四种南方根结线虫生防菌菌株的筛选研究 第三稿
四种南方根结线虫生防菌菌株筛选研究
摘要
线虫的生物防治是近几年植保领域的热点之一，本文从采自洛阳市李楼蔬菜基地的根际土壤样本中分离、筛选出了4株对南方根结线虫具有明显拮抗效果的生防细菌菌株，并对这4株生防菌进行了一系列的生理生化指标检测。初步检测结果如下：假单胞菌属（18-4）、巨大芽胞杆菌属（15-5）、蜡样芽胞杆菌属（20-7）、枯草芽孢杆菌属（2-1）。该结果为下一步开发防治南方根结线虫的生物制剂提供了理论依据，利于减少传统化学农药过度使用而导致的“3R”问题。
关键词：根结线虫；生物防治；根际生防细菌；筛选；
1 引言
通过有关植物线虫病害知识的问卷调查发现，现在农户中对于植物寄生线虫所导致的病害中了解程度不够，对于线虫病的危害没有一个清晰的认识，而相反植物寄生线虫已经是导致植物病害的第二大杀手，不仅能引起植物线虫病，同时他也能为植物病原细菌和真菌提供侵染途径，也是很多植物病毒的传播介体。传统的防治线虫病害的方法一般都是采用传统化学农药，化学方法防治植物寄生线虫具有防治好，见效快的特点，但是不可避免的污染了自然环境，因此生物防治越来越引起广泛的关注。利用对植物寄生线虫具有明显拮抗效果的生防细菌对植物寄生线虫进行防治是当今新的研究热点。种类繁多的细菌从寄主植物、线虫体、线虫的卵、土壤中上被分离，不同的作用方式被报道。自然界中存在有许多对植物有益的细菌群落，在农业生态系统中，充分利用这些细菌的生物学潜力来控制植物寄生线虫的种群数量将有助于减少化肥和农药投入、促进植物生长、减轻对环境的污染，实现农业可持续高效的发展。
本研究首先从蔬菜的根际土壤中分离细菌，通过室内离体实验的方法验证其防效，同时对线虫有拮抗作用的细菌进一步鉴定。本次研究的结果能在一定程度上为开发新型防治线虫的生物制剂提供理论依据。
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 土壤样本与供试线虫来源及处理
土壤样本采自洛阳市李楼蔬菜基地的蔬菜大棚中，样本土壤均为蔬菜大棚的根际土壤。在蔬菜收获后，采用十点取样法从5~15 cm的土层中采集作物根际土壤，共采集30份土样，土样自然风干后过200目筛，然后封装于密封袋中并编号，置于4 ℃冰箱保存备用。
从样本土壤中分离得到细菌菌株50种，其中对植物寄生线虫具有拮抗效果的菌株有4种，编号分别为2-1、15-5、18-4、20-7。将其接种于LB固
体培养基上，置于4℃冰箱冷藏室保存备用。
供试线虫为南方根结线虫，保存于本实验室中。
2.1.2 供试培养基
培养基具体配方如下表（表1）所示：
表1 供试培养基种类及成分
培养基名称成分
LB液体培养基胰蛋白胨10 g、酵母膏5g、NaCl 5 g、蒸馏水1000 mL
LB固体培养基胰蛋白胨10 g、蒸馏水1000 mL、酵母提取物5 g、NaCl 5 g、琼脂粉18 g
休和利夫森二氏培养基蛋白胨2 g、NaCl 5 g、K2HPO40.2 g、葡萄糖10 g、琼脂20 g、溴百里酚蓝1% 水溶液3 mL、蒸馏水1000 mL
葡萄糖蛋白胨液体培养
基蛋白胨5.0 g，葡萄糖5.0 g，K2HPO45.0 g，蒸馏水1000 mL
淀粉培养基在LB 固体培养基中加入2 g 可溶性淀粉
柠檬酸盐培养基NH4H2PO4 1 g，K2HPO4 1 g，NaCl 5 g，MgSO40.2 g，柠檬酸钠2 g，琼脂18 g，蒸馏水1000 mL。
2.2 试验方法
2.2.1 根际细菌的分离
根际土壤细菌的分离一般采用稀释涂平板法，具体实验方法步骤如下：（1）稀释液的制备：称取土样5 g，并将土壤磨成粉末状，放入50 mL 去离子水中，摇床上振荡30 min，静置使澄清，用无菌枪头吸取上清液100 μL 并加入900 μL无菌水中，用无菌水稀释为10-1 10-2 10-3 10-410-5 五个浓度梯度并保存。
（2）培养：吸取各浓度稀释液200uL涂布于LB固体培养基制成平板，拿封口膜封口后倒置于恒温箱内，37℃培养24h。
（3）挑菌落：挑取单细菌菌落于新的LB培养基中，37℃恒温培养24h。
（4）菌株的纯化：尽量挑取形态不同的单菌落于液体LB培养基中，37℃、200r/min摇床振荡培养，然后用平板划线分离法进行纯化，直到获得纯培养
[9]。
2.2.2 寄生线虫拮抗细菌的筛选
取纯化的细菌接种于装有LB液体培养基的试管中，37 ℃、200r/min摇床中培养24h，然后于无菌超净工作台上用移液枪取600 μL培养液于Landy 培养基（加100 μL KH2PO4、1000 μL 40%葡萄糖）中，37 ℃摇床中震荡培养48 h，取出后静置，取上清液于离心管中，10000 r离心10 min，用移液枪取上清液于凹面皿、备用[10]。
挑取20~40条线虫于凹面皿上清液中，置于26 ℃恒温培养箱内，处理12 h、24 h和48 h后分别观察和计数。由于供试线虫中存在假死现象，我们必须在解剖镜下用自制挑针刺激线虫，如果线虫个体僵直不动，则可以记做死亡，若呈弯曲状则为假死状态。
生测结果计算参照陈立杰等人的方法[11]。
线虫死亡率(%) = 死亡线虫数／供试线虫数×100%
2.2.3 细菌各项生理生化指标的鉴定
共选取甲基红（VP）、乙酰甲基甲醇（VP）、吲哚的产生（细菌对色氨酸的利用）、淀粉水解、葡萄糖的氧化发酵、产氨实验、柠檬酸盐的利用这七项指标检测，参照《微生物学实验指导》中提到的实验方法，对待测菌株进行该七项指标的鉴定试验[12]。
3 结果分析
3.1 土壤细菌的分离和纯化
采用稀释平板法对30份土壤进行细菌的分离和纯化，纯化细菌划线培养保存。由下图（图1）显微镜观察可以看出所挑选出的4个植物寄生线虫的拮抗细菌的单菌落形态各不相同，颜色也都不一致，每一种细菌都具有各自独特的形态特征：
2-1细菌单菌落呈微椭圆形，菌落整体颜色较为一致，为浅黄色，边缘整齐，表面无褶皱，菌落较为湿润，稍浑浊，呈半透明状；15-5细菌单菌落呈圆形，菌落整体颜色一致，为从中心到边缘皆为灰黑色，边缘有突起，表
面无褶皱，菌落较为湿润，不透明；18-4细菌单菌落呈圆形，菌落中心为灰黑色或黑色，由中心向边缘颜色逐渐变浅，边缘呈浅黄色，菌落边缘呈不规则形状，有突起，表面有褶皱，菌落中心不透明，边缘为半透明状，菌落中心较边缘部分略厚；20-7细菌菌落不规则，菌株呈发散性生长，无明显的菌落中心，菌落浅黄色。菌落边缘向四周发散生长，菌落透明。
图1主要拮抗细菌单菌落 3.2 拮抗细菌的筛选
将分离得到的50个菌株分别进行实验室内寄生线虫离体抗性筛选： 用37℃ 200 r/min 恒温摇床条件下培养48h 得到细菌发酵上清液，将线虫置于该发酵上清液中放在26℃恒温培养箱中培养，12 h 、24 h 、48 h 后分别观察结果，结果表明，不同细菌发酵液对线虫的抑制效果不同，其中2-1、15-5、18-4、20-7这4个菌株的发酵液对线虫的抑制效果最为明显，四种细菌在48h 内作用
效果如下表（表2）：
表2 拮抗细菌菌株上清液对植物寄生线虫的活性
处理线虫死亡率Nematode mortality(％）Treatment 12 h 24 h 48 h 2-1 94.44±0.94 100.00±0 100.00±0
15-5 80.56±1.13 96.44±2.36 100.00±0
18-4 60.78±1.35 95.00±2.15 100.00±0
20-7 50.78±1.45 91.66±1.95 100.00±0
CK 0.00±0 0.00±0 0.00±0
注：（1）CK：无菌水对照；（2）LANDY培养基上重复实验5次
