紫外分光光度法检测饮料中防腐剂的实验方案[20121120][1]
分析化学综合实验 紫外-可见分光光度计
紫外-可见分光光度法测定饮料中的苯甲酸钠含量一、实验目的（1）掌握紫外-可见分光光度法的分析原理。
（2）熟悉紫外-可见分光光度法的结构、特点，掌握及使用方法。
（3）了解紫外-可见分光光度法技术定量测定物质含量的方法。
二、实验原理苯甲酸，俗称安息香酸，是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。
在我国，苯甲酸及其钠盐常用于酱菜类、罐头类和一些饮料类等食品中。
苯甲酸及其钠盐的过量摄入会对人体产生很大危害，所以监测食品中苯甲酸及其钠盐的含量，对保障人们身体健康有着重要意义。
由于苯甲酸钠在200~350 nm有吸收，因此可利用紫外-可见分光光度法测定饮料中的苯甲酸钠含量。
三、仪器与试剂1、仪器UV-1800/V紫外-可见分光光度计；10 mL石英比色皿2个；1000 mL容量瓶1个；1.0 mL和5.0 mL移液管各1个；50 mL容量瓶8个。
2、试剂0.1 mol/L NaOH溶液；6.0×10-3mol/L标准苯甲酸钠溶液；去离子水；市售可乐或雪碧等。
四、实验步骤（1）移取6.0×10-3mol/L标准苯甲酸钠溶液1.0 mL于50 mL容量瓶中，加入0.6 mL 0.1 mol/L NaOH溶液，用去离子水定容，摇匀，以试剂空白为参比，在210~350 nm范围内绘制吸收曲线，确定最大吸收波长λmax。
（2）分别移取0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL 苯甲酸钠标准溶液于7个50 mL容量瓶中，各加入0.6 mL 0.1 mol/L NaOH 溶液，用去离子水定容至刻度。
在定量测定模式下，以试剂空白为参比，在λmax处测定各溶液的吸光度。
（3）分别移取5 mL可乐或雪碧于50 mL容量瓶中，用超声波脱气5min 以驱赶CO2，加入0.6 mL 0.1 mol/L NaOH溶液，用去离子水定容至刻度。
以试剂空白为参比，在λmax处测定各溶液的吸光度。
紫外光谱吸收法测定雪碧中的防腐剂
3、利用上一步测定的最大吸光度处的 λmax 测定苯甲酸标准溶 液的吸光度，平行测三组（苯甲酸标准溶液的浓度为 6.4ug/mL）。
4、绘制雪碧吸收曲线（A-λ）。 5、由朗比定律计算得出配制的雪碧溶液中苯甲酸的浓度
三、 数据记录及处理
1、苯甲酸钠最大吸收峰的寻找
λ（nm） 210
215
220
222
224
226
227
228
吸光度 A
λ(nm)
230
235
240
245
250
255
Байду номын сангаас
260
吸光度 A
2、待测液、标准溶液在 λmax 处的吸光度平行测定
测量液 测量次序
雪碧溶液 标准溶液
1 2 3
3、根据测定数据绘制雪碧吸收曲线（A-λ）如例图所示。
4、浓度计算
由 A∝C 可知 雪碧 = େ雪碧 进而计算出雪碧中苯甲酸的
标准液
େ标准液
浓度（注意：求得的浓度为稀释后的浓度，需换算成原液浓
度）。
实验三：紫外光谱吸收法测定雪碧中的防腐剂
一、 实验目的 1、了解苯甲酸钠的紫外吸收特性，利用该特性检测食物中的
防腐剂 2、进一步掌握朗伯比尔定律
二、实验原理 为防止食物在储藏、运输等过程中变质、腐败等现象的发生，
食品生产者常在食品中加入一定量的防腐剂。苯甲酸和山梨酸以 及它的钠盐都是卫生组织允许的主要防腐剂。
苯甲酸具有芳香结构，在 210nm-260nm 范围内有最大吸收 峰，由朗比定律 A=lg(1/T)=Kbc 可知，吸光度 A 与溶液浓度 C 成正比，可根据苯甲酸钠的吸光度测量雪碧中的苯甲酸含量。 二、 实验步骤
紫外分光光度法测定饮料中的苯甲酸
紫外分光光度法测定饮料中的苯甲酸TYYGROUP system office room 【TYYUA16H-TYY-TYYYUA8Q8-实验三紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂—苯甲酸1 实验试剂与仪器试剂苯甲酸（AR），雪碧汽水仪器日立UV-3010紫外-可见光谱仪，1cm石英比色皿2 实验原理与方法为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。
我国规定了苯甲酸（盐）在碳酸饮料中最大使用量为0.2g/kg。
苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有强吸收由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。
从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。
