生化试剂参数
生化及分子生物实验常用技术参数资料(包括常用缓冲液和酶的配制等等[1]....)
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实验室常用技术参数资料一、核酸及蛋白质常用数据1．核苷三磷酸的物理常数2．常用核酸的长度与分子量3．常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算1μg=10-6g1pg=10-12g1ng=10-9g 1fg=10-15g（2）分光光度换算：1A260双链DNA=50μg/ml1A260单链DNA=30μg/ml1A260单链RNA=40μg/ml（3）DNA摩尔换算：1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp DNA=0.66μg1pmol pBR322=2.8μg1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿（4）蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10μg100pmol分子量50，000蛋白质=5μg100pmol分子量10，000蛋白质=1μg氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿（5）蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA30，000MW蛋白质=810bp DNA50，000MW蛋白质=1.35kb100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4．常用蛋白质分子量标准参照物5．常用DNA分子量标准参照物续上表二、常用缓冲液1．分子克隆常用缓冲液2．磷酸缓冲液（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH 值：pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
生化试剂br
生化试剂br
生化试剂（BR）：配制生物化学检验试液和生化合成。
质量指标注重生物活性杂质。
可用于有机合成。
化学试剂规格目前在我国划分为：
国标试剂：该类试剂为我国国家标准所规定，适用于检验、鉴定、检测。
基准试剂：含量应该是99.9%到100%。
随着科学技术和新兴工业的发展，对化学试剂的纯度、净度以及精密度要求愈加严格和专门化。
优级纯（GR，绿标）（一级品）：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究，有的可作基准物质。
分析纯（AR，红标）（二级品）：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。
化学纯（CP，蓝标）（三级品）：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。
实验纯（LR，黄标）：主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。
（注：此规格已很少使用）。
生化试剂参数..
A1，延迟一定时间后读取吸光度A2，计算吸光度差值与标准比较求得结果。 如肌酐苦味酸法等。可消除内源性物质干扰。
生化试剂主要参数及意义
动力学法
一级动力学法：（两点速率法）样本与试剂反应不断消耗反应物，反应速度
不断减小，吸光度变化不断减小，在特定时间段内进行监测，该时间段内吸 光度升高或降低与样本浓度成正比，如同型半胱氨酸、总胆汁酸等。
生化试剂其他参数及意义
试剂吸光度范围(Linearity） 线性度不能超过设定界限，超限时说明吸光度的变化量之间已经不成 线性或说明底物不足，检测结果会变低。
试剂线性范围（Dynamic Range/Technical Limit） 与试剂/样本比值有关，超出范围的样本应增加样本量重测或样本稀释 后重测。
生化试剂其他参数及意义
前区检查限(Prozone Check Limt) 主要用于免疫比浊法项目，可根据项目要求选YES或NO，比较终点法 后两个读数点的差别，如果后一点比前一点的吸光度低，表示已经有 抗原过剩，样本应稀释后重测 方程式（Fomular） Y=aX+b a为截距，b为斜率。用于校正检测结果，一般a为1.000，b为0.000，
生化试剂主要参数及意义
测定波长（wavelength）： 不同生化分析仪具备不同的波长。可选择单波长或双波长。
主波长（main
wavelength/primary wavelength ）
根据待测物质在特定波长下具有最大吸收峰来选择主波长。
副波长（次波长sub
wavelength/second wavelength ）
生化试剂各机型参数确定
目录
【2017年整理】常用生化试剂作用
常用生化试剂作用：1、蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，在尿素和SDS中稳定。
一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。
2、SDS：十二烷基硫酸钠，溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。
3、IPTG：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，常用于蓝白斑筛选及IPTG 诱导的细菌内的蛋白表达等。
IPTG和乳糖的结构相似，所以它和乳糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。
与乳糖不同的是，IPTG不被β-半乳糖苷酶水解。
常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。
作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定。
4、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的显色试剂，在IPTG的催化下显蓝色。
常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。
5、G418：一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染最常用的选择试剂。
当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后，则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。
Ｇ418的这一选择特性，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
6、DMSO：二甲基亚砜。
实验室常用于作液体层析溶剂，同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物。
能溶于所有烷烃和烯烃。
7、曲拉通X-100：TritonX-100，用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用，能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40。
8、NP-40：很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
体外诊断生化试剂应用参数