4种细菌的发酵上清液在48h内对线虫的致死率均达到了100%。编号15-5、18-4、20-7在12 h 的时候相对防治效果分别为：80.56%、60.78%、50.78%，而编号为2-1的菌株的上清发酵液在12 h 内对植物南方根结线虫的致死率高达94.44%。得到的4株对植物寄生线虫具有拮抗作用的细菌中编号为2-1的细菌拮抗效果最为明显。防治效果同时表明这4个拮抗细菌菌株在接种后0~24h内对植物寄生线虫的防治效果呈上升趋势，由此表明这些拮抗细菌菌株对植物寄生线虫的防控具有较长的持效期。
3.3 主要拮抗细菌革兰氏染色
革兰氏染色法：对各主要拮抗细菌样品的染色玻片在显微镜的油镜下观察结果如图（图2）。
图2拮抗细菌革兰氏染色后油镜观察图
表3 拮抗细菌革兰氏染色
编号革兰氏染色颜色鉴别结果（+/-）
15-5 紫色+
2-1 紫色+
18-4 红色-
20-7 紫色+
注：“﹢”代表阳性；“﹣”代表阴性
根据表2的结果说明：植物寄生线虫拮抗细菌既有革兰氏阳性细菌，又有革兰氏阴性细菌,其中15-5、20-7、2-1为革兰氏阳性，18-4为革兰氏阴性。革兰氏阳性细菌占75%，革兰氏阴性细菌占25%。初步判断自然界中对植物寄生线虫有拮抗作用的细菌大多为革兰氏阳性菌。
3.4 细菌的生理生化特征鉴定
共有待测菌株4种，编号分别为2-1、15-5、18-4、20-7分别测定其甲基红（VP）、乙酰甲基甲醇（VP）、吲哚的产生（细菌对色氨酸的利用）、淀粉水解、葡萄糖的氧化发酵、产氨实验、柠檬酸盐的利用这7项生理生化特征，得到结果如下表（表3）所示
由下表可知：在已经测定的4株对植物寄生线虫具有明显拮抗效果的细菌菌株中，甲基红实验除了18-4外都呈现阴性结果；乙酰甲基甲醇的实验结果均为阴性；吲哚的产生实验除了2-1为阳性外，其余样本均为阴性；葡萄糖
的氧化发酵实验4种菌均为氧化型；2-1和15-5在柠檬酸盐培养基上呈阳性反应，18-4和20-7在柠檬酸盐培养基上不能正常生长，不能利用柠檬酸盐。对照以上7项生理生化特征的鉴定结果，查阅伯杰明细菌鉴定手册，该4个菌株的鉴定结果为：单胞菌属（18-4）、巨大芽胞杆菌属（15-5）、蜡样芽胞杆菌属（20-7）、枯草芽孢杆菌属（2-1）.
表4 待测细菌菌株生理生化指标鉴定结果
生理生化特征
菌株编号甲基红乙酰甲基
甲醇吲哚淀粉水解葡萄糖的
氧化发酵
产氨实验柠檬酸盐
的利用
2-1 - - + + O + + 15-5 - - - + O + + 18-4 + - - - O + - 20-7 - - - + O + -
符号：+，≥90%菌株阳性；-，≥90%菌株阴性；d，11~89%菌株阳性；+w，阳性弱反应；O，氧化型；F，发酵型。
部分指标实验结果如下图（图3）所示：
图3 甲基红（VP）实验结果
4 结论与讨论
本研究采用稀释平板法[13]对所采取的土样进行细菌菌株分离与纯培养，最终得到50株形态或颜色各不相同的单菌落，说明植物的根际土壤中存在着种类繁多的微生物品种。通过试验筛选出4株对植物寄生线虫具有明显拮抗作用的细菌编号为2-1、15-5、18-4、20-7，这4个菌株的发酵液对线虫的抑制效果最为明显，这4种细菌的发酵液在48h内对线虫的致死率均达到100%。其中编号为2-1的菌株的发酵上清液在12h内对植南方根结线虫的致死率高达94.44%，具有较好的防治效果和防治潜力。革兰氏染色结果：除了18-4为革兰氏阴性外，其余3种细菌均为革兰氏阳性细菌，由此可以初步的判断自然界中存在的拮抗植物寄生线虫的细菌大多为革兰氏阳性菌。通过接下来对其生理生化指标的测定，对该四个菌株的鉴定结果为假单胞菌属（18-4）、巨大芽胞杆菌属（15-5）、蜡样芽胞杆菌属（20-7）、枯草芽孢杆菌属（2-1）。
前人研究证实，植物寄生线虫拮抗细菌有芽孢杆菌[14]和荧光假单胞杆菌
[15]等。本实验的拮抗能力测定实验结果表明，菌株2-1能有效的控制植物寄生根结线虫的种群数量，同时控制时效较长。不过尽管如此，但是该菌株是否能开发为相应的生物制剂进行商品化生产，还需经过进一步的研究去探究；而且该拮抗菌株对线虫的作用方式和作用机理也有待进一步的探究。因为尽管在实验室条件下该菌株对植物寄生线虫具有良好的生物防治作用[16,17]，当时实际应用效果应该结合大田中土壤微生物数量，土壤理化性质，以及环境条件等各方面的条件来综合考虑[18]。只有综合考虑各方面条件，制定合理的使用方法与使用数量，才能获得最佳的防治效果。
因此，本实验虽然筛选出了具有明显拮抗作用的细菌，但是也有不足之处。由于室内试验测定没有考虑大田环境中的土壤理化性质，作物因素以及其他植物的影响等条件，若进一步深入的研究其作用机理及方式，则对土壤跟及线虫的生物防治工作会产生很大的启示。为了更有效的防治植物寄生线虫病害，我们必须运用有害生物综合防治策略（IPM），综合考虑环境，作物，病原物三者间的关系，制定有效的综合防治策略，综合合理的总用各种防治手段，达到最大的经济，环境收益，也响应了我国21世纪植物保护工作的综合方针；响应了当今潮流，采用高效、持久的生物防治手段对植物线虫病害进行防治。
参考文献
[1] 安川,永春柑橘根部15种线虫记述及线虫分离新技术的研究[D].厦门.厦
门大学2009.
[2] 许志刚.普通植物病理学[M].北京:中国农业出版社,2009:219-220.
[3] 钟爽,曾会才,等.香蕉植物线虫病的防治技术[C]. 中国植物病理学会
2010年学术学会论文集. 2010.
[4] 陈立杰，段玉玺;不同细菌菌株对大豆根腐病菌及胞囊线虫病的影响[J].
沈阳农业大学学报,2006, 6; 435-437.
[5] 郑云峰,李建生,邱美强,等.根结线虫生防菌研究进展[J].中国农村小康科
技,2006(11):62-65.
[6] 郭荣军,刘杏忠；应用根际细菌防止植物寄生线虫的研究[J]. 中国生物防
治1996,12(9): 134-137.
[7] 梁建根,郑经武,等.设施栽培中蔬菜根结线虫生物防治研究进展[J].中国农
学通报,2010.
[8] 郑云峰,李建生.等.根结线虫生防菌研究进展[J].中国农村小康科技.2006，
11-13.
[9] Aravind R,Eapen S J,Kumar A.Screening of endopHytic bacteria and
evaluation of selected isolates for suppression Of burrowing nemmode
using three varieties of black pepper(Piper nigrum L)[J]．Crop Protection，2010,29(4);318—324．
[10] 丁国春,付鹏,李红梅,等.枯草芽孢杆菌ARll菌株对南方根结线虫的生物
防治[J]．南京农业大学学报,2005,28(2)：46-49．
[11] 陈立杰,刘彬，段玉玺，等．白僵菌发酵液对不同种类线虫生物活性的影
响[J]．沈阳农业大学学报, 2008, 39(3): 305-308．
[12] 黄秀梨．微生物学实验指导[M]．北京：高等教育出版社, 2004, 28(2)：
156-158．
[13] 李红梅,付鹏. 出口苗木寄生线虫检疫处理技术的研究[J].南京农业大学
学报, 2001, 24(3)：31-34．
[14] 杨佐忠.枯草杆菌拮抗体在植物病害生物防治中的应用[J]. 四川林业，
2001,22(3)：41-44．
[15] 张杰, 彭宇发, 赵建周, 等. 用接合转移方法构建杀虫防病荧光假单胞
菌[J]. 农业生物技术学报, 1995,3(2)：175-180．
[16] 鄢小宁, 郑经武, 等. 黄瓜幼苗内生真菌诱导植株对南方根结线虫的抗
性[J]. 植物保护学报,2011, 38(3)：253-257.