本实验测定雪碧中苯甲酸，含有人工合成色素、甜味剂等，但一般在紫外区无吸收，故不干扰测定，样品不用处理，苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，可在225nm波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。
3 实验步骤苯甲酸标准储备液配制称取0.1000g苯甲酸于100mL容量瓶中，加适量蒸馏水定容，配制成1mg/mL溶液，吸取此液5mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，每毫升溶液相当于苯甲酸100ug。
标准曲线绘制取苯甲酸标准储备液、、、、，分别置于50mL容量瓶中，用蒸馏水溶液稀释至刻度。
以水为对照液，测定其中5号标准溶液的紫外可见吸收光谱（测定波长范围为200~350nm），找出λmax ，然后在λmax处测定五个标准溶液的吸光度A。
样品处理和测定雪碧饮料除二氧化碳后，准确移取于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，在λ处测定max吸光度。
4 实验结果测得苯甲酸在227nm波长处有最大吸光值表1 标准液吸光度测定标准液（μg/ml） 0 2 4 8 12吸光度图1 苯甲酸标准溶液标准曲线测得雪碧样品的苯甲酸吸光度为=μg/ml从曲线上找出相应的苯甲酸浓度Cx: 样品定容后体积为100mlV1: 所取样品体积为 25mlV2因为雪碧的密度约等于1kg/m3,故μg/ml≈μg/g=kg根据中华人民共和国国家标准《食品添加剂使用卫生标准一》对汽水类食品中苯甲酸的最大使用量做了规定：苯甲酸<=0.2g/Kg，本实验使用的雪碧样品苯甲酸浓度Kg<0.2g/Kg,即低于国家标准，符合国家标准。
实验 紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂
实验紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂实验目的：1．掌握蒸馏操作；2．掌握紫外可见分光光度法测定苯甲酸的方法和原理。
实验原理：为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。
其使用量一般在0.1%左右。
苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。
由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。
从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。
本实验采用蒸馏法对鲜橙多中的苯甲酸进行了测定，苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，可在225nm波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。
仪器与试剂：紫外分光光度计，蒸馏装置；无水硫酸钠，磷酸，硫酸，氢氧化钠，重铬酸钾，苯甲酸；鲜橙多。
操作步骤：1、样品前处理：准确称取10.0g均匀的样品，置于250 mL蒸馏瓶中，加1mL H3PO4，20g无水Na2SO4，70mL水，三粒玻璃珠进行第一次蒸馏。
用预先加有5mL 0.1mol﹒L-1 NaOH的50mL容量瓶接收馏出液，当蒸馏液收集到45mL时，停止蒸馏，用少量水洗涤冷凝器，最后用水稀释至刻度。
吸取上述蒸馏液25mL，置于另一个250mL蒸馏瓶中，加入25mL 0.033mol﹒L-1 K2Cr2O7溶液,6.5mL 2mol﹒L-1H2SO4溶液，连接冷凝装置，水浴上加热10min，冷却，取下蒸馏瓶，加入1mL H3PO4、20g无水Na2SO4、40mL水和三颗玻璃珠，进行第二次蒸馏，用预先加有的5mL 0.1mol﹒L-1 NaOH的50mL容量瓶接收蒸馏液，当蒸馏瓶收集到45mL左右时，停止蒸馏，用少量洗涤冷凝器，最后用水稀释至刻度。
根据样品中苯甲酸含量，取第二次蒸馏液5～20mL，置于50mL容量瓶中，用0.01mol﹒L-1 NaOH定容，以0.01mol﹒L-1 NaOH作为对照液，于紫外分光光度计225nm处测定吸光度。
紫外可见分光光度法测碳酸饮料中苯甲酸钠的含量
化学工业科技创新导报 Science and Technology Innovation Herald112食品添加剂对于改善食品色、香、味,延长食品保质期具有重要作用。
苯甲酸及它们的盐在饮料中使用较为广泛,但都有一定的毒性[1],其中苯甲酸还是防腐剂中使用量最大者[2]。
监测它们在饮料中的使用量, 对于保障人们身体健康具有重要的现实意义。
目前主要有气相色谱法、液相色谱法、AOAC 法(氧化法)[3]等。
