基因工程作业题及答案

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(0589)《基因工程》网上作业题及答案

（0589）《基因工程》网上作业题及答案1：第一次作业2：第二次作业3：第三次作业4：第四次作业5：第五次作业1：[论述题]一、名词解释1、限制性核酸内切酶；2、基因文库；3、cDNA文库；4、RFLP；5、核酸探针；6、转录二、简答题1、试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？2、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？3、什么叫基因工程（Gene Engineering），试从理论和技术两个方面谈谈Gene Engineering 诞生的基础？4、抗性基因是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？5、Y AC 载体具有什么样的功能性元件？为什么它在克隆大片段时具有很大的优越性？三、论述题1、分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？参考答案：一、名词解释1、DNA重组：是指用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接，组成一个新的DNA 分子的过程。

2、克隆：原指一个亲本细胞经无性繁殖产生无数个相同细胞的子代群体的过程。

3、DNA克隆：是指将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中，使其扩增和繁殖，以获得大量的相同的DNA分子，又称分子克隆或基因克隆。

4、目的基因：要分离和克隆的相应基因常称为目的基因。

因目的基因片段需插入载体，导入宿主细胞内进行复制或表达，所以对宿主细胞DNA而言，又称它为外源性基因或外源性DNA。

5、基因载体：能够携带外源DNA进入受体细胞内进行复制或表达的DNA分子，被称为基因载体。

6、质粒：是独立于细菌染色体之外，能自主复制的共价闭合环状双链DNA。

二、简答题1、答：（1）限制性核酸内切酶：识别并特异切割DNA碱基序列；（2）DNA polⅠ：催化缺口平移，制备高比度DNA探针；（3）Klenow片段：合成cDNA第二条链，补齐或标记双链DNA3′端；（4）TaqDNA聚合酶：DNA体外扩增(PCR)；（5）逆转录酶：催化合成cDNA；(6) T4DNA 聚合酶：聚合补平或标记DNA平末端或3′凹端等；（7）DNA连接酶：催化2条DNA链之间形成磷酸二酯键；（8）大肠杆菌DNA连接酶：应用于黏端DNA或切口间连接；（9）T4DNA连接酶：应用于黏性或平末端DNA的连接；（10）末端脱氧核苷酸转移酶：给载体或cDNA加上互补的同聚尾、加标记物；（11）碱性磷酸酶：防止载体自身连接、32P标记5′端；（12）T4多核苷酸激酶：5′端磷酸化、5′端标记放射性核素。

(完整版)基因工程原理练习题及其答案

基因工程原理练习题及其答案一、填空题1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。

2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。

3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。

4．碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。

5．同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。

6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。

7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。

8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。

9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。

10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。

11．EGTA是____________离子螯合剂。

12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。

13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。

14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。

基因工程试卷及答案

基因工程试卷及答案(1)(总4页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--一、名词解释1、基因治疗：是将目的基因放进特定载体中导入靶细胞或组织，通过替换或补偿引起疾病的基因，或者关闭或抑制异常表达的基因来克服疾病的治疗方法。

2、反义核酸：是指能与特定mRNA精确互补、特异阻断其翻译的RNA或DNA分子。

3、反义DNA：也称反义寡核苷酸或反义脱氧寡核苷酸，是一种人工合成的、能与mRNA互补的、用于抑制翻译的短小反义核酸分子。

4、同尾酶：指切割DNA可产生相同的黏性末端的限制酶5、转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。

6、ａ-互补：指半乳糖苷酶的两个无活性片段组合而成为功能完整的酶的过程。

7、转化：指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。

8、基因克隆：通过体外重组技术，将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。

9、核酶：是一类具有催化活性的RNA分子，具有核苷酸水解活性，可特异性剪切RNA分子，相当于RNA酶。

10、位点偏爱：某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一识别序列表现出不同的切割效率，这种现象称作为位点偏爱。

二、选择1.在( B )诱导下，目的蛋白与lacZ就会以融合蛋白的形式表达出来。

A. dNTP C. DMSO2.（ A ）可使表达蛋白避免被细胞内蛋白降解，或使表达的蛋白正确折叠，从而达到维护目的蛋白的目的。

A.分泌表达载体融合表达载体 C.组氨酸标签表达载体 D.内含肽表达载体的琼脂糖凝胶电泳方向为（ B ）A. 正极向负极B. 负极向正极C浓度高向浓度低. D. 浓度低向浓度高4.影响脉冲场凝胶电泳电泳分辨率的最关键因素是（D ）A.电场强度B. 缓冲液浓度C. 温度D.脉冲时间5.控制潜在RNA酶活性最重要的是（C）A.使用RNA酶抑制剂B.实验用具C.细致谨慎的操作D.温度控制6.酵母基因表达系统的宿主不具有以下哪一条件(B )A.安全无毒B.载体DNA转化频率低C. 发酵周期短D.蛋白质分泌能力好7. 酿酒酵母的附加体形表达载体有（D）的缺点A.蛋白分泌能力差B.无终止子C.不能独立复制D.无选择压力时不稳定8.（C）不能用大肠杆菌表达系统来生产。