[17] 祝明亮,张克勤,夏振远,等.烟草根结线虫生物防治研究进展[J]. 微生物
学通报,2004,31(6)：95-99.
[18] 闫梦红,蔡正求,韩继刚,等．植物内生细菌在防治植物病害中的应用研究[J]．生
物技术通报,2004, 21(3)：8-2.
生防菌的筛选
生防菌的筛选 通过对向日葵根部土壤中微生物的分离、筛选、生物学测定和田间防治效果的系统的研究，分离筛选出对向日葵黄萎病菌具有防病作用的拮抗菌株，为向日葵黄萎病优良生防菌剂的研制和开发奠定基础。 1.1 材料与方法 1.1.1 土样和病原菌来源 向日葵黄萎病菌（Verticillium dahliae Kleb.）：内蒙古农业大学植物病理实验室分离保存。 土壤样品：来自内蒙古农业大学农场的带有植株组织的根围土壤。 1.1.2 培养基 1.1. 2.1 真菌培养基 PDA培养基：马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，水1000 mL，琼脂20 g。 1.1. 2.2 细菌培养基 LB固体培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，NaCl5 g，蒸馏水1000 mL，琼脂20 g，pH自然。 LB液体培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，NaCl5 g，蒸馏水1000 mL，pH 自然。 1.1.3 向日葵品种及用具 供试向日葵品种为实验室有的相关种子。 超净工作台，无菌培养皿，无菌吸管，三角瓶，试管，无菌水，酒精灯，接种环，接种针和记号笔等。 1.2 土样中细菌的分离 采用梯度稀释法，将从病区采集的植物带根土壤，抖去浮土后称取根际土壤1 g置于盛有9 mL无菌水的试管内，剧烈振荡5 min，制成土壤悬浮液，梯度稀释10-4后，涂LB平板，28 ℃培养箱中黑暗培养，48 h后挑取不同菌落形态的单个菌落，经LB平板纯化后4 ℃保存于LB斜面待用。 1.3 拮抗菌的筛选 采用平板对峙培养法，筛选拮抗菌。将活化的向日葵黄萎病菌菌饼置于PDA 平板中央，在距离其2 cm处点接细菌，每皿接4个菌株，每个菌株重复3次。设不接种拮抗菌的平板为对照（CK），置于25 ℃培养箱黑暗培养，待对照平板菌落半径超过3 cm时，测量并记录结果。 1.4 生防菌的筛选 1.4.1 待测液的制备
根肿病与根结线虫的区别
[经济作物]根肿病与根结线虫病识别与防治技巧！ 近年来，随着蔬菜生产不断发展，复种指数越来越高，连作现象十分突出，十字花科作物根肿病及根结线虫病为害日趋严重，产量损失高达30%以上，同时根肿病及根结线虫病的发生又促进了软腐细菌的感染，导致作物发育不良，叶片萎蔫甚至枯死。十字花科根肿病与根结线虫病症状相似，都表现为根部肿大，地上部生长不良，严重时整株枯死。但两者病原及发病条件不同，防治技术差异较大，正确识别是防治两种病的关键所在。 一、病害识别 1、病状特点： ①根肿病只发生在十字花科蔬菜，发病于根部，根系受病菌刺激，细胞加速分裂，部分细胞膨大，以致形成肿瘤。肿瘤一般成纺锤形、手指形、不规则畸形，大的如鸡蛋，小的如粟粒。在主根上发病时，肿瘤个大而数少，在侧根上发生时个小而数多。肿瘤初期表面光滑，后期常发生龟裂，且粗糙。其他杂菌侵入后可造成腐烂，由于根部发生肿瘤，严重影响对水分和养分的正
常吸收，所以地上部出现萎蔫。但在后期感病的植株，地上部症状不明显。 ②根结线虫病不仅发生在十字花科蔬菜的根部上，还发生在胡萝卜、茄子、番茄、莴苣、生菜等的根部，作物根部感染根结线虫后，受到根结线虫释放的吲哚乙酸等生长激素的影响，造成细胞恶性分裂，形成根瘤或根结。主要发生在须根和侧根上，病部产生肥肿畸形瘤状结。剖开根结，内部有许多细小的乳白色线虫。一般根结之上可生出细弱的新根，再度侵染则形成根结状肿瘤。轻病株地上部症状不明显，重病植株矮小，叶片萎蔫，渐黄枯，严重时全株枯死。 ③根肿病和根结线虫病田间简易诊断可根据解剖根部的肿瘤或根结进行区别，在肿瘤内是否有乳白色洋梨状的根结线虫的成虫，这是最准确的诊确依据，根肿病的肿瘤内什么也没有。 2、发生规律： ①根肿病是由真菌芸薹根肿菌侵染引起的。病菌在根肿上产生休眠孢子囊，肿瘤腐烂后，休眠孢子囊散落在土中越冬或越夏。因此，曾发生过根肿病的菜地，或连续栽种十字花科蔬菜的菜地(白菜类和甘蓝类蔬菜)，由于病菌孢子囊在土中逐年积累，病情会逐年加重。病原真菌在土壤或种子上越冬，可在土壤中存活6年以上，主要靠雨水、灌水、害虫及农事操作等传播。还有土壤缺钙的地块发病也重。 ②根结线虫病以卵及幼虫随植株病残体在土壤中越冬，可通过种子、苗木、土壤、流水和包装材料远距离传播。土壤疏松、地势高燥、盐分低、贫瘠、砂壤土的地块，适宜根结线虫活动发病严重。通透性不好的土壤极少发生。 3、流行条件： ①诱发根肿病的主要条件是土壤酸碱度、温度和湿度。土壤pH值为5.4－6. 5、土壤温度为18－25℃、土壤湿度为60％时，不仅有利于病菌休眠孢子囊萌发，产生游动孢子，并能在48小时内侵入植株表皮细胞内。土壤pH值在7.2以上、土壤湿度在45％以下或95％以上、土壤温度在12℃以下或27℃以上，本病很少发生。 ②根结线虫病的线虫是好气性的，地势高燥，结构疏松，含盐量低的中性砂质土壤，适合根结线虫活动。此外，线虫多分布在表层下20厘米土壤中，以3－9厘米土层内最多，空气充足，有利线虫生长，因而发病不但普遍，而且也较严重。
生防菌对植物真菌病害的作用
生防菌对植物真菌病害的作用 学院：生命科学学院 专业班级： 学生姓名：
目录 摘要 (3) 1植物真菌病害 (3) 2生防菌的种类及生防机制 (3) 2.1 生防菌的种类 (3) 2.2 生防菌的生防机制 (4) 2.2.1 竞争作用 (4) 2.2.2 拮抗作用 (5) 2.2.3 诱导抗性作用 (5) 2.2.4 促生作用 (6) 3 生防菌的筛选与鉴定 (7) 3.1 拮抗芽孢杆菌的分离 (7) 3.2 芽孢杆菌的分类鉴定 (7) 参考文献： (8)
生防菌对植物真菌病害的作用 摘要：真菌病害是造成作物产量损失的主要原因，作物病害的80％由病原真菌引起，利用微生物及其代谢产物对其进行生物防治，是目前研究的热点。可用于生物防治的微生物有真菌、细菌、放线菌、病原菌弱致病菌等。生防菌的生防机制各不相同，主要有竞争作用、拮抗作用、诱导作物抗性和促进作物生长，间接提高作物抗性等作用，许多生防微生物还可通过几种不同机制之间的联合来发挥功能。本文还对生防菌的分离与分类鉴定进行了简单介绍。 关键词：真菌病害，生物防治，生防机制，木霉菌，芽孢杆菌，放线菌 1植物真菌病害 植物病害一直是农作物优质高产的重要制约因素之一。据估计, 全球主要农作物的平均损失约占总产量的10 %～15 %, 每年直接经济损失高达数千亿美元。在植物病害中,70 %～80 %的病害是病原真菌侵染所引致的。植物真菌病害不仅直接造成农作物产量下降与品质降低, 而且部分病原真菌在侵染农作物过程中, 可分泌产生多种对人畜有害的毒素与代谢物, 对农产品的安全性构成极大威胁。此外, 重大农作物真菌病害的控制往往依赖化学防治, 杀菌剂的使用不仅增大生产成本, 而且其反复施用不可避免地带来环境污染与农产品农药残留问题[1]。因此，近年来世界各国都在努力开发可替代传统化学药剂控制植物病害的新方法。其中利用微生物及其代谢产物进行生物防治，被公认为是一种环境友好型的选择。 2生防菌的种类及生防机制 2.1 生防菌的种类 生防菌的种类繁多,生产上广泛应用的有真菌、细菌、放线菌、病毒等。真菌主要有木霉菌、毛壳菌、酵母菌、淡紫拟青霉菌、厚壁孢子轮枝菌及菌根真菌等;细菌主要有芽孢杆菌、假单胞杆菌等促进植物生长菌( PGPR)、放射性土壤农杆菌和巴氏杆菌等; 放线菌主要有链霉菌及其变种；病毒的弱毒株系；病原菌的无致病力突变菌株[2]。一些生长繁殖快抗逆性强的菌株如土壤杆菌（Agrobacterium）、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）和芽孢杆菌(Bacillus) 等是目前生防菌的研究热点[3]。