其中以气相色谱法经常使用,但仪器要求高,不便于基层实验室使用。
该文提出把苯甲酸钠用磷酸酸化后蒸馏出苯甲酸直接于紫外分光光度计上分别在两组分的最大吸收波长处测定,根据吸光度加和性的原理再分别进行定量。
1 实验部分1.1 仪器与试剂北京瑞利U V-1801紫外可见分光光度计1 c m 石英比色皿2只磷酸、氢氧化钠、苯甲酸、重铬酸钾、硫酸均为分析纯试剂苯甲酸标准储备液：称取1.000 ｇ苯甲酸，用0.01 m ol/ＬN a O H 稀释至1000 ｍＬ容量瓶中。
此溶液1 ｍＬ含有1 ｍg的苯甲酸。
苯甲酸标准操作液：移取10.00 ｍＬ苯甲酸标准储备液用0.01 m o l /ＬN a O H稀释至100 ｍＬ此溶液此溶液1ｍＬ含有0.1 ｍg的苯甲酸。
1.2 样品处理取雪碧样品溶液10.00 ｍＬ至于250 m L的蒸馏瓶中，加1 m L磷酸，70 m l 水蒸馏，用预先加有5 m L 0.1 m o l /ＬN a O H 100 m L 容量瓶接收流出液，约收集45 m L时停止蒸馏，用少量的水洗涤冷凝器，最后将容量瓶内蒸馏液稀释至刻度。
吸取20.00 m L 蒸馏液置于另一个250 m L 蒸馏瓶中，加入33 m ol/L重铬酸钾25 m L、2 m o l /Ｌ硫酸溶液6.5 m L ，加热回流10 m i n ，冷却，再加1 m L 磷酸，40 m L 水，蒸馏，收集流出液于100 m L容量瓶，用0.01 mol/ＬNaOH稀释至刻度，摇匀。
紫外分光光度法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量
紫外分光光度法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量作者：杨森徐莲杨留勇吕瑜环来源：《数码设计》2017年第05期摘要：针对目前防腐剂苯甲酸钠的测定方法较多，本方法采用紫外分光光度法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量，具有灵敏度高、加标回收率高、操作简单、分析速度快和结果准确等优点。
该方法能为碳酸饮料的生产企业提供一种实用、便捷和低成本的分析技术，可作为饮料企业对防腐剂苯甲酸钠含量监控的有效方法提供重要依据。
关键字：碳酸饮料；紫外分光光度法；苯甲酸钠；测定中图分类号：O657.32 文献标识码：A 文章编号：1672-9129（2017）05-0076-02Abstract：In view of the current preservative， the method for the determination of sodium benzoate is more，In this method， the content of sodium benzoate in carbonated drinks was determined by UV Spectrophotometry，The utility model has the advantages of high sensitivity，high recovery rate， simple operation， fast analysis speed and accurate result，This method can provide a practical， convenient and low cost analytical technique for carbonated beverage enterprises，It can serve as an important basis for the effective methods of monitoring the content of preservatives and sodium benzoate in the beverage enterprises.Key words：carbonated drinks；ultraviolet spectrophotometry；sodiumbenzoate Determination引言苯甲酸钠，又名安息香酸钠，是目前我国在食品工业上最常用的防腐剂之一。
食品中防腐剂测定方法的研究
食品中防腐剂测定方法的研究摘要：研究了紫外分光光度法测定食品中防腐剂(苯甲酸)的含量。
样品中苯甲酸的最小检出量为 0.0010mg/ml, 回收率为 98%。
该方法简便易行, 灵敏准确。
关键词：防腐剂;测定;紫外分光光度法食品防腐剂苯甲酸的测定 ,通常采用乙醚提取碱滴定法和水蒸气蒸馏紫外分光光度法测定,这两种方法测定程序复杂且周期长 ,回收率也较低。
本文作者在前人工作的基础上 ,采用了新的测定方法。
即乙醚萃取紫外分光光度法测定。
样品分析结果表明：该方法简便准确、快速可行。
1食品防腐剂对微生物或霉菌具有杀灭、抑制或阻止生长作用的食品添加剂为防腐剂。