CHEMISTRY ACP ALB ALP ALT AM 货号270010036008201110060180006051000503601850111018018001803601870111050018005003600930TEST ACP ALB ALP ALT AM SAMPLE VOL．20371025 DILUTION0101000 REAGENT VOL.1-STEP250300270290250 DILUTION00000 2-STEP50[N] DILUTION00000 WAVE-LENGTH-1410600410340340 WAVE-LENGTH-2450700480410700 METHOD RATE END RATE RATE END REACTION+++--FIRST-POINT-160439 LAST-POINT-1166161616 FIRST-POINT-2N/A N/A N/A N/A N/A LAST-POINT-2N/A N/A N/A N/A N/A NO LAG-TIME YES NO YES YES NO TURBIDITY NO NO NO NO NO PROZONE CHECK NO NO NO NO NO REAGENT OD L-0.5-0.5-0.5-0.5-0.5 H 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 SERUM BLANK L N/A N/A N/A N/A N/A REAGENT OD H N/A N/A N/A N/A N/A MIN-OD-0.5-0.5-0.5-0.5-0.5 MAX-OD 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 LINEARITYDYNAMIC RANGE L00000 H8060100010001180 UNIT U/L g/L U/L U/L umol/L CORRELATION FACTORA=11111 B=00000 COUNT11111 DILUTION VOLUME00000 CONDENSE VOLUME00000 MONITOR SPAN11111 AGC POINT00000 K.FACTOR1308.42628.260780上述参数仅供参考，详情请参阅试剂说明及仪器说明。
常用生化检测项目分析方法及参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法)、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法）、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法）、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等.以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法,包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用.2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等,也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗”O”、类风湿因子,以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法.二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等,其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改.各种测定项目的分析参数（analysis paramete）大部分也已设计好,存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测.1．试验名称试验名称(test code）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式) 方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
实验室常用生化试剂配方
实验室常用生化试剂配方1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版）抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度(mg/ml) 10025(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 3525(0.15M NaOH配) 50(DMSO配)50 50MM使用终浓度（μg/ml）链霉菌2CMYEME大肠杆菌LA或LB氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMPAmpicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprimcat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph－* 10 10 2 5 10 5 100 10－－ 25 25 20 25 10 － 50－－－－－－ 2.5 － 550-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30注意事项：(1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装；（2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并设置阴性对照；（3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。
有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio（4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易挥发，有剧毒；（5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存；（6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整；(7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂对自身的损伤及对工作环境的污染。
生化试剂参数
在特定的温度下，一般是37度，待测物质直接或是间接或试剂中的底物发生反应，使整个液体环境的吸光度或是颜色发生变化，这个变化可能是变深或变淡，根据朗伯比尔定律，然后我们用数字光电设备去监测发生的变化，把颜色转化成电信号再转化成数字，电脑再加以计算，套入我们预先设定好的公式，这样就有结果了。
*朗伯比尔定律又称比尔定律，是光吸收的基本定律，适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。
光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目,在我们生化分析上通俗的说就是光通过颜色均匀的液体光被吸收的多少或是颜色的变化和液体中物质的浓度成线性关系。
例如AST和GLU的检测原理：L-天门冬氨酸+ α-酮戊二酸—AST—草酰乙酸+ L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH +H+ —MDH— L-苹果酸+ NAD+ + H2ONADH在340nm有吸收峰，所以NADH的减少速度就可以反应出AST的含量葡萄糖 + H2O + O2 —葡萄糖氧化酶—H2O2 + 葡萄糖酸2 H2O2+ 4-氨基安替比林+酚—过氧化物酶—醌亚胺（红色）+ 4 H2O生成红色的醌亚胺在500nm波长就可以检测到。
一、分析方法的选择：常见的分析方法有:终点法,速率法。
1 终点法：一般分一点终点法和两点终点法，一点法其原理是经过一定反应时间后,反应达到平衡时进行的一点分析。
例如:溴甲酚绿法测定白蛋白均用该法。
对于反应快的物质选用一点终点分析法。
二点终点法，是用二点的吸光度之差进行计算。
2速率法：也叫速度法或连续监测法，多数用于酶活力的测定。
所有酶活力测定均选用速率法。
其原理是根据酶所催化反应的速率来测定酶活力的大小，实际操作时要注意反应的方向，正反应和负反应。
二、双波长测定中辅波长的选择：双波长的应用是为了消除样品中对测定有干扰的物质的影响,而实际应用中选择第二波长主要用于消除脂血、溶血、黄疸等的干扰。