四种南方根结线虫生防菌菌株的筛选研究 第三稿
四种南方根结线虫生防菌菌株筛选研究 摘要 线虫的生物防治是近几年植保领域的热点之一，本文从采自洛阳市李楼蔬菜基地的根际土壤样本中分离、筛选出了4株对南方根结线虫具有明显拮抗效果的生防细菌菌株，并对这4株生防菌进行了一系列的生理生化指标检测。初步检测结果如下：假单胞菌属（18-4）、巨大芽胞杆菌属（15-5）、蜡样芽胞杆菌属（20-7）、枯草芽孢杆菌属（2-1）。该结果为下一步开发防治南方根结线虫的生物制剂提供了理论依据，利于减少传统化学农药过度使用而导致的“3R”问题。 关键词：根结线虫；生物防治；根际生防细菌；筛选；
1 引言 通过有关植物线虫病害知识的问卷调查发现，现在农户中对于植物寄生线虫所导致的病害中了解程度不够，对于线虫病的危害没有一个清晰的认识，而相反植物寄生线虫已经是导致植物病害的第二大杀手，不仅能引起植物线虫病，同时他也能为植物病原细菌和真菌提供侵染途径，也是很多植物病毒的传播介体。传统的防治线虫病害的方法一般都是采用传统化学农药，化学方法防治植物寄生线虫具有防治好，见效快的特点，但是不可避免的污染了自然环境，因此生物防治越来越引起广泛的关注。利用对植物寄生线虫具有明显拮抗效果的生防细菌对植物寄生线虫进行防治是当今新的研究热点。种类繁多的细菌从寄主植物、线虫体、线虫的卵、土壤中上被分离，不同的作用方式被报道。自然界中存在有许多对植物有益的细菌群落，在农业生态系统中，充分利用这些细菌的生物学潜力来控制植物寄生线虫的种群数量将有助于减少化肥和农药投入、促进植物生长、减轻对环境的污染，实现农业可持续高效的发展。 本研究首先从蔬菜的根际土壤中分离细菌，通过室内离体实验的方法验证其防效，同时对线虫有拮抗作用的细菌进一步鉴定。本次研究的结果能在一定程度上为开发新型防治线虫的生物制剂提供理论依据。 2 材料与方法 2.1 材料 2.1.1 土壤样本与供试线虫来源及处理 土壤样本采自洛阳市李楼蔬菜基地的蔬菜大棚中，样本土壤均为蔬菜大棚的根际土壤。在蔬菜收获后，采用十点取样法从5~15 cm的土层中采集作物根际土壤，共采集30份土样，土样自然风干后过200目筛，然后封装于密封袋中并编号，置于4 ℃冰箱保存备用。 从样本土壤中分离得到细菌菌株50种，其中对植物寄生线虫具有拮抗效果的菌株有4种，编号分别为2-1、15-5、18-4、20-7。将其接种于LB固
根结线虫防治四大要点
根结线虫防治四大要点 近年来，随着保护地蔬菜栽培面积的不断扩大，为根结线虫的发生、发展提供了适宜环境条件，使得土壤中的根结线虫得以积聚增殖，致使连作温室中的黄瓜和番茄受害严重，常造成减产或绝收，且病害呈逐年上升趋势。现根据目前实践生产中存在问题，总结防治措施下：一、根结线虫防治，要以预防为主，药剂为辅 线虫本身移动性较差，一年内最多移动1米远。在实践中，我们经常见菜农随便借用种苗、串棚、农机具（特别是旋耕机）混用等现象。这无形中为线虫的远距离传播提供了方便。日光温室栽培中，有的种植7～8年温室内基本没有根结线虫，而有的种植2～3年甚至当年就有根结线虫危害，根结线虫一旦传入，很难根治。因此，阻止根结线虫的传入是防治根结线虫的首要工作，这一点必须引起高度重视。 在线虫防治过程中，应重视每一个细小的农事操作环节，如进出棚要换鞋子、种苗消毒、在借用农具时，将农具进行火烧、水烫等杀线虫处理。做到早期预防，是根治线虫的基础。二、要注意轮作倒茬 连作是造成当地线虫严重的又一重要原因。一般根结线虫在没有活寄主的情况下只能存活1年左右，因此，在发病严重的地块与非寄主作物合理轮作是有效防治措施但要考虑轮作年限问题。 根结线虫病除危害黄瓜外，还能危害番茄、茄子、芹菜、甘蓝、辣椒、大白菜等20多种蔬菜，这些都是线虫的寄主作物，发病田块不可连茬种植，而禾本科作物、韭菜、蒜、葱等不宜感染根结线虫，属于线虫的非寄主作物。为切断线虫寄主，可与非寄主植物进行两年以上的轮作，这里需要强调的是，轮作年限必须达到2—3年以上，才能断绝线虫食源，使其无法生存。实践中有的菜农轮作间隔期太短，所以未收到预期效果。 三、夏季高温淹水闷棚，要地膜、棚膜双扣 具体做法是在前茬作物拔秧后，立即进行，此时根结线虫大多处于表土层，可取得更好的防治效果，以免根结线虫向下转移，清洁地面，在地面按每667平方米施用稻草500—1000千克，生石灰100—150千克（如果土壤偏碱性，可不用），深翻30—40厘米，然后按40厘米行距起垄，垄高30厘米，在沟内浇大水，使沟内存有明水，然后在地面上覆盖旧棚膜，并扣好棚膜。使20厘米土温保持50摄氏度以上，连续保持15—20天。高温处理后，撤掉棚膜地膜，放水后施有机肥，恢复土壤生机，两星期后翻耕种植蔬菜。这一方法除可有效控制根线虫病外，对其他传染病害、杂草种子、地下害虫等，都有较好的控制能力。 四、注意用药方法 针对线虫，多数菜农重视化学防治，但又经常抱怨药剂的无效。究其原因，多数农民盲目用药，不讲方式和方法是造成药剂疗效差的原因。例如：1.8%的阿维菌素是目前防治根结线虫的特效药之一，但阿维菌素在碱性溶液中易分解，因此不可与碱性农药（绝大多数铜制剂、松脂合剂、石硫合剂、波尔多液、杀虫双等）或碱性化肥（钙镁磷肥、草木灰、石灰、硝酸钙、碳酸钾等）混用。而且配好的药液应当日使用，尽可能在阴天或清晨、傍晚施用，以免光解。还要注意施药期以卵高峰期最佳。这些注意事项往往被菜农忽视，最终导致药效降低。不同的农药有不同的特性和施用方法，施用前应正确掌握所用农药的类型、性质、用量、浓度、防治对象和使用方法，或向农业部门咨询，不可完全相信推销商的宣传。做到心中有数，使用准确，防治才有效。
根结线虫
科技之窗 根结线虫 植物的根部若不好，哪能谈得上高产 根结线虫是一个让农民朋友们听了头疼的病，因为很难彻底清除掉。近年来各地蔬菜根结线虫病的发生呈上升趋势，以瓜类、番茄和芹菜受危害为重，病株常达30%--60%，减产20%--40%，个别减产达80%以上。 根结线虫病的发生规律是：秋季重于春季，大棚重于露地，温室重于大棚。 由于线虫体微小且在地下部危害，往往被误认为营养病害。目前此病仍呈蔓延趋势，应引起广泛的关注。有些地方采用剧毒农药防治后尽管取得了一定的防治效果，但农药残留威胁了人们的健康，也不乏有农药中毒的报道。 一、危害的特点 目前已知为害蔬菜的线虫主要有高弓根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫及南方根结线虫。线虫寄主范围广泛，常为害瓜类、茄果类、豆类及萝卜、葫萝卜、莴苣、白菜等30多种蔬菜，还能传播一些真菌和细菌性病害。 根结线虫主要为害各种蔬菜的根部，表现为侧根和须根较正常增多，并在幼根的须根上形成球形或圆锥形大小不等的白色根瘤，有的呈念珠状。被害株地上部生长矮小、缓慢、叶色异常，结果少，产量低，甚至造成植株提早死亡。 蔬菜染病后的植株矮小，黄化、萎蔫。线虫所造成的肿块初为白色，质地柔软，后变为褐色，或暗褐色。染病植株根系紧缩，有小结或肿块。青椒染病部位肿块比起西葫芦和番茄这些作物染病部位结块要小得多，常被忽略。 二、形态特征 根结线虫雌雄异体。幼虫呈细长蠕虫状。雄成虫线状，尾端稍圆，无色透明，大小1.0～1.5×0.03～0.04毫米。雌成虫梨形，多埋藏在寄主组织内，大小0.44～1.59×0.26～0.81毫米。该种雌虫会阴区图纹近似圆形,弓部低而圆,背扇近中央和两侧的环纹略呈锯齿状,肛门附近的角质层向内折迭形成一条明显的折纹和肛门上方有许多短的线纹等特征与本属已记载的其他根结线虫的会阴区图纹显著不同。此外,具有比一般根结线虫较长的侵袭期幼虫。