基因工程期末考试题及答案

基因工程期末考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程中常用的工具酶是：A. 纤维素酶B. 限制性内切酶C. 淀粉酶D. 过氧化氢酶答案：B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因的表达C. 基因的克隆D. 基因的测序答案：D3. 基因枪法是一种：A. 植物转基因方法B. 动物转基因方法C. 微生物转基因方法D. 所有生物的转基因方法答案：A4. 重组DNA技术中，通常使用哪种质粒作为载体？A. 质粒DNAB. 线粒体DNAC. 核糖体RNAD. 染色体DNA答案：A5. 基因工程中，目的基因的表达通常需要：A. 启动子B. 终止子C. 增强子D. 所有选项答案：D二、填空题（每空2分，共20分）1. 基因工程是指按照人们的意愿，将不同来源的基因在体外构建杂合DNA分子，然后导入到活细胞和生物体内，以改变生物的遗传特性并取得新品种或新产品。

2. 基因工程中常用的宿主细胞有大肠杆菌、酵母菌和________。

答案：哺乳动物细胞3. 基因工程中，________是连接目的基因和载体DNA的关键酶。

答案：DNA连接酶4. 目的基因的表达需要________和________的协同作用。

答案：启动子；终止子5. 基因工程产品在医学领域的应用包括生产________、________和基因治疗等。

答案：重组蛋白；单克隆抗体三、简答题（每题10分，共30分）1. 请简述基因工程在农业中的应用。

答案：基因工程在农业中的应用主要包括提高作物的抗病性、抗虫性、抗旱性和提高作物的产量和品质。

例如，通过基因工程培育的抗虫棉可以减少农药的使用，提高棉花的产量和质量。

2. 基因工程在医学领域有哪些应用？答案：基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、单克隆抗体、基因治疗和疫苗开发等。

例如，利用基因工程技术生产的胰岛素可以治疗糖尿病，单克隆抗体用于治疗癌症和自身免疫性疾病。

3. 请解释什么是转基因生物，并简述其潜在的风险。

基因工程试题库答案

基因工程试题库答案基因工程练习题一、单项选择题1．在基因工程中，切割载体和含有目的基因的DNA片段中，一般需使用A.同种限制酶B.两种限制酶C.同种连接酶D.两种连接酶2．基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A.①②③④B.①②③C.②③④D.①②④3．有关基因工程的叙述正确的是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞内完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的结构成分为合成目的基因提供资料4．下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体A.细菌质粒B.噬菌体C.动植物病毒D.细菌核区的DNA5．基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。

在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测表达6．不是基因工程方法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D.乙肝疫苗7．在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8．下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或多个限制酶切点9．水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中有三种氨基酸构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。

在转基因技术中，这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达10．应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。

这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C.合成β—球蛋白的DNA上一页下一页D.合成苯丙氨酸羟化酶的DNA片段11．基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。

基因工程试题及答案解析

基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是：A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案：D2. 基因工程中，用于将目的基因导入植物细胞的方法是：A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案：C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案：C二、填空题1. 基因工程中，常用的运载体有____、____和____。

答案：质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中，常用的筛选标记基因有____、____和____。

答案：抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。

答案：基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。

在农业中，基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物；在医学领域，基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等；在工业上，基因工程可以用于生产酶、疫苗等；在环境保护方面，基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。

2. 基因工程中，如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达？答案：确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面：首先，目的基因需要有合适的启动子和终止子，以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止；其次，需要考虑目的基因的密码子偏好性，以确保其在宿主细胞中能被高效翻译；再次，需要考虑目的基因的稳定性，避免其在宿主细胞中被降解；最后，还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。

四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。

答案：基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。

重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病；基因治疗可以用于治疗遗传性疾病；疾病诊断可以通过基因检测来实现；基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。

然而，基因工程的应用也带来了伦理问题，如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。

高中基因工程试题及答案

高中基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然选择B. 基因的人工选择C. 基因的人工重组D. 基因的自然重组答案：C2. 基因工程中常用的载体是：A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案：A3. 基因枪法属于哪种基因转移技术？A. 化学法B. 物理法C. 生物法D. 机械法答案：B4. 以下哪个不是基因工程的步骤？A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的自然选择答案：D5. 基因工程在医学领域的应用不包括：A. 基因治疗B. 基因检测C. 基因编辑D. 基因克隆答案：D二、填空题6. 基因工程的核心技术是________。