我国准许使用的防腐剂GB2760-1986 有：苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、二氧化硫、焦亚硫酸钠及其钾盐、丙酸钙、丙酸钠、对羟基苯甲酸乙酯、丙酯、脱氢醋酸、双乙酸钠、葡萄糖-δ-内酯和乳酸链球菌素。
1996 年对GB2760-1986 作很大修订,把二氧化硫、焦亚硫酸钾及其钠盐列入漂白剂。
将葡萄糖-δ-内酯归到稳定和凝固剂中。
特别是把保鲜剂、过氧化氢、乙氧基喹、仲丁胺、桂醛、噻苯咪唑、苯基苯酚、苯基苯酚钠等统统归到防腐剂中。
这与日本相反。
1997 年以前日本把噻苯咪唑、联苯、苯基苯酚、苯基苯酚钠等列为防腐剂,1997 年单列项为防霉剂。
食品防腐剂 GB2760-1996共有 28个品种,1997 年新增丙酸、纳他霉素和液体二氧化碳(催化法)。
1998 年增补单辛酸甘油脂。
1999 年增加脱氢醋酸钠。
2002 年增加对羟基苯甲酸甲酯钠,对羟基苯甲酸乙酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠。
截止到2003 年共 36 个品种。
2试剂与仪器苯甲酸标准溶液：0.05mg/ml (准确称取 0.5000g 苯甲酸以 0 .01mol/L 的 NaOH 溶解并定容至1000ml, 使用时再以蒸馏水稀释 10 倍)。
756 型紫外可见分光光度计上海分析仪器厂3实验条件的选择取 0.05mg/ml 苯甲酸标准溶液 3ml 于 125ml 分液漏斗中 ,加入 20ml 饱和氯化钠溶液, 再加入一定量的1：1HCl 和 25ml 乙醚, 充分振荡后静置。
苏秀琴 紫外分光光度法同时测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠
甘肃联合大学学生毕业论文题目：紫外分光光度法同时测定饮料中的苯甲酸钠和山梨酸钾作者：苏秀琴指导老师：展惠英学院系化工学院专业 2010 级工业分析与检验三年制班工业分析与检验日 20 月 6 年2012．紫外分光光度法同时测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠内容摘要：介绍了饮料中山梨酸钾和苯甲酸钠的紫外分光光度法同时测定方法。
实验表明该方法可快速准确地测定饮料中的山梨酸钾和苯甲酸钠，样品中山梨酸钾最小检出限为0.00067g/L,回收率为92%-94%;苯甲酸钠最小检出限为0.0014g/L,回收率为94%-96%。
关键词：山梨酸钾；苯甲酸钠；同时测定；紫外分光光度法一﹑实验目的(一)通过实验了解食品防腐剂的紫外光谱吸收特性,并利用这些特性对食品中所含的防腐剂进行定型鉴定.(二)掌握工作曲线的制作方法，并对食品中防腐剂的含量进行定量测定.二﹑实验原理食品添加剂对于改善食品色﹑香﹑味，延长食品保质期具有重要作用.山梨酸和苯甲酸及它们的盐在饮料中使用较为广泛，但都具有一定的毒性，其中苯甲酸还是防腐剂中使用量最大者.监测它们在饮料中的使用量，对于保障人们身体健康具有重要的现实意义.为了防止食品在储存﹑运输过程中发生变质﹑腐败，常在食品中添加少量防腐剂.防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸和山梨酸以及他们的钠盐﹑钾盐是食品标准允许使用的两种主要防腐剂.苯甲酸具有芳烃结构，在波长228nm和272nm处有K吸收带和B吸收带，山梨酸具有α不饱和羟基结构，在波长250nm处有β跃迁的K吸收带，因此根据他们的紫外吸收光谱特征可以对他们进行定性鉴定和定量测定.由于食品中防腐剂的用量很少，一般在千分之一左右，同时食品中其他成分可能产生干扰.因此需要预先将防腐剂与其他成分分离，并经提纯浓缩后进行测定.常用的从食品中分离防腐剂的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等.本实验可以采用溶剂萃取的方法，用乙醚将防腐剂从样品中提取出来，在经碱性水溶液处理及乙醚萃取以达到分离﹑提纯的目的.三﹑试剂山梨酸钾标准溶液:0.0052㎎/ml﹑苯甲酸钠标准溶液：0.0052㎎/ml﹑盐酸（1:1）；乙醚（AR）﹑饱和NaCl溶液，以上试剂为分析纯，水为重蒸馏水，7%的葡萄糖饮料.四﹑仪器紫外分光光度计UV-1201五﹑实验部分(一)实验方法取一定量实验所用溶液于分液漏斗中，加入20ml饱和NaCl溶液，再加入10ml 盐酸（1：1）和25ml乙醚充分振摇5min后静置弃去无机相，以试剂空白为参比测吸光度。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
紫外可见分光光度计法测定食品中防腐剂的含量
一、实验目的
1.进一步了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，以岛津UV-2450为例学习紫外分光光度计的操作。