雌虫、雄虫和幼虫的口斜较长;背食道腺开口离口斜基部球较远;雌虫排泄孔位置偏后等与近似种M.incognita不同。卵囊通常为褐色,表面粗糙,常附着许多细小的砂粒。 三、生活习性 根结线虫多分布在0～20厘米土壤内，特别是3～9厘米土壤中线虫数量最多，常以卵或2龄幼虫随植株残体遗留在土壤中或粪肥中越冬或翌年环境适宜时以2龄幼虫从嫩根侵入，繁殖为害。在日光温室中可终年为害。线虫可通过带虫土或苗及灌溉水传播。土温25～30℃，土壤湿度为40%～70%条件下线虫繁殖很快，易在土壤中大量积累，10℃以下停止活动，55℃时10分钟死亡。在无寄主条件下可存活一年。 连茬地病重，保护地重于露地。根结线虫主要以病土、病苗及灌溉水传播。在地势高燥、土壤质地疏松、盐分低的情况下发病重，多年连作的地块发病也重。零散田块发病有时更为严重。 四、症状识别 幼苗染病，初期根上形成小米状根瘤，以后根瘤增多、增大，植株生长缓慢，黄弱；成株期地上部生长不良、矮小、黄化，萎蔫或早枯，似缺肥水，枯萎病症状，果实小而少，多畸型果。病轻时地上部不显症，但影响产量，地下部可见大小不等的瘤状物。黄瓜得此病，有的根部不产生瘤状物，而是寄生在腐烂的根茎中。所以，当地上部出现以上症状时，应想到根结线虫病危害的可能，此时要挖出植株根部进行检查，以确诊病情。
研究生中期考核表模板
某某大学硕士研究生中期考核筛选表 院(系、所、中心) 专业研究方向 研究生姓名性别女学号政治面貌中共党员指导教师姓名导师职称教授学习起止时间 自我鉴定（包括政治思想、平时表现及专业学习情况） 思想方面，我一直对自己有较高的要求。我认真学习马克思列宁主义、毛泽东思想、中国特色社会主义理论体系。积极努力的加入党组织，时以共产党员的标准要求自己。平时注意学习先进的政治理论，关心国内国际大事，积极拥护党和国家的各项路线、方针、政策，自觉遵守法律、法规和学校的各项规章制度。 生活方面，我尊敬师长，团结同学，并积极参加班级和学校组织的各种文体活动。在学习和课题研究之余，加强体育锻炼，积极参加各项娱乐活动，提高了身体素质，陶冶情操，劳逸结合，提高了学习和实验的效率。 学习方面，我努力学习专业课程，并阅读了大量与本专业相关的书籍和论文，这既让我开阔了视野，也使我对自己研究方向的内容以及整个学科的结构有了进一步的认识，使自己具备了自我学习，认真思考、善于钻研的能力。在导师的指导下，学术思想活跃、学习目的明确，态度端正、学风良好，勤奋学习，刻苦钻研，成绩优秀。 必修课各科成绩 课程名称任课教师 成 绩 课程名称任课教师成绩 十三经导读学术研究方法 比较诗学中国文学研究通论 二十世纪中国文学通论中国现当代小说史论 中国现当代文学批评史论政治 政治 发表 和撰 写学 术论 文情 况 政治 思想 品德 评语 及结 论院（系、所、中心）党总支盖章： 年月日说明：书写时一律用钢笔（蓝黑墨水或碳素墨水）书写，字迹要端正、清楚
专 业 学 习 考 核 结 果 考核小组长（签名）： 科 研 能 力 考 核 结 果 考核小组长（签名）：考核小组筛选结果： 组长（签名） （公章） 年月日
河北省根结线虫发生种类与分布_陈书龙
收稿日期:2006-03-02 基金项目:河北省农业科学院重点项目(A03-1-03-25) 作者简介:陈书龙(1963-),男,河北阜城人,博士,研究员,主要从事线虫学研究工作。 河北省根结线虫发生种类与分布 陈书龙,李秀花,马 娟 (河北省农林科学院植物保护研究所,河北保定 071000) 摘要:对采自河北省不同地区的根结线虫种类、分布以及种群密度进行了调查,根据根结线虫二龄幼虫、雄虫和雌虫的形态特征,明确了河北省根结线虫种类有南方根结线虫、北方根结线虫和花生根结线虫。其中南方根结线虫发生最为普遍,几乎遍及全省各个地区,发生量很大,土壤线虫土壤的群体密度最高达50条/g,主要为害保护地黄瓜和番茄等作物;北方根结线虫和花生根结线虫仅局部发生,北方根结线虫主要为害花生和麻山药,花生根结线虫主要为害花生和黄瓜,北方根结线虫与花生根结线虫在土壤中的发生量相对较少,土壤线虫土壤的群体密度最高达10条/g 。 关键词:南方根结线虫;北方根结线虫;花生根结线虫;鉴定;分布 中图分类号:S435 6 文献标识码:A 文章编号:1000-7091(2006)04-0091-04 Identification and Distribu tion of Root -knot Nematodes in Hebei Province CHEN Shu -long,LI Xiu -hua,MA Juan (Institute of Plant Protec tion,Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences,Baoding 071000,China)Abstract:The species and distribution as well as population densities of root-knot nematodes (Meloidogyne spp.) were investigated in Hebei province.The results showed that the species occured in Hebei include M incognita ,M hapla and M.arenaria .M incognita is widly spread in Hebei and causes a serious damage to the vegetable production.The highest density of this nematode in soil reach to 50second stage juveniles per gra m soil.It maily causes damage to cu -cumber and tomato in the protected fields.M hapla and M arenaria only partially distributed in Hebei.M hapla maily causes damage to peanut and Dioscorea opposita while M arenaria only causes yield loss to peanut and cucumber.The population densitiy of M hapla and M arenaria are relatively lower,and the highest density of those nematodes in soil reach to 10second sta ge juveniles per gram soil. Key words:M arenaria ;M hapla ;M incognita ;Identification;Distribution 植物寄生线虫主要为害植株根部,造成植株矮小和顶端黄化,通常与缺肥、缺水、水淹、营养不良、根腐真菌和病毒病的为害症状难以区分,一般不易引起人们重视。对于迁移性线虫,在对植株造成严重危害后,通常在植株枯萎或死亡前离开受害植株,造成线虫病害诊断困难,所以在评估线虫的危害时,它所造成的损失远比我们想象的要高[1]。近年来,随着农业生产结构的调整,线虫为害日趋严重,为害植物的线虫种类多达30个属、数百种,几乎每一种 植物都会受到多种线虫的危害[1]。为有效地防治植物线虫病害,做到有的放矢,必须了解植物线虫病害的发生种类。我国陕西、福建等省份均对本省的植物线虫病害种类做过调查 [2,3] ,并对当地线虫病害 的防治起到指导作用,有关河北省植物线虫的种类 及发生情况尚未见系统报道,因此笔者于2003~2005年对河北省的植物线虫种类进行了初步调查,旨在摸清河北省植物线虫的发生种类及分布,为植 物线虫病害的防治提供理论依据。本研究仅就河北 华北农学报 2006,21(4):91-94