答案：重组DNA技术7. 基因工程中常用的受体细胞有________和________。

答案：大肠杆菌、酵母菌8. 基因工程在农业上的应用包括________和________。

答案：转基因作物、基因改良9. 基因工程在环境保护中的应用包括________和________。

答案：生物修复、污染物降解10. 基因工程在工业生产中的应用包括________和________。

答案：生物催化剂、生物制药三、简答题11. 简述基因工程的基本原理。

答案：基因工程的基本原理是利用分子生物学技术，将目的基因从一种生物体中提取出来，然后通过重组DNA技术将其插入到另一种生物体的基因组中，使其在新的宿主细胞中表达，从而获得具有特定性状的生物体或生产特定的生物产品。

12. 基因工程在医学领域有哪些应用？答案：基因工程在医学领域的应用包括基因治疗，通过将正常基因导入患者体内以治疗遗传性疾病；基因检测，用于疾病诊断和风险评估；基因编辑，通过修改基因序列来治疗疾病；以及生产生物药物，如胰岛素、干扰素等。

四、论述题13. 论述基因工程的伦理问题及其解决途径。

答案：基因工程的伦理问题主要包括对人类基因组的修改可能带来的未知风险、基因歧视、生物多样性的减少等。

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第二章1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶答：核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。

核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。

同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。

同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。

核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。

末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA 3’-OH端随机添加dNTPs的酶2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。

第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。

顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。

3．部分酶切可采取的措施有哪些？答：1）缩短保温时间2）降低反应温度3）减少酶的用量4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?答：回文序列是：5'-CATA TG-3，5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响?答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。

概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。

第三章1．如何将野生型的λ噬菌体改造成为一个理想的载体?答：①删除λ噬菌体的非必需区，留出插入空间；并在余下的非必须区内制造限制酶切点②引进某些突变表型，作为选择标记③突变某些基因，使它成为安全载体④删除λDNA必须区段上常用的限制酶切点2．什么是蓝白斑筛选法?答：这种方法是根据α互补的原理来筛选重组体。

主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌β—半乳糖苷酶的α基因片段（LacZ’），携带有lac基因片段的载体转入LacZ’－的宿主菌后，在IPTG（异丙基硫代-β-D半乳糖）诱导下，载体表达的β—半乳糖苷酶的α肽段和宿主菌表达的β—半乳糖苷酶的β肽段互补，形成有活性的β—半乳糖苷酶，该酶可以分解无色的5—溴—4—氯—3—引哚—β—D—半乳糖苷(X-gal)得到蓝色的5—溴—4—氯—靛蓝，因此在含有X-gal平板上形成浅蓝色的菌斑。

外源基因插人LacZ’(或LacZ’基因部分被取代)后，重组的克隆将丧失分解X-gal的能力，在含有X-gal的平板上形成白色的菌斑，非重组的克隆则为蓝色菌斑。

3．M13系列载体具有哪些优缺点?答：（1）有MCS，便于克隆不同的酶切片段（2）Xgal显色反应，可供直接选择（3）可以克隆双链DNA分子中的每一条链4．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?答：虽然噬菌粒载体携带有M13的IG区，能够合成单链DNA，但是它没有M13的功能基因，没有M13基因2的产物存在，所以不能合成单链DNA。

而辅助噬菌体具有M13的所有功能基因，但是IG区是缺陷的，辅助噬菌体本身的DNA不能进行单链复制，于是就可以为噬菌粒提供基因2产物和包装蛋白。

5．某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。

现用Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?答：(1)加四环素；(2)Tet r Kan s和Tet r Kan r；(3)重新点种在含Tet、Kan和只加Tet的平板上，选择只在Tet平板上生长的菌落，即为所需的重组体。

第四章1. 目的基因的获取方法有哪些？各有什么优缺点？答：1）鸟枪法克隆：优点是可以随机克隆供体细胞的全基因组DNA片段；缺点是①工作量较大，需要了解目的基因的背景知识，②不能获得最小长度的目的基因，③不能除去真核生物目的基因的内含子结构2）cDNA法：优点是①能获得最小长度的目的基因②能除去真核生物目的基因的内含子结构；缺点是①仅限于克隆mRNA分子具有polyA结构的蛋白质编码基因②mRNA分离纯化困难3）PCR法：优点是高效快速的体外合成目的基因；缺点是已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列4）化学合成法：优点是适于合成引物、接头等多种DNA短片段；缺点是必须已知基因的DNA序列，直接合成较大的基因成本较高2. 什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库有什么不同?答：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。