2.掌握利用紫外分光光度法测定苯甲酸和山梨酸的吸收光谱图。
3.掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸和山梨酸及其钠盐和钾盐的含量。
二、实验原理
为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸和山梨酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。
苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。
根据苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸的含量。
山梨酸具有α,β-不饱和羰基结构，在波长255nm处有π—π*跃迁的K吸收带，因此可根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性鉴定和定量测定。
由于食品中防腐剂用量很少，GB2760-2011 规定0.2-1.5g/kg，并且食品样品中其它的成分也可能对防腐剂的测定具有干扰作用，因此一般可预先将样品中的防腐剂与其它成分进行分离，再经过提纯和浓缩进行测定。
常用的分离方法包括蒸馏法和溶剂萃取法等。
本实验采用溶剂萃取法，先用HCl溶液将样品进行酸化，再利用乙醚将这两种防腐剂品从样品中萃取出来，然后将乙醚蒸发，剩下的萃取物经过碱性溶液（NaOH）溶解与处理。
最后对照标准物质，利用紫外分光光度计对目的成分进行检测。
三、实验仪器和试剂
1.紫外可见分光光度计UV2450（日本岛津），1.0cm石英比色皿，50mL容量瓶。
2.HCl溶液（1:1）、NaOH溶液（40g/L）、NaCl溶液（5%）。
3.苯甲酸钠标准溶液的配制
（1）苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠 1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。
该贮备液可置于冰箱保存一段时间。
（2）苯甲酸钠标准溶液（32mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液32.00mL于1000mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。
（3）系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL 、
2.00mL和2.50mL于5个10mL容量瓶中，用NaOH溶液稀释定容。
得到浓度分别为
1.6 mg/L、3.2 mg/L、4.8 mg/L、6.4 mg/L和8.0 mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。
4.山梨酸钾标准溶液的配制
（1）山梨酸钾标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的山梨酸钠 1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。
该贮备液可置于冰箱保存一段时间。
（2）山梨酸钾标准溶液（16mg/L）：准确移取山梨酸钾储备液16.00mL于1000mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。
（3）系列标准溶液的配制：分别准确移取山梨酸钾标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL 、
2.00mL和2.50mL于5个10mL容量瓶中，用NaOH溶液稀释定容。
得到浓度分别为
0.8mg/L、1.6 mg/L、2.4 mg/L、3.2 mg/L和4.0 mg/L的山梨酸钾系列标准溶液。
四、样品前处理
液体样品：酱油、食醋取5mL，饮料取10mL于125mL分液漏斗中，加入盐酸溶液2mL进行酸化，用无水乙醚萃取三次，每次30mL，每次振摇1min。
合并乙醚层于250mL 分液漏斗中，用NaCl溶液洗涤2次，每次5-10mL。
然后用索氏抽提器回收乙醚，用NaOH 溶液溶解，定容至100mL备用。
若用雪碧等碳酸饮料可直接移取饮料1.5ml于50mL容量瓶中，用超声脱气5min驱赶二氧化碳后，用NaOH稀释定容备用。
五、实验操作
5.1开机
（1）打开计算机，打印机。
（2）打开主机开关，双击软件图标UVProbe，点击“Connect”与仪器联机，仪器开始自检，通过后按“OK”。
5.2吸收光谱的测定
（1）选择“Window”→“Spectrum”，打开光谱模块。