烟草根结线虫病
烟草根结线虫病 Tobacco Root Knot Nematode 烟草根结线虫病是世界各国烟草生产中的重要病害之一，一般在温暖地区轻砂质土或砂壤土发生严重。我国根结线虫病分布范围很广，据90年代初统计，我国云南、贵州、广东、广西、湖南、湖北、浙江、安徽、福建、陕西、四川、河南和山东等13个省市烟区不同程度地发生根结线虫病。特别是近年来烟草根结线虫病扩展迅速，危害逐年加重，已成为烟草生产中亟待解决的重要问题之一。 症状 根结线虫病在苗期和大田期均可发生。苗期因温度低，危害时间短，一般发生较轻，症状不明显。受害重的烟苗，长势弱，叶片黄白色，拔起后可见根系发育不良，并有少量米粒大小的根结。 成株期发病的典型特点是根部形成大小不等的瘤状物即根结，根结大小、形状差别很大，小的如米粒，大的如花生米，圆形，纺缍形或不规则形。有时一条根上多个根结串生在一起，使整个根系粗细不匀，形成鸡爪状畸形根。剖开根结，内有一至多个黄白色或乳白色粒状物，为病原线虫的雌虫。由于根部受害地上部也会受到影响。主要表现为植株矮化，叶片变黄，形如缺肥或缺水状。叶片变黄先从中、下部叶片开始。起初，下部叶尖和叶缘出现褪绿斑，后整株叶片由下而上逐渐变黄，整个植株因生长缓慢而比正常植株矮小，特别在干旱条件下更加明显。重病烟株根部变短，后期土壤湿度大时根系腐烂仅留根部表皮和木质部，整个植株萎蔫枯死。 病原
据研究，我国主产烟区烟草根结线虫为混合种群，主要有4种，Meloidogyne incognita Chitwood,称南方根结线虫，M. javanica(Treub) Chitwood，称爪哇根结线虫，M. hapla Chitwood,称北方根结线虫，M. arenaria (Neal) Chitwood称花生根结线虫。其中南方根结线虫为优势种，不同地区分布略有差异。南方根结线虫和花生根结线虫还存在小种分化现象。 发病规律 根结线虫主要以卵、卵囊及幼虫在病残体或其他寄主的根上越冬成为翌年初侵染源。田间可通过灌溉、耕耙、锄等农事操作传播，移栽带病烟苗、施用带虫粪肥等也是重要的传播途径之一。条件适宜时，土壤中的线虫卵开始孵化，幼虫从根的表皮侵入寄主。线虫以口针穿刺根表皮细胞取食，由于线虫的刺吸，根部中柱鞘细胞大量分裂形成多核的巨形细胞，周围细胞以此为中心而形成肿瘤。随虫态发育成熟，雌虫开始产卵。寄生部位不深的，雌虫将卵排在根外，卵孵化后可重复侵染。寄生部位深的，所产的卵留在根组织内，孵化后继续在组织内发育完成生活史，也可迁移离开根结而侵染新根。一般在南方地区发生代数较多，在我国北方地区发生代数较少，据河南报道，烟草根结线虫在河南省许昌地区一年约发生4代，第一代于3月上旬至5月中下旬完成，历时60~70d；第二代于5月下旬至7月上旬完成，历时40~50d；第三代于7月中旬至8月中旬完成，历时30~40d；第四代于10月下旬完成，历时50~80d。发生代数越多危害越重。 根结线虫病的发生与多种因素有关，其中土壤温度对其发生起主导作用。温度可影响线虫活动的早晚、线虫发育、发生代数及群体数量，当土壤温度超过25℃，线虫20天即可完成一代。因此在较温暖地区，根结线虫活动早，发生代数多，危害时间长，群体密度大，危害重。一般认为，线虫侵染越早，危害越重，侵染越晚，发病越轻。据观察，在临近作物收获季节，大约80%的根系都有被线虫侵染的迹象，但此时根系受害很轻，地上部几乎看不到明显的症状。土壤质地及含水量是影响线虫病的另一重要因素。线虫喜在轻质透气好的砂壤土中活动，黏性土壤对线虫发生不利。土壤湿度过高也会影响线虫活动，一般土壤相对湿度40%～80%时比较适于线虫活动。常年病田连作，可增加土壤中线虫群体密度，也是加重病害的原因。 病害控制 防治策略应以利用抗（耐）病品种与栽培管理、药剂防治相结合。 1.抗病品种的利用 G28、K326、G80、中烟14等具有较强的抗病性，可根据各地情况选用。 2．苗床期控制采用水田土或其他非烟田、非菜园土育苗，或对苗床土消毒处理，可用57%磷化铝片，按每m2放1片药后埋土，然后用塑料薄膜覆盖，3~5 d后揭膜通风，有良好防效。磷化铝高毒，应注意安全。移栽时应剔除病苗，防止带病烟苗进入大田。 3.加强栽培管理轮作是病区防治根结线虫的有效措施，可与禾本科作物3年以上轮作，有条件的地区可实行水旱轮作，效果更好。 4.药剂防治烟草移栽时将药剂施入穴内，施药深度10～15cm防效最好，施药太浅，效果较差。常用药剂：15%铁灭克颗粒剂，每hm2用药2～3kg（a.i）；10%克线丹颗粒剂，每hm2用药2～7.5kg（a.i）/hm2。其他药剂如呋喃丹、克线磷、涕灭威、甲基异柳磷等也有较好的防效。这些药剂毒性都很大，要特别注意安全。
根结线虫根部症状
根结线虫根部症状、幼虫、雌成虫及一些微观症状 图 根结线虫主要有爪哇根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫及南方根结线虫。根结线虫寄主范围广泛，常为害瓜类、茄果类、豆类及萝卜、葫萝卜、莴苣、白菜等30多种蔬菜，还能传播一些真菌和细菌性病害。主要为害各种蔬菜的根部，表现为侧根和须根较正常增多，并在幼根的须根上形成球形或圆锥形大小不等的白色根瘤，有的呈念珠状。被害株地上部生长矮小、缓慢、叶色异常，结果少，产量低，甚至造成植株提早死亡。少量的根结线虫有利于植株的生长，线虫数量多时才影响作物生长，一般植株地上症状不明显。 描述:根结 描述:雌成虫
描述:各种幼虫 巨形细胞: 根结线虫在寄主根尖分生组织附近侵入。侵入后刺由食道分泌出吲哚乙酸等生长激素，刺激寄主细胞分裂，形成巨形细胞，线虫头部四周细胞的细胞壁分消解，余下的细胞壁联接，细胞质融合后形成多核的、细胞质很浓的巨形细胞。 描述:巨型细胞
效果比较好的要大都是高毒农药，像涕灭威、克线丹、灭线威等！现在比较好的是用2%阿维1000倍在移栽时灌根，并且保证作物苗无虫！ 根结线虫的防治一般采取农业防治比较，与禾本科作物轮作啊！最好是水旱轮作，田间多施有机质的肥料！另外，菊科植物对根结线虫也有一定的抑制作用！ 小麦胞囊线虫(CCN，Heterodera spp. )是小麦上为害最为严重的一类固着寄生的线虫；包括已经定名的12个有效种和几个为未定名的种，主要为害禾谷作物及杂草，其中为害最重分布最广的为燕麦胞囊线虫（Heterodera avenae ）；小麦胞囊线虫全球性分布，世界主要产麦过均有发生；在巴基斯坦、沙特阿拉伯、澳大利亚分别对小麦能造成15-20%、40-92%和23-50%的产量损失，也是印度小麦上的主要病害，被称为“molya”。 在我国湖北发现小麦胞囊线虫在小麦上的发生为害，现在在华北、华中等小麦主产区均有发生；理论上讲由于华北地区气候与小麦胞囊线虫生活习性不一致，小麦胞囊线虫不能在冬小麦幼苗期大量侵染，在华北平原的北部该线虫难以对小麦生产造成严重的损失；但河南农业大学根据1990年在郑州郊区须水镇的调查认为，能对小麦造成40％以上的产量损失；但一般认为小麦胞囊线虫对我国冬小麦不会造成严重的产量损失。 描述:小麦胞囊线虫田间、根部症状及卵
最全根结线虫防治方法大全
最全根结线虫防治方法大全！ 目前农业生产中危害最普遍的线虫种类主要有根结线虫、孢囊线虫、根腐线虫、茎线虫、肾状线虫、半穿剌线虫、叶线虫、松材线虫等，其中以根结线虫危害最重、损失最大。线虫病往往没有明显症状，容易与缺素症混淆，并与其它病原生物形成复合侵染。 一、线虫的综合防治技术 （一）农业防治1、轮作有根结线虫的菜地，最好实行轮作，特别是水稻和葱、蒜等轮作，防治根结线虫效果更好。勿与线虫易发蔬菜种类如茄子、番茄、芹菜、莴苣、胡萝卜等蔬菜轮作。 2、苗床消毒或无土育苗苗床是根结线虫传播的重要途径之一，如果苗床不进行处理，很容易将根结线虫传播到大田，而作物早期受到根结线虫的危害对其产量有很大的影响。采用无土育苗是避免根结线虫为害的一条重要措施。如果苗床面积很大，可采用苗床消毒的措施，将35%威百亩水剂（8-10kg/亩）与土壤充分拌匀后，盖上塑料薄膜熏蒸。