一般以改造的噬菌体DNA或黏粒作为载体，包括下列过程：(1)高分子量染色体DNA的制备；(2)体外重组连接；(3)包装蛋白的制备；(4)重组体的体外包装；(5)将重组DNA导人寄主细胞；(6)筛选。

基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。

基因库(gene pool)是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。

在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。

3. 什么是cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?答：同mRNA互补的DNA称为cDNA。

cDNA文库是以某一生物的总mRNA为模板，在无细胞系统中，在反转录酶的作用下，首先合成一互补的DNA, 即第一链，破坏RNA模板后，再以第一链为模板合成第二链，得到的双链DNA称为cDNA。

选用适合的载体，将合成的cDNA重组导人寄主细胞，经筛选得到韵cDNA克隆群称为cDNA文库。

由于cDNA技术合成的是不含内含子的功能基因，因此是克隆真核生物基因的一种通用方法。

由于细胞内的基因在表达的时间上并非是统一的，具有发育的阶段性和时间性．有些则需要特殊的环境条件。

所以，cDNA文库是不可能构建得十分全，也就是说任何一个cDNA 文库都不可能包含某—生物全部编码基因。

第五章1. 你在做Southern印迹分析，为了节省时间，你电泳后直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上，然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。

错在哪里?答：错在电泳后直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上，而没有先将凝胶中的DNA变性成为单链，从而导致目标DNA未能与探针杂交；另外如果你的杂交探针是双链的，在加人杂交混合物之前忘记将探针变性也可能得到空白的放射自显影结果。

2．什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?答：Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。

它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western印迹中使用的探针是抗体(蛋白质)，而Southern印迹中使用的探针是核酸（DNA或RNA）。

3. 蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?答：β—半乳糖苷酶的N末端是非必需的，，可以进行修饰，并不影响酶的活性或α肽的互补性。

如果插入的外源DNA引起α肽的可读框的改变，或者插入片段在正确的可读框中含有终止密码的话，就会形成白色噬菌斑。

如果插入DNA的碱基数正好是3的倍数，且不含有终止密码的话，仍然会形成蓝色噬菌斑。

这种插入物的长度可达几百个碱基对。

4. 重组体克隆的筛选和鉴定方法有哪些？答：1）载体表型选择法2）根据插入基因的表型选择3）DNA电泳检测法4）核酸杂交检测法5）免疫化学检测法6）转译筛选法第六章1．如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码动物激素的基因，并使之在大肠杆菌中进行表达? 简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决办法。

答：要使动物中编码激素的基因在大肠杆菌中表达，通常遇到的问题有：(1)细菌的RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子。

(2)大多数真核基因有内含子，这些内含子在转录后从前体mRNA中被切除而形成成熟mRNA。

细菌细胞没有这样的机制来去除内含子。

(3)有些真核生物的蛋白质是通过前体分于加工而来的，例如胰岛素就是通过加工去除前体分子内部的33个氨基酸残基而来，剩下的两段肽链分别形成胰岛素的α、β链。

(4)产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解。

针对上述可能出现的问题，建议在克隆的过程中采取以下措施：①应将激素的编码序列置于含有核糖体结合位点和起始密码子A TG的细菌强启动子的附近(含有这种序列的载体称表达载体)。

②可以以激素的mRNA为模板用反转录酶合成激素的基因。

这种DNA不含内含子可插入到载体中进行克隆。

此外，如果蛋白质序列短则可通过化学合成得到该基因。

合成的基因应含起始密码ATG、通过该激素蛋白的氨基酸序列推测而来的编码序列，以及1—2个终止密码：ATG——————编码序列————————TGA TAG 现在，这个合成基因可被插入载体中。

③有时加工过程可以在离体条件下进行。

如果加工有困难，可以用合成基因，从而免除加工过程。

④选用合适的突变型宿主从而防止蛋白酶水解。

如果用酵母作为宿主上述许多问题都可以较容易地解决，尤其是现在有既能在大肠杆菌中又能在酵母中复制的穿梭质粒载体。

说明：1)ATG,TAG和TGA是对应mRNA中的转录起始信号AUG和终止信号UAG,UGA的DNA 序列。

2)克隆生长素释放抑制因子基因时采用化学合成基因的方法。

生长索释放抑制因子是一种由下丘脑分泌的激素，长14个氨基酸残基，因此人工合成的基因，包括在宿主菌中表达所需的转录的起始和终止信号，仅51bp长。