例如:钼酸铵法测定无机磷,其测定波长为340ｎｍ,对于溶血样品,血红蛋白在340ｎｍ有较强吸收,其吸光度同380ｎｍ处吸光度相同,选用380ｎｍ作辅助波长,可消除溶血对测定的干扰。
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生化试剂主要参数及意义
一级动力学法：（两点速率法）
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生化试剂主要参数及意义
零级动力学法：（连续监测法，用于酶活性监测）
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生化试剂主要参数及意义
ü反应方向(response direction) u正向反应（UP/INC/+）：吸光度增加。 u负向反应（DOWN/DEC/-）：吸光度下降。
检测时吸光度值为主波长的吸光度减去副波长的吸光度。
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生化试剂主要参数及意义
✓分析时间： 孵育时间（incubate time） 一点终点法的孵育时间是指样本与试剂开始到反应终点的时间；两点 终点法是指第一个吸光度反应点开始到第二个吸光度点为止时间。一 般为5min。 延迟时间（delay time） 加入第二反应试剂后到第一个吸光度监测点开始的时间。即样本与反 应试剂（第二试剂）混匀开始至第一个吸光度选择点之间的时间。单 试剂一般设置为30s，双底物反应或酶类反应一般设置为1-3min。 连续监测时间（ continuous monitoring time） 在延迟时间后的零级反应开始，监测至少4个点（3个吸光度变化值）， 一般为1-2min。
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生化试剂其他参数及意义
ü 试剂吸光度范围(Linearity） 线性度不能超过设定界限，超限时说明吸光度的变化量之间已经不成 线性或说明底物不足，检测结果会变低。 ü试剂线性范围（Dynamic Range/Technical Limit） 与试剂/样本比值有关，超出范围的样本应增加样本量重测或样本稀释 后重测。
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生化试剂主要参数及意义
ü项目名称(test name)： 常以项目的英文缩写来设置。 ü方法类型(assay/Method )（适用于仪器的方法）： 方法类型主要分为：终点法和动力学法 u终点法 u一点终点法：样本与试剂混匀一定时间后读取反应终点吸光度，如血糖氧化 酶法、总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法等。 u两点终点法：（又称固定时间法）样本与试剂混匀一定时间后先读取吸光度 A1，延迟一定时间后读取吸光度A2，计算吸光度差值与标准比较求得结果。 如肌酐苦味酸法等。可消除内源性物质干扰。
多用于连续监测法测定酶活时，无Байду номын сангаас定标曲线，根据摩尔消光系数计
算得到结果。
106× V
F= —————— ɛ×v×L
V：反应体系总体积（ml）；v：样本体积（ml）
ɛ：摩尔消光系数（cm2/mol） L：比色杯光径（cm）；106：将mol换算为μmol
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生化试剂其他参数及意义
ü试剂吸光度上限、下限/试剂吸光度界限(OD Limt) ü底物耗尽限额(substrate exhaust limit) ü试剂吸光度线性范围(Linearity） ü 试剂线性范围（Technical Limit） ü前区检查限(Prozone Check Limt) ü方程式（Fomular） ü小数位（Decimal Places） ü双份界限（Duplicate Limit） ü敏感性界限(Sensitivity Limit) ü第一标准吸光度界限(S1 Abs.limt) ü反应过程吸光度界限(Absorbance Limit)
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生化试剂其他参数及意义
ü前区检查限(Prozone Check Limt) 主要用于免疫比浊法项目，可根据项目要求选YES或NO，比较终点法后 两个读数点的差别，如果后一点比前一点的吸光度低，表示已经有抗 原过剩，样本应稀释后重测
生化试剂各机型参数确定
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目录
➢生化试剂主要参数及意义 ➢生化试剂其他参数及意义 ➢各机型生化分析仪概括介绍 ➢各机型参数特点
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生化试剂主要参数及意义
生
化
试
剂
说
明
书
中
各
参
数
（
例
：
脂
肪
酶
）
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生化试剂主要参数及意义
✓项目名称 ✓方法类型 ✓反应方向 ✓测定波长 ✓测定温度 ✓样本体积 ✓试剂量 ✓分析时间 ✓校正方法
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生化试剂主要参数及意义
ü校正方法（Calibration Type）：
可采用标准液（校准液）定标方式或理论K值方式获取标准曲线。
u线性定标（ Linear/AB）：
两点定标，标准曲线呈直线。
u非线性定标（Spline/4AB/polygonal）：
多点定标，标准曲线近似于直线。
u理论K值 （Factor/MB）：
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生化试剂主要参数及意义
动力学法
一级动力学法：（两点速率法）样本与试剂反应不断消耗反应物，反应速度 不断减小，吸光度变化不断减小，在特定时间段内进行监测，该时间段内吸 光度升高或降低与样本浓度成正比，如同型半胱氨酸、总胆汁酸等。
零级动力学法：（连续监测法，用于酶活性监测）样本与试剂反应，反应物 可匀速生成某个产物，如NADH，在特定波长下吸光度均匀的增大或减小，增 大或减小的速度与样本浓度呈正比。如碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等。
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生化试剂其他参数及意义
ü试剂吸光度上限、下限/试剂吸光度界限(OD Limt) 常用规定波长及光径下的吸光度值表示。终点法常在0点读数，连续监 测法常以反应监测起始点来判读该吸光度值。 可用于判断试剂质量。检测试剂空白时，若超过此参数的限值，则提 示试剂可能失效。
ü底物耗尽限额(substrate exhaust limit) 连续监测法或两点终点法时设置。 根据吸光度上升或下降设定MAX-OD/MIN-OD，吸光度超过设定界限时， 代表样品酶活非常高，底物消耗太快，所测得结果不能代表真实酶活 力。
ü测定温度 30℃、37℃、25℃
ü样本体积（sample volum） 一般为2-35μl ，以0.1μl步进。
ü试剂量（regengt volum） 一般为20-300μl ，以1μl步进。
不同机型生化分析仪的样本量及试剂量限制不同，样本与试剂可根据比例进行增大
或减少。
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生化试剂主要参数及意义
✓测定波长（wavelength）： 不同生化分析仪具备不同的波长。可选择单波长或双波长。
主波长（main wavelength/primary wavelength ） 根据待测物质在特定波长下具有最大吸收峰来选择主波长。 副波长（次波长sub wavelength/second wavelength ） 可不选择设定。副波长可消除样本溶血，血清浑浊的干扰影响，副波 长与主波长越接近越好。