3、水淹杀虫重病田灌水10-15cm深，20-30天，使线虫缺氧窒息而死。最好该种一季水稻，既杀死线虫，又不造成田地荒芜。 4、深翻根结线虫多分布在表土层，深翻可减少为害。播前深耕深翻25cm以上，把可能存在的线虫翻到土壤深处，可减轻为害。 5、采用抗根结线虫的品种或砧木选用抗病或耐病的蔬菜品种，可大大减轻各种病害的为害。 （二）物理防治
1、蒸汽消毒蒸汽消毒对人畜无害，多次使用无有害生物的抗药性问题。蒸汽消毒的方法有地表覆膜消毒法、埋设地下管道法以及负压消毒法，以负压消毒法效率最高。根结线虫对热很敏感，在50℃时保持10-15分钟，可杀死几乎所有线虫。 2、无土栽培无土栽培是一项能有效避免根结线虫为害的重要农业措施。根据研究，利用土壤栽培槽填装由稻壳、作物秸秆及动物排泄物的发酵物料等构成的栽培基质进行蔬菜栽培，具有成本低、技术简单，产品优质等优点，具有广阔的应用前景。 3、日光消毒（1）日光消毒蔬菜收获后，在夏季炎热季节，覆地膜覆盖10-15
烟草青枯病菌生防菌的筛选和鉴定
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/3b2973220.html, 烟草青枯病菌生防菌的筛选和鉴定 作者：毕涛刘群王晓强李向东陈晓红温亮苏建东杨举田 来源：《山东农业科学》2014年第11期 摘要：采用纸碟片法筛选到4株对烟草青枯病菌（Ralstonia solanacearum）有抑菌作用的生防菌C2c、C1a、Tsb和Ch1b，抑菌圈直径分别为51.50、25.95、24.40 mm和20.05 mm。通过16S rDNA序列分析，C2c、C1a和Tsb为多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa），Ch1b 为成团泛菌（Pantoea agglomerans）。这4株生防菌对烟草赤星病菌（Alternaria alternate）、 烟草根黑腐病菌（Thielaviopsis basicola）、棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、苹果霉心病菌（Trichothecium roseum）等病原真菌也有较好的抑制作用。 关键词：烟草青枯病菌；生防菌；纸碟片法 中图分类号：S435.72+S476 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2014）11-0068-04 由青枯劳尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的青枯病是烟草上最具毁灭性的细菌性病害，已经成为我国烟叶生产的主要制约因素。 烟草青枯病的生物防治越来越引起重视。孔凡明等（1999）[1]认为生防菌可以减轻发病 程度，在接种青枯菌前喷施生防菌防病效果更好。罗宽等（2002）[2]筛选到3株青枯菌拮抗菌，并通过大田试验验证其防效。尹华群等（2004）[3]筛选到1株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）及2株短芽孢杆菌（Bacillus brevis）。张伏军等（2007）[4]、胡军华等（2009）[5] 分离到1株铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），盆栽试验表明，先施用生防菌菌液或活性物质的防治效果要高于农用链霉素，后施菌液或活性物质也有一定的防治效果。段燕平等（2012）[6]分离得到1株枯草芽孢杆菌（B. subtilis），防治效果达66.70%。 本研究希望筛选更多的生防菌，鉴定其种属地位并测定其抑菌谱，为烟草青枯病的生物防治提供理论指导。 1 材料与方法 1.1 供试材料 1.1.1 供试病菌烟草青枯病菌、棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum）、苹果霉心病菌（Trichothecium roseum）、玉米弯孢霉叶斑病菌（Curvularia lunata）和玉米小斑病菌（Bipolaris maydis）由本实验室分离保存；白地霉（Geotrichum candidum）由密西西比州立大学吕士恩老师提供；烟草赤星病菌（Alternaria alternate）、烟草根黑腐病菌（Thielaviopsis basicola）和苹果炭疽病菌（Gleosporium fructigenum）由山东农业大学张广民老师提供。
研究生中期考核自我鉴定范文
研究生中期考核自我鉴定范文 时光荏苒光阴流逝一转眼研究生阶段的学习已经过半。回首过去的一年多我觉得还是比较充实且有意义的其中有收获当然也有失落。总的来说自己成熟了很多。在这里对自己过去一年多的学习、生活、科研及社会工作等做一个小结目的是总结经验发现不足之处以利于今后继续发扬优点弥补不足为将来适应社会做好准备让自己的人生道路走得更稳、更好以服务于祖国和人民。 先从政治思想和道德品质方面谈谈我这一年来的认识和收获。虽然自己在本科阶段未能如愿加入中国共产党但我始终不忘党的宗旨时刻以共产党员的标准严格要求自己。用科学发展观来认识世界认识社会能清醒的意识到自己所担负的社会责任对个人的人生理想和发展目标有了相对成熟的认识和定位。同时我也在努力争取早日加入中国共产党。 在学习方面我根据自身研究方向的要求有针对性的认真研读了有关核心课程为自己的科研工作打下扎实基础并选修了一部分其他课程开阔了自己的学术视野。在导师的指导下积极参与了一些课题的研究。在研究的过程中认真阅读教材、查阅学术资料和参考书籍增强自己的实践动手能力使自己的理论知识与实践水平得到了进一步的增强和提高。通过对研究方向的深入钻研对专业领域的应用背景、科学前沿以及整个学科的结构都有了宏观、深入的认识使自己具备了自我学习认真思考、善于钻研的能力。并
认真撰写了研究生毕业论文开题报告准备在专业领域根据自己的研究成果发表一到两篇学术论文。 平时生活中为人处世和善热情和同学关系融洽并积极参与各项集体活动。 纵观研究生阶段这已过去的日子我所获颇丰从学业、科研工作到个人素质都得到了充分的培养和锻炼是充实且有意义的一段经历。相信这些经历和积累都将成为我人生道路上的宝贵财富。在以后的工作和学习中我将继续保持并发扬严谨治学的作风兢兢业业争取让每一天更加充实且有意义。
蔬菜南方根结线虫的发生与防治
蔬菜南方根结线虫的发生与防治 姜玉兰 （山东省青岛市种子站，266000） 近年来，随着农业种植结构的调整，蔬菜种植面积不断扩大，根结线虫病的发生呈逐年 上升的趋势，由于多年连作，根结线虫病已成为蔬菜设施栽培的一种毁灭性病害，除辣椒、 葱、蒜目前尚未发现被侵染外，几乎所有蔬菜都已受到危害，特别是瓜类、茄类、豆类等受 到的危害最重, 常造成严重减产甚至绝收。 1 南方根结线虫的危害及发生 南方根结线虫(Meloidogyne incognita)属植物寄生线虫，该病主要危害番茄、茄子、 黄瓜、莴苣、菜豆、芹菜、辣椒、甘蓝、大白菜等30多种蔬菜根部，侧根和须根上形成大小 不等的瘤状根结。植株地上部轻，病株症状不明显，重病株植株矮小，叶片变小、变黄，呈 点片缺肥状，不结实或结实不良。 在不同的温度下，南方根结线虫一代生活史时间一般在17～57d之间。主要分布在5～30 cm深的土层中，土壤pH 4～8、土温20～30℃、土壤相对湿度40％～70％有利于线虫的繁殖 和生长发育，55℃以上经过10min幼虫即可死亡。土壤温度超过40℃或低于5℃，在干燥或过 湿土壤中，线虫侵染活动都很少。地势高燥、土壤质地疏松、盐分低、土壤间干间湿利于线 虫病发生。砂土常较粘土发病重，连作地发病重。 2 南方根结线虫防治