（2）选择“Edit”→“Method”，设定波长范围（从大到小），扫描速度（Fast），采样间隔（1.0），扫描方式（Single），Instrument Parameters（Absorbence）。
（3）样品池和空白池均放上2.5mL缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Baseline”，启动基线校正，点击确定。
注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。
（4）参比池中加入缓冲溶液，样品池中加入标准液，点击按键条中的“Start”，测定紫外可见吸收光谱。
（5）扫描完成后，在弹出的新数据采集对话框中输入样品名，点击确定。
（6）图谱保存：选择“File”→“Save as”，在对话框顶部的保存位置中选择适当的路径，输入文件名，保存类型中选择Spc，点击“保存”。
（7）最大吸收峰：选择“Operations”→“Peak Pick”，找到最大吸收峰对应的波长。
5.3标准曲线法测定待测样品的浓度
(1)选择“Window”→“Photometric”，打开测量光度模块。
(2)选择“Edit”→“Method”，设置合适的波长（“Wavelength”），如225nm，点击“Add”，
点击选定的Wavelength，根据提示，点击next，next，方法，设定保存路径，点击“保存”。
(3)样品池和空白池均放上2.5mL缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Cell blank”，进行背
景校正。
(4)标准曲线：在Standard table框里输入Sample ID（从1开始），标准溶液的浓度
“Concentration”，输入完毕，将光标移到WL225下。
在样品池中由稀到浓，依次放入系列标准溶液，点击按键条中的“Read std”，依次读出标准系列溶液的吸光度值。
（浓度为0 的空白液可先按“自动归零”后再读数）
(5)点击“Graph”→“Standard Curve Statistics”→“Equation”，“Correlation Coefficient”，
得到标准曲线的方程和相关系数。
(6)同样，样品池中分别放入样本，在Sample table框里框里输入Sample ID，点击按键条中
的“Read std”，读出待测溶液的浓度和对应的吸光度值。
4.4关机
点击菜单中“Instrument”→“configure”→“maintenance”，进入界面后点击“D2”、“W1”，关闭氘灯和钨灯，再点击按键条中“Disconnect”，然后关仪器软件，最后关电脑和仪器电源。
4.5 数据处理
六、思考题
1. 紫外可见分光光度计由哪些部件构成？各有什么作用？
光源单色器样品池检测器记录装置
1.为什么在吸光度测定时，要尽量控制A在0.2—0.7之间比较合理？
2.简述电子跃迁图。
解释吸光度的加和性出师表
两汉：诸葛亮
先帝创业未半而中道崩殂，今天下三分，益州疲弊，此诚危急存亡之秋也。
然侍卫之臣不懈于内，忠志之士忘身于外者，盖追先帝之殊遇，欲报之于陛下也。
诚宜开张圣听，以光先帝遗德，恢弘志士之气，不宜妄自菲薄，引喻失义，以塞忠谏之路也。
宫中府中，俱为一体；陟罚臧否，不宜异同。
若有作奸犯科及为忠善者，宜付有司论其刑赏，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使内外异法也。
侍中、侍郎郭攸之、费祎、董允等，此皆良实，志虑忠纯，是以先帝简拔以遗陛下：愚以为宫中之事，事无大小，悉以咨之，然后施行，必能裨补阙漏，有所广益。
将军向宠，性行淑均，晓畅军事，试用于昔日，先帝称之曰“能”，是以众议举宠为督：愚以为营中之事，悉以咨之，必能使行阵和睦，优劣得所。
亲贤臣，远小人，此先汉所以兴隆也；亲小人，远贤臣，此后汉所以倾颓也。
先帝在时，每与臣论此事，未尝不叹息痛恨于桓、灵也。
侍中、尚书、长史、参军，此悉贞良死节之臣，愿陛下亲之、信之，则汉室之隆，可计日而待也。
臣本布衣，躬耕于南阳，苟全性命于乱世，不求闻达于诸侯。
先帝不以臣卑鄙，猥自枉屈，三顾臣于草庐之中，咨臣以当世之事，由是感激，遂许先帝以驱驰。
后值倾覆，受任于败军之际，奉命于危难之间，尔来二十有一年矣。
先帝知臣谨慎，故临崩寄臣以大事也。
受命以来，夙夜忧叹，恐托付不效，以伤先帝之明；故五月渡泸，深入不毛。
今南方已定，兵甲已足，当奖率三军，北定中原，庶竭驽钝，攘除奸凶，兴复汉室，还于旧都。
此臣所以报先帝而忠陛下之职分也。
至于斟酌损益，进尽忠言，则攸之、祎、允之任也。
愿陛下托臣以讨贼兴复之效，不效，则治臣之罪，以告先帝之灵。
若无兴德之言，则责攸之、祎、允等之慢，以彰其咎；陛下亦宜自谋，以咨诹善道，察纳雅言，深追先帝遗诏。
臣不胜受恩感激。
今当远离，临表涕零，不知所言。
3.。