰形异常的情况，这可能会给分析结果的准确性和可靠性带来问题。
本文将探讨液相色谱峰形异常的原因和解决方法。
液相色谱峰形异常可能包括以下几种情况：峰形不对称、峰形尖锐或宽平、峰形峰面积异常等。
峰形不对称是最常见的液相色谱峰形异常之一。
常见的原因包括色谱柱问题、样品准备问题和仪器条件问题。
首先，使用老化的色谱柱或柱上的杂质可能会导致峰形不对称。
解决方法是更换新的色谱柱或清洗柱。
其次，样品准备问题也可能导致峰形不对称，例如溶剂选择不当、溶解度不好、样品分离不彻底等。
解决方法是优化样品的准备方法，例如改变溶解剂以提高样品的溶解度。
最后，仪器条件问题也可能导致峰形不对称，例如流速过高、进样量过大、柱温过高等。
解决方法是优化仪器条件，减小流速、减少进样量、降低柱温等。
峰形尖锐或宽平也是常见的液相色谱峰形异常之一。
峰形尖锐或宽平可能与色谱柱、流速和进样量等因素有关。
首先，使用的色谱柱可能不适合所需分析的化合物。
解决方法是选择合适的色谱柱，例如选择相应分析物的特异性柱。
其次，流速不适当可能导致峰形尖锐或宽平。
高流速可能导致峰形尖锐，而低流速可能导致峰形宽平。
解决方法是优化流速，选择适当的流速以获得理想的峰形。
进样量也是影响峰形的因素之一，进样量过大可能导致峰形宽平。
解决方法是减小进样量，确保进样量在可接受的范围内。
峰面积异常也是液相色谱峰形异常的一种表现形式。
峰面积异常可能与样品准备、进样量、积分演示等因素有关。
首先，样品准备不当可能导致峰面积异常。
峰面积异常可能是由于溶剂残留、样品挥发等引起的。
解决方法是改善样品准备方法，确保样品没有残留溶剂。
进样量也是影响峰面积的因素之一，进样量过大或过小可能导致峰面积异常。
解决方法是优化进样量，确保进样量在合理范围内。
此外，峰面积异常还可能与积分演示的参数设置有关，例如积分窗宽、基线漂移调整等。
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HPLC异常问题原因及解决办法办法（一）
压力异常
操作压力的变化往往是故障的征兆。
从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。
A、没有压力显示，没有流动相流动
B、流动相流动正常，但没有压力显示
C、压力持续偏高
D、压力持续偏低
E、压力不断上升
F、压力降为零
G、压力不断下降，但不回零
H、压力波动
HPLC日常维护办法之二：漏液
漏液
通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。
如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。
A、接头处漏液
B、泵漏液
C、进样阀漏液
D、色谱柱漏液
筛板选择指导
E、检测器漏液
HPLC日常维护办法之三：谱图的各种问题
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。
其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。
对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A、峰拖尾
B、峰前延
C、峰分叉
D、峰变形
E、早出的峰变形
F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
G、K’增加时，脱尾更严重
H、酸性或碱性化合物的峰拖尾
I、额外的峰
J、保留时间波动
K、保留时间不断变化
L、基线漂移
M、基线噪音（规则的）
N、基线噪音（不规则的）
O、宽峰
P、分离度降低
Q、所有的峰面积都太小
R、所有的峰面积都太大
HPLC日常维护办法之四：
你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。
你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。
例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。
大部分的问题是可以通过眼睛看到。
A、溶剂的气味
B、热气味
C、读数不正常
D、灯警告
E、警告音
F、刺耳的短音或长音。