2 1 农业防治选用高抗病品种，采用多茎嫁接的方法，进行无土育苗。种苗移栽、农事 操作是线虫传播的重要途径。因此应选用无病土壤育苗，劳动器械应适时消毒。尽量多用种 子繁殖，因为种子不传播线虫。收获后及时清除焚烧病株残体。种植前一定要将表土深翻20 cm以下，土壤中增施堆肥、粪肥、绿肥。如在休耕时期栽培万寿菊，然后将万寿菊翻耕于土 壤中，可显著降低南方根结线虫的数量；或土壤中添加1％的麦糠、楝叶，对南方根结线虫 的防效[1]可达7155％、6999％；或休耕期种植金盏菊、孔雀草满一季可降低土壤中90 ％的线虫。但注意，金盏菊是北方根结线虫的寄主。蟹粉（主要是甲壳素）与土壤按10％～ 20％混和堆肥可降低南方根结线虫的危害。005％的生蟹粉比20％的堆肥对控制南方根结 线虫更有效，使用蟹粉防治必须在种植前采用。 轮作与休耕可有效降低线虫的危害，但并不可能完全杀灭线虫。水旱轮作的方法防治效 果较好，轮作的作物应避免葫芦科、茄科以及豆科作物，与禾本科作物、对线虫有毒性（ 如蓖麻和蕉麻）或抗线虫蔬菜（如石刁柏）和耐线虫蔬菜（如葱、蒜、韭菜）进行2～3年轮 作。通常休耕6个月后土壤中线虫数量可减少95％以上，在线虫高发区有时仅种植冬季作物 。也可采用无土栽培，通常栽培基质是草炭、蛭石、珍珠岩、椰壳的混合物。无土栽培1～3 年后，基质需要更换或进行消毒，通常采用蒸汽或土壤消毒剂消毒。 萝卜、莴苣、菠菜等能在较低温度下生长，可以提前或推后种植，以避开线
240种已报道杀南方根结线虫植物及杀线虫化学成分
杀南方根结线虫的植物有效成分（20181221） 草酸柠檬酸苹果酸酒石酸扁桃酸巴豆酸苦参碱苦豆碱槐胺碱野靛碱毒扁豆碱邻苯二酚间苯二酚对苯二酚间苯三酚丁子香酚香茅醇DL-薄荷醇柠檬酸 已报道杀南方根结线虫的植物（20181221）240种植物 合欢黄花菊万寿菊一枝黄花蟛蜞菊艾蒿黄花蒿紫茎泽兰肿柄菊青蒿乌桕蓖麻火殃勒苦楝子大叶桃花心木红果米仔兰四季米仔兰烟草曼陀罗金纽扣鸡蛋花夹竹桃黄芩厚果鸡血藤紫花非洲山毛豆雷公藤细辛冬青马樱丹鸡矢藤骆驼蓬假俭草对叶百部花椒黄文江鱼藤了哥王博落回地黄黄杜鹃白花丹岗松生姜韭菜大黄何首乌马齿苋猫爪草决明黄柏喜树连翘徐长卿黄荆栀子白花蛇舌草半夏藜芦黄姜苦参番荔枝牛角瓜砂仁槟榔玉蕊镶边玄叶铁苋锡兰叶下珠洪桑重阳木黄脉爵床硬枝老鸦嘴白蟾花龙船花鹅掌木圆叶南洋参竹柏酸豆蕺菜草麻黄石榴无花果马钱麻疯树大蝎子草杏一把伞南星山茶马尾松草乌紫云英大蒜胡黄连狗脊白头翁蛇床子小茴香甘草番泻叶胡黄连鱼腥草竹醋液朱砂连胡黄连木香紫青金盘圆叶葡萄叶大豆荚壳松柏叶松柏籽胜红蓟紫万年青芦笋蒲公英侧柏千里光牵牛子马鞭草向日葵辣蓼川楝子常春藤龙胆草山苍子贯仲藿香苍耳刺柏叶刺柏籽洋葱构树黄藤莴苣蚯蚓粪茼麻银杏柑橘荆芥七叶一枝花巴豆薄荷草麻黄大戟杜衡商陆藿香五味子附子山茶马尾松打碗花泽泻小米椒巴豆杜衡商陆藿香川穹南瓜土元粪苦豆子藿香蓟金腰箭孔雀草苦艾山道年蒿金盏花木贼猪屎豆木蓝印度皇橙斑纹芦荟臭椿香苦草番茄毒扁豆马铃薯画眉草
柠檬香茅瑞香木醋液牛心朴子叶菜豆利马豆蔓生刀豆鱼藤毛鱼藤狼牙刺羊角豆楹树大叶相思印度黄檀长角豆花生芒柄花苜蓿腰果蓟罂粟苦蒿年蒿石刁柏燕麦印楝黑芥海棠果番木瓜长春花距瓣豆宽皮橘菽麻大花菟丝子蜿蜒香茅狗牙草鲫鱼草向日葵止泻木韦氏大风子白茅黑夜爵床独行菜印度紫荆木母菊含羞草苦瓜翅籽辣木黑种草圣罗勒稻金甲豆萝卜黑麦蛇瓜孔雀草。
昆虫病原线虫对南方根结线虫的抑制效果
第？卷第2期 2017年6月 热带生物学报 JOURNAL OF TROPICAL BIOLOGY Vol. 8 No. 2 Jun. 2017 文章编号：1674 -7054(2017)02 -0185 -05 昆虫病原线虫对南方根结线虫的抑制效果 孙燕芳，龙海波，岳建军，冯推紫，白成 (中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，海口 571101) 摘要：为明确昆虫病原线虫、异小杆线虫（！+:<〇"33H b S D品系对南方根结线虫的生防潜 力，在盆栽条件下，通过测定感染南方根结线虫的番茄苗施用昆虫病原线虫悬浮液后的根结指数、卵囊数和繁 殖率等指标的变化来研究该H b S D对南方根结线虫的抑制效果。结果表明:H b S D3个不同的接种时间和浓度 对番茄根结指数、卵囊数和繁殖率的影响呈现出显著性差异(P< 0. 05)，其中，H b S D悬浮液施用量6 000头每 盆并与南方根结线虫同时接种番茄苗的处理组根上的根结指数、卵囊数和繁殖率(2. 67,53.8和19.77)，与对 照(3.5，82.2和26.81)相比均有很大程度的减少，对根结指数的防效可达31.40d。 关键词：异小杆线虫;南方根结线虫;根结指数;繁殖率;悬浮液;抑制效果 中图分类号：S 476.15 文献标志码：A D O I：10. 15886/j. cnki. rdswxb. 2017. 02. 010 昆虫病原线虫是昆虫专化性寄生天敌线虫，能够主动寻找、侵入寄主、在寄主体内大量繁殖并释放共 生菌导致寄主昆虫快速死亡，具有重要的害虫生物防治价值。目前，昆虫病原线虫作为一类新型的生物 杀虫剂，市场销售额占生物农药份额的第2位，仅次于苏云金杆菌（'o=42<>r3p353)。国际上商品化 的昆虫病原线虫产品异小杆线虫！和斯氏线虫已在北美和英国等地广泛用于防治田间害虫(1_2)。Valle的研究表明，利用夜蛾斯氏线虫（I和异小杆线虫（！能够极显著地减少异常珍珠线虫在番茄植株根上所形成的根结数，甚至能够影响卵的孵化，异常珍珠线虫的 繁殖率分别降低了 57d和53d(3)。Perez的研究结果表明，番茄接种象耳豆根结线虫350个卵块+ 350 条J2和175个卵块+ 175条J2并同时施用异小杆线虫JPM4等4个品系的100条IJs后，植株根上的根结 数均较对照减少，其中，异小杆线虫下的1个种和夜蛾斯氏线虫能显著抑制根结线虫卵的孵化和J2对根 的侵染(4)。Shapiro等利用感染了昆虫病原线虫的大蜡螟（0043虫尸研究其对胡椒和西葫芦南方根结线虫病的抑制作用，结果显示，虫尸能减少植株根上根结数和卵囊中的卵块数[5_6]。国内的相关 报道多为综述[2]。海南省是我国反季节蔬菜种植的重要省份之一，但蔬菜上的根结线虫病发生危害较严 重，尤以南方根结线虫优势种群危害最大，对蔬菜生产造成严重威胁。因此，笔者选取本实验室前期筛选 的昆虫病原线虫！?S D品系来开展其对南方根结线虫（D e43o:B e的抑制效果实验，旨在为生物防治当地植物根结线虫提供科学依据。 1材料与方法 !1昆虫病原线虫供试的昆虫病原线虫为异小杆线虫（！+〇1〇"33 S D品系，由本研究团队诱集，用黄粉虫老熟幼虫纯化和扩繁[7]。扩繁收获的感染期幼虫IJs悬浮液于10 C人工气候箱备 用，试验时线虫的贮存期不超过30 d。 1#植物根结线虫供试的植物根结线虫由本实验室分离纯化和鉴定，并使用番茄进行室内活体培养。 1.3供试植物选番茄品种‘特级大明星’为供试植物。 收稿日期：2016 -09 -23 修回日期：2017-01 -03 基金项目：公益性行业(农业)科研专项(201503114)#海南省国际合作专项（KJHZ2013-2) 作者简介：孙燕芳（1986 -)，女，研究实习员.研究方向：生防菌研究.E-mail:S yf182********@ 163. c m 通信作者：白成（1951-)，男，研究员.研究方向:生物化学与生物防治.E-mail:chengbai2001@https://www.360docs.net/doc/3b2973